Isolation of Whole Cell Protein Lysates from Mouse Facial Processes and Cultured Palatal Mesenchyme Cells for Phosphoprotein Analysis

Madison A. Rogers; Brenna J. C. Dennison; Katherine A. Fantauzzo

doi:10.3791/63834

リンタンパク質分析のためのマウスフェイシャルプロセスおよび培養口蓋間葉系細胞からの全細胞タンパク...

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Developmental Biology

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Isolation of Whole Cell Protein Lysates from Mouse Facial Processes and Cultured Palatal Mesenchyme Cells for Phosphoprotein Analysis

リンタンパク質分析のためのマウスフェイシャルプロセスおよび培養口蓋間葉系細胞からの全細胞タンパク質溶解物の単離

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07:26 min

April 1, 2022

DOI: 10.3791/63834-v

Madison A. Rogers*¹, Brenna J. C. Dennison*¹, Katherine A. Fantauzzo¹

¹Department of Craniofacial Biology, School of Dental Medicine,University of Colorado Anschutz Medical Campus

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

このプロトコルは、解剖されたマウス胚の顔面プロセスまたは培養マウス胚口蓋間葉系細胞から全細胞タンパク質溶解物を単離し、その後のウェスタンブロッティングを実行してリン酸化タンパク質レベルを評価する方法を提示する。

このプロトコルは、哺乳類の頭蓋顔面発達中に活性なリンタンパク質のダイナミクスおよび役割についてのより大きな洞察を得るために使用することができる。このプロトコールは、2つの生理学的に関連する文脈、マウス顔面プロセスおよび培養マウス胚性口蓋間葉系細胞からのタンパク質単離中の脱リン酸化の共通の障壁を克服する。すべての試薬と材料を氷上に保持しながら迅速に移動し、リン酸化タンパク質の完全性を維持するためにすべての溶解バッファーにホスファターゼ阻害剤を使用することが不可欠です。

まず、腹側を上に向けてマウスの体を解剖ボードの上に置き、マウス腹部に70%エタノールを噴霧します。次に、まっすぐなせんけ鉗子で膣口に前部の皮膚をつまんで持ち上げて腹腔を開きます。次に、持ち上げた皮膚を下層に、直刃の外科用ハサミで両側の45度の角度で切断し、四肢と後肢のほぼ中間のそれぞれの側方面まで伸びるV字型を生成する。

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