Name: インビトロ 巨大単層小胞内のアクチン細胞骨格の再構成 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-25T13:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 19 s
Description: 学ぶF-actinを巨大単層リポソームに封入する方法。細胞骨格タンパク質の高効率な封入とコルテックス様構造の形成により、細胞の最小モデル構築と生体力学的研究に有用です。

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我々は、ARO MURI W911NF-14-1-0403 to M.P.M.、米国国立衛生研究所(NIH)R01 1R01GM126256からM.P.M.、米国国立衛生研究所(NIH)U54 CA209992、NIH RO1 GM126256、NIH U54 CA209992、ミシガン大学/ジェネンテック、SUBK00016255及びヒューマン・フロンティア・サイエンス・プログラム(HFSP)の助成金番号RGY0073/2018からM.P.M.への資金提供を認める。この資料に記載されている意見、所見、結論、または推奨事項は著者のものであり、必ずしもARO、NIH、またはHFSPの見解を反映するものではありません。S.C.は、V.ヤダヴ、C.ムレサン、S.アミリとの実りある議論を認める。

1. 緩衝液およびタンパク質溶液の調製
<ol><li>0.1 mM CaCl 2、10 mM HEPES (pH 7.5)、1 mM DTT、0.5 mM Dabco、320 mM スクロース、および 0.2 mM ATP を混合して、全容量 5 mL の水性内部非重合 (INP) バッファーを調製します。</li>
	<li>タンパク質ミックス(PM)を調製するには、11.2 μM 非蛍光 G-アクチン、2.8 μM 蛍光標識アクチン、および 0.24 μM Arp2/3 (材料表) の濃度で INP バッファーにタンパク質を添加します。F-アクチン層を形成するには、100 nM ゲルソリン、4 μM コフィリン、および 2.2 μM VCA-His を PM に加えます。対照実験として、PMを100μg/mLの蛍光色素で置き換えます(材料表)。</li>
	<li>100 mM KCl、4 mM MgCl2、10 mM HEPES (pH 7.5)、1 mM DTT、0.5 mM Dabco、10 mM ATP、および 80 mM スクロースを混合して、全容量 5 mL の水性内部重合(IP)バッファー (水性) を調製します。</li>
	<li>INPバッファー(PMを含む)とIPバッファーを1:1の容量比で混合して最終バッファー(FB)を調製し、リポソーム内に内包される全容量30μLの内水溶液を得た。</li>
	<li>10 mM HEPES (pH 7.5)、50 mM KCl、2mM MgCl 2、0.2 mM CaCl 2、2mM ATP、1 mM DTT、0.5 mM Dabco、212 mM グルコース、および 0.1 mg/mL β-カゼインを混合して、全容量 150 μL の水性アウトサイドバッファー (OB) を調製します。 注:OBの浸透圧は、OBの浸透圧がFB(20-60mOsm)の浸透圧よりもわずかに大きいことを保証するためにグルコースで調整することができます。FBの密度はOBよりわずかに高くなければなりません。</li>
</ol>反転エマルジョン技術に基づくリポソームの調製
<ol><li>脂質-油混合物を調製する<ol><li>100 μL の 25 mg/mL L-α-ホスファチジルコリン (非蛍光エッグPC、EPC とも呼ばれ、1% DHPE を含む) をガラスバイアルに入れます。クロロホルムをアルゴンガスで蒸発させ、バイアルの底に乾燥固体脂質膜(2.5mg)を残す。<ol><li>F-アクチン層を形成するには、1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-{[n(5-アミノ-1-カルボキシペンチル)イミノ二酢酸]スクシニル}ニッケル塩(DOGS-NTA-Ni)をEPCとDOGS-NTA-Niの比率で10:1の比率で加え、クロロホルムの蒸発前に混合する。</li>
		</ol></li>
		<li>2mLの鉱油を加え、脂質 - 油混合物を室温で1時間浴中で超音波処理して脂質を再懸濁させる。 注:超音波処理後の脂質 - 油混合物は、4°Cで1週間保持することができます。 使用前に再超音波処理が推奨されます。</li>
	</ol></li>
	<li>目的のタンパク質を含む単層脂肪滴を調製するための最終緩衝液(FB /オイル)エマルジョンを調製する。<ol><li>プラスチックチューブに取り込んだ脂質-油混合物100 μLに、FBを10 μL加える。FB が 1 つの液滴に入っていることを確認します。</li>
		<li>ガラスシリンジを使用して、脂質 - 油 - FB混合物を引き出し、それを乳化するために複数回静かに上下に吸引する。最初に少量の脂質 - 油混合物を引き出し、次にシリンジの先端を液滴の周囲に配置してFB液滴を小さな液滴に分解する。白っぽくて濁ったエマルジョンが形成されるまで、上下の吸引を繰り返します。</li>
	</ol></li>
	<li>30 μLのOBを別のプラスチックチューブに入れます。30μLの脂質-油混合物をOBの上に置き、それを約10分間放置して界面に脂質単層を発達させる。 注:脂質が荷電している場合、またはタンパク質が組み込まれている場合、このステップの持続時間は延長されるべきである38。</li>
	<li>リポソームを調製する<ol><li>50 μLのFB/オイルエマルジョン(ステップ2.2)をステップ2.3のチューブの上部油相に慎重に加えます。</li>
		<li>プラスチックチューブを100 x g で4°Cで15分間遠心分離します。 リポソーム形成のために最適化するために時間と遠心分離速度を変化させる。 注:遠心分離後、上部の油相は透明であるべきであり、下部OB(リポソームを含む)はわずかに濁っているべきである。</li>
		<li>油相をピペットで慎重に取り除きます。必要に応じて余分なボリュームを吸引します。リポソーム相の上にオイルのメニスカスを作らないように、ピペットチップをチューブの側面に置かないようにしてください。</li>
		<li>新しいピペットで、ピペットチップを残りの底相にゆっくりと突き刺し、水性ボリュームを吸引してリポソームを回収する。 注:オイルを組み込むよりも、ボリュームを失う方が良いです。油分を含めるとリポソームが破裂し、内部成分が外部バッファーに放出されます。せん断を減らすためにピペットの先端を切断します。</li>
	</ol></li>
</ol>3. 顕微鏡観察
<ol><li>100 μL の OB をインキュベーションチャンバー (12 mm の丸いカバーグラスを含む 4 ウェルプレート) のウェルに注ぎます。回収したリポソームをOBに静かに沈着させ(ステップ2.4.4)、チャンバーの上に別のカバースリップを置きます。 注:OBは、ガラス表面を不動態化し、リポソーム20間の固着を最小限に抑えるために、β-カゼインを含有する。</li>
	<li>63倍の油浸対物レンズを用いて共焦点顕微鏡でリポソームを観察します。488 nm、647 nm、および 561 nm のレーザーラインを使用して、蛍光標識脂質、封入蛍光色素、および封入蛍光標識アクチンをそれぞれ観察します。目的のフレームをキャプチャし、TIFF形式で画像を保存します。</li>
	<li>ImageJ/Fiji39で画像を処理および分析します。ImageJ/Fijiの新規ユーザー向けには、オンラインチュートリアルをご用意しています( 資料表を参照)。<ol><li>ImageJ/Fijiソフトウェアを使用してTIFFファイルを開きます。</li>
		<li>画像に移動し>明るさ/コントラスト>調整します。画像の明るさとコントラストを目的のスケールに調整するには、「最小」と「最大」の設定、および「明るさ」スライダと「コントラスト」スライダを調整します。 </li>
		<li>ツールバーの 長方形 選択ツールをクリックし、関心領域(ROI)を選択します。 [画像>トリミング] に移動してROIをトリミングします。</li>
		<li>[分析] > [スケールの設定] に移動します。ポップアップウィンドウで、「ピクセル縦横比」フィールドに「1.0」と入力し、「長さの単位」として μm を設定します。「ピクセル単位の距離」フィールドに、画像の幅をピクセル単位で入力します。[既知の距離] フィールドに、実際の画像幅をミクロン単位で入力します。</li>
		<li>リポソームのサイズを測定するには、ツールバーの 楕円形 選択ツールを使用して、リポソームの端に沿って円を描きます。 [分析>測定] に移動して、リポソームの直径を計算できる円の面積を測定します。</li>
	</ol></li>
</ol>

著者は利益相反がないと宣言しています。

いくつかの重要なステップは、調製プロセス中の高収率のリポソームの成功を決定する。油中の脂質膜を完全に溶解するには、ガラスバイアルの底部の脂質膜が完全に消失するまでサンプルを超音波処理しなければならない。超音波処理の後、脂質 - 油混合物は、脂質分子がさらに分散するために暗条件下で室温で一晩保存されなければならない29。混合物は、4°Cで最大1週間保存することができる。目的のタンパク質を含む単層脂肪滴を含むFB /オイルエマルジョンを調製する場合、気泡を導入しないように、脂質 - オイル - FB混合物をガラスシリンジを通して穏やかに前後にポンピングする必要があります。このプロセスの間、1つの大きな液滴は、数回の繰り返しの後、ガラスシリンジの先端で剪断され、多数の小さな液滴(直径約5〜100μm)に切り取られる。混合物は、プロセス30の後に白っぽくなければならない。リン脂質の品質を確認するために、FB含有液滴の周囲に脂質単層が首尾よく形成されたか否かと、図2Aに示すように蛍光色素を組み...

アクチン細胞骨格は、分子レベルの収縮性と力発生1,2,3を調整することによって、細胞の細胞内構造を構築する上で基本的な役割を果たす。その結果、細胞変形4、5、分裂6、遊走7、8、および接着9を含む多数の重要な細胞活動を媒介する。アクチンネットワークのインビトロ再構成は、近年10、11、12、13、14、15、16、17で大きな注目を集めている。再構成の目標は、生細胞内に存在する複雑な生化学的調節を欠いている細胞の最小モデルを構築することである。これは、特定の細胞内活動をプローブするための制御可能な環境を提供し、アクチン細胞骨格18、19の異なる成分の同定および分析を容易にする。さらに、リン脂質巨大単層小胞(GUV、リポソーム)内のインビトロアクチンネットワークのカプセル化は、半透過性の境界を有する閉じ込められたが変形可能な空間を提供する。細胞9、20、21、22内のアクチン機構の生理学的および機械的微小環境を模倣する。
リポソームを調製するための様々な方法の中で、脂質膜水和法(膨潤法としても知られる)は、最も初期の技術の1つである23。乾燥脂質膜は、緩衝液を添加して水和し、膜状の気泡を形成し、最終的に小胞24となる。より大きな小胞をより高い収率で製造するために、電形成法25として知られる膜水和法から進歩する改良された方法は、交流電界を印加して水和プロセス26を効率的に促進する。アクチン封入のためのこれらの水和ベースの方法の主な制限は、高濃度タンパク質のカプセル化効率が低く、かつ特定の脂質組成物とのみ適合性があることである24。この反転エマルジョン技術は、比較して、脂質成分およびタンパク質濃度に対する制限が少ない20、27、28、29である。この方法では、カプセル化のためのタンパク質の混合物が内部水性緩衝液に添加され、これは後で脂質含有鉱物油溶液中で乳化され、脂質単層液滴を形成する。次いで、単層脂肪滴は、遠心分離を介して別の脂質/油水界面を通過し、二重層脂質小胞(リポソーム)を形成する。この技術は、アクチンカプセル化のための最も成功した戦略の1つであることが証明されています24,30。これとは別に、パルス噴出31、32、過渡膜噴出33、およびcDICE法34を含むいくつかのマイクロ流体デバイス法がある。逆乳化法とマイクロ流体法の類似点は、利用される脂質溶媒(油)と、リポソームの外側小葉の形成のための脂質/油水界面の導入である。対照的に、マイクロ流体法によるリポソームの生成は、マイクロ流体デバイスのセットアップを必要とし、二重層の2つの小葉の間に閉じ込められた油を伴い、これは、油除去のための余分なステップを必要とする35。
この原稿では、以前に使用したように、逆エマルジョン技術を使用して、重合F-アクチンネットワークを封入したリポソームを調製した22。封入用のタンパク質混合物を、まず、アクチンをその球状(G)形態に維持するために、非重合条件を有する緩衝液に入れた。初期のアクチン重合を防ぐために、全プロセスを4°Cで実施し、後にサンプルを室温まで昇温させることによって引き起こされた。室温で一旦、アクチンは重合して糸状(F)形態になる。様々なアクチン結合タンパク質を内部水性緩衝液に添加して、タンパク質の機能性および特性を研究することができ、したがって、アクチンネットワークおよび膜表面との相互作用に関する洞察をさらに提供する。この方法は、最終リポソーム28、37のサイズに近い目的の様々なタンパク質36および大きな物体(微粒子、自走式マイクロスイマーなど)の封入にも適用することができる。

<table><tbody><tr><td>1,2-ジオレオイル-SN-グリセロ-3-{[N(5-アミノ-1-カルボキシペンチル)イミノ二酢酸]サクシニル}ニッケル塩(DOGS-NTA-Ni)&nbsp;</td><td>アバンティポーラーリピッド株式会社</td><td>231615773</td><td>ニッケル脂質</td></tr><tr><td>1,4-ジアザビシクロ[2.2.2]オクタン</td><td></td><td>Sigma D27802-25G</td><td>DABCO</td></tr><tr><td>アクチンタンパク質 (純度 >99%) ウサギ骨格筋</td><td>Cytoskeleton, Inc</td><td>AKL99-D</td><td>非蛍光 G-アクチン</td></tr><tr><td>アクチンタンパク質 (ローダミン): ウサギ骨格筋</td><td>Cytoskeleton, Inc</td><td>AR05</td><td>蛍光標識アクチン</td></tr><tr><td>アデノシン 5&prime;-三リン酸二ナトリウム塩水和物</td><td>Σ</td><td>A2383-10G</td><td>ATP</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 色素</td><td>ThermoFisher</td><td></td><td>蛍光色素</td></tr><tr><td>Andor iQ3</td><td>Andor Technologies</td><td></td><td>共焦点顕微鏡用制御および取得ソフトウェア</td></tr><tr><td>Arp2/3 タンパク質複合体:ブタ脳</td><td>細胞骨格株式会社</td><td>RP01P-A</td><td>Arp 2/3</td></tr><tr><td>塩化カルシウム二水和物</td><td>Σ</td><td>10035048</td><td>CaCl2</td></tr><tr><td>Chamlide Chambers (12 mm 丸型カバーガラス用4ウェル)</td><td>Quorum Technologies</td><td></td><td>インキュベーションチャンバー</td></tr><tr><td>Cofilin protein: human recombinant</td><td>Cytoskeleton, Inc</td><td>CF01-C</td><td>cofilin</td></tr><tr><td>共焦点顕微鏡 (63回; 油浸対物レンズ)</td><td>Andor Technologies</td><td>ライカ DMi8</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-GLUCOSE BIOXTRA</td><td>Sigma</td><td>G7528</td><td>グルコース</td></tr><tr><td>ジチオスレイトール</td><td>DOTサイエンティフィック&nbsp;</td><td>DSD11000-10</td><td>DTT</td></tr><tr><td>ゲルソリンタンパク質: ホモ サピエンス 組換え細胞骨格 (Homo Sapiens Recombinant</td><td>Cytoskeleton, Inc</td>) <td>HPG6</td><td>ゲルソリン</td></tr><tr><td>ハミルトン 1750 ガスタイト シリンジ, 500 &micro;L、セメント針、22 G、2インチ円錐形チップ</td><td>Cole-Parmer</td><td>UX-07940-53</td><td>ガラスシリンジ</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>AmericanBio</td><td>7365-45-9</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ/Fiji</td><td></td><td></td><td>https://imagej.net/tutorials/</td></tr> <tr><td>L-α-Phosphatidylcholine</td><td>Avanti Polar Lipids Inc.</td><td>97281442</td><td>EPC</td></tr><tr><td>塩化マグネシウム</td><td>Σ</td><td>7786303</td><td>MgCl2</td></tr> <tr><td>鉱油, 分子生物学用, 軽油</td><td>Σ</td><td>8042475</td><td>鉱油</td></tr><tr><td>N-WASP 断片 WWA (aa400&ndash;501、VCA-His)</td><td></td><td></td><td>VCA-Hisは、ラボプロトコルを使用して精製されます。プロトコルは、合理的な要求に応じて提供することができます</td></tr><tr><td>オレゴングリーン 488 1,2-ジヘキサデカノイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン (オレゴングリーン 488 DHPE)</td><td>サーモフィッシャー</td><td>O12650</td><td>DHPE</td></tr><tr><td>塩化カリウム</td> シ<td>グマ</td><td>7447407</td><td>KCl</td></tr><tr><td>ショ糖</td><td>シグマ</td><td>57-50-1</td><td>スクロー</td></tr>ス<tr><td>&β;-ウシミルク</td><td>シグマ</td><td>C6905-250MG</td><td></td> からのカゼイン</tr></tbody></table>

インビトロ 巨大単層小胞内のアクチン細胞骨格の再構成

In Vitro Reconstitution of the Actin Cytoskeleton Inside Giant Unilamellar Vesicles

細胞内の主要な機械的機構であるアクチン細胞骨格は、細胞の変形、分裂、遊走、および接着を含む多数の重要な物理的細胞活動を媒介する。しかし、 インビボ でのアクチンネットワークのダイナミクスと構造の研究は、生細胞内の生化学的および遺伝的調節によって複雑になる。細胞内生化学的調節を欠いた最小モデルを構築するために、アクチンは巨大な単層小胞(GUV、リポソームとも呼ばれる)の内部に封入される。生体模倣リポソームは細胞サイズであり、細胞骨格ネットワークの機械的および動的特性に対する定量的洞察を容易にし、ボトムアップ合成生物学のための実行可能なルートを開く。封入用のリポソームを生成するために、反転エマルジョン法(エマルジョン移動法とも呼ばれる)が利用され、これは複雑な溶液をリポソームに封入して様々な細胞模倣系を調製するための最も成功した技術の1つである。この方法では、目的のタンパク質の混合物を内部緩衝液に添加し、これを後でリン脂質含有鉱物油溶液に乳化させて単層脂肪滴を形成する。所望のリポソームは、脂質/油水界面を横切る単層脂肪滴から生成される。この方法は、所望の脂質成分を含むリポソームへの濃縮アクチンポリマーのカプセル化を可能にし、生体模倣細胞骨格ネットワークの in vitro 再構成への道を開く。

反転エマルジョン技術に基づくリポソームの調製を、 図1にグラフィカルかつ概略的に例示する。
まず、リン脂質(EPC)および蛍光脂質(DHPE)で構成された空(ベア)リポソーム(直径約5〜50μm)を調製した。対照実験として、明るい遠赤色蛍光色素を裸のリポソーム内に封入した。液滴の周囲に脂質単層が首尾よく形成されたかどうかは、図2Aに示すように、エマルジョン中に蛍光色素を組み込んだ単層脂肪滴を観察することによって決定することができた。リポソームの生成の成功は、共焦点顕微鏡を用いた488nmレーザー下で、緑色蛍光脂質二重層(DHPEと脂質の結合)である薄い円形環の可視化によって確認することができた(図2A、右端のパネル)。蛍光色素の封入を確認するには、リポソームの内部環境を、遠赤色蛍光色素(材料表)のために、647nmレーザー下で均一に蛍光化する必要があります(<strong...

本稿では、F-アクチン細胞骨格を巨大な単層脂質小胞(リポソームとも呼ばれる)に封入する実験技術と、リポソーム膜の内小葉に皮質生物模倣型F-アクチン層を形成する方法を示す。

The actin cytoskeleton, the principal mechanical machinery in the cell, mediates numerous essential physical cellular activities, including cell ...

この尺度は、複雑な生化学的調節を欠く細胞の最小モデルを構築する。使用される技術は、リポソームの高収率を生成し、細胞骨格タンパク質に対して高いカプセル化効率を有することができる。この対策は、さまざまなタンパク質や、微粒子や自己準備マイクロスイマーなどの大きな物体のカプセル化に適用できます。個人は、最初の数回の試みでリポソーム収量を増やすのに苦労しています。歩留まりを上げるために、原稿のセクションを定期的に議論して詳細を確認することをお勧めします。はじめに、0.1ミリモルのCACL2種、10ミリモルのHEPES、1ミリモルのDTT、0.5ミリモルのDAPCO、320ミリモルのスクロース、および0.2ミリモルのATPを混合することにより、水性内部非重合緩衝液を総容量5ミリリットルで調製する。摂氏4度で内側の非重合バッファーにタンパク質を添加して、タンパク質ミックスを調製します。アクチン層を形成するには、100ナノモルのゲルカリン、4マイクロモルのコファリン、および2.2マイクロモルのVCA HEZをタンパク質ミックスに加えます。対照実験として、タンパク質混合物を1ミリリットル当たり100マイクログラムの蛍光色素に置き換えます。100ミリモルの塩化カリウムを混合することにより、全量5ミリリットルの水性内部重合緩衝液を調製する。4ミリモル塩化マグネシウム、10ミリモルHEPES、1ミリモルDTT、0.5ミリモルDABCO、10ミリモルATPおよび80ミリモルスクロース。内部非重合緩衝液と内部重合緩衝液を1対1の容量比で混合して最終緩衝液を調製し、リポソーム内に封入されることになる総容量30マイクロリットルの内水溶液を得た。10ミリモルのHEPES、50ミリモルの塩化カリウム、2ミリモルの塩化マグネシウム、0.2ミリモルの塩化カルシウム、2ミリモルのATP、1ミリモルのDTT、0.5ミリモルのDAPCO、212ミリモルのグルコースおよび0.1ミリグラム/ミリリットルのベータケーシングを混合することにより、総容量150マイクロリットルの水性外部緩衝液を調製する。脂質油混合物を調製するには、1ミリリットルあたり25ミリグラムの100マイクロリットルをガラスバイアルに加えることから始めます。アルゴンガスでクロロホルムを蒸発させ、バイアルの底に乾燥した固体脂質フィルムを残します。アクチン層を形成するには、クロロホルムを蒸発させる前に、EGGPCとニッケル脂質の比率を10対1の割合でニッケル脂質を加えて混合します。2ミリリットルの鉱油を加える。クロロホルムを蒸発させ、脂質を再懸濁するために、浴中で室温で脂質油混合物を1時間超音波処理する。目的のタンパク質を含む単層脂肪滴を調製するための油エマルジョン中の最終バッファーを調製する。まず、100マイクロリットルの脂質油混合物をプラスチ

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JoVE Journal

Bioengineering

バイオエンジニアリング（生体工学）

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膜貫通タンパク質の再構成、顕微鏡およびパッチクランプ研究のための巨大単膜小胞への電位依存性イオンチャネル、KvAP、

ジャイアントベシクルは、マイクロメートルサイズの成分を高度に詰め込んだ有用な細胞モデルです。油中水型エマルジョン遠心分離法は、カプセル化された材料で巨大小胞を調製するためのシンプルで強力なツールです。...

油中水型エマルションの遠心分離により巨大ベシクルカプセル化微小球の調製

初期エンドソーム機能 F アクチンの重合によって決まります。ここで、この複雑な一連の反応の生化学的・遺伝的影響を受けやすいレンダリング核生成と、試験管の初期エンドソーム膜に...

体外初期エンドソームの F-アクチンの重合

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巨大リポソームの膜カーボンナノ チューブを引っ張ってください。

この記事では、細胞骨格タンパク質を内包した巨大な単層小胞を迅速に生産するための簡単な方法を紹介します。この方法は、閉じ込めおよび細胞骨格 - 膜相互作用における細胞骨格構造のボトムアップ再構成に有用であることが証明されている。...

巨大な単層小胞内の再構成された細胞骨格の迅速なカプセル化

このプロトコルでは、蛍光顕微鏡を使用して再構成された膜テザー細胞骨格ネットワークのダイナミクスを研究するための、支持された脂質二重層の形成、および細胞骨格フィラメントとモータータンパク質の添加について説明します。...

支持脂質二重層上の膜テザー最小アクチン皮質の再構成

このプロトコルは、脂質二重層へのモデル膜タンパク質の合成および取り込みの研究のために、巨大単層小胞(GUV)内に無細胞発現(CFE)システムをカプセル化するために使用される逆エマルジョン法を説明しています。...

無細胞発現系のカプセル化による細菌グルタミン酸受容体チャネルの再構成

この記事では、小胞内構造を持ち、内側、環状、および外側の領域で電気伝導性がカスタマイズされた化合物ジャイアントユニラメラベシクル(cGUV)を調製する方法を紹介します。電気形成は単純なGUVを合成し、浸透圧ショックによって気孔細胞やcGUVに変換されるため、有核細胞の生物物理学を研究するための貴重なモデルを提供します。...

化合物巨大ユニラメラ小胞の合成:核細胞の生体模倣モデル

この記事では、相分離された巨大小胞内の細胞骨格ネットワークの単純なワンポット再構成を紹介します。この方法は一般化でき、広範囲の生体分子のカプセル化または閉じ込めに適用できます。...

インビトロ Phase Separated Giant Unilamellar Vesicles(GUV)内部の細胞骨格ネットワークの再構成

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セルラーミミックの構築のための小胞における無細胞転写および翻訳機構のカプセル化

学ぶF-actinを巨大単層リポソームに封入する方法。細胞骨格タンパク質の高効率な封入とコルテックス様構造の形成により、細胞の最小モデル構築と生体力学的研究に有用です。

インビトロ巨大単層小胞内のアクチン細胞骨格の再構成

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