Name: 電離放射線照射による腸管上皮再生 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-07-27T14:05:00.000+00:00
Duration: 9 min 10 s
Description: 学ぶ ガンマ線照射後の腸管上皮再生メカニズム。マウスモデルを用いて、放射線損傷後の細胞活性化、増殖、分化を追跡し、予備幹細胞の動態と組織修復プロセスを解明する方法です。

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著者らは、組織標本の準備に関する専門家の支援についてはストーニーブルックがんセンター組織学研究コア、動物の世話と取り扱いを支援するストーニーブルック大学の実験動物資源部門に感謝したいと思います。この研究は、国立衛生研究所からの助成金によって支援されました DK124342 Agnieszka B. Bialkowskaに授与され、DK052230からVincent W. Yang博士に授与されました。

著者には利益相反はありません。

このプロトコルは、堅牢で再現性のある放射線障害モデルを記述します。これにより、損傷後7日間の腸上皮の変化を正確に分析することができます。重要なことに、選択された時点は損傷の重要な段階を反映しており、腸への明確な変化(損傷、アポトーシス、再生、および正常化段階)によって特徴付けられます60。この照射モデルは確立され、注意深く評価されており、放射線療法を受けている患者が経験する損傷の適切な症状を模倣していることを示している61。結腸直腸癌および婦人科癌の患者の半数以上が腹部放射線療法を受けています40,62,63。放射線治療を標的とする高度な方法にもかかわらず、患者は健康な腸組織の照射を経験し、ここで提示された全身照射モデルで観察されたものと非常によく似た病態生理を生み出します。したがって、本明細書に記載される放射線モデルは、患者および/または医療従事者の偶発的...

ヒトの腸管上皮は、完全に平らに配置すると、バドミントンコートの表面のほぼ半分を覆います1。代わりに、人間を腸の内容物から分離するこの単一細胞層は、一連の指のような突起、絨毛、およびくぼみ、腸の表面積を最大化する陰窩に圧縮されます。上皮の細胞は陰窩 - 絨毛軸に沿って分化する。絨毛は主に栄養吸収腸細胞、粘液分泌杯細胞、およびホルモン産生腸内分泌細胞で構成され、陰窩は主にディフェンシン産生パネス細胞、活性および予備幹細胞、および前駆細胞2,3,4,5で構成されています。さらに、これらの細胞が下にある間葉系コンパートメントの間質細胞および免疫細胞および内腔の微生物叢との双方向の通信は、腸の恒常性を維持する相互作用の複雑なネットワークを生成し、損傷後の回復に不可欠です6,7,8。
腸上皮は人体で最も急速に自己再生する組織であり、代謝回転率は2〜6日です9,10,11。恒常性の間、ロイシンリッチリピート含有Gタンパク質共役受容体5(LGR5)の発現によって特徴付けられる腸陰窩の基部(陰窩基底柱状細胞)の活性幹細胞は急速に分裂し、他のすべての腸上皮系譜に分化する前駆細胞を提供する。しかし、有糸分裂率が高いため、活性幹細胞とその直接の前駆細胞はガンマ線損傷に特に敏感であり、照射後にアポトーシスを起こします5,12,13,14。それらが失われると、腸陰窩内の予備幹細胞および非幹細胞(前駆細胞の亜集団およびいくつかの最終分化細胞)が活性化され、基底陰窩コンパートメントを補充し、絨毛の細胞集団を再構成し、したがって腸上皮を再生することができる15。系統追跡技術を用いて、複数の研究グループは、予備(静止)幹細胞が活性幹細胞の喪失時の再生をサポートできることを実証している13、16、17、18、19、20、21、22。これらの細胞は、ポリコーム複合体タンパク質1癌遺伝子(Bmi1)、マウステロメラーゼ逆転写酵素遺伝子(mTert)、ホップホメオボックス(Hopx)、およびロイシンリッチリピートタンパク質1遺伝子(Lrig1)の存在によって特徴付けられる。さらに、非幹細胞は、損傷時に腸陰窩を補充することができることが示されている23、24、25、26、27、28、29、30、31。特に、分泌細胞や腸細胞の前駆細胞は、傷害時に脱分化を起こし、幹細胞様細胞に戻り、腸上皮の再生をサポートすることが示されています。最近の研究では、損傷時にステムのような特徴を獲得する能力を持つ複数のマーカー(DLL+、ATOH1+、PROX1+、MIST1+、DCLK1+など)32,33,34,35,36を発現する細胞が同定されています。驚くべきことに、Yuらは、成熟したPaneth細胞(LYZ+)でさえ腸の再生に寄与し得ることを示した37。さらに、腸上皮細胞のアポトーシスを引き起こし、上皮バリア機能を破壊することに加えて、照射は腸内細菌叢の嚥下障害、免疫細胞の活性化および炎症誘発性応答の開始、ならびに間葉系および間質細胞の活性化をもたらす38,39。
ガンマ線は、特に結腸直腸腫瘍の場合、癌治療における貴重な治療ツールです40。しかし、照射は細胞にダメージを与えることで腸の恒常性に大きく影響し、アポトーシスにつながります。放射線被曝は、患者の回復を遅らせる複数の摂動を引き起こし、急性期の粘膜損傷と炎症、および長期的に下痢、失禁、出血、腹痛を特徴としています。この症状の広がりは、胃腸放射線毒性と呼ばれます。さらに、経壁線維症および/または血管硬化症の放射線誘発性の進行は、治療後数年でのみ現れる可能性があります38,41。損傷自体と同時に、放射線は腸細胞の修復応答を誘導し、再生の開始と調整に関与するシグナル伝達経路を活性化します42。放射線誘発性小腸疾患は、他の臓器(子宮頸部、前立腺、膵臓、直腸など)に提供される骨盤または腹部の放射線療法に起因する可能性があります41、43、44、45、46。したがって、腸管照射損傷は重要な臨床的問題であり、結果として生じる病態生理学のより良い理解は、放射線療法に関連する胃腸合併症を軽減するための介入の開発を進める可能性があります。放射線とは別に、腸上皮の再生目的を調査することを可能にする他の技術があります。炎症およびその後の再生を研究するためのトランスジェニックおよびケミカルマウスモデルが開発されている47。デキストラン硫酸ナトリウム(DSS)は腸に炎症を誘発し、炎症性腸疾患と同様の特徴を発達させます48。発がん性化合物アゾキシメタン(AOM)とDSS治療の組み合わせは、大腸炎関連癌の発症をもたらす可能性があります48,49。虚血再灌流誘発傷害は、腸上皮の再生能力を研究するために採用される別の方法である。この技術には経験と外科的知識が必要です50。さらに、前述の技術は放射線とは異なるタイプの傷害を引き起こし、再生の異なるメカニズムの関与につながる可能性があります。さらに、これらのモデルは時間がかかりますが、放射線技術はかなり短いです。最近、腸および結腸から生成されたエンテロイドおよびコロノイドを利用するin vitro法が、腸管再生のメカニズムを研究するために放射線障害と組み合わせて使用 されている51,52。ただし、これらの手法は、モデル53,54の臓器を完全には再現していません。
提示されたプロトコルには、タモキシフェン治療後に予備幹細胞集団に由来する系統の追跡を可能にする遺伝子モデルと組み合わせたガンマ線損傷のマウスモデルの説明が含まれています(Bmi1-CreER;Rosa26eYFP)。このモデルは、12Gy全身照射を利用しており、予備の幹細胞を活性化するのに十分な有意な腸損傷を誘発すると同時に、損傷から7日以内に腸の再生能力のその後の調査を可能にします55。

<table><tbody><tr><td>1 mLシリンジ</td><td>BD</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>309659-16G再利用可能な小動物給餌針:ストレート</td><td>VWR</td><td>20068-630-27G</td><td></td></tr> <tr><td>x 1/2 "針</td><td>BD</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>305109-28G x 1/2 "モノジェクト1mLインスリンシリンジ</td><td>Covidien</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>1188128012-5-Ethynyl-2&prime;-デオキシウリジン(EdU)</td><td>サンタクルスバイオテクノロジー</td><td>sc284628A</td><td>10 mg/mL 滅菌 DMSO:水 (1:4 v/v) 中、分注し、-20°Cで保存します。C</td></tr><tr><td>アゼルサイエンティフィック&nbsp;10%中性緩衝ホルマリン</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>22-026-213-B6.129X1-GT</td><td></td></tr><tr><td>(ROSA)26Sortm1(EYFP)Cos / J</td><td>ジャクソン研究所</td><td>株#:006148</td><td></td></tr><tr><td>B6;129-BMI1TM1(cre/ERT)Mrc/J</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>Strain #:010531</td><td></td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミンフラクションV、ヒートショック</td><td>ミリポアシグマ</td><td>3116956001</td><td></td></tr><tr><td>チキン 抗GFP</td><td>Aves</td><td>GFP-1020</td><td></td></tr><tr><td>Click-IT plus EdU Alexa Fluor 555 イメージングキット、Invitrogen</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>C10638-Corn</td><td></td></tr> <tr><td>oil</td><td>Millipore-Sigma</td><td>C8267-Decloaking</td><td></td></tr> <tr><td>Chamber</td><td>Biocare Medical</td><td>DC2012</td><td>-</td></tr><tr><td>ジメチルスルホキシド(DMSO)</td><td>Fisher BioReagents</td><td>BP231-100</td><td>感光性</td></tr><tr><td>DNaseフリープロテイナーゼK</td><td>Invitrogen</td><td>C10618H</td><td>DPBS</td></tr><tr><td>Donkey anti-chicken AF647</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>703-605-155</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>FisherScientific</td><td>21-031-CV-Eosin</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>S176</td><td></td></tr><tr><td>蛍光顕微鏡 Nikon Eclipse 90i 明るく蛍光灯、対物レンズ付き: 10X, 20X</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount 水性 埋込媒体</td><td>ミリポアシグマ</td><td>F4680-25ML</td><td></td></tr><tr><td>ガンマセル 40 Exactor</td><td>Best Theratronics Ltd.</td><td>-</td><td>0.759 Gy min-1</td></tr><tr><td>ヤギ抗ウサギ AF488</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>111-545-144</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin Solution, Gill No. 3</td><td>Millipore-Sigma</td><td>GHS332</td><td></td></tr><tr><td>HM 325 Rotary Microtome from Thermo Scientific</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-900-668</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33258, Pentahydrate (bis-Benzimide)</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>H3569</td><td>希釈 1:1000</td></tr><tr><td>過酸化水素溶液、ACS、29-32%、Spectrum Chemical</td><td>Fisher Scientific</td><td>18-603-252-In</td><td></td></tr> <tr><td>Situ 細胞死検出キット、フルオレセイン (ロシュ)</td><td>Millipore-Sigma</td><td>11684795910</td><td></td></tr><tr><td>Liquid Blocker Super PAP PEN、Mini</td><td>Fisher</td><td>Scientific DAI-PAP-S-M</td><td></td></tr><tr><td>炭酸リチウム (粉末/認定 ACS)、Fisher Chemical</td><td>Fisher Scientific</td><td>L119-500</td><td>0.5g/1L dH2O</td></tr><tr><td>Luer-Lokシリンジ 滅菌済み、単回使用、10 mL</td><td>VWR</td><td>89215-218</td><td>-</td></tr><tr><td>メタノール</td><td>VWR</td><td>BDH1135-4LP</td><td></td></tr><tr><td>Pharmco 製品&nbsp;エチルアルコール、200プルーフ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>NC1675398-Pharmco-Aaper 281000ACSCSLT 酢酸 ACSグレード</td><td>キャピトルサイエンティフィック</td><td>AAP-281000ACSCSLT</td><td>-</td></tr><tr><td>ウサギ 抗Ki67</td><td>バイオケア メディカル</td><td>CRM325</td><td></td></tr><tr><td>リチャード・アラン サイエンティフィック サイトシールXYLマウント メディウム</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>22-050-262</td><td></td></tr><tr><td>科学産業インキュベーター-65度でスライドを焼くための魔神</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>50-728-103</td><td></td></tr>ク<tr><td>エン酸ナトリウム二水和物</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>S279-500</td><td></td></tr><tr><td>ステンレス鋼解剖キット</td><td>VWR</td><td>25640-002</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost Plusマイクロスライド[サイズ:25 x 75 x 1 mm]</td><td>VWR</td><td>&nbsp;48311-703</td><td></td></tr><tr><td>タモキシフェン</td><td>ミリポア シグマ</td><td>T5648</td><td>30 mg/mL 滅菌コーン油中、できれば新鮮または短期間で -20&deg;C、感光</td></tr>性<tr><td>Tissue-Tek 24-取り外し可能なハンドル付きスライドホルダーSakura</td><td></td><td>4465</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek&nbsp;アキュエッジ&nbsp;ロープロファイルブレード</td><td>Sakura</td><td>4689</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek&nbsp;手動スライド染色セット</td><td>さくら</td><td>4451</td><td></td></tr><tr><td>ティッシュテック染色皿 ふた付きグリーン</td><td>さくら</td><td>4456</td><td></td></tr><tr><td>ティッシュテック染色皿 ふた付きホワイト</td><td>さくら</td><td>4457</td><td></td></tr><tr><td>トゥイーン 20</td><td>ミリポアシグマ</td><td>P7949</td><td></td></tr><tr><td>ユニセット加工カセット</td><td>VWR</td><td>87002-292-VWR</td><td></td></tr> <tr><td>マイクロカバーメガネ</td><td>VWR</td><td>48393-081</td><td></td></tr><tr><td>キシレン</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>X5P-1GAL</td><td></td></tr></tbody></table>

電離放射線照射による腸管上皮再生

Intestinal Epithelial Regeneration in Response to Ionizing Irradiation

腸上皮は単層の細胞で構成されていますが、腸管陰窩の底にある腸幹細胞の活発な増殖によって生成される複数の種類の最終分化細胞が含まれています。しかし、急性腸損傷のイベント中に、これらの活性腸幹細胞は細胞死を受けます。ガンマ線照射は広く使用されている結腸直腸癌治療であり、治療的には有効であるが、活性幹細胞プールを枯渇させる副作用がある。実際、患者は放射線療法を受けている間に胃腸放射線症候群を頻繁に経験しますが、これは一部には活発な幹細胞の枯渇によるものです。腸陰窩における活性腸幹細胞の喪失は、典型的には静止している予備腸幹細胞のプールを活性化し、分泌細胞および腸細胞前駆細胞の脱分化を誘導する。これらの細胞がなければ、腸上皮は放射線療法や他のそのような主要な組織傷害から回復する能力を欠いているでしょう。系統追跡技術の新たな進歩により、再生中の細胞の活性化、分化、および移動の追跡が可能になり、腸内でのこれを研究するために首尾よく採用されています。本研究は、放射線障害後のマウス腸管上皮内の細胞を解析する方法を示すことを目的とする。

12 Gy全身照射(TBI)をマウスの遺伝的系統追跡と組み合わせて使用 することで、腸内の放射線損傷の結果を完全に分析することができます。まず、 Bmi1-CreER;Rosa26eYFPマウスは、Bmi1+ 予備幹細胞集団内で黄色蛍光タンパク質(EYFP)発現の増強を誘導するタモキシフェン注射を単回受けた。タモキシフェン注射の2日後に、マウスは照射または偽照射を受けた。安楽死の3時間前に、マウスにEdUを注射した。安楽死後、照射後0時間、3時間、6時間、24時間、48時間、72時間、96時間、および7日目に小腸検体を採取して分析しました。前述の経時変化からの代表的なヘマトキシリンおよびエオジン(H&amp;E)画像(図1)は、損傷に対する腸上皮応答を示しています。0時間の時点は、恒常性腸上皮の実例です(図1)。これに続いて、3時間から48時間の間に陰窩コンパートメント内の細胞が失われることを特徴とするアポトーシス相が続きます(<str...

消化管は、放射線治療によるがん治療の損傷に対して最も敏感な臓器の1つです。それは同時に、そのような侮辱に続く最高の再生能力の1つを持つ臓器系です。提示されたプロトコルは、腸上皮の再生能力を研究するための効率的な方法を記載している。

The intestinal epithelium consists of a single layer of cells yet contains multiple types of terminally differentiated cells, which are generated by the ...

ガンマ線照射は、結腸直腸癌の広く使用されている治療法です。そしてそれは治療的に効果的ですが、それは胃腸管に悪影響を及ぼします。提示されたプロトコルは、放射線損傷後の再生中の細胞の活性化、分化、および遊走を研究するための効率的な方法を説明しています。このプロトコルは、堅牢で再現性のある放射線障害モデルを記述します。重要なことに、このモデルは、損傷後の腸細胞の運命を追跡することを可能にし、したがって、特定の細胞亜集団の再生能力のより良い理解を提供する。この手法では、異なる系統追跡動物モデルを使用して、損傷後の細胞のさまざまな亜集団のリアルタイムの行動と相互作用を研究することができます。このプロトコルを少し変更することで、微生物叢と放射線損傷時のさまざまな上皮、間質、および免疫細胞集団との関係を調査できるはずです。はじめに、タモキシフェン粉末を滅菌コーン油にマイクロリットルあたり30マイクログラムの濃度で再懸濁します。60%の振幅で30秒のオンオフサイクルで3分間超音波処理します。室温で1時間暗所で回転させて混合する。次に、滅菌DMSOをEdU粉末に添加してEdUを調製する。全量の1/5を加え、残りの滅菌超純水をゆっくりと加えます。完全に溶解したら、分注して摂氏20度で保存します。水中の70%エタノール、摂氏4度に冷却したDPBS、ブアンの固定液バッファー、10%緩衝ホルマリンなど、組織を採取および固定するための試薬を準備します。次に、マウス解剖キット、ペトリ皿、10ミリリットルの注射器に取り付けられた16ゲージの経管針、組織学的カセットなどの必要な機器を準備します。ガンマ線照射の2日前に、タモキシフェン注射のために実験動物を準備する。各動物の体重を量り、必要な投与量を計算します。腹部を70%エタノールで消毒します。次に、1ミリリットルの注射器に取り付けられた27ゲージの針を使用してタモキシフェンの単回投与を腹腔内に投与し、Creを介した組換えを誘発します。潜在的なタモキシフェン毒性を排除するために、次の48時間動物を観察します。.48時間後、動物を照射室に移します。ガンマ線照射器内のサンプルチャンバーを70%エタノール溶液で消毒します。吸収マットと動物をサンプルチャンバー内に置きます。蓋をして、チャンバーを閉じます。動物を12グレイ全身照射にさらすようにガンマ線照射器をプログラムします。次に、キーを開始位置に回し、開始を押して露出を開始します。アクティブな露出時間のために部屋を出てください。プリセット時間が経過すると、マシンは自動的に停止し、ビープ音が鳴り始めます。キーを停止位置に回して、機械の電源を切ります。サンプルチャンバーを開き、蓋を外します。動物をケージに移し、サンプルチャンバーを70%エタノールで消毒します。動物を従来の飼育室に戻し、処理後の状態を観察します。毎日動物の体重を監視します。計画された安楽死の3時間前に、腹部を消毒し、28ゲージのインスリン注射器を使用して100マイクロリットルのEdUストック溶液をマウスの腹腔内に注射します。動物を安楽死させた後、照射後の異なる時点で近位腸を採取する。小腸の近位部を解剖し、付着した組織を取り除きます。10ミリリットルの注射器に取り付けられた16ゲージのストレート栄養針を使用して、冷たいDPBSで組織を洗い流し、Bouinの固定バッファーで組織を固定します。腸を縦方向に切り開き、スイスロール技術を使用して近位腸を転がします。組織を10%緩衝ホルマリンを含む容器内の組織学的カセットに入れ、室温で24〜48時間インキュベートします。インキュベーション後、組織学的カセットを70%エタノールに移し、組織をパラフィンに包埋します。包埋後、組織学的カセットを少なくとも1時間氷上に置く。次に、ミクロトームを使用して厚さ5ミクロンの水平断面を切り取ります。組織切片を摂氏45度まで温めた水浴に移し、切片を帯電したスライドの上に置きます。スライドを室温で一晩ラックに置いて乾かします。小腸検体のヘマトキシリンおよびエオジン画像は、ゼロ時間で恒常性腸上皮を示し、その後、アポトーシス期に陰窩コンパートメント内の細胞が失われた。これに続いて、高度に増殖する細胞が陰窩に生息する再生段階が続き、7日目までに正常化段階に至りました。EYFPによる系統追跡は、恒常性の間、Bmi1陽性予備幹細胞に由来する細胞が陰窩内のプラス4〜プラス6の位置に制限されることを示した。EdUおよびKi−67染色は、偽照射マウスにおいて正常な腸恒常性を示し、活性幹細胞からトランジット増幅ゾーンを通って拡大した。アポトーシス期には、EYFP陽性細胞の数が減少し、放射線障害によって引き起こされる増殖細胞の喪失を伴いました。再生段階では、予備幹細胞の活性化とBmi1陽性細胞の急速な増殖が観察されました。さらなる増殖および移動は腸上皮の完全性を回復させた。TUNEL染色は、恒常性の間にアポトーシス細胞が存在しないことを示した。TUNEL染色の増加は、アポトーシス期の後半に観察されました。再生段階では、TUNEL染色は再生陰窩内で着実に減少し、陰窩が正常化するとほとんど存在しませんでした。この手法は、RNAシーケンシング、シングルセルRNAシーケンシング、蛍光活性化セルソーティング、またはプロテオミクス解析と組み合わせて、損傷後の腸管再生における特定の細胞系譜の役割に関するより深い知識を集めることができます。研究者らは、腸の再生における微生物叢と上皮、間質、および免疫細胞集団との相互作用を調査して、腸上皮の再生能力の理解を広げることができます。

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

ヒトの急性腎臓損傷（AKI）は腎臓のネフロンを構成する上皮細胞の損傷によって引き起こされる一般的な臨床上の問題であり、AKIは50から70パーセント1の高い死亡率に関連付けられています。この現象を導くメカニズムと限界がよくわかっていないままにかかわらず、上皮細胞の破壊に続いて、ネフロンは、再生する機能が制限されています。このビデオの記事では、我々はターゲットレーザーのゼブラフィッシュ胚の腎臓で腎臓のネフロン細胞の切除、または前腎のための私たちのテクニックを説明します。私たちの新しいメソッドは、AKIの腎毒性誘発性のモデルを補完し、腎臓のネフロンにおける上皮再生に関連付けられている細胞と分子の変化の高解像度の理解を得るために使用することができます。...

腎上皮再生を研究するためにゼブラフィッシュの前腎のレーザーアブレーション

プラナリアの間に定義された一貫性のある大きさの組織を移植するための効果的な方法が記載されている。も含まれて移植に使用される固定化技術が生きた動物の部分的な照射のために、鉛の盾と一緒に、適合させることができる方法の説明です。...

プラナリアの固定化、部分照射し、組織移植

X 線照射したカコ 2 および末梢血単核球 (PBMC) 間のクロストークを調査するためのプロトコルを提案します。プロトコルはカコ 2 照射と PBMC; と共培養のセットアップから始まります。その後、上皮細胞の電気抵抗は、カコ 2 と PBMC の両方で実行 48 h...

X 線間のクロストークを解析のための共培養法照射 caco-2 細胞と PBMC

ここでは、化学療法誘発性粘膜炎のモデルを用いて、小腸損傷および代償過剰増殖の重要なエンドポイントおよび増殖マーカーを確立するためのプロトコルを提示する。細胞周期特異的マーカーを用いて増殖細胞の検出を実証し、小腸重量、暗号深さ、およびウイルス高さをエンドポイントとして用いた。...

化学療法誘発性粘膜炎のマウスモデルを用いて小腸損傷と適応を評価するための重要なエンドポイントと増殖マーカー

マウス乳腺から開発されたオルガノイドを照射し、上皮形質および免疫細胞との相互作用を評価することを特徴とした。照射されたオルガノイドは、照射正常組織における腫瘍細胞動員につながる可能性のある細胞間相互作用をよりよく評価するために使用することができる。...

乳腺からの照射オルガノイドの成長とキャラクタリゼーション

3次元 organotypic 培養を用いて唾液腺の形態や機能マーカーを可視化することで、放射線後の組織損傷のメカニズムについて、新たな知見を得ることができます。ここで説明されているのは、電離放射線への曝露の前に、培養、照射、染色、50 ~ 90 μ m...

顎下および耳下腺唾液腺からの Organotypic 培養の放射線治療は生体内特性をモデル化する

ホウ素中性子捕捉療法(BNCT)に用いられる中性子混合ビームによる放射線誘発DNA損傷応答は完全には確立されていない。このプロトコルは、中性子混合ビームを照射した後のヒト大腸癌細胞株における免疫蛍光染色による修復タンパク質の放射線誘発病巣(RIF)を検出するためのステップバイステップの手順を提供する。...

ヒト大腸癌細胞におけるDNA損傷および修復病巣の免疫蛍光イメージング

ここでは、レーザー誘導創傷時の腸の画像を取得する方法を紹介します。マウスの腸を多光子レーザーにさらすことによって、単一または複数の陰窩の喪失が局所的に誘発される。損傷領域を数か月にわたって繰り返しイメージングすることにより、腸の回復のリアルタイムのダイナミクスがキャプチャされます。...

腸のリモデリングを研究するためのレーザーアブレーションと生体内顕微鏡

3次元コロノイドの発生のためのマウス結腸陰窩の単離を詳述するプロトコルについて説明します。その後、確立されたコロノイドは、炎症性チャレンジを受ける前、または上皮単層を確立するように指示される前に、宿主上皮の細胞組成を反映するように最終分化され得る。...

確立されたマウスコロノイドに対する腸の炎症の上皮効果を in vitro で研究する

免疫蛍光イメージングは、複雑で時間依存の生物学的プロセスを1つのスナップショットで観察する能力に制約があります。この研究は、精密にカットされたマウスの顎下腺スライスで実施されたライブイメージングアプローチの概要を説明します。このアプローチにより、ホメオスタシス中の細胞間相互作用や再生・修復の過程をリアルタイムで観察することができます。...

唾液腺における細胞間相互作用の Ex Vivo Live Cell Imaging(英語)

学ぶ ガンマ線照射後の腸管上皮再生メカニズム。マウスモデルを用いて、放射線損傷後の細胞活性化、増殖、分化を追跡し、予備幹細胞の動態と組織修復プロセスを解明する方法です。

電離放射線照射による腸管上皮再生

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