Name: マウスにおけるリゾホスファチジルコリン誘発局所脱髄モデルの安定的に確立された2点注射 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 55 s
Description: 学ぶマウスにおけるリゾホスファチジルコリン誘発局所脱髄モデルの確立方法。ステレオタクシックフレームを用いた2点注射により、脳梁の安定した脱髄を再現可能にし、多発性硬化症などの脱髄性疾患のメカニズム解明と治療法開発に貢献します。

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この研究は、中国国家自然科学財団(助成金:82071380、81873743)の支援を受けました。

すべての動物の処置は、中国華中科技大学同済医科大学の動物ケア研究所委員会によって承認されました。C57BL/6雄雌マウス(野生型、WT;20-25g;8-10週齢)を本研究に使用した。マウスを市販の供給源から入手した( 材料表を参照のこと)。マウスを、水および食物を自由に供給した特定の病原体フリー(SPF)動物施設に収容 した。それらは、22°Cの温度および55%〜60%の相対湿度の標準条件下で、明暗サイクルの交互の12時間周期に保持された。
1. LPC溶液調製
<ol><li>LPC粉末25mg( 材料表参照)をクロロホルム250μLとメタノール混合溶液(1:1)で溶解し、10%LPC溶液を作り、500μLの遠沈管に移した。 注:LPCが完全に溶解していない場合は、遠沈管を超音波洗浄機に入れ、40kHzで〜1時間超音波処理して均一な溶液を得ます。</li>
	<li>溶液を3 μL/チューブに分割し、-80 °Cで保存します。 注:ソリューションは〜2年間保存できます。</li>
	<li>手術前に、溶液を27μLの0.9%NaCl溶液で希釈し(ステップ1.2)、溶液を37°Cの恒温水槽に保管する。 注:注射を開始する直前に溶液を準備してください。</li>
</ol>2. 手術準備
<ol><li>32 G、2 インチの針を使用して、5 μL シリンジに接続します( 材料表を参照)。マイクロリットルシリンジが遮られていないことを確認します。注射剤の調製のために5μLのLPC溶液を回収する。</li>
	<li>3%イソフルランと100%酸素を約0.3 L/minの速度で混合したイソフルラン気化器に接続された誘導チャンバ内でマウスを麻酔する。</li>
	<li>呼吸がスムーズな状態でつま先ピンチ反射の欠如によって麻酔の深さを確認します。</li>
	<li>電気シェーバーを使用して耳の間のマウスの頭を剃ります。手順中に角膜の乾燥を防ぐために潤滑点眼剤を適用します。</li>
	<li>次に、マウスを背側を上にした定位フレーム( 材料表を参照)に置き、鼻錐と歯のクランプで頭を固定します。鼻を通して1.2%-1.6%のイソフルランで麻酔を維持します。 注:イソフルラン濃度は、マウスの呼吸状態に応じて調整することができる。</li>
</ol>3. 外科手術
注:動物は、すべての手順の間、加熱パッドの上に置かれます。
<ol><li>マウスを両側イヤーバー付きの定位装置に固定します。イヤーバーが水平で、頭が水平で安定していることを確認します。</li>
	<li>ヨードフォアで数回拭き取り、続いてアルコールを円運動させて頭の皮膚を消毒します。次に、メスを使用して頭皮の正中線に沿って約1.5cmの小さな切開部を切断し、頭蓋骨を露出させます。</li>
	<li>ブレグマ、ラムダ、および後部フォンタネルが露出するまで、1%過酸化水素に浸した綿棒で頭蓋骨を拭きます。シリンジを定位装置の上に置きます。 注:過酸化水素は注意して使用し、周囲の組織に触れないでください。</li>
	<li>動物の頭の水平位置(前後と左右の両方)を確認してください。<ol><li>定位フレームのZ軸ノブを調整して、針先と頭蓋骨が曲がらずにちょうど触れるようにしてから、Z軸座標を測定します。ブレグマと後部フォンタネルのZ座標を確認してください。</li>
		<li>ブレグマと後部フォンタネルのZ座標の差が0.02mm以下になるようにイヤーバーを調整します。そして、同様の方法に従い、正中線の左右両側における対応する位置のZ座標を測定した。イヤーバーを調整して、左右が同じレベルになるようにします。</li>
	</ol></li>
	<li>脳梁を見つけます。XYZ の原点をブレグマに設定します。 注:最初の注射部位は、ブレグマの横方向1.0mm、深さ2.4mm、および前方1.1mmである。第2の注射部位は、ブレグマの側方1.0mm、深さ2.1mm、および前部0.6mmである。たとえば、ブレグマの座標は (0,0,0) です。(-1, 1.1, X) および (-1, 0.6, Y) としてマークされた対応する位置の Z 座標を測定します。脳梁の第1の注射部位座標は(-1, 1.1, -[X+2.4])であり、第2の注射部位は(-1, 0.6, -[Y+2.1])であると求めることができる。</li>
	<li>注射部位が決まったら、頭蓋骨に滅菌マーカーで印を付け、座標を記録します。</li>
	<li>頭蓋骨ドリルでマークされた部位を静かに掘削します( 材料表を参照)。出血を避けるように注意してください。</li>
	<li>針を指定された座標までゆっくりと動かし、注射を開始します。脳梁脱髄を誘導するには、LPC溶液2 μLを各注射部位(ステップ3.5)に0.4 μL/minの速度で注入します。</li>
	<li>注射後、針を各部位にさらに10分間保持する。 注:2回の注射の間隔が20分を超えないようにしてください。</li>
	<li>4-0縫合糸で皮膚を縫合し、動物が10分以内に目を覚ますのを待ちます。鎮痛薬は、施設の動物ケア規則に従って術後に投与する。 注:安楽死の推奨時間は、実験の目的に応じて決定することができます。</li>
</ol>4. 局所脱髄のためのサンプル抽出
注: この手順の詳細については、以前に発行されたレポート14 を参照してください。
<ol><li>中性赤色染料( 材料表を参照)をリン酸緩衝生理食塩水(PBS)中の1%溶液に溶解する。</li>
	<li>マウスを犠牲にする数時間前(詳しくは、前の参考文献10を参照のこと)に、各マウスの腹腔内注射によりPBS中の1%中性赤色色素500μLを注射する。</li>
	<li>心臓灌流12 を4°Cで予冷した30mLの0.1% PBSで行う。</li>
	<li>脳型で脳を1mmにスライスします( 材料表を参照)。</li>
	<li>ニュートラルレッドに染色された病変部を顕微鏡下で可視化し、病変部を解離させる。 注:その後の分析の精度を向上させるために、周囲の正常組織をできるだけ取り除きます。病変組織は、RT-PCR、電子顕微鏡、およびウェスタンブロット分析で検査することができます。</li>
</ol>5. 組織学的染色と免疫蛍光
<ol><li>組織学的染色および免疫蛍光12の場合、心臓灌流後(ステップ4.3)、脳10を取り出し、4%PFA中で一晩(4°Cで)固定し、30%スクロース中で完全に脱水した。</li>
	<li>凍結スライサー10を用いて一定温度(−20°C)で20mm 冠状脳切片に切断した。</li>
	<li>スライスをルクソールファストブルー(LFB)染色、免疫蛍光、およびウェスタンブロット10に使用します。</li>
</ol>

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<li>Villoslada, P., Steinman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+targets+and+therapeutics+for+neuroprotection%2C+remyelination+and+repair+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Investigational+Drugs%22%5BJournal%5D)">New targets and therapeutics for neuroprotection, remyelination and repair in multiple sclerosis.</a> Expert Opinion on Investigational Drugs. 29 (5), 443-459 (2020).</li>
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<li>Gentile, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomodulatory+effects+of+exercise+in+experimental+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immunomodulatory effects of exercise in experimental multiple sclerosis.</a> Frontiers in Immunology. 10, 2197(2019).</li>
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<li>Luo, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+stable+and+easily+reproducible+model+of+focal+white+matter+demyelination%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A stable and easily reproducible model of focal white matter demyelination.</a> Journal of Neuroscience Methods. 307, 230-239 (2018).</li>
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<li>Kutzelnigg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+demyelination+and+diffuse+white+matter+injury+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Cortical demyelination and diffuse white matter injury in multiple sclerosis.</a> Brain. 128, Pt 11 2705-2712 (2005).</li>
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</ol>

著者らには開示するものは何もありません。

中枢神経系の慢性脱髄疾患であるMSは、若年成人20における神経機能障害の最も一般的な原因の1つです。臨床的には、MS患者の約60%〜80%が、二次進行性MSを発症する前に再発および寛解のサイクルを経験し21,22、そしてそれは最終的に時間の経過とともに累積的な運動障害および認知障害をもたらす23。現在、疾患の臨床的、病理学的、または免疫学的特徴の多様性全体をカバーする単一の実験モデルは存在しない24。異なる段階でのMSの病理学的プロセスおよび病因をシミュレートするために、EAEモデル、給餌動物CPZ、およびLPC誘発脱髄モデルを含む、利点および限界を有する3つの一般的な脱髄動物モデルがある。
マウスにおいて、EAEはミエリン抗原の注射後の免疫応答によって誘導され、ミクログリア活性化および血管周囲TおよびBリンパ球の浸潤をもた...

受容体媒介性リゾリン脂質シグナル伝達は、ほとんどすべての器官系の多様な生理学的プロセスを伴う1。中枢神経系(CNS)において、このシグナル伝達は、多発性硬化症(MS)などの自己免疫性神経疾患の病原性において重要な役割を果たしている。多発性硬化症は、病理学的脱髄および炎症反応を特徴とする慢性免疫媒介性障害であり、神経学的機能障害および認知障害を引き起こす2,3。初期の疾患の間に連続的な再発および寛解の後、ほとんどの患者は最終的に二次進行期に進行し、脳に不可逆的な損傷およびその結果生じる障害を引き起こす可能性がある4。二次進行性経過の病理学的特徴は、炎症性病変によって引き起こされる脱髄プラークであると考えられている5。MSの既存の治療法は、再発のリスクを大幅に減らすことができます。しかしながら、進行性MS6によって引き起こされる長期脱髄損傷に対する有効な治療法はまだ存在しない。したがって、白質変性に焦点を当てた前臨床治療薬を研究するためには、安定して確立され、容易に再現可能なモデルが必要である。
脱髄および髄鞘再形成は、多発性硬化症を発症する際の2つの主要な病理学的プロセスである。脱髄は、炎症誘発性表現型7を有するミクログリアによって誘発される軸索周囲のミエリン鞘の喪失であり、神経インパルスの遅い伝導をもたらし、ニューロンおよび神経学的障害の喪失をもたらす。髄鞘再形成は希突起膠細胞によって媒介される内因性修復応答であり、障害は神経変性および認知障害につながる可能性がある8。炎症反応は、ミエリン損傷の程度と修復の両方に影響を及ぼし、プロセス全体にとって重要です。
したがって、持続的な炎症性脱髄の安定した動物モデルは、MSの治療戦略のさらなる探求にとって有意義であるMSの複雑さのために、実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)、毒性脱髄モデル、クプリゾン(CPZ)、およびリゾホスファチジルコリン(LPC)を含む、インビボで脱髄病変を模倣する様々なタイプの動物モデルが確立されている9。.LPCは炎症に関連する内因性リゾリン脂質であり、ミエリン脂質に対する毒性を伴う急速な損傷を誘発し、局所脱髄をもたらす可能性がある。以前の報告および研究10,11に基づいて、いくつかの修正を加えた2点注入の詳細なプロトコルが提供される。一般に、古典的な一点LPC注射モデルは、注射部位で局所脱髄のみを生じ、しばしば自発的髄鞘再形成を伴う12,13。しかし、2点注射LPCモデルは、LPCがマウス脳梁において脱髄を直接誘導し、ミエリン再生をほとんど伴わずにより、より耐久性のある脱髄を引き起こすことができることを実証することができる。

<table><tbody><tr><td>L-&alpha;-卵黄からのリゾホスファチジルコリン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L4129-25MG</td><td></td></tr><tr><td>32ゲージニードル</td><td>ハミルトン</td><td>7762-05</td><td></td></tr><tr><td>10 &mu;lシリンジ</td><td>ハミルトン</td><td>80014</td><td></td></tr><tr><td>高速頭蓋骨ドリル</td><td>strong、韓国</td><td>strong204</td><td></td></tr><tr><td>ドリル</td><td>ヘイガー&ドイツ、マイジンガー&nbsp;</td><td>参照 500 104 001 001 005</td><td></td></tr><tr><td>Matrx 動物無害換気装置</td><td>MIDMARK</td><td>VMR</td><td></td></tr><tr><td>マウス用ポータブル定位固定装置</td><td>報酬</td><td>68507</td><td></td></tr><tr><td>マイクロシリンジ</td><td>報酬</td><td>KDS LEGATO 130</td><td></td></tr><tr><td>イソフルラン&nbsp;</td><td>VETEASY</td><td></td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>Servicebio</td><td>G1101</td><td></td></tr><tr><td>リン酸塩緩衝液</td><td>BOSTER</td><td>PYG0021</td><td></td></tr><tr><td>LuxoL高速ブルーサービス</td><td>バイオ</td><td>G1030-100ML</td><td></td></tr><tr><td>縫合</td>糸<td>FUSUNPHARMA</td><td>20152021225</td><td></td></tr><tr><td>脳型</td><td>報酬</td><td>68707</td><td></td></tr><tr><td>電子顕微鏡固定剤</td><td>Servicebio</td><td>G1102-100ML</td><td></td></tr><tr><td>ニュートラルレッド (C.I. 50040)、顕微鏡用 Certistain</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1.01376</td><td></td></tr><tr><td>抗ミエリン塩基性タンパク質抗体&nbsp;</td><td>Millipore</td> <td>#AB5864</td><td></td></tr><tr><td>Anti-GST-P pAb</td><td>MBL</td><td>#311</td><td></td></tr><tr><td>Ki-67 Monoclonal 抗体 (SolA15)</td><td>Thermo Fisher&nbsp;サイエンティフィック</td><td>14-5698-95</td><td></td></tr><tr><td>ベータアクチンモノクローナル抗体</td><td>プロテインテック</td><td>66009-1-IG&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ミエリン塩基性タンパク質ポリクローナル抗体</td><td>Proteintech</td><td>10458-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>OLIG2 ポリクローナル抗体</td><td>Proteintech</td><td>13999-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488&nbsp;アフィニピュア&nbsp;ロバ反ウサギ&nbsp;IgG (H+L)</td><td>YEASEN</td><td>34206ES60</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 AffiniPure Donkey Anti-Rat IgG (H+L)&nbsp;</td><td>YEASEN</td><td>34412ES60</td><td></td></tr><tr><td>アレクサフロー 594&nbsp;AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L)&nbsp;</td><td>YEASEN</td><td>34212ES60</td><td></td></tr><tr><td>HRP ヤギ抗ウサギ IgG (H+L)</td><td>abclonal</td><td>AS014</td><td></td></tr><tr><td>HRP ヤギ抗マウス IgG (H+L)&nbsp;</td><td>abclonal</td><td>AS003</td><td></td></tr><tr><td>成体 C57BL/6 オスとメスのマウス</td><td>湖南省 SJA Laboratory Animal Co., Ltd</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

マウスにおけるリゾホスファチジルコリン誘発局所脱髄モデルの安定的に確立された2点注射

A Stably Established Two-Point Injection of Lysophosphatidylcholine-Induced Focal Demyelination Model in Mice

受容体媒介性リゾリン脂質シグナル伝達は、多様な神経疾患、特に多発性硬化症(MS)の病態生理学に寄与する。リゾホスファチジルコリン(LPC)は、炎症に関連する内因性リゾリン脂質であり、ミエリン脂質に対する毒性を伴う迅速な損傷を誘発し、局所脱髄をもたらす可能性がある。ここでは、重度の脱髄を直接引き起こし、外科的処置によってマウスにおいて実験的脱髄傷害を迅速かつ安定に複製することができる定位2点LPC注射のための詳細なプロトコルが提示される。したがって、このモデルは脱髄疾患、特にMSと非常に関連しており、関連する臨床的に関連する研究の進歩に貢献することができる。また、免疫蛍光法およびルクソール高速青色染色法を用いて、LPCを注射したマウスの脳梁における脱髄の経時変化を描写した。さらに、行動法を用いて、モデリング後のマウスの認知機能を評価した。全体として、定位フレーム を介した リゾホスファチジルコリンの2点注射は、さらなる研究のためにマウスにおいて脱髄モデルを生成するための安定的かつ再現性のある方法である。

LPCの2点注射は、より耐久性のある脱髄をもたらした LPCは主に、ミエリンに対する毒性および軸索完全性の切断を伴う急速な損傷をもたらす15。注射の日を0日目とした。マウスを10〜28日間(10dpiおよび28dpi)の期間保存した。ルクソールファストブルー(LFB)染色10を用いて、これらの時点におけるマウスにおける脱髄の面積を評価した。2点注射モデルでは、偽群と比較して10dpiで有意な脱髄があり、LPCの局所注入が脳梁を首尾よく脱髄できることを示した。比較的高い脱髄度が28dpiで依然として存在し、2点LPC注射による持続的かつ安定した脱髄を示す(図1D-E)。
ミエリン鞘の喪失をさらに評価するために、脱髄が比較的明らかとなる重要な時点として10日間を選択した。分解されたミエリン塩基性タンパク質(dMBP)を免疫蛍光...

本プロトコールは、マウスにおいて安定かつ再現可能な脱髄モデルを生成するための定位フレーム を介した リゾホスファチジルコリンの2点注射を記載する。

Receptor-mediated lysophospholipid signaling contributes to the pathophysiology of diverse neurological diseases, especially multiple sclerosis (MS). ...

私たちのモデルは、脱髄疾患、特に多発性硬化症に非常に関連しています。また、関連する臨床的に関連する研究の進展に貢献することができます。これは、外科的処置によってマウスに迅速かつ安定して重度の脱髄を直接引き起こす可能性のある詳細なプロトコルです。この手法を初めて試すときは、辛抱強く、座標が正確であることを確認してください。32ゲージの針を5マイクロリットルの注射器に接続することから始めます。注射の準備のために5マイクロリットルのLPC溶液を回収する。次に、呼吸が滑らかな状態での足指挟み反射の欠如によりマウスの麻酔深度を確認します。背側を上にしてマウスを脳定位固定装置フレームに配置し、ノーズコーンと歯のクランプで頭を固定します。マウスを両側のイヤーバーで固定装置に固定します。イヤーバーが水平で、頭が水平で安定していることを確認してください。ヨードフォアで拭いて頭の皮膚を消毒します。次にメスを使用して、頭皮の正中線に沿って約1.5センチメートルに小さな切開を切り、頭蓋骨を露出させます。ブレグマ、ラムダ、および後部泉門が露出するまで、1%過酸化水素に浸した綿棒でスキルを拭きます。注射器を定位固定装置に置きます。動物の頭の水平位置を確認し、脳梁を見つけます。注射部位が決まったら、座標を記録し、頭蓋骨にマーカーで印を付けます。マークされた部位を頭蓋骨ドリルでそっと開けます。出血しないように注意してください。針を指定された座標までゆっくりと動かします。脳梁脱髄を誘発するには、各注射部位に毎分0.4マイクロリットルの速度で2マイクロリットルのLPC溶液を注入します。注射後、針をさらに10分間各部位に保ちます。最後に、4-0縫合糸で皮膚を縫合し、動物が10分以内に目覚めるのを待ちます。代表的な画像は、ルクソール高速青色染色による白質軍団の検出を示しています。この結果から、注射後10日目および28日目に脳梁の安定した脱髄が見られる。異なる時点での脱髄領域の定量化をここに示す。免疫蛍光染色により、分解されたミエリン塩基性タンパク質は、注射後10日目にLPC注射群でdMBPの顕著な増加が観察され、これは脳梁のミエリン喪失を表しています。ミエリン塩基性タンパク質、またはMBPのウエスタンブロット分析は、発現がLPCの注射後にMBPの有意な喪失を示した。ベータアクチンは、ベースライン発現を測定するための負荷対照として使用されました。電子顕微鏡画像は、偽群とLPC注入群の脳梁における有髄超微細構造を確認します。GST-piは、希突起膠細胞前駆細胞(OPC)の分化成熟のマーカーです。LPC注射の10日後、GST-piは偽群と比較して減少した。同時に、希突起膠細胞の増殖能力は、増殖する希突起膠細胞と全希突起膠細胞系統細胞の比率によって反映され得る。より高い比率は、注射後10日後の希突起膠細胞のより多くの増殖を表す。代表的な画像は、各グループ、プラットフォームの存在下、およびプラットフォームを取り外した後のマウスの水泳経路を示しています。結果は、脱髄マウスの空間記憶が2点LPC注射モデルで著しく損なわれていることを示唆しています。この手順を試みるときは、注入速度が正確であることを確認し、針をさらに10分間各部位に保持します。

a-stably-established-two-point-injection-lysophosphatidylcholine

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

このビデオは、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質と不活性化結核菌の組み合わせを注入することにより、マウスモデルで実験的な自己免疫性脳脊髄炎を誘発する方法を示しています。このモデルにより、研究者は疾患のメカニズムを研究し、治療的介入をテストすることができます。...

マウスモデルにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎の誘導

このビデオは、麻酔をかけた動物の視神経に外科的にアクセスし、リゾレシチンを正確に送達して限局性脱髄を誘発し、さらなる研究のための神経病理学的条件を作り出す手順を示しています。...

リゾレシチンを用いた視神経の局所脱髄誘導

このビデオでは、実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)を使用して多発性硬化症のマウスモデルを確立しています。マウスにニューロンペプチドとアジュバントを含むエマルジョンを注入すると、自己反応性T細胞を活性化する免疫応答が引き起こされます。これに続いて、百日咳毒素(PTX)を注射して血液脳関門の透過性を高め、自己反応性T細胞が脳に浸潤できるようにします。この浸潤は、最終的にミエリン損傷をもたらすシグナル伝達カスケードを開始し、多発性硬化症の脱髄状態を模倣しています。...

このビデオでは、2点リゾフォスファチジルコリン(LPC)注入を用いた局所性脱髄マウスモデルの作成を実演しています。麻酔をかけたマウスの頭蓋骨が露出しています。注入座標が決定され、穴が開けられて、標的部位でのLPC注入が可能になります。LPCは炎症を介してニューロンの局所性脱髄を誘導しますが、2点注射によりその持続可能性が保証されます。...

リゾホスファチジルコリンの2点注入による局所脱髄マウスモデルの確立

このビデオでは、リゾレシチン注射を使用してマウス脊髄ニューロンの脱髄を誘導し、その後、オリゴデンドロサイト前駆細胞の遊走と分化を通じて再髄鞘形成を行う方法を示します。このプロセスは、ニューロンの信号伝達を損ない、その後徐々に回復します。...

マウス脊髄ニューロンの脱髄と再髄鞘形成

出典: Wang, X. et al., 中枢神経系の In Vivo 再ミエリン化研究のための浸透圧ポンプベースの薬物送達。J. Vis.

脱髄マウスモデルにおける浸透圧ポンプベースの神経治療薬送達

マウス脊髄を撮像するための新規のex vivo調製。このプロトコルは、脊髄全体生細胞の相互作用の二光子イメージングを可能にする。...

マウス脊髄における細胞ダイナミクスの二光子イメージング

脱髄疾患は、リゾレシチンを中枢神経系に局所的に適用することで、動物でモデル化することができます。マウスの脊髄にリゾレシチンを1回注射すると、時間の経過とともに自然に修復する病変が生じます。目標は、脱髄および再髄鞘形成に関与する因子を研究し、修復を強化するための薬剤をテストすることです。...

リゾレシチンの焦点注入による実験的脱髄およびマウス脊髄の再ミエリン化

ここで提示されるプロトコルは、成人雄のダークアグーチラットにおける両方の皮質半球の広範な灰色物質脱髄の再生を可能にする。この方法は、カテーテルの脳内移植、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質に対する非臨床的免疫、および移植されたカテーテルを介した炎症性サイトカイン混合物の脳内注射を含む。...

炎症性サイトカインの脳内注射による広範囲にわたる大脳皮質脱髄のラットモデル

脱髄は、複数の中枢神経系疾患において起こる。信頼性の高い インビボ...

中枢神経系の In Vivo 髄鞘再形成研究のための浸透圧ポンプベースの薬物送達

本プロトコルは、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質を使用し、臨床スコアリングシステムを使用して疾患プロセスをモニタリングするマウスモデルにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎の誘発を記載しています。実験的自己免疫性脳脊髄炎関連症状は、マウス大腿骨マイクロコンピューター断層撮影分析とオープンフィールドテストを使用して分析され、疾患プロセスを包括的に評価します。...

実験的自己免疫性脳脊髄炎の誘導と多様な評価指標

学ぶマウスにおけるリゾホスファチジルコリン誘発局所脱髄モデルの確立方法。ステレオタクシックフレームを用いた2点注射により、脳梁の安定した脱髄を再現可能にし、多発性硬化症などの脱髄性疾患のメカニズム解明と治療法開発に貢献します。

マウスにおけるリゾホスファチジルコリン誘発局所脱髄モデルの安定的に確立された2点注射

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