Name: レンティック水域のペリフィトン群集の その場 一次生産性を低コストに測定する方法 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-12-16T13:05:00.000+00:00
Duration: 6 min 2 s
Description: 学ぶ、レンティック水域のペリフィトン一次生産性を低コストでその場測定する革新的な方法。インフレータブルカヤックを活用した非侵襲的アプローチにより、複数地点での同時測定が可能となり、生態系研究のデータ収集効率を大幅に向上させます。

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この研究は、チェコ科学財団(GACR 19-05791S)、RVO 67985939、および戦略AV 21、土地の節約と回復のプログラム内のCASによってサポートされました。フィールドで撮影してくれたOndřej Sihelskýに感謝します-彼がいなければ、撮影は完全な地獄になっていたでしょう。このプロジェクトは、調査対象地域へのアクセスを提供した企業、PalivovýKombinát Ústí s.p.とSokolovská Uhelnáとの緊密な協力なしには不可能でした。

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著者らは、開示する利益相反がないことを確認しています。

この論文で説明されている方法論は、光学酸素センサーを使用してO2 濃度を測定する非侵襲的技術を組み合わせた明暗ボトル酸素技術の原理に基づいています。このシステムは、O2 を測定するための光ファイバをボトルからボトルに素早く移動させることができるため、異なるインキュベーション設定の並列測定を可能にする。さまざまな深さの底生生物群集は、分類学的構成と生産性が異なる場合があります。それらを並行して同時に測定することで、時間を節約し、結果をより正確にすることができ、ペリフィトンが成長する全深さプロファイルの計算を可能にします。振とうフラスコに統合された非侵襲的酸素センサーにより、リアルタイムの酸素フラックスモニタリングが可能になります。
設計された実験セットアップにより、実験室でシミュレートするのが難しい、コミュニティが自然に存在するそれぞれの深さでの微生物群集の主要な生産性の測定が可能になります(適切な圧力、その場での温度と光強度の日周経過の変化の追跡、異なる栄養素の利用可能性)。提案手法の主な改善点は、非侵襲性、費用対効果、...

一次生産は、システム全体の食物網を形成する水系への自生炭素の唯一の侵入です1。したがって、一次生産性の正確な推定は、水生生態系の機能を理解するための重要なステップです。沿岸地帯は、一次生産性と生物多様性の高い地域です。植物プランクトンに加えて、ペリフィトン(以下、微生物マットと呼ぶ)と大型藻類が沿岸域の一次生産性に大きく貢献していると考えられています2。彼らの固着したライフスタイルと著しい空間的不均一性のために、一次生産性の定量化は自明ではありません。 
一次生産性は、主に光強度、温度、栄養素の利用可能性、および共光帯3,4のそれぞれの深さにおける炭酸塩系のイオン種の分布によって駆動されます。深さは微生物マットの空間分布に著しく影響します。微生物群集は、浅い深さでの高照射と顕著な季節温度変化の悪影響に対処し、より深い深さではより低い光強度に対処する必要があります。深さ勾配に加えて、動的栄養相互作用は異なるスケールで複数の複雑な空間パターンを生成します5。この複雑なシステムは、実験室でシミュレートするのが複雑です。沿岸域から個々の一次生産者の代謝活性を推測する最も正確な方法は、in situ実験を設定することです。
本稿で紹介する方法論は、従来のチャンバー法2,6,7と、輸送可能で建造が容易な低コストのフローティングバージに基づいています。これにより、自然光スペクトル、温度、および深さに伴う炭酸塩系のイオン種の異なる分布の下で、異なる深さでの一次生産性の測定が可能になります。この方法は、植物プランクトンの光合成を測定するために最初に採用され6、現在でも一般的に使用されている明るいボトル酸素と暗いボトル酸素の原理に基づいています6,7。光の中に保たれたボトル内の酸素の変化率(一次生産性と呼吸の影響を含む)と暗所に保たれたもの(呼吸のみ)を比較します8。この方法は、一次生産性の代理として酸素発生(光合成)を使用します。測定された変数は、正味の生態系生産性(NEP、光条件下での経時的なO2濃度の変化として)および生態系呼吸(RE、暗所での経時的なO2濃度の変化として)である。総生態系生産性(GEP)は、2つの差の計算です(表1)。ここでは「生態系」という用語は、ペリフィトンが独立栄養生物と従属栄養生物で構成されていることを示すために使用されます。この従来のチャンバー法の最も重要な改善点は、非侵襲的酸素光学センサーを使用し、周辺一次生産性を測定するためのこの主にプランクトンの方法を最適化することです。
この技術は、チェコ共和国の新たに出現した採掘後の湖の沿岸域の微生物マットを測定する例で説明されています-ミラダ、モスト、およびメダール。微生物マットの代謝活性は、研究されたコミュニティが自然に発生する特定の深さで直接行われるO2フラックスの直接in situ測定を使用して決定されます。従属栄養活性および光合成活性は、非侵襲的光学酸素センサーを備えた密閉ガラス瓶で測定されます。これらのセンサーは、感光性色素の蛍光を使用して酸素分圧を検出します。微生物マットの入ったボトルを懸濁し、適切な深さのフローティングデバイスでインキュベートします。ボトル内の酸素濃度は、小型ボートから日中連続的に測定されました。
無傷の微生物マットのサンプルが収集され、スキューバダイバーによって指定された深さの気密インキュベーションボトルに入れられます。各ボトルには、O2 の生産性/消費量を経時的に監視する非侵襲的な光学式酸素マイクロセンサーが装備されています。すべての測定は、各深さで5つの反復暗/明ペアで行われます。温度と光合成有効放射(PHAR)強度は、インキュベーション全体を通してそれぞれの深さで測定されます。6時間の in situ インキュベーション(日中)の後、微生物マットをボトルから回収し、乾燥させます。O2 フラックスは微生物バイオマスに正規化されています。対照として、微生物マットバイオマスを含まない湖水を含む明暗気密ボトル(ブランクコントロール)のO2濃度の変化をフラックス補正します。以下は、フローティングバージを構築し、実験全体を段階的に実行するための詳細な手順です。この論文はまた、2つの深さ(1 mと2 m)での微生物マットの測定からの代表的な結果を示し、各深さで5回の反復を行います。実際の温度と光強度は、データロガーを使用して実験全体を通して測定されました。

<table><tbody><tr><td>アルミアングル L形材 40 x 40 mm x 3 mm、長さ 2,000 mm</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>アルミフラットバー 40 x 3 x 350 mm</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>バケット 15 L コンクリートインフィル付き&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ネジロック付きカラビンフック 50 x 5 mm</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>電気テープ 黒</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>押出ポリスチレン (XPS) 素材 500 x 200 x 150 mm</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fibox 3 LCD trace</td><td>PreSens Precision Sensing GmbH</td><td></td><td>スタンドアロン光ファイバー酸素計</td></tr><tr><td>Hondex PS-7 ポータブル デプス サウンダー</td><td>Hondex&nbsp; - ホンダ</td><td>水から底までの深さを測定する</td>電子機器<td></td>、https://www.honda-el.net/industry/ps-7e</tr><tr><td>KORKEN - ガラス製の密閉ジャー、0.5 L</td><td>IKEA</td><td></td><td>のインキュベーションボトル、</td></tr><tr><td>https://www.ikea.com/cz/en/p/korken-jar-with-lid-clear-glass-70213545/ 金属製フック&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>酸素センサースポット SP-PSt3-NAU-D5</td><td>PreSens Precision Sensing GmbH</td><td></td><td>非侵襲的光学式酸素センサー 実条件下での測定用</td></tr><tr><td>スカウト幼児用カヌー</td><td>GUMOTEX</td><td></td><td>https://www.gumotexboats.com/en/scout-standard#0000-044667-021-13/11C</td></tr><tr><td>ネジ 10 x 170 mm 六角ナット</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>付き ネジ 4 x 15 mm 六角形</td><td></td><td></td><td></td>ナット</tr><tr><td>ネジ 4 x 15 mm 蝶ナット</td><td></td><td></td><td></td>付き</tr><tr><td>スナップフック 50 x 5 mm</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>スチールカラビンフック 50 x 5 mm</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ワイヤー直径 3 mm、インサイドリンク 5.5 x 26 mm</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>スチールチェーン、5 m</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>歯ブラシ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ピンセット</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ワッシャー 10 x 50 mm</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ワッシャー 4 x 10 mm</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ワッシャー 4 x 10 mm</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

レンティック水域のペリフィトン群集の その場 一次生産性を低コストに測定する方法

A Low-Cost Method of Measuring the In Situ Primary Productivity of Periphyton Communities of Lentic Waters

生育期勾配におけるペリフィトンの 原位置 一次生産性を測定することで、一次生産性に対する環境ドライバー(主にリン濃度と光強度)と種組成の定量的影響を解明することができます。一次生産性は、主に光強度によって駆動されます, 温度, 栄養素の利用可能性, および真光帯のそれぞれの深さにおける炭酸塩系のイオン種の分布.実験室でシミュレートすることは非常に難しい複雑なシステムです。この安価で運搬可能で、構築が容易なフローティングバージは、実際の自然条件下で一次生産性を正確に直接測定することができます。この方法論は、密閉されたガラス瓶に統合された非侵襲的酸素センサーを使用して一次生産性をリアルタイムで測定することに基づいており、オンライン酸素フラックスモニタリングを可能にし、代謝活動に関する新しい洞察を提供します。微生物マット(または他の底生生物)の総一次生産性の詳細な季節 的in situ 測定は、レンティック水中の一次生産性ダイナミクスを制御するプロセスに関する現在の知識を向上させることができます。

<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64078/64078fig05.jpg"> 図5:日中の微生物マットの正味および総生態系生産性。(A)ライトボトル-ネット生態系生産性:ライトボトルからの微生物マットの正味酸素生産性の経時変化データ。インキュベーションボトル内の酸素濃度変化は、日中の1時間後に測定されました。灰色の円:微生物マットのサンプルが入ったボトル。白い円:湖水のみの空のボトル。(B)暗いボトル呼吸:暗いボトルからの独立栄養呼吸と従属栄養呼吸の合計。インキュベーションボトル内の酸素濃度の変化は、日中の1時間後に測定されました。灰色の円:微生物マットのサンプルが入ったボトル。白い円:湖水のみの空のボトル。(C</st...

ここでは、実際の in situ 環境温度および光条件下で微生物マットの一次生産性を測定するための費用効果が高く、輸送可能な方法/施設を紹介します。実験セットアップは広く入手可能な材料に基づいており、実験室ベースのモデルの利点を提供しながら、さまざまな条件下で使用できます。

Measuring the in situ primary productivity of periphyton during the growing season gradient can elucidate the quantitative effect of environmental drivers ...

適切な場所におけるペリフィトンまたは任意の水微生物の総生産性の詳細なin-situ測定は、レンティック水中の一次生産性の動的を制御するプロセスに関する現在の知識を向上させることができます。提案手法の主な改善点は、非侵襲性、費用対効果、およびさまざまな場所での同時測定の可能性です。また、追加費用なしで大規模なデータ資産を収集できます。実験を行う際にバージを交換する場合は、持ち運びが簡単なインフレータブルカヤックを使用してください。フロートを固定するのに理想的な深さの場所を選択します。次に、組み立てられたはしけをボートの船尾の後ろに取り付け、ボートの側面に沿ってアンカーを慎重に下げます。アンカーを水面の少し下に吊るして位置合わせし、フロートをアンカーで必要な深さのスポットに簡単に牽引できるようにします。その場所に着いたら、ボートからアンカーをほどいて底まで下げ、はしけをアンカーチェーンに固定し、インキュベーションボトルをバージに取り付けるためのチェーンを固定します。インキュベーションボトルを準備するには、気密シール付きの透明でワイドネックの0.5リットルボトルの内壁に酸素光学センサースポットを取り付け、黒い電気テープで包んで暗いトリートメントボトルの不透明な層を作ります。配置した光学センサーのスポットに小さな穴を開け、カット穴がセンサーの直径よりわずかに小さいことを確認して、光がボトルに入らないようにします。インキュベーションボトルをポータブルボックスに入れ、周囲の水の沈殿物を乱すことなく、ボックスと一緒にそれぞれの深さまで潜ります。次に、長いピンセットを使用して、サンプルのバイオマスを乱しすぎないように注意しながら、サンプルをインキュベーションボトルに慎重に充填します。微生物マットが小さな石などの固い表面に成長する場合は、無傷のバイオマスを含む石全体をボトルに慎重に移します。明るいボトルと暗いボトルの1組に、沈殿物のないそれぞれの深さからのきれいな水を入れて、空白のコントロールとして機能します。すべてのインキュベーションボトルの水がきれいで、邪魔な沈殿物が含まれていないことを確認した後、閉じたボトルをフローティングバージに固定されたボートに持ってきます。最初の2組のインキュベーションボトルを最初のチェーンのスナップフックに取り付け、光ファイバー酸素計を使用して各ボトルの初期酸素濃度を測定します。メーターの光ケーブルをボトル内に取り付けられた酸素センサーに接続し、数秒以内にメーター内の酸素濃度を読み出して測定値を記録します。測定後すぐに、付属のボトルでチェーンを慎重に水中に戻し、インキュベーションボトルがそれらの中に入れられたバイオマスがサンプリングされたのと同じ深さに配置されていることを確認します。1時間後、ボトルの入った各チェーンをボートに慎重に引っ張って、酸素濃度を再度測定します。酸素値の読み取りは以前に実証され、サンプルを再び水中に下げました。すべての測定が完了したら、インキュベーションボトルからサンプルを取り出し、石などの硬い物質の表面に成長した微生物マットを歯ブラシや小さなナイフでこすり、内容物をプラスチックフラスコに移します。時間の経過に伴う酸素濃度の増加は、対照と光にさらされたサンプルボトルの両方で明らかであり、正味の生態系生産性を示しています。それにもかかわらず、増加の傾きは、微生物マットサンプルを含むボトルで有意に高くなります。暗いボトル内の時間の経過に伴う酸素濃度の変化は、独立栄養呼吸と従属栄養呼吸の合計です。この場合、コントロールボトル内の酸素濃度の傾きはゼロと有意に異ならない。生態系の正味生産性から呼吸率を差し引くと、生態系の総生産性が得られ、データは定義によく準拠しています。この方法の実用化は、植生期における周生生物群集の総生態系生産性を示す3つの採掘後の湖の畑で達成されました。水中でのバイオマスサンプリングプロセスでは、サンプルを追加した後に閉じた後、インキュベーションボトル内に気泡が閉じ込められないようにすることが重要です。この手順を使用して、水域と適切なサイズの任意の生物または生物群集との間の酸素交換を定量化することができる。この方法では、自然条件を可能な限り作り出すことで、選択した生物の年間を通じてその場で一次生産性を研究することができ、生涯の炭素代謝に対するその相対的な重要性をよりよく理解できます。

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環境温度と湿度導管隠花植物のコンダクタンスを測定するオープン ソース データロガーを構築するシンプルでコスト効果の高い方法を提案します。データロガーのハードウェア設計を記述、データロガー、およびキャリブレーション プロトコルを実行する手順アセンブリ命令、必要なオープン ソース...

東京三菱銀行、導管隠花植物の水量を推定する低コストのオープン ソース データロガー

凍結圏の炭素流束はまだほとんど評価されていないが、気候変動に関して極めて重要である。ここでは、レーザー誘起蛍光発光(L.I.F.E.)技術に基づく氷河環境におけるフォトトロフィーの可能性を捉えた新しいプロトタイプデバイスを示し、現場で高いスペクトルおよび空間分解能データを提供します。...

クライオスフェア生息地におけるバイオマーカーのインシトゥ測定のための新規非侵襲的ツールとしてのレーザー誘起蛍光放射(L.I.F.E.)

高速繰り返し速度蛍光光度計(FRRf)は、光システムII光生理学および一次生産性を測定するための有益な方法である。ここでは、キュベット型FRRfを用いて基質動物プランクトン上のエピゾイ藻類、 コラシウム...

キュベット型高速繰り返し速度蛍光光度計による コラシウム 属の付着ステージの光生理機能の測定

学ぶ、レンティック水域のペリフィトン一次生産性を低コストでその場測定する革新的な方法。インフレータブルカヤックを活用した非侵襲的アプローチにより、複数地点での同時測定が可能となり、生態系研究のデータ収集効率を大幅に向上させます。

レンティック水域のペリフィトン群集のその場一次生産性を低コストに測定する方法

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レンティック水域のペリフィトン群集の その場 一次生産性を低コストに測定する方法

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