Reconstitution of Septin Assembly at Membranes to Study Biophysical Properties and Functions

Brandy N. Curtis; Ellysa J. D. Vogt; Kevin S. Cannon; Amy S. Gladfelter

doi:10.3791/64090

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Biochemistry

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Reconstitution of Septin Assembly at Membranes to Study Biophysical Properties and Functions

生物物理学的特性と機能を研究するための膜でのセプチンアセンブリの再構成

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06:32 min

July 28, 2022

DOI: 10.3791/64090-v

Brandy N. Curtis*¹, Ellysa J. D. Vogt*², Kevin S. Cannon^1,3, Amy S. Gladfelter^1,2,3

¹Department of Biochemistry and Biophysics,University of North Carolina at Chapel Hill, ²Curriculum in Genetics and Molecular Biology,University of North Carolina at Chapel Hill, ³Department of Biology,University of North Carolina at Chapel Hill

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

無細胞再構成は、細胞骨格アセンブリを理解するための重要なツールであり、過去10年間の研究は、最小限の系におけるセプチンダイナミクスを研究するためのアプローチを確立した。ここでは、異なる膜コンテキストでセプチンアセンブリを観察するための3つの相補的な方法、すなわち平面二重層、球状支持体、およびロッド支持体を提示する。

このプロトコルは、膜結合タンパク質に取り組んでいる人々が、膜形状がタンパク質集合体の組織化においてどのように役割を果たすかを決定するための指針となります。この技術の主な利点は、タンパク質の種類、膜組成、および膜の形状に対する汎用性です。また、脂質二重層が関連タンパク質の特性をどのように変化させることができるかについての調査も可能にします。

実験に適した膜を特定するには、脂質拡散速度、目的のタンパク質の移動度、および表面に付着していないリポソームまたは融合リポソームがあるかどうかを含むチェックリストを確立することをお勧めします。スライドのプラズマ洗浄を開始するには、プラズマクリーナーを酸素で5分間パージして、ラインとチャンバーから空気を除去します。ドライカバーガラススライドをセラミッククレードルに配置します。

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