Name: 無菌技術、麻酔、および鎮痛の現代の基準に一致する修正マウス異所性心臓移植プロトコル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-28T13:20:00.000+00:00
Duration: 12 min 40 s
Description: 学ぶマウス異所性心臓移植の修正プロトコル。無菌技術と麻酔・鎮痛を統合し、遺伝子改変マウスを用いた移植免疫と拒絶反応のメカニズム解明に貢献する経済的で再現性の高い微細外科モデルです。

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著者らは、西オーストラリア大学とハリーパーキンス医学研究所の動物ケアスタッフの素晴らしい努力に感謝し、その献身と専門知識がこれらの手術の実現可能性と成功に貢献しました。

<ol><li>Mann, F. C., Priestley, J. T., Markowitz, J., Yater, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+the+intact+mammalian+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Transplantation of the intact mammalian heart.</a> Archives of Surgery. 26 (2), 219-224 (1933).</li>
<li>Neptune, W. B., Cookson, B. A., Bailey, C. P., Appler, R., Rajkowski, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+homologous+heart+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22A.M.A.+Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Complete homologous heart transplantation.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (2), 174-178 (1953).</li>
<li>Downie, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homotransplantation+of+the+dog+heart%5BTitle%5D)+AND+%22A.M.A.+Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Homotransplantation of the dog heart.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (5), 624-636 (1953).</li>
<li>Blanco, G., Adam, A., Rodriguezperez, D., Fernandez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+homotransplantation+of+canine+heart+and+lungs%5BTitle%5D)+AND+%22A.M.A.+Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Complete homotransplantation of canine heart and lungs.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 76 (1), 20-23 (1958).</li>
<li>Abbott, C. P., Lindsey, E. S., Creech, O., Dewitt, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+heart+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">A technique for heart transplantation in the rat.</a> Archives of Surgery. 89, 645-652 (1964).</li>
<li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 57 (2), 225-229 (1969).</li>
<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D%2C+H-2K%2C+and+non-H-2+antigens+in+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).</li>
<li>Joffre, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+acute+and+chronic+allograft+rejection+with+CD4%2BCD25%2BFoxp3%2B+regulatory+T+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Prevention of acute and chronic allograft rejection with CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T lymphocytes.</a> Nature Medicine. 14 (1), 88-92 (2008).</li>
<li>Gregori, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells+induced+by+1+alpha%2C25-dihydroxyvitamin+D3+and+mycophenolate+mofetil+treatment+mediate+transplantation+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells induced by 1 alpha,25-dihydroxyvitamin D3 and mycophenolate mofetil treatment mediate transplantation tolerance.</a> The Journal of Immunology. 167 (4), 1945-1953 (2001).</li>
<li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice%3A+Experience+of+3000+operations+by+one+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: Experience of 3000 operations by one surgeon.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 20 (10), 1123-1128 (2001).</li>
<li>Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+vascularized+murine+cardiac+transplantation+to+study+graft+arteriopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy.</a> Nature Protocols. 2 (3), 471-480 (2007).</li>
<li>Hoogstraten-Miller, S. L., Brown, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+in+aseptic+rodent+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Techniques in aseptic rodent surgery.</a> Current Protocols in Immunology. 82, 1-14 (2008).</li>
<li>Navarro, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+anesthesia%3A+The+art+and+science%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Mouse anesthesia: The art and science.</a> ILAR Journal. , (2021).</li>
<li>Adams, S., Pacharinsak, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+anesthesia+and+analgesia%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Mouse+Biology%22%5BJournal%5D)">Mouse anesthesia and analgesia.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 5 (1), 51-63 (2015).</li>
<li>Australian code for the care and use of animals for scientific purposes. NHMRC. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes">https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes</a> (2013).</li>
<li>Prosser, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+changes+to+tissue-resident+immunity+after+MHC-matched+and+MHC-mismatched+solid+organ+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Dynamic changes to tissue-resident immunity after MHC-matched and MHC-mismatched solid organ transplantation.</a> Cell Reports. 35 (7), 109141(2021).</li>
</ol>

著者は、開示すべき利益相反はありません。

マウス同所性心臓移植モデルは、主に免疫学的拒絶反応のレベルと性質に対するMHCミスマッチの影響、そして最近では移植片組織常在免疫の保持に対する移植の影響を調査するために使用される堅牢な前臨床モデルです16。当初はCorryら7 プロトコルに厳密に従っていましたが、無菌技術、鎮痛、麻酔のベストプラクティス基準を組み込むようにプロトコルを改良しました。これらの新しい診療の更新は、追加のトレーニング、滅菌手術用手袋、ガウン、外科用ドレープの提供、追加の麻酔の適用、および鎮痛投与の更新によって達成されました。このような変更により、手術のセットアップ時間がわずかに増加し、手術ごとに追加コストがかかりました。
重要な研究上の懸念に対処するための動物の使用は、研究者と動物倫理委員会(AEC)との間の契約の下で許可されており、そのような作業を行うための社会的ライセンスを維持しています。AECの決定は、明確な倫理ガイドライン15に基づいており、動物へのコスト...

免疫学や移植に関する理解の多くは、動物を対象とした固形臓器移植の実験モデルに基づく研究によるものです。哺乳類における血管化心臓移植の最初の記述1以来、このようなモデルは、低体温の治療的応用2、特殊な縫合糸を使用する利点3、肺および心臓の全ホモ移植のための技術4など、幅広い領域の知識に貢献してきました。ラット5,6における心臓移植モデルの開発は、異なる育種系統の利用可能性のために免疫学的実験のためのより広い範囲を提供した。利用可能な近交系および変異マウス系統のかなり広い範囲により、Corryらは、この範囲が移植研究にもたらすかなりの利点のために、マウス異所性心臓移植の技術を開発しました。このモデルは広く使用されており、移植片拒絶反応8および治療法9のより深い理解に貢献しています。しかしながら、その最初の説明以来、この技術は、吻合部位の位置の調整などのいくつかのマイナーな技術的詳細を除いて、ほとんど変わっていない10、11。
Corryら7 の技術を実験に統合して以来、プロトコルを改善するための有望な領域、すなわち無菌技術、麻酔、および鎮痛の領域を特定しました。これらの領域の改善は、実験結果にプラスの影響を与え、動物福祉を改善することが期待されていました。これは、無菌技術が術後感染の減少に役立つため、小動物手術で使用される場合に以前に示されていました12、罹患率と死亡率に影響を与えるだけでなく、移植手術後の免疫応答を評価するために設計された実験を損なう可能性があります。麻酔および鎮痛の観点から、洗練されたレジメンの使用は、実験対象の痛みおよび苦痛を軽減することによって、動物へのコストを削減し、この手術モデルの倫理的議論のバランスをとるのに役立つ。さらに、適切な麻酔と鎮痛は、痛みに関連するストレス反応を制限し、術後の回復の質を改善し、最終的には外科的成功率を高めます13。
動物福祉と実験結果の両方を改善することを目的として、これらのギャップを埋めるための調整を伴うプロトコルが開発されました。このプロトコルは、獣医麻酔科医からの相談と、麻酔薬および鎮痛レジメンで利用される薬理学的介入の効果と効果の持続時間の両方を十分に考慮して、Corryら7 によって最初に記述されたものから適応されています。このアプローチは、適切な周術期ケアを確保するために、バランスの取れた麻酔とマルチモーダル鎮痛の原則に基づいていました14。無菌技術の適用に加えて、オピオイドブプレノルフィンと局所麻酔薬ブピバカインが先制的に投与されました。.全身麻酔は吸入麻酔薬イソフルランを用いて行った。

<table><tbody><tr><td>2030ライクロフト灌漑カニューレ30 G</td><td>マクファーレン</td><td>56005HU</td><td></td></tr><tr><td>編組外科用シルク7-0</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ブルドッグクランプ湾曲 - 35 mm&nbsp;</td><td>Roboz</td><td>RS-7441-5</td><td></td></tr><tr><td>ブピバカイン 0.25%&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Castroviejoニードルホルダーキャッチ湾曲-&nbsp; 145 mm</td><td>Haag-Streit</td><td>11.62.15</td><td></td></tr><tr><td>クロルヘキシジン5%溶液</td><td>Ebos</td><td>JJ61371</td><td></td></tr><tr><td>綿先端アプリケーター - 7.5 cm</td><td>Dove</td><td>SN109510</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol 70%溶液</td><td>Ebos</td><td>WH130192EE</td><td></td></tr><tr><td>ガーゼ 5 x 5 cm ホワイト</td><td>Aero</td><td>AGS50</td><td></td></tr><tr><td>ジェルフォーム 80 mm x 125 mm&nbsp;</td><td>ファイ</td><td>ザー7481D</td><td></td></tr><tr><td>バリカン</td><td>ウォール</td><td>9860L</td><td></td></tr><tr><td>ヘパリン1,000IU1mL</td><td></td><td></td><td></td>アイ</tr><tr><td>リススーパーカットはさみストレート-11.5cm&nbsp;&nbsp;</td><td>インカ・サージカル&nbsp;</td><td>11550.11</td><td></td></tr><tr><td>イソフルラン気化器</td><td>ダーバル</td><td>9176</td><td></td></tr><tr><td>マイクロブルドッグクランプ-3.7cm</td><td>グレマン</td><td>14119-G</td><td></td></tr><tr><td>マイクロはさみ湾曲105mm&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>マイクロポア普通紙サージカルテープ - 幅2.5cm</td><td>Ebos</td><td>7810L</td><td></td></tr><tr><td>マイクロメスハサミ - 湾曲した先端</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>モノフィラメントポリプロレン縫合糸 - 5/0</td><td>Surgipro</td><td>P-205-X</td><td></td></tr><tr><td>Myweigh i101 精密スケール 100 g x 0.005 g</td><td>Myweigh</td><td>Kit00053</td><td></td></tr><tr><td>針 - 30 G x 0.5 インチ</td><td>BD</td><td>BD304000</td><td></td></tr><tr><td>ニードルホルダー 15cm 湾曲 「極細」</td> <td>外科専門医</td><td>ST-B-15-8.2</td><td></td></tr><tr><td>ナイロン 10/0 x 15 cm on 3.8 mm 3/8 丸型テーパー (直径 0.07mm) CV300</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>丸型縫合鉗子 湾曲 0.3 mm 120 mm</td><td>B. ブラウン</td><td>FD281R</td><td></td></tr><tr><td>丸型縫合鉗子 ストレート 0.3 mm 120 mm</td><td>B. ブラウン</td><td>FD280R</td><td></td></tr><tr><td>丸型ハンドル バンナス スプリングハサミ-str/12.5 cm</td><td></td><td>15400-12</td><td></td></tr><tr><td>スプリングハサミ-Cvd Sm ブレード</td><td></td><td>15001-08</td><td></td></tr><tr><td>スティーブンス ハサミ 鈍い ストレート 110 mm</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>サージカルバックボード</td><td></td><td></td><td>硬質ラミネート段ボール 15 x 15 cm</td></tr><tr><td>サージカルドレープ</td><td></td><td></td><td>25 cm x 25 cm と 25 cm x 40 cm&nbsp;</td></tr><tr><td>手術顕微鏡</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>シリンジ - 1 mL</td><td>BD</td><td>592696</td><td></td></tr><tr><td>シリンジ - 3 mL</td><td>ライカ</td><td>M651</td><td></td></tr><tr><td>歯付き鉗子</td><td>BD</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>ウィスコンシン大学 ソリューション</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>保温パッド</td><td></td><td></td><td>遠赤外線保温パッド 20 x 25 cm</td></tr><tr><td>ウェストコット スプリングハサミ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ヤサルギル クリップ アプライヤー バヨネット</td><td>Aesculap</td><td>FE582K</td><td></td></tr><tr><td>ヤサルギル チタン クリップ パーマ 6.6 mm</td><td>Aesculap</td><td>A19FT222T</td><td></td></tr><tr><td>マウス 使用法</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Strain/SEX/Weight</td><td>Donor</td><td>Recipent</td><td></td></tr><tr><td>BALB/c、女性、19-23 g</td><td>7</td><td>21</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6、女性、17-20 g</td><td>7</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD45.1 BALB/c、女性、17-21 g</td><td>5</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

無菌技術、麻酔、および鎮痛の現代の基準に一致する修正マウス異所性心臓移植プロトコル

A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia

動物における心臓移植の実験モデルの開発は、免疫学および固形臓器移植の分野における多くの進歩に貢献してきた。異所性血管化マウス心臓移植モデルは、当初、不一致の近交系マウス系統の組み合わせを用いた移植片拒絶反応の研究に利用されていましたが、遺伝子組み換え株と治療法へのアクセスは、強力な新しい前臨床的洞察を提供することができます。基本的に、この技術の外科的方法論は、特に無菌技術、麻酔、鎮痛などの重要な要因に関して、術後の罹患率と死亡率に重大な影響を与える開発以来変わっていません。さらに、周術期管理の改善は、動物福祉と実験結果の両方を改善することが期待されています。本稿では,獣医麻酔の専門家と共同で開発したプロトコールについて報告し,周術期管理に重点を置いた手術手技について述べる.さらに、これらの改良の影響について説明し、この手順の重要な外科的ステップのトラブルシューティングについて詳しく説明します。

創傷治癒およびマウス回復の良好な結果を促進する上での外科的技術の有効性を決定するために、実験室での初期の実験は、レシピエントに対する可変免疫原性の様々な心臓移植片の生存特性を決定した。これらには、レシピエントと同じ主要組織適合遺伝子複合体(MHC)マーカーを共有する同系(n = 5)および同系(n = 5)移植片、および移植片とレシピエントが異なるMHCマーカーを有する主要なミスマッチ移植片(n = 9)が含まれていました。異所性腹部心拍の直接触診を使用して、進行中の移植片機能と生存率を評価し、拒絶反応と耐性の代理マーカーとして機能しました。
両方の対照群において、全ての移植片は、100日の実験時間エンドポイント(平均未定義)で生存可能であった。不一致群の平均生存期間は9日であった。 図1 は、ミスマッチ心臓移植片と対照心臓移植片の間の移植片生存の明確な対照を示すKaplan-Meier生存曲線を示しています16。これらのデータは、手順に続く適切な治癒反応を促進するのに十分で...

本論文では、異所性血管化心臓移植の修正技術を、更新された無菌技術、鎮痛、および麻酔で説明します。

The development of experimental models of cardiac transplantation in animals has contributed to many advances in the fields of immunology and solid organ ...

これは心臓移植の経済的で再現性のあるモデルです。これは、顕微手術のスキルを向上させるためと、ドナーまたはレシピエントとしての遺伝子組み換えマウス系統の使用を可能にするために使用できます。この技術には、手術後の罹患率を制限するために、通常の人間の手術のすべての疼痛管理と麻酔の複雑さが広く含まれています。このモデルは、外科的に誘発された免疫、移植拒絶反応に対するミスマッチの影響、および移植寿命を研究するために重要です。このモデルの一般的な外科的アプローチは、他のマウス固形臓器移植に修正された形で適用することができる。微視的なスケールとそれに関連する時間的制約により、わずかな誤差が生じます。成功への鍵は、専門家の監督による定期的な練習であり、困難な分野に関する具体的なフィードバックを提供します。手順を実演するのは、私の研究室の研究助手であるLiu Liuさんです。外科手術を支援するのは、ウェン・フア・ファン博士、ジャス・カウルさん、シャオ・チャンさんです。マウスを麻酔して誘導室から取り出した後、バリカンを使用して腹側の腹部を密接に剃って脱毛します。ドナーの場合、生殖器から腹側胸部の上縁まで伸びる領域を剃ります。剃った領域が横方向に中央腋窩線に達することを確認してください。清潔な潤滑性のある直腸プローブを動物の直腸に挿入し、マイクロポアテープを使用して手術用ボードに固定することにより、温度を監視します。外傷性鉗子、眼瞼反射、および筋緊張によって加えられる圧力による足または尾の刺激に対する反応を観察することにより、麻酔の深さを評価します。呼吸努力を観察しながら胸壁の動きを観察して呼吸数を測定して一回換気量を評価し、原稿に記載されているように呼吸数を算出します。滅菌綿の先端のアプリケーターを使用して手術部位を消毒したら、クロルヘキシジンを手術部位の中心から端まで円を描くように3回塗布し、続いてクロルヘキシジンとエタノールを同じパターンで組み合わせます。滅菌器具を配置する場所として、外科用ボードの両側に滅菌外科用ドレープを配置して、手術野を準備します。ドレープに小さな楕円形の開口部を作った後、提案された切開部位に開窓ドレープを置きます。前に示したように動物を準備した後、目の潤滑剤を塗ります。計画された切開部位に沿って29ゲージのインスリン注射器を使用して、腹側腹部に体重ベースの用量のブピバカインを皮下注射し、計画された切開の範囲をカバーする目に見えるブレブの直線を探します。次に、滅菌外科用メスの刃を使用して、8倍の倍率で腹側正中線皮膚切開を行います。開腹術が下腹部から肋骨縁まで広がっていることを確認してください。そして、術野を最大化するためにリトラクターを挿入します。滅菌ガーゼのセグメントを温めた0.9%塩化ナトリウム溶液で湿らせ、手術部位の上側に配置します。次に、湿らせた滅菌綿棒を使用して、腸をやさしく骨抜きにします。それらをこのガーゼの上に置き、ガーゼを臓器に巻き付けます。綿の先端のアプリケーターと丸い体の縫合鉗子の組み合わせを使用して、鈍い解剖技術で周囲の組織から腹部大動脈と下大静脈を解放して動員します。クリアランスの領域が血管の腎下面の間と大動脈の分岐部の上にあることを確認してください。後腹部血管を特定した後、鉗子を使用して大動脈を脊柱から離れる方向にそっと引っ張ります。湾曲した鉗子を腹部血管の後方に通すことによって、これらの血管の両側に頭尾方向にチャネルを作ります。計画された吻合ゾーンで特定され動員された各血管を、器具で結ばれた長さの10-Oナイロンを使用して、外科医の結び目に1回追加で投げます。腹部血管の頭部と抱擁端に外科用クランプを取り付けることにより、吻合部位を循環から隔離します。クランプが完全に閉塞するのに十分な程度に両方の血管を横切ることを確認してください。利き手でない手で鉗子を使用して大動脈を安定させます。大動脈の前面で30ゲージの針を使用して大動脈切開を行います。先端のまっすぐな顕微手術ハサミを使用して大動脈切開術を延長します。腺切開術を行うには、まっすぐな鉗子を使用し、大動脈切開術の中央に沿った点で下大静脈に穏やかな前方牽引を適用します。凹面を前方に向けて湾曲した顕微手術用ハサミを使用して、大動脈切開と同じ長さの下大静脈のセグメントを取り除きます。残りの血液の開いた血管の内部をヘパリン化塩化ナトリウム溶液で洗浄します。ドナーの心臓を腹部に配置し、上行大動脈が腹部大動脈切開術の真横にあり、心臓が回転していることを確認して、2回目の吻合のために肺動脈を引き抜くことができるようにします。10-Oナイロンを使用して、大動脈切開術の12:00の位置と上行大動脈の内腔の対応する端との間にステー縫合糸を配置します。先端をまっすぐにした鉗子を顕微手術用ニードルホルダーに取り付け、その後3回外科医の結び目で結び、両端を切断して約2ミリメートルの縫合糸を残します。大動脈切開術の6:00の位置と上行大動脈の対応する側面の間に2番目のステー縫合糸を配置します。この縫合糸は、その後のランニング縫合糸のベースとしても機能するため、最終的なタイオフのために少なくとも10ミリメートルの尾を残してください。大動脈切開術の解剖学的右端と上行大動脈の対応する自由端に対抗するために、10-Oナイロンの連続ランニング縫合糸を上向きに配置します。この手順を慎重に実行し、この行には約 4 回のスローを使用します。縫合糸の自由端を遠位ステー縫合糸の周りに通過させてから、2番目の連続した縫合糸を解剖学的左側に配置して、大動脈切開の残りの自由端との配置に影響を与えます。外科医の結び目を使用して縫合糸を尾に結び、さらに2回投げます。下大静脈の12:00の位置、静脈切開、および肺動脈の内腔の対応する四肢の間にステー縫合糸を置きます。このアンカーポイントから、肺動脈の解剖学的左端とそれに対応する静脈切開術の端の間に識別できるように連続ランニング縫合糸を配置します。静脈切開術の6:00の位置と肺動脈内腔の対応する四肢に針を通します。上昇する方法で、肺動脈の残りの自由端と静脈切開術の解剖学的右に針を通します。この線に平均4回のスローを使用してから、肺動脈と静脈切開術の最終的な自由端を一緒に描きます。縫合糸の自由端をアンカーに結び、器具を使用して、外科医の結び目を2回の追加スローで結び、余分な糸を切ります。血流を妨げる血管にねじれがないか確認してください。ゲルフォームを縫合ライン上に配置します。それらの周りに約2ミリメートルのゲルフォームを2枚置き、目に見えるすべての縫合線が覆われるように成形します。コドルクランプから始めて、次にセファロクランプから始めて、血管クランプを解放します。少量の出血が予想されるため、吻合部位の上に綿の先端のアプリケーターを先制して配置して圧力をかけます。目に見える漏れを修正した後、心臓の脈動をチェックします。それがない場合は、心臓血管にねじれがないか確認し、腸を心臓の上と周囲に再配置し、乾燥しているように見える場合は、温めた塩化ナトリウム溶液で腹腔を湿らせます。連続的な中断のない技術を使用して、最初に筋肉層を縫合し、次に皮膚を縫合することにより、非吸収性の6-Oプロレンモノフィラメントを使用して腹腔を閉じます。レシピエントが手術用ボードから取り外され、麻酔薬から外れたら、1ミリリットルの温かい生理食塩水を皮下投与し、術後の回復プロトコルに従って観察のために加温した準備されたケージにレシピエントを置きます。術後100日間の同系および先天性異所性マウス心臓移植の場合、完全な回復と受け入れが観察されました。.しかし、主要な異所性マウス心臓移植の場合、術後7日という早い時期に急速な拒絶反応が観察されました。吻合中は、縫合糸が手術野のどこにあるかを把握する必要があります。そうしないと、構造物に重大な損傷を与えたり、縫合糸が絡まったりする可能性があります。解剖と吻合のこれらの顕微手術技術は、異所性腎臓移植や同所性肝移植を含む他の小型哺乳類手術モデルに非常に適用可能であり、研究者は移植片拒絶反応を研究することができます。

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

マウス異所性心臓移植モデルは、拒絶反応や免疫応答のメカニズムを研究するための重要な方法であると多くの研究者によって証明されています。しかし、関係する技術はまだ厳しいです。標準的な技術を変更することにより我々は1000以上の移植で成功を収めている。...

マウスにおける異所心臓移植

マウスの子宮頸心臓移植モデルは、免疫学的ならびに虚血再灌流障害の研究によく適している。私たちは、非縫合カフ技術を使用して手順を変更し、このアプローチに1,000以上の成功移植を行った。 ここで、私たちはビデオを補足するためにこの技術のさらなる詳細を提供する。...

変更されたカフ法を用いたマウス子宮頸心臓移植モデル

マウスの心臓の異所性移植のための顕微手術のための技術が実証されています。これには、ドナー採取とレシピエント血管の吻合のための簡略化された方法が含まれています。...

異マウスハートTransplantion用に変更する方法

原稿は、マウスで異所性心移植を実行するために必要な手順について説明します。...

ネズミ異心臓移植技術

カフ技術は、技術的に困難な小血管の縫合糸吻合を避けることにより、マウスにおける異所性子宮頸部心臓移植のモデルを短縮し、促進します。このビデオペーパーで示されている技術的な詳細により、研究者は自分の研究室でこのモデルを確立できるはずです。...

マウスにおける異子宮頸心臓移植

我々は、ラットにおける異所性腹部心臓移植のモデルを記述し、現在の戦略の改変を暗示し、外科的アプローチを単純化する。さらに、重要な心筋細胞の耳内注射による新しい拒絶反応モデルを記述し、ラットにおける免疫学的分析をさらに可能にする。...

ラットにおける異所性心臓と心筋細胞移植のための免疫学的モデル

マウス子宮頸部異所性心臓移植のためのカフ技術にインナーチューブアプローチを導入し、カフ上の血管をエバートするのに役立ちます。我々は、2人の経験豊富な外科医間の協力が著しく手術時間を短縮することを発見した。...

マウスの心臓移植のためのカフ技術の最適化

我々は、ブタ異所性心臓移植モデルにおける心臓同種移植片全体への治療薬の送達のために、正常温熱 エクスビボ...

心臓同種移植への治療薬の送達のためのブタヘテロトピック心臓移植プロトコル

本プロトコールでは、心臓同種移植片拒絶反応のメカニズムを調べるためにマウス心臓移植モデルが用いられる。この異所性心臓移植モデルでは、手術効率が向上し、修正カフ技術を用いた心臓移植の頸部エンドツーエンド吻合によって心臓移植片の生存が確保されます。...

マウス頸部異所性心臓移植モデルのための修正カフ法

マウス心臓移植モデルは、移植免疫学を研究するための貴重な研究ツールとなります。本プロトコルは、層流を可能にするためにレシピエントの総頸動脈およびドナーの肺動脈幹にカフを配置することを含むマウス異所性頸部心臓移植を詳述する。...

血管カフを用いたマウスヘテロトピック頸部心臓移植

このプロトコルは、マウス頸部心臓移植のための簡略化された端側縫合吻合技術を提示し、移植免疫学の研究において堅牢かつ再現性の高いモデルを提供します。...

エンドツーサイド吻合技術を用いた子宮頸部ヘテロトピオマウス心臓移植による移植免疫学の研究

学ぶマウス異所性心臓移植の修正プロトコル。無菌技術と麻酔・鎮痛を統合し、遺伝子改変マウスを用いた移植免疫と拒絶反応のメカニズム解明に貢献する経済的で再現性の高い微細外科モデルです。

無菌技術、麻酔、および鎮痛の現代の基準に一致する修正マウス異所性心臓移植プロトコル

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