Name: マウスにおける横行大動脈狭窄の修正技術 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 52 s
Description: 学ぶマウスにおける横行大動脈狭窄（TAC）の簡易手術法。自己製作の開創器を用いて心肥大や心不全を誘導し、左室質量と駆出率の変化を評価する。侵襲性を低減した動物モデル構築技術です。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

この研究は、中国国家自然科学財団(NSFC 81822002)によって資金提供されています。この作業に参加したすべてのメンバーに感謝します。

現在のプロトコルは、中国武漢の華中科技大学同済医科大学同済病院の倫理委員会によって承認されています。この手順は、雄の成人C57 / BL6マウス(>10週齢)で行われます。すべての手術器具は、手術前にオートクレーブ滅菌によって滅菌されました。
1.手術器具の準備
<ol><li>5 mLシリンジを用意し、針ホルダーで針の先端をつまんで鈍らせます。</li>
	<li>27 Gの針を用意し、針ホルダーで鈍らせます。眼科用ハサミで針の先端を切ることは、針を鈍らせる別の方法です。</li>
	<li>27G針の先端を90°曲げます。 注:この針は、血管狭窄のために大動脈と結びつけるためのスペーサーとして使用されます。</li>
	<li>市販の鉄線(医療グレード、直径0.5 mm、 材料表を参照)を使用し、針の周りにひもを付けます(図1A)。針の鈍い先端に小さなスネアまたはループを形成します(図1B)。 注:この再利用可能な器具は、特別な自作のリトラクターとして機能し、後のステップで大動脈の下に絹縫合糸を通過させることができます。</li>
	<li>手術前にすべての手術器具(上記で作成した特別な開創器を含む)をオートクレーブして滅菌します。</li>
</ol>2.動物の準備
<ol><li>体重に応じて、ペントバルビタールナトリウム溶液(50 mg / kg、材料表を参照)の腹腔内注射を介してマウスを麻酔します。.100μLの0.5%リドカインを手術領域に局所的に皮下注射する。</li>
	<li>鉗子の先端でマウスのつま先をつまんで、マウスが完全に麻酔されていることを確認します。</li>
	<li>麻酔下での乾燥を防ぐために、眼科用軟膏を両眼に塗布します。</li>
	<li>脱毛クリームまたはバリカンで喉と胸の上部から髪を取り除きます。</li>
	<li>外側に移動する同心円状のヨウ素と70%エタノールの3つの交互のスクラブで、髪のない領域を消毒します。</li>
	<li>マウスを滅菌ドレープで覆われた加熱パッドの上に仰臥位で置き、頭をオペレーターに向けます。四肢を粘着テープで固定し、4-0縫合糸で切歯を固定します(図2A)。</li>
	<li>直腸プローブを挿入します( 材料の表を参照)手術中の体温を監視します。手術中は体温を37°Cに維持してください。</li>
	<li>滅菌手袋を着用してください。 注意: 滅菌手袋を着用したら、他の滅菌されていない領域や物体に触れないでください。</li>
	<li>滅菌した眼科用ハサミで新しい使い捨て滅菌ドレープに穴(直径1〜1.5 cm)を切ります。滅菌ドレープをマウスの上に置き、穴から髪の毛のない操作フィールドが見えることを確認します。 注:このステップにより、オペレーターは他の滅菌されていない領域に触れることを回避できるため、手術中に無菌状態を維持するのに役立ちます。</li>
</ol>3.横行大動脈の狭窄
<ol><li>メスの刃で胸骨上ノッチ(図2B)のレベルで1.5cmの垂直皮膚切開を行います。皮膚切開部を胸骨角のレベルまで拡大します。 注:胸骨上ノッチは、マヌブリウムスターニの上端にあるノッチです。これは、マウスの毛が除去されたときに検出できる表面記号です(図2B)。胸骨角は、マヌブリウムスターニとコーパススターニの間の関節です。胸骨が露出すると、肋骨と同じレベルの胸骨に水平の白い線として表示されます(図2C)。</li>
	<li>皮膚と表在性筋膜を慎重に分離し、気管と近位胸骨を露出させます。上端から胸骨角まで、胸骨に3〜4 mmの縦正中線切開を慎重に行います(図2D)。 注:マウスに急性気胸を引き起こす危険性があるため、切り傷は胸骨角を超えてはなりません。</li>
	<li>鉗子とその下の胸腺と弧大動脈で胸骨をそっと持ち上げます。まっすぐな鉗子を慎重に使用し、標的血管とその周囲の組織を鈍く解剖します。</li>
	<li>ユーザーの右手の端にワイヤースネアが含まれていた以前に自作のリトラクター(ステップ1.4)を持ちます。</li>
	<li>自作開創器のスネアを大動脈の下に、左総頸動脈と右頚動脈の起点の間に慎重に通します(図2E)。</li>
	<li>自作のリトラクターを左手に渡して、右手を他の楽器用に予備にします。</li>
	<li>右手に顕微鏡ピンセットを持って、7-0シルク縫合糸を最後にスネアのループに通し、リトラクターを引き出します。これにより、さらなる結紮のために動脈の周りに絹縫合糸を残すことができます(図2F)。 注意: 穏やかに、大動脈弓を元の位置から引きずりすぎないでください。</li>
	<li>27 Gの針を大動脈と平行に置き、縫合糸を針と大動脈の周りに結びます(図2G、H)。 注:大動脈結紮がないことを除いて、偽の手順は同じである必要があります。</li>
	<li>眼科用鉗子と、27Gの針と大動脈に結び付けられた結び目を保持する別の鉗子で27Gの針をつかみます。結紮から27Gの針をすばやく、しかし穏やかに引き抜きます(図2H)。 注意: 結び目はきつすぎてはいけません、さもなければ針を引き出すのは簡単ではありません。大動脈が破裂した場合に針を抜くときは注意してください。</li>
	<li>中断された縫合パターンで4−0合成モノフィラメント縫合糸で皮膚を縫合する(図2I)。</li>
</ol>4.術後ケア
<ol><li>マウスを暖かいパッド( 材料の表を参照)に置き、マウスが復活するのを待ちます。通常、マウスは約60分で復活します。 注:動物は、主胸骨横臥に十分な意識を取り戻すまで放置してはなりません。</li>
	<li>0.5 mLの温かい生理食塩水を皮下注射し、動物の体液恒常性を監視します。 注:このステップは、動物が脱水症や血液量減少性循環状態になるのを防ぎます。</li>
	<li>エリスロマイシン軟膏を毎日3日間創傷表面に塗布する。</li>
	<li>術後の痛みの治療のために、1 mg / Lのブプレノルフィン局所麻酔薬を切開部位に非経口的に投与します( 材料の表を参照)。.</li>
	<li>術後、感染と障害の兆候(栄養失調、猫背の姿勢、波立たせられた毛皮)がないかマウスを監視します。 注:手術を受けた動物は、完全に回復するまで他の動物と一緒に戻されません。</li>
</ol>5.超音波イメージング
<ol><li>手術後28日目に超音波画像システム12,13(24MHz、材料表を参照)を介して血流速度を計算して、横行大動脈の結紮が成功したことを確認します。<ol><li>動物を20%酸素富化空気中の4.5%イソフルランで麻酔し、20%酸素富化空気中の0.5%イソフルランで維持する。</li>
		<li>マウスを仰臥位に置き、その四肢を粘着テープで電極に固定します。</li>
		<li>脱毛クリームを使用して、胸毛を取り除き、胸部に超音波カップリング剤を塗布します。</li>
		<li>プラットフォームをできるだけ左に傾けます。プローブを垂直位置に保ちながら、ノッチが動物のあごを指すように、胸部の右傍胸骨線に沿ってプローブを徐々に下げます。</li>
		<li>機器のBモードで、大動脈弓と狭窄部位がはっきりと見えるまでX軸とY軸を調整します。</li>
		<li>パルス波 ドップラーボタンをクリックして、パルス波 モードに切り替えます。</li>
		<li>破線のカーソルサンプルボリュームボックスを狭窄部位の遠位に調整し、最高速度の狭窄ジェットを見つけます。</li>
		<li>パルス波ドップラーボタンをもう一度クリックして、大動脈流の波形を取得し、ピーク速度を測定します。波のパターンのピークに応じて血流速度を計算します(図3A、B)。</li>
		<li>イメージャーをBモードに設定します。プラットフォームを水平位置に置きます。プローブを左傍胸骨線に30°回転させます。</li>
		<li>X 軸と Y 軸を調整して、短軸ビューを取得します。Mモードを押してインジケーターラインを表示し、Cine Storeをクリックして、心臓壁の厚さ、チャンバーの寸法、および駆出率を後で測定するために画像を保存します。 注意: 駆出率の計算式:100%*((LVボリューム;d - LVボリューム)/ LVボリューム;d)。心拍出量を計算するための式:ストローク量*心拍数(最初に描かれたフレームで)/ 1000。駆出率や心拍出量などのほとんどの指標は、超音波イメージングシステムのソフトウェア を介して 自動的に測定できます。LV Vol;d:左心室の拡張期容積。LV巻:左心室の収縮期容積。</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Heidenreich, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AHA%2FACC%2FHFSA+Guideline+for+the+Management+of+Heart+Failure%3A+A+Report+of+the+American+College+of+Cardiology%2FAmerican+Heart+Association+Joint+Committee+on+Clinical+Practice+Guidelines%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">AHA/ACC/HFSA Guideline for the Management of Heart Failure: A Report of the American College of Cardiology/American Heart Association Joint Committee on Clinical Practice Guidelines.</a> Circulation. 145 (18), 895(2022).</li>
<li>McDonagh, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ESC+Guidelines+for+the+diagnosis+and+treatment+of+acute+and+chronic+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">ESC Guidelines for the diagnosis and treatment of acute and chronic heart failure.</a> European Heart Journal. 42 (36), 3599(2021).</li>
<li>Lv, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+myocardial+infarction+and+myocardial+ischemia-reperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Induction of myocardial infarction and myocardial ischemia-reperfusion injury in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (179), e63257(2022).</li>
<li>Curaj, A., Simsekyilmaz, S., Staudt, M., Liehn, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+invasive+surgical+procedure+of+inducing+myocardial+infarction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Minimal invasive surgical procedure of inducing myocardial infarction in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (99), e52197(2015).</li>
<li>Nakamura, M., Sadoshima, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+physiological+and+pathological+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of physiological and pathological cardiac hypertrophy.</a> Nature Reviews Cardiology. 15 (7), 387-407 (2018).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bibliometric+analysis+on+the+progress+of+chronic+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Problems+in+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Bibliometric analysis on the progress of chronic heart failure.</a> Current Problems in Cardiology. 47 (9), 101213(2022).</li>
<li>Riehle, C., Bauersachs, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+animal+models+of+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Small animal models of heart failure.</a> Cardiovascular Research. 115 (13), 1838-1849 (2019).</li>
<li>Melleby, A. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+for+high+precision+aortic+constriction+that+allows+for+generation+of+specific+cardiac+phenotypes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">A novel method for high precision aortic constriction that allows for generation of specific cardiac phenotypes in mice.</a> Cardiovascular Research. 114 (12), 1680-1690 (2018).</li>
<li>Rockman, H. A., Wachhorst, S. P., Mao, L., Ross, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ANG+II+receptor+blockade+prevents+ventricular+hypertrophy+and+ANF+gene+expression+with+pressure+overload+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">ANG II receptor blockade prevents ventricular hypertrophy and ANF gene expression with pressure overload in mice.</a> The American Journal of Physiology. 266, 2468-2475 (1994).</li>
<li>Eichhorn, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+closed-chest+model+to+induce+transverse+aortic+constriction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A closed-chest model to induce transverse aortic constriction in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (134), e57397(2018).</li>
<li>Tavakoli, R., Nemska, S., Jamshidi, P., Gassmann, M., Frossard, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technique+of+minimally+invasive+transverse+aortic+constriction+in+mice+for+induction+of+left+ventricular+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Technique of minimally invasive transverse aortic constriction in mice for induction of left ventricular hypertrophy.</a> Journal of Visualized Experiments. (127), e56231(2017).</li>
<li>Lang, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+cardiac+chamber+quantification+by+echocardiography+in+adults%3A+an+update+from+the+American+Society+of+Echocardiography+and+the+European+Association+of+Cardiovascular+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+of+Echocardiography%22%5BJournal%5D)">Recommendations for cardiac chamber quantification by echocardiography in adults: an update from the American Society of Echocardiography and the European Association of Cardiovascular Imaging.</a> Journal of the American Society of Echocardiography. 28 (1), 1-39 (2015).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+cardiac+morphological+and+functional+changes+in+mouse+model+of+transverse+aortic+constriction+by+echocardiographic+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Assessment of cardiac morphological and functional changes in mouse model of transverse aortic constriction by echocardiographic imaging.</a> Journal of Visualized Experiments. (112), e54101(2016).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATF4+protects+the+heart+from+failure+by+antagonizing+oxidative+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">ATF4 protects the heart from failure by antagonizing oxidative stress.</a> Circulation Research. 131 (1), 91-105 (2022).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GCN5-mediated+regulation+of+pathological+cardiac+hypertrophy+via+activation+of+the+TAK1-JNK%2Fp38+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+%26+Disease%22%5BJournal%5D)">GCN5-mediated regulation of pathological cardiac hypertrophy via activation of the TAK1-JNK/p38 signaling pathway.</a> Cell Death & Disease. 13 (4), 421(2022).</li>
<li>Syed, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Up-regulation+of+Nrf2%2FHO-1+and+inhibition+of+TGF-beta1%2FSmad2%2F3+signaling+axis+by+daphnetin+alleviates+transverse+aortic+constriction-induced+cardiac+remodeling+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radical+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Up-regulation of Nrf2/HO-1 and inhibition of TGF-beta1/Smad2/3 signaling axis by daphnetin alleviates transverse aortic constriction-induced cardiac remodeling in mice.</a> Free Radical Biology and Medicine. 186, 17-30 (2022).</li>
<li>Zaw, A. M., Williams, C. M., Law, H. K., Chow, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally+invasive+transverse+aortic+constriction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Minimally invasive transverse aortic constriction in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (121), e55293(2017).</li>
<li>Lao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Operating+transverse+aortic+constriction+with+absorbable+suture+to+obtain+transient+myocardial+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Operating transverse aortic constriction with absorbable suture to obtain transient myocardial hypertrophy.</a> Journal of Visualized Experiments. (163), e61686(2020).</li>
<li>Veldhuizen, R. A., Slutsky, A. S., Joseph, M., McCaig, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+mechanical+ventilation+of+isolated+mouse+lungs+on+surfactant+and+inflammatory+cytokines%5BTitle%5D)+AND+%22European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">Effects of mechanical ventilation of isolated mouse lungs on surfactant and inflammatory cytokines.</a> European Respiratory Journal. 17 (3), 488-494 (2001).</li>
<li>Withaar, C., Lam, C. S. P., Schiattarella, G. G., de Boer, R. A., Meems, L. M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+failure+with+preserved+ejection+fraction+in+humans+and+mice%3A+embracing+clinical+complexity+in+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Heart failure with preserved ejection fraction in humans and mice: embracing clinical complexity in mouse models.</a> European Heart Journal. 42 (43), 4420-4430 (2021).</li>
</ol>

著者らは、利益相反はないと宣言した。

持続的な圧力過負荷の誘発は、徐々に心肥大と心不全を引き起こす可能性があります。このモデルは、世界中の多くの研究所で使用されています14,15,16。このプロトコルは、顕微手術のスキルや機械的換気を必要としない改良されたTAC法を提供しました。
このプロトコルの最も重要なステップは、大動脈弓の下に絹縫合糸を通すことです。スネアが大動脈弓に引っ掛かったとき、動脈への不必要な牽引を減らすために、すべての動きは穏やかでなければなりません。また、大動脈の周りの縫合糸は、スペーサーを引き出すのが難しい場合に備えてきつすぎてはいけません。手術後、マウスが急速に回復するためには、豊富な食物と水も重要です。
以前の原稿は、TACに他の方法を提供してきました。Eichhornらは、横大動脈10を結紮する閉鎖胸部法を...

心不全は、心室充填または排出血液の構造および機能の障害に起因する複雑な臨床症状です1。病期は、主に症状の重症度と身体活動に基づくニューヨーク心臓協会の機能分類によって定義されます2。駆出率が50%を超える患者では、構造的および/または機能的異常がナトリウム利尿ペプチドを上昇させ、駆出率(HFpEF)2を維持した心不全の診断を支持しました。虚血性心疾患は、心不全の複数の病因の中で主要な原因です。したがって、心筋梗塞モデル(永久冠動脈結紮など)は、心臓低灌流または虚血再灌流損傷後の病態生理学を研究するためにしばしば使用されます3,4。急性心筋損傷に加えて、高血圧、糖尿病、肥満、心筋症の家族歴などの他の危険因子も心不全の発症に寄与します。患者がステージA(心不全のリスクがある)を通過し、ステージB(心不全前)に入ると、構造変化が起こります1。たとえば、高血圧患者は最初に適応性左心室肥大を経験し、その後徐々に不適応心肥大に発展し、病理学的リモデリングによって心不全に移行します5。
さまざまな心血管疾患の末期段階として、慢性心不全は何十年にもわたって研究されてきました6。薬物注入(アンジオテンシンII)、代謝障害(糖尿病または高カロリー食)、大動脈狭窄など、複数のマウスモデルが心不全の研究に広く使用されています7。これらのモデルの中で、アンジオテンシンII灌流は腎臓7などの様々な臓器副作用を伴う。代謝障害の誘発は通常、かなり長い期間を必要とします。上行大動脈狭窄は、ヒト疾患との関連性が限定的であると考えられてきた7。
TACは、後負荷を増加させ、心肥大と心不全を誘発する信頼性の高いモデルです8。オープンチェストTACモデルは、Rockmanらによって最初に記述され、世界中の多数の研究所で使用されました9。しかしながら、この古典的なTAC手順は、マウスにかなり大きな外傷を引き起こし、それらの正常な行動を変化させ、それは長い回復時間を要し、さらなる治療を妨害する可能性がある10。他の修正された閉鎖胸部TAC手順は、いくつかの侵襲的ステップを減らしましたが、顕微手術のスキルまたは機械的換気を必要としました10,11。
本プロトコルは、胸骨の上端の3mmの正中線切開 を介して 自作の開創器を使用して大動脈弓への低侵襲アプローチを伴う段階的な方法を詳述している。このモデルは、顕微手術のスキル、機械的換気、または肋骨の切断を必要としないため、TAC手術を行うための迅速で外科的外傷が制限され、複雑で安価な方法を提供します。

<table><tbody><tr><td>4-0 非吸収性縫合糸</td><td>Jinhuan</td><td>HM403</td><td>皮膚の縫合に使用</td></tr><tr><td>5mLシリンジ</td><td>Haifuda Technology Co., Ltd.</td><td>BD-309628</td><td>リトラクターを含むスネアを作るために使用</td></tr><tr><td>7-0 非吸収性縫合</td>糸 <td>金環</td><td>HM701</td><td>大動脈結紮に使用</td></tr><tr><td>動物温度モニター</td><td>Kaerwen</td><td>FT3400</td><td>体温のモニタリングに使用</td></tr><tr><td>ブプレノルフィン&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>B-044</td><td>術後疼痛治療用</td></tr><tr><td>脱毛クリーム&nbsp;</td><td>Veet</td><td>N/A</td><td>手術部位から体毛を除去するために使用</td></tr><tr><td>ヒーティングパッド</td><td>Xiaochuangxin</td><td>N/A</td><td>体温の維持に使用</td></tr><tr><td>イブプロフェン</td><td>MCE</td><td>HY-78131</td><td>術後の痛みの治療に使用</td></tr><tr><td>鉄線 (0.5mm)</td> <td>清元</td><td>鉄線 #26</td><td>リトラクターを含むスネアを作るために使用</td></tr><tr><td>顕微鏡ピンセット</td><td>RWD</td><td>F12006-10</td><td>組織を貫通して分離して手術スペースを開くために使用されます</td></tr><tr><td>ニードルホルダー</td><td></td><td>RWD F12005-10</td><td>ゲージ針の先端をつまんで鈍らせるために使用されます</td></tr><tr><td>眼科用鉗子</td><td>RWD</td><td>F14012-10&nbsp;</td><td>皮膚やその他の組織を保持するために使用されます</td></tr><tr><td>眼科用ハサミ</td><td>RWD</td><td>S11001-08</td><td>マウスのスキング切開を行うために使用されます</td></tr><tr><td>ペントバルビタールナトリウム</td><td>シグマ</td><td>P3761</td><td>マウスの麻酔に使用されます</td></tr><tr><td>滅菌手術マット</td><td>ヘイル&ハーティ</td><td>211002</td><td>手術中に動物を置くために使用されます</td></tr><tr><td>超音波イメージングシステム</td><td>富士フイルムビジュアルソニックス</td><td>vevo1100</td><td>血流速度、左心室壁の厚さ、駆出率の測定に使用されます https://www.visualsonics.com/product/imaging-systems/vevo-1100</td></tr></tbody></table>

マウスにおける横行大動脈狭窄の修正技術

A Modified Technique for Transverse Aortic Constriction in Mice

横行大動脈狭窄(TAC)は、マウスモデルにおける圧力過負荷の形成に基づく心不全および心肥大に関する研究で頻繁に使用される手術です。この手順の主な課題は、横方向の大動脈弓を明確に視覚化し、標的血管を正確にバンド化することです。古典的なアプローチは、横方向大動脈弓を露出させるために部分開胸術を行います。しかし、それはかなり大きな外科的外傷を引き起こし、手術中に人工呼吸器を必要とするオープンチェストモデルです。不必要な外傷を防ぎ、手術手順を簡素化するために、大動脈弓は胸骨の近位比率 を介して 接近し、スネアを含む小さな自作リトラクターを使用して標的血管に到達して結合します。この手順は、胸膜腔に入ることなく実施することができ、人工呼吸器または顕微手術を必要とせず、マウスに生理学的呼吸パターンを残し、手順を簡素化し、手術時間を大幅に短縮する。侵襲性の低いアプローチと操作時間の短縮により、マウスはストレス反応が少なく、急速に回復することができます。

TAC手術が成功した後、超音波画像システムを使用して圧力過負荷が検出されました。手術の4週間後、マウスは心機能の低下を発症します。本研究では、TAC手術の有効性を、4週間後にTAC手術を受けたマウスの駆出率(EF)、分数短縮(FS)、左心室腫瘤(LV量)、左心室内径(LVID) を介して 検証しました。EFは、偽マウスと比較して4週間後のTACマウスにおいて有意に減少した(47%±10%対78%±4%、 p &lt;0.0001)(図4A)。LV質量はTACマウスにおいて有意に上昇した(158.1 ± 50.5 vs 91.8 ± 21.7 mg、 p = 0.0226)(図4B)。FSはTACマウスにおいて有意に減少した(23±5対46%±3%、 p &lt;0.0001)(図4C)。LVIDはTACマウスにおいて有意に上昇した(2.88 ± 0.39 vs 1.81 ± 0.52 mm...

本プロトコルは、自作リトラクターを用いた低侵襲横断大動脈狭窄(TAC)手順を伴う修正され単純化された技術を記述する。この手順は人工呼吸器や顕微鏡なしで行うことができ、圧力過負荷を引き起こし、最終的には心肥大または心不全につながります。

Transverse aortic constriction (TAC) is a frequently used surgery in research regarding heart failure and cardiac hypertrophy based on the formation of ...

このプロトコルは、TAC手術を行うための迅速な外科的外傷を制限し、複雑でなく、安価な質量を提供します。このモデルは、自作のリトラクターを使用して大動脈弓にアプローチし、顕微手術スケールや機械的換気を必要としないため、外科的外傷を大幅に制限します。はじめに、5ミリリットルの注射器を用意します。次に、針ホルダーで先端をつまんで針を鈍くします。ニードルホルダーで鈍らせた27ゲージの針を用意し、その先端を90度に曲げます。市販の鉄線を使用し、針に巻き付けます。針の鈍い先端に小さなスネアまたはループを形成します。オートクレーブ滅菌により、手術前にすべての手術器具を滅菌します。麻酔下での乾燥を防ぐために、つま先をつまんで麻酔の深さを確認します。眼科用軟膏を両眼に塗ります。次に、マウスを滅菌ドレープで覆われた加熱パッドの上に仰臥位で置き、頭をオペレーターに向けます。四肢を粘着テープで固定し、切歯を4-0縫合糸で固定します。次に、直腸プローブを挿入して、手術中の体温を監視します。滅菌した眼科用ハサミを使用して、新しい使い捨ての滅菌ドレープに穴を開けます。滅菌ドレープをマウスの上に置き、髪の毛のない操作フィールドが穴から見えることを確認します。切開を行った後、皮膚と表在筋膜を分離し、気管と近位胸骨を露出させます。次に、上端から胸骨角度まで胸骨に3〜4ミリメートルの縦正中線を慎重に切開し、鉗子で胸骨を静かに持ち上げます。まっすぐな鉗子を使用して、標的血管とその周囲の組織を鈍く解剖します。次に、以前に自作したリトラクターを右手にワイヤースネアで持ちます。左総頸動脈と右分母動脈の起点の間の大動脈の下のリトラクターのスネアを慎重に通過させます。リトラクターを左手に渡します。顕微鏡ピンセットを右手に持ち、最後に7-0シルク縫合糸をスネアループに通します。リトラクターを引き出します。27ゲージの針を大動脈と平行に置き、縫合糸を針と大動脈の周りに結びます。次に、眼科用鉗子で27ゲージの針を持ち、別の鉗子で27ゲージの針と大動脈に結び付けられた結び目を持ちます。27ゲージの針を結紮からすばやく、しかし静かに引き抜きます。中断された縫合パターンで4-0合成モノフィラメント縫合糸で皮膚を縫合します。マウスを暖かいパッドの上に置き、復活するのを待ちます。一般的に、マウスは約60分で復活します。4週間の手術後。駆出率および分数短縮は、偽マウスと比較して横行大動脈狭窄マウスにおいて有意に減少した。しかし、左室腫瘤および左室内径は横行大動脈狭窄マウスにおいて有意に上昇した。この粒子の最も重要なステップは、大動脈弓の下に縫合糸を通過させることです。すべての映画は、動脈への不必要な牽引を減らすために穏やかでなければなりません。この手順に従って、研究者は、心肥大または心不全の患者に対する潜在的な治療標的を調査するために、動物モデルに治療を適用することができます。

a-modified-technique-for-transverse-aortic-constriction-in-mice

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

マウスの横大動脈狭窄（TAC）は、心肥大や心不全の開発の基礎となるメカニズムを研究するために一般的に使用される実験的なモデルです。ここで、我々は、マウスの心肥大の再現性の学位を作成するために大動脈を収縮する手順を説明します。...

マウスの横大動脈狭窄

このビデオでは、圧力過負荷による心不全を調べるために、マウスの低侵襲横行大動脈狭窄の実験プロトコルを示します。...

マウスモデルにおける横方向大動脈弓バンディング:左心室における高圧誘導のためのマウスにおける低侵襲技術

このプロトコルの目的は、非侵襲的B-およびMモード心エコー法およびカラー/脈波ドップラーイメージングを用いて、横方向の大動脈狭窄によって作成された心臓病のマウスモデルにおいて心臓の構造的および機能的変化を評価することです。...

心臓形態学的および心エコーイメージングによって横大動脈狭窄のマウスモデルにおける機能の変更の評価

気管挿管と人工呼吸器の使用を排除しながら、低侵襲性横大動脈狭窄（MTAC）は、通常の横方向の大動脈狭窄（TAC）の必需品を節約します。これは、特に翻訳研究における左心室過負荷のハイスループット研究のために非常に望ましい方法であることが分かります。...

マウスにおける低侵襲横大動脈狭窄

このプロトコルの目的は、段階的に説明するマウスにおける低侵襲横大動脈狭窄 (TAC) の技術。挿管や一般的に使用される標準的な手順に必要な換気の除去、TAC...

左室肥大の誘導マウスにおける低侵襲の横大動脈狭窄のテクニック

ここでは、側方開胸による横方向の大動脈狭窄 (TAC) のプロトコルを提案します。この手法は、圧負荷および TAC...

マウスで横方向の大動脈狭窄を誘導するために閉じて胸モデル

ここでは、大動脈収縮の確立されたマウスモデルにおける外科的大動脈デベンディングのステップバイステッププロトコルについて説明する。この手順は、左心室逆リモデリングと肥大の回帰の基礎となるメカニズムを研究するだけでなく、心筋回復を加速させる可能性のある新しい治療オプションをテストすることができます。...

げっ歯類における大動脈デベンディングによる左心室逆改造の研究

このプロトコルは、吸収性縫合糸を有する一過性心筋肥大を得るための改善された方法を提示し、圧力過負荷を除去した後に減少した左心室肥大をシミュレートする。これは、心筋肥大型プレコンディショニングに関する研究のために貴重な可能性があります。.

過渡性心筋肥大を得るために吸収性縫合を用いて横方向の大動脈収縮を操作する

パイロシーケンシングでは、（R）多型を解析するために使用される、これまでで最も徹底的なシンプルな方法のひとつです。このメソッドは、多くの臨床的に関連する遺伝子多型を含めて迅速かつ効率的な一塩基多型の評価につながっている。パイロシークエンスの手法と方法論が説明されています。...

パイロシーケンシング：正確なジェノタイピングのための簡単​​な方法

血管新生は、既存の血管か​​らの血管の出芽は、自然および病理学的プロセスの両方に関連付けられています。ここでは、血管新生増強と阻害剤が直接文化の大動脈輪に追加できる大動脈リングアッセイを示す。発芽しneovessel伸長は6-12日の期間にわたって大動脈リングを調べることによって決定することができます。...

大動脈リングアッセイ

学ぶマウスにおける横行大動脈狭窄（TAC）の簡易手術法。自己製作の開創器を用いて心肥大や心不全を誘導し、左室質量と駆出率の変化を評価する。侵襲性を低減した動物モデル構築技術です。

マウスにおける横行大動脈狭窄の修正技術

さらに動画を探す