Phage-Mediated Genetic Manipulation of the Lyme Disease Spirochete <em>Borrelia burgdorferi</em>

Christian H. Eggers

doi:10.3791/64408

JoVE Journal
Immunology and Infection

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JoVE Journal Immunology and Infection

Phage-Mediated Genetic Manipulation of the Lyme Disease Spirochete Borrelia burgdorferi

ライム病スピロヘータ・ボレリア・ブルグドルフェリのファージ媒介遺伝子操作

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09:01 min

September 28, 2022

DOI: 10.3791/64408-v

Christian H. Eggers¹

¹Department of Biomedical Sciences,Quinnipiac University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

細菌細胞間でDNAを移動するバクテリオファージの能力は、それらを細菌宿主の遺伝子操作のための効果的なツールにします。ここで紹介するのは、 ボレリア・ブルグドルフェリのバクテリオファージであるφBB-1を誘導、回収、および使用して、ライム病スピロヘータの異なる株間で異種DNAを形質導入するための方法論です。

このプロトコルは、ライム病剤ボレリア・ブルグドルフェリの分子生物学を解剖するための別の重要なツールを説明しているので重要である。この技術の主な利点は、ファージ形質導入を使用することにより、エレクトロポレーションのように電気パルスの適用を必要とせずにボレリア・ブルグドルフェリにDNAを導入するための代替方法を提供することである。この方法は、ボレリア・ブルグドルフェリがその風土病サイクルに持続し、最終的にヒトにライム病を引き起こすために使用する分子メカニズムへのさらなる洞察を提供するために使用できます。

まず、150マイクロリットルの適切なボレリア・ブルグドルフェリクローンを、形質導入プロトコル用の密閉された滅菌円錐形遠心チューブ内の15ミリリットルのBSKに接種します。次に、ボレリア・ブルグドルフェリクローン内の異種DNAの選択と維持のために、適切な濃度の抗生物質または抗生物質の組み合わせを培地に補給し、摂氏33度でサンプルをインキュベートします。培養物が成長した後、適切な量の培養液を6, 000 Gで10分間遠心分離します。

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