Name: マウスモデルにおける上頚部神経節摘出術の手術手技 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-12-02T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 30 s
Description: 学ぶマウス上頚部神経節摘出術による交感神経切除法。薬理学的阻害の副作用を回避し、侵襲性を低減してアドレナリン能神経支配の除去を実現する信頼性の高い手術モデルです。

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Q. W.はNIH T32CA009685の支援を受けました。R. J. W. は NIH R01CA219534 の支援を受けました。メモリアルスローンケタリングがんセンターのコア施設は、NIH P30CA008748によってサポートされました。

ここに記載されている動物の手順は、メモリアルスローンケタリングがんセンターの施設動物管理および使用委員会によって承認されました。ここでは、8週齢の雄および雌のNSGマウスを使用した。動物は商業的な供給源から入手した( 材料表を参照)。器具は滅菌され、外科作業面は消毒され、動物の皮膚表面は消毒され、外科医は処置中ずっと滅菌手袋を着用します。
1. マウスの準備と術前のセットアップ
<ol><li>手術の前日に、誘導チャンバー(幅3.75 x 奥行き9 x 高さ3.75、 材料表参照)で2%イソフルランでマウスに麻酔をかけます。 注:麻酔の外科的平面は、個々の動物に応じて、通常3〜5分で達成されます。つま先をつまんで麻酔の妥当性を評価し、必要に応じてイソフルランの割合を増やします。.<ol><li>首の腹側を剃るか、製造元の指示に従って化学脱毛剤を使用してください( 材料表を参照)。</li>
	</ol></li>
	<li>手術当日に、誘導チャンバー内で2%イソフルランでマウスを麻酔する。つま先をつまんで麻酔の妥当性を評価し、必要に応じてイソフルランの割合を増やします。.</li>
	<li>先制全身鎮痛のために2 mg / kgのメロキシカムを皮下投与します。.局所眼軟膏( 材料表を参照)を塗布して、麻酔下での眼の損傷や乾燥を防ぎます。.</li>
	<li>マウスを解剖顕微鏡の背側に置き、熱サポートを提供します。精密気化器とノーズコーンを使用して、2%〜2.5%のイソフルランで吸入麻酔を維持します。低刺激性テープで両前肢をそっと固定します( 材料表を参照)。</li>
	<li>首の剃った腹側をポビドンヨードできれいにしてから、70%アルコールで拭きます。このプロセスをさらに2回繰り返します。手術部位に抜け毛がないことを確認してください。 注:短い湾曲した鉗子のペアを使用することもできます。この限られたスペースで適切に機能するために、細かい鉗子または眼科用鉗子のペアを使用してください。追加の術前セットアップは、施設のガイドラインに従って含めることができます。</li>
</ol>2.解剖
<ol><li>あごの下約2 mmから胸骨の切り欠きの上2 mmまでの小さなハサミを使用して、首の腹側に1.5 cmの正中線の皮膚切開を行います。</li>
	<li>鉗子で皮膚の縁を横方向に引っ込めて、下にある筋膜と顎下唾液腺を露出させます。両側の皮膚の下に先のとがったハサミを挿入して広げることにより、下にある筋膜から皮膚を分離します。鉗子で顎下腺を尾側に引き下げて、下にある筋肉を明らかにします。</li>
	<li>顎二腹筋と舌骨筋の後腹の接合部を見つけます(図1A、黒丸)。前頸静脈は、舌骨筋に対して縦方向および外側に走っているのが見られます。 注:舌骨筋は気管を縦方向に覆い、顎二腹筋は気管の頭蓋側に横向きにあります(図1C)。<ol><li>前頸静脈の外側にあるこの接合部に45°の角度の鉗子の先端を挿入して、上にある深い頸部筋膜に開口部を突き刺して広げます。</li>
	</ol></li>
	<li>手順2.3.1で作成したこのウィンドウは、45°の角度の鉗子で開いたままにします。もう一方の手で一対の湾曲した鉗子で拡散操作を実行して、この開口部をより広く拡大します。</li>
</ol>3.神経節の同定と切除
<ol><li>明らかにされた空間の側壁にある上頸部神経節(SCG)を見つけます。それは丸い真珠のような組織として現れます。 注:SCGが特定されない場合は、この空間の組織をより横方向および上方に検査する必要があります。SCGは、この領域にしばしば存在する脂肪と簡単に混同される可能性があります。脂肪はわずかに黄色味を帯びていますが、対照的に、SCGは真珠のように白く見えます。</li>
	<li>もう一方の手で鉗子で開口部を維持しながら、鉗子でSCGをそっとつかみ、開口部から引き出して見やすくします。</li>
	<li>SCGが見えたら、SCGの外側の基部をつかみ、周囲の組織に付着したままにします。もう一方の手を使用して、SCGを腹側および尾方向にゆっくりと穏やかに引っ込めます。<ol><li>SCGを複数回引っ込めて、神経節を少しずつ徐々に剥離します。この操作中は神経節を無傷に保ち、残りの神経節の残骸が残らないようにします。 注意: このステップで出血が発生する可能性があるため、神経節をそっと引っ張ってください。軽度の出血が発生した場合は、酸化再生セルロースまたは滅菌ガーゼの小さなストリップを使用して、開口部に30秒から1分間圧力を保持します。次に、ガーゼをゆっくりと持ち上げて再評価します。出血が止まるまで、必要に応じて開口部に圧力を保持するプロセスを繰り返します。</li>
	</ol></li>
	<li>神経節の基部を保持している他の鉗子をゆっくりと放します。血液の溜まりを探して出血をチェックします。 注意: この時点でのわずかなにじみは正常です。手順を閉じて終了する前に、持続的または重大な出血がないことを監視し、確認します。これが発生した場合は、手順3.3.1の説明に従って、開口部に圧力をかけたままにします。</li>
	<li>唾液腺を通常の解剖学的位置に戻します。単純な中断された5-0ナイロン縫合糸を使用して皮膚を近似して閉じます( 材料表を参照)。</li>
	<li>マウスを単独できれいなケージに入れて、麻酔から完全に回復できるようにします。 注意: マウスが麻酔から完全に目覚めるまでに5〜15分かかる場合があります。胸骨横臥を維持するのに十分な意識を取り戻すまで、マウスを放置しないでください。完全に回復するまで、マウスを他のマウスと一緒にケージに入れないでください。マウスの術後回復を少なくとも24時間に1回、72時間評価する。</li>
</ol>

<ol><li>Magnon, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autonomic+nerve+development+contributes+to+prostate+cancer+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Autonomic nerve development contributes to prostate cancer progression.</a> Science. 341 (6142), 1236361(2013).</li>
<li>Zhao, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Denervation+suppresses+gastric+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Denervation suppresses gastric tumorigenesis.</a> Science Translational Medicine. 6 (250), 115(2014).</li>
<li>Zahalka, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adrenergic+nerves+activate+an+angio-metabolic+switch+in+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Adrenergic nerves activate an angio-metabolic switch in prostate cancer.</a> Science. 358 (6361), 321-326 (2017).</li>
<li>Amit, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+p53+drives+neuron+reprogramming+in+head+and+neck+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Loss of p53 drives neuron reprogramming in head and neck cancer.</a> Nature. 578 (7795), 449-454 (2020).</li>
<li>Renz, B. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+signaling+via+muscarinic+receptors+directly+and+indirectly+suppresses+pancreatic+tumorigenesis+and+cancer+stemness%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">Cholinergic signaling via muscarinic receptors directly and indirectly suppresses pancreatic tumorigenesis and cancer stemness.</a> Cancer Discovery. 8 (11), 1458-1473 (2018).</li>
<li>Lucido, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innervation+of+cervical+carcinoma+is+mediated+by+cancer-derived+exosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecologic+Oncology%22%5BJournal%5D)">Innervation of cervical carcinoma is mediated by cancer-derived exosomes.</a> Gynecologic Oncology. 154 (1), 228-235 (2019).</li>
<li>Peterson, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basal+cell+carcinoma+preferentially+arises+from+stem+cells+within+hair+follicle+and+mechanosensory+niches%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Basal cell carcinoma preferentially arises from stem cells within hair follicle and mechanosensory niches.</a> Cell Stem Cell. 16 (4), 400-412 (2015).</li>
<li>Maronde, E., Stehle, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mammalian+pineal+gland%3A+Known+facts%2C+unknown+facets%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Endocrinology+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">The mammalian pineal gland: Known facts, unknown facets.</a> Trends in Endocrinology & Metabolism. 18 (4), 142-149 (2007).</li>
<li>Yamazaki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ontogeny+of+circadian+organization+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Rhythms%22%5BJournal%5D)">Ontogeny of circadian organization in the rat.</a> Journal of Biological Rhythms. 24 (1), 55-63 (2009).</li>
<li>Huang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((S100%2B+cells%3A+A+new+neuro-immune+cross-talkers+in+lymph+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">S100+ cells: A new neuro-immune cross-talkers in lymph organs.</a> Scientific Reports. 3 (1), 1114(2013).</li>
<li>Dieguez, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melatonin+protects+the+retina+from+experimental+nonexudative+age-related+macular+degeneration+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pineal+Research%22%5BJournal%5D)">Melatonin protects the retina from experimental nonexudative age-related macular degeneration in mice.</a> Journal of Pineal Research. 68 (4), 12643(2020).</li>
<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bilateral+superior+cervical+ganglionectomy+attenuates+the+progression+of+%CE%B2-aminopropionitrile-induced+aortic+dissection+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Bilateral superior cervical ganglionectomy attenuates the progression of β-aminopropionitrile-induced aortic dissection in rats.</a> Life Sciences. 193, 200-206 (2018).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+superior+cervical+sympathetic+ganglion+in+ischemia+reperfusion-induced+acute+kidney+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">The role of the superior cervical sympathetic ganglion in ischemia reperfusion-induced acute kidney injury in rats.</a> Frontiers in Medicine. 9, 792000(2022).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superior+cervical+ganglionectomy+alters+gut+microbiota+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Superior cervical ganglionectomy alters gut microbiota in rats.</a> American Journal of Translational Research. 14 (3), 2037-2050 (2022).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-Adrenergic+signaling+induces+Notch-mediated+salivary+gland+progenitor+cell+control%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">β-Adrenergic signaling induces Notch-mediated salivary gland progenitor cell control.</a> Stem Cell Reports. 16 (11), 2813-2824 (2021).</li>
<li>Boyd, A., Aragon, I. V., Abou Saleh, L., Southers, D., Richter, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cAMP-phosphodiesterase+4+%28PDE4%29+controls+%CE%B2-adrenoceptor-+and+CFTR-dependent+saliva+secretion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+Journal%22%5BJournal%5D)">The cAMP-phosphodiesterase 4 (PDE4) controls β-adrenoceptor- and CFTR-dependent saliva secretion in mice.</a> Biochemical Journal. 478 (10), 1891-1906 (2021).</li>
<li>Smith, B., Butler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+long-term+propranolol+on+the+salivary+glands+and+intestinal+serosa+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">The effects of long-term propranolol on the salivary glands and intestinal serosa of the mouse.</a> The Journal of Pathology. 124 (4), 185-187 (1978).</li>
<li>Sucharov, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-Adrenergic+receptor+antagonism+in+mice%3A+A+model+for+pediatric+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">β-Adrenergic receptor antagonism in mice: A model for pediatric heart disease.</a> Journal of Applied Physiology. 115 (7), 979-987 (2013).</li>
<li>Ding, C., Walcott, B., Keyser, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+alpha1-+and+beta1-adrenergic+modulation+of+lacrimal+gland+function+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">The alpha1- and beta1-adrenergic modulation of lacrimal gland function in the mouse.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 48 (4), 1504-1510 (2007).</li>
<li>Grisanti, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prior+%CE%B2-blocker+treatment+decreases+leukocyte+responsiveness+to+injury%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Prior β-blocker treatment decreases leukocyte responsiveness to injury.</a> JCI Insight. 5 (9), 99485(2019).</li>
<li>Alito, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autonomic+nervous+system+regulation+of+murine+immune+responses+as+assessed+by+local+surgical+sympathetic+and+parasympathetic+denervation%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiologica%2C+Pharmacologica+et+Therapeutica+Latinoamericana%22%5BJournal%5D)">Autonomic nervous system regulation of murine immune responses as assessed by local surgical sympathetic and parasympathetic denervation.</a> Acta Physiologica, Pharmacologica et Therapeutica Latinoamericana. 37 (3), 305-319 (1987).</li>
<li>Yun, H., Lathrop, K. L., Hendricks, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+central+role+for+sympathetic+nerves+in+herpes+stromal+keratitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">A central role for sympathetic nerves in herpes stromal keratitis in mice.</a> Ophthalmology & Visual Science. 57 (4), 1749-1756 (2016).</li>
<li>Haug, S. R., Heyeraas, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+sympathectomy+on+experimentally+induced+pulpal+inflammation+and+periapical+lesions+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Effects of sympathectomy on experimentally induced pulpal inflammation and periapical lesions in rats.</a> Neuroscience. 120 (3), 827-836 (2003).</li>
<li>Savastano, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+standardized+surgical+technique+for+rat+superior+cervical+ganglionectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A standardized surgical technique for rat superior cervical ganglionectomy.</a> Journal of Neuroscience Methods. 192 (1), 22-33 (2010).</li>
<li>Garcia, J. B., Romeo, H. E., Basabe, J. C., Cardinali, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+superior+cervical+ganglionectomy+on+insulin+release+by+murine+pancreas+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Autonomic+Nervous+System%22%5BJournal%5D)">Effect of superior cervical ganglionectomy on insulin release by murine pancreas slices.</a> Journal of the Autonomic Nervous System. 22 (2), 159-165 (1988).</li>
<li>Ziegler, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+sympathetic+denervation+attenuates+myocardial+inflammation+and+improves+cardiac+function+after+myocardial+infarction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Local sympathetic denervation attenuates myocardial inflammation and improves cardiac function after myocardial infarction in mice.</a> Cardiovascular Research. 114 (2), 291-299 (2017).</li>
<li>Getsy, P. M., Coffee, G. A., Hsieh, Y. H., Lewis, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+superior+cervical+ganglia+modulate+ventilatory+responses+to+hypoxia+independently+of+preganglionic+drive+from+the+cervical+sympathetic+chain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">The superior cervical ganglia modulate ventilatory responses to hypoxia independently of preganglionic drive from the cervical sympathetic chain.</a> Journal of Applied Physiology. 131 (2), 836-857 (2021).</li>
<li>Dieguez, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superior+cervical+gangliectomy+induces+non-exudative+age-related+macular+degeneration+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Superior cervical gangliectomy induces non-exudative age-related macular degeneration in mice.</a> Disease Models & Mechanisms. 11 (2), 031641(2018).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperactivation+of+sympathetic+nerves+drives+depletion+of+melanocyte+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Hyperactivation of sympathetic nerves drives depletion of melanocyte stem cells.</a> Nature. 577 (7792), 676-681 (2020).</li>
<li>Pirzgalska, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sympathetic+neuron-associated+macrophages+contribute+to+obesity+by+importing+and+metabolizing+norepinephrine%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Sympathetic neuron-associated macrophages contribute to obesity by importing and metabolizing norepinephrine.</a> Nature Medicine. 23 (11), 1309-1318 (2017).</li>
<li>Kajimura, D., Paone, R., Mann, J. J., Karsenty, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Foxo1+regulates+Dbh+expression+and+the+activity+of+the+sympathetic+nervous+system+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Foxo1 regulates Dbh expression and the activity of the sympathetic nervous system in vivo.</a> Molecular Metabolism. 3 (7), 770-777 (2014).</li>
</ol>

著者は開示するものは何もありません。

このプロトコルは、SCG入力の外科的片側アブレーションのためのマウスモデルを記述する。この技術は、様々な設定におけるアドレナリン作動性神経支配の効果を研究することを可能にする。さらに、切除された交感神経節は、 in vitro 実験30用の3Dマトリゲル培養で増殖させることもできる。
SCGxを含む研究は、解剖学的構造が大きいため、解剖学的に簡単に解剖できるため、主にラットで行われています。マウスのSCGxはZieglerらによって以前に記載されており26、他の研究で簡単に報告されていますが21、22、27、28、この技術はラットで使用されたものに基づいており、CCAはSCGの切除前に曝露および解剖されます。ラットモ...

複数の研究により、腫瘍微小環境の神経が腫瘍の進行をサポートする上で積極的な役割を果たすことが報告されています。アドレナリン作動性交感神経のアブレーションは、in vivoで前立腺がんおよび胃がんの腫瘍の発生と播種を損なうことが示されています1,2,3一方、アドレナリン受容体の薬理学的遮断は頭頸部がんの腫瘍増殖を阻害します4。交感神経の関与は、膵臓癌、子宮頸癌、および基底細胞癌の進行においても説明されています5,6,7。
交感神経系内では、上頸部神経節(SCG)が頭を神経支配する交感神経幹の唯一の神経節です。SCGは、唾液分泌や概日リズムなどの様々な生理機能を調節し、頸部リンパ節を直接神経支配する8,9,10。SCGはまた、黄斑変性症11および大動脈解離12の進行などの病理学的プロセスにも関与している。さらに、SCGの切除は、虚血再灌流誘発性急性腎障害を悪化させ13、ラットの腸内細菌叢を変化させることが報告されています14。
マウスモデルにおけるSCGの完全なアブレーションは、癌と自律神経系の研究を可能にする貴重な実験技術を表すでしょう。多くの研究がアドレナリン作動性アブレーションとして薬理学的アドレナリン作動性受容体遮断を利用しているが15,16,17,18,19,20、外科的切除は、反復的な薬理学的介入の必要性および関連する副作用を回避しながら、完全な片側アドレナリン作動性アブレーションを可能にする21,22,23。
SCGの外科的切除はラット24で記載されており、上頸部神経節切除術(SCGx)の効果を研究しているほとんどの報告はラットモデルを採用しています。ラットモデルと比較して、SCGxは、SCGのサイズが小さいため、マウスでは技術的により困難です。ただし、マウスは比較的取り扱いが簡単で、費用効果が高く、遺伝子操作に適しています。Garciaらは、マウスでSCGxを最初に報告した人の1人であり、インスリン放出に影響を与えることが判明しました25。より最近になって、Zieglerらは、ラットについて記載された公表された技術に基づいてマウスにおけるSCGxを記載した24、26。この記事および他の記事は、総頸動脈(CCA)が最初に同定され解剖され、続いてSCGがCCA21、22、27、28の分岐部から除去される方法を説明する。この記事では、CCAの解剖を回避し、それによってこの手順の最も深刻な合併症であるCCAの損傷による出血を最小限に抑える、より侵襲的で安全な技術をマウスで説明します。

<table><tbody><tr><td>抗チロシンヒドロキシラーゼ抗体</td><td>EMDミリポア</td><td>AB152</td><td></td></tr><tr><td>人工涙液潤滑剤眼科軟膏</td><td>Akorn</td><td>59399-162-35</td><td></td></tr><tr><td>Curity 2 x 2インチガーゼスポンジ8プライ、滅菌</td><td>Covidien</td><td>1806</td><td></td></tr><tr><td>Derfニードルホルダートーマス</td><td>サイエンティフィック</td><td>1177K00</td><td></td></tr><tr><td>解剖顕微鏡</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>デュモン#5/45鉗子</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11251-35</td><td></td></tr>デュ<tr><td>モン #7b 鉗子</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11270-20</td><td></td></tr>エ<tr><td>チロンナイロン縫合糸</td><td>エチコン</td><td>698H</td><td></td></tr><tr><td>ファインハサミ-タフカット</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>14058-09</td><td></td></tr><tr><td>低刺激性サージカルテープ</td><td>3Mブレンダー 70200419342</td><td></td><td></td></tr><tr><td>誘導チャンバー、2リットル</td><td>VetEquip</td><td>941444</td><td></td></tr><tr><td>イソフルラン</td><td>バクスター</td><td>1001936060</td><td></td></tr><tr><td>ナイール</td><td>教会&ドワイト株式会社</td><td></td><td>40002957 化学脱毛剤</td></tr><tr><td>NORADRENALINE RESEARCH ELISA</td><td>Labor Diagnostika Nord (Rocky Mountain Diagnostics)</td><td>BA E-5200</td><td></td></tr><tr><td>NSG Mouse Jackson</td><td>Laboratory</td><td>JAX:</td>005557 <td></td></tr><tr><td>Povidone-Yodine Swabstick</td><td>PDI</td><td>S41350</td><td></td></tr><tr><td>Webcol Alcohol Preps</td><td>Covidien</td><td>5110</td><td></td></tr></tbody></table>

マウスモデルにおける上頚部神経節摘出術の手術手技

Surgical Technique for Superior Cervical Ganglionectomy in a Murine Model

交感神経系が癌の進行に重要な役割を果たすことを示唆する証拠が増えています。アドレナリン作動性神経支配は、唾液腺分泌、概日リズム、黄斑変性症、免疫機能、および心臓生理学を調節します。マウス外科的交感神経切除術は、反復的な薬理学的介入の必要性と関連する副作用を回避しながら、完全な片側アドレナリン作動性アブレーションを可能にすることにより、アドレナリン作動性神経支配の効果を研究する方法です。しかし、マウスの外科的交感神経切除術は、上頸部神経節のサイズが小さいため、技術的に困難です。本研究では,上頸部神経節を確実に同定・切除し,交感神経系を切除するための術法について述べる.神経節の同定と除去の成功は、トランスジェニックマウスを使用して蛍光交感神経節を画像化し、切除後のホーナー症候群を特定し、切除された神経節のアドレナリン作動性マーカーを染色し、交感神経切除後の標的臓器におけるアドレナリン作動性免疫蛍光の低下を観察することによって検証されます。このモデルは、交感神経系によって調節される他の生理学的プロセスと同様に、癌の進行の将来の研究を可能にします。

このプロトコルは、マウスモデルにおけるSCGの外科的除去を記述する。 図2 は、CCA、前頸静脈、およびSCGを含む解剖学的ランドマークを示しています。解剖(図2A)では、右前頸静脈が気管の外側境界に沿って流れているのを見ることができます。前頸静脈よりも深い位置にあるため、左CCAとその内頸動脈(ICA)および外頸動脈(ECA)への分岐部は、静脈の外側にかすかにしか見えません。NSGでこれを調べると。B6-P0TdTomatoトランスジェニックマウス(シュワン細胞が蛍光赤色であるP0-Cre TdTomatoマウス、未発表の研究)で赤色蛍光ニューロンを有する蛍光顕微鏡下で、蛍光迷走神経がCCAに横方向に流れているのを見ることができ、蛍光SCGはCCAの分岐部、前頸静脈の外側に見ることができます(図2B)。
正常マウス及びトランスジェニックマウスにおけるSCGの切除後、切除した組織を、非蛍光性SCG対照と比...

本プロトコルは、上頸部神経節を同定および切除することによるアドレナリン作動性神経支配のアブレーションのマウスモデルを記載する。

Growing evidence suggests that the sympathetic nervous system plays an important role in cancer progression. Adrenergic innervation regulates salivary ...

交感神経系は、がんの進行やその他の病気に重要な役割を果たしています。外科的交感神経切除術は、完全な片側アドレナリン作動性アブレーションを誘発することによってこれらのプロセスを研究するための貴重な方法です。この技術は、交感神経系の薬理学的阻害に関連する副作用を回避する。さらに、頸動脈の解離を回避するため、前述の方法よりも侵襲性が低い。このテクニックを実行するとき、神経節が存在する適切なスペースに入り、それを脂肪と区別するのは難しいかもしれません。したがって、ランドマークと実践を特定することが不可欠です。解剖学的構造は、動いているときと解剖されていないときはわずかに異なって見えるため、視覚的なデモンストレーションは、この技術の鍵となる解剖学的ランドマークを特定する方法に関するより良いガイドを提供します。眼の損傷や乾燥を防ぐために、麻酔をかけたマウスに局所眼科用軟膏を塗布することから始めます。マウスを背側の解剖顕微鏡の下に置き、精密気化器とノーズコーンを使用して吸入麻酔を維持します。低刺激性テープで両前肢を固定します。首の剃った腹側をポビドンヨードできれいにしてから、70%アルコールで拭きます。洗浄プロセスをさらに2回繰り返した後、手術部位の上に滅菌ドレープを置きます。次に、小さなハサミを使用して、あごの下約2ミリメートルから胸骨のノッチの2ミリメートル上まで、首の腹側に1.5センチメートルの正中線の皮膚切開を行います。両側の皮膚の下に先のとがったハサミを挿入して広げることにより、下にある筋膜から皮膚を分離します。次に、鉗子で皮膚の縁を横方向に引っ込めて、下にある筋膜と顎下唾液腺を露出させます。鉗子で顎下腺を尾側に引っ張って、下にある筋肉を明らかにします。次に、顎二腹筋と舌骨筋の後腹の接合部を見つけます。前頸静脈の外側のこの接合部に45度の角度の鉗子の先端を挿入して、上にある深い頸部筋膜に開口部を突き刺して広げます。45度の角度の鉗子でこの窓を開いたままにし、もう一方の手で湾曲した鉗子のペアで広げ操作を実行して、この開口部を広げます。明らかにされた空間の側壁に上頸部神経節またはSCGを見つけます。もう一方の手で鉗子で開口部を維持しながら、鉗子でSCGをそっとつかみ、開口部から引き出して見やすくします。SCGが見えたら、周囲の組織に付着したままのSCGの外側基部をつかみます。一方、SCGを腹側と尾方向にゆっくりとゆっくりと複数回引っ込め、神経節を少しずつ徐々に剥離させます。この操作中は神経節を無傷に保ち、残りの神経節の残骸が残らないようにします。神経節の基部をゆっくりと解放し、血液の溜まりを探して出血をチェックします。完了したら、唾液腺を通常の解剖学的位置に戻します。単純な中断された5-0ナイロン縫合糸を使用して皮膚を近似して閉じます。解剖中、右前頸静脈は気管の外側境界に沿ってコースをたどりました。赤色蛍光ニューロンを有するP0 tdTomatoトランスジェニックマウスを蛍光顕微鏡で調べたところ、総頸動脈に横方向に流れる蛍光迷走神経が、前頸静脈外側の総頸動脈の分岐部に蛍光SCGが観察された。トランスジェニックマウスにおいて切除されたSCGは、非蛍光SCG対照と比較したその赤色蛍光によって確認された。免疫蛍光染色により、アドレナリン作動性神経のマーカーであるチロシンヒドロキシラーゼが確認された。上頸部神経節郭清術後、眼瞼下垂である眼瞼下垂が認められ、これはホーネル症候群の徴候です。右上頚部神経節摘出術後の右顎下唾液腺のチロシン水酸化酵素の免疫蛍光染色で,チロシン水酸化酵素神経染色を欠いたアドレナリン作動性シグナルのアブレーションが成功したことを確認した.対照的に、左対照顎下腺はアドレナリン作動性入力を維持し、チロシンヒドロキシラーゼ神経染色を無傷で維持し、これも定量によって確認された。唾液腺におけるノルエピネフリンのELISA定量は、対照偽手術側とは対照的に、上頸部神経節摘出術側の顎下腺におけるノルエピネフリン発現の有意な減少を確認した。SCGを取り外すときは、辛抱強く穏やかにしてください。少しずつゆっくりとそれを悶えます。そうしないと、SCGに接続された頸動脈が簡単に損傷し、出血する可能性があります。

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