Name: 非侵襲的微小透析技術 による ラット心臓からの動的連続採血 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 52 s
Description: 学ぶ 微小透析法によるラット心臓からの非侵襲的動的連続採血技術。リアルタイムで血液成分をモニタリングし、心血管疾患のバイオマーカー解析や診断・治療への応用が可能です。

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この研究は、中国国家自然科学基金会(82104533)、中国ポスドク科学基金会(2020M683273)、四川省科学技術局(2021YJ0175)、および四川省科学技術計画の主要研究開発プロジェクト(2022YFS0438)の支援を受けました。一方、著者らは、TRI-ANGELS D&H TRADING PTEのシニア機器エンジニアであるYuncheng Hong氏に感謝の意を表します。LTD.(シンガポール市、シンガポール)、マイクロダイアリシス技術の技術サービスを提供するため。

動物プロトコルは、成都中医薬大学の管理委員会によって承認されています(記録番号:2021-11)。特定無病原菌雄性Sprague Dawley(SD)ラット(8-10週,260-300g)を独立した換気ケージで飼育し,実験室環境を22°C,相対湿度65%に維持し,本研究に用いた。動物は商業的な供給源から入手した( 材料表を参照)。すべてのラットは、期間中、遊離水と食事で1週間の適応給餌に慣れていました。
1. 実験準備
<ol><li>図1に示すように、採血のマイクロダイアリシスに関与する機器を組み立てます(材料の表を参照)。</li>
	<li>微小透析採血用の灌流液として、3.50 mmol / Lのクエン酸塩、7.50 mmol / Lのクエン酸ナトリウム、および13.60 mmol / Lのグルコースを含む抗凝固剤クエン酸デキストロース溶液(ACD)を準備します( 材料の表を参照)。</li>
	<li>使用前に、0.22μmの膜ろ過ユニットでACDをろ過し、超音波で気泡を除去してください。SDラットの刺激を減らすために、ACDを37°Cに保ちます。</li>
</ol>2. 微小透析配管システムの開通性検査
<ol><li>透析ユニットのプローブの入口をシリンジ針、チューブアダプター、およびfepチューブに取り付けます(材料表を参照)。 注:マイクロダイアリシスプローブの青い端は流体の流入用で、透明な端は流体の流出用です。</li>
	<li>ACDs 18を2μL/minの速度で配管システムに灌流し、微小透析配管システムの開通性を確認します。 注:ACDがサンプル収集サイトから流れる場合、妨げられないマイクロ透析システムを使用して、さらなる心臓採血を行うことができます。そうでない場合は、血液プローブに漏れの破損がないか、パイプとパイプのジョイントが密閉されていないかどうかを確認する必要があります。</li>
</ol>3.マイクロダイアリシスプローブの移植
<ol><li>0.6 L / minの空気と酸素の混合物に2%イソフルランでラットを麻酔し、完全に意識不明のラットを手術台に固定し、動物の温度維持装置を使用して体温を37°Cに維持します( 材料の表を参照)。</li>
	<li>電気かみそりで首から毛皮を取り除き、ベタジンと70%アルコールの3ラウンドを交互に投与して手術部位を消毒します。ブピバカイン(1.5 mg / kg)をラットに注射します。.首の正中線に沿って1.5cmの切開を通して軟部組織と血管周囲筋膜を鈍く解剖することによって右頸静脈を露出させる。 注:実験で使用するすべての手術器具とツールは、オートクレーブ滅菌によって事前に滅菌する必要があります。滅菌手袋と外科用ドレープを使用してください。実験操作全体は無菌環境で実施する必要があります。麻酔および鎮痛レジメンについては、地元の動物使用ガイドラインに従ってください。.</li>
	<li>心臓遠位端の右頸静脈に4-0の外科用縫合糸を使用して取り外し可能なスリップノットを作成し、一時的に血流を遮断し、心臓近くの右頸静脈を1.5cm切開します。</li>
	<li>ラット心臓の近位端に向かって右頸静脈に針状のカテーテルスタイレット(長さ25mm、直径0.7mm、 材料表参照)を挿入し、血液微小透析プローブ(プローブ全長24mm、膜長10mm)をカテーテルに挿入し、カテーテルスタイレット19の斜め切開に沿って眼科鉗子をプローブに移植する。</li>
	<li>ガイドカテーテルスタイレットを取り外し、プローブの半透膜(膜長10 mm、膜径0.5 mm)を右頸静脈に完全に浸します。心臓の遠位端にある取り外し可能なスリップノットを解き、右頸静脈の血流を回復させます。</li>
	<li>4-0の外科用縫合糸を使用してプローブを右頸静脈で結紮し、プローブテールチューブを首の後ろに皮下通します。具体的なプローブ注入手順については 、図2 を参照してください。 注:この研究で使用された血液微小透析プローブによる分子カットオフは>20kDです。採取した血液サンプルには、分子量20kD未満の物質が含まれています。</li>
</ol>4. マイクロダイアリシスサンプリング
<ol><li>微小透析プローブ移植の1週間後、外科的外傷から回復したラットは微小透析サンプリングを受ける。覚醒しているラットを自由に動くタンクに入れ( 材料の表を参照)、プローブをマイクロ透析システムに接続します。ACDを2 μL/minの速度で1時間灌漑することにより、プローブ透析膜を平衡化します。</li>
	<li>微量透析血液サンプルを2 μL/minの流量で採取し、4°Cのフラクショナル容器に一時的に保管します。 注:得られた血液サンプルは、室温で10分間20,000 x g で遠心分離することにより、直接テストできます。または、次のテストのために-80°Cで保存することもできます。サンプルを収集するときは、プローブが脱出および/または漏れていないかどうかを常に観察することが重要です。</li>
</ol>5. ポストサンプリング操作
<ol><li>SDラットを空気と酸素の混合物に2%イソフルランを0.6 L /分で麻酔します。.</li>
	<li>プローブが右頸静脈にあることを再確認するために解剖します。微小透析プローブを右頸静脈から取り外し、超純水に入れます。</li>
	<li>最後に、5%イソフルランを吸入してラットを安楽死させる。</li>
	<li>プローブをパイプラインに接続し、超純水で2 μL/minの速度で一晩すすぎ、パイプとプローブ内の残留塩分を完全に洗い流します。</li>
	<li>プローブを取り外し、超純水に浸します。プローブ透析膜が収縮するのを防ぐために4°Cで保存してください。 注意: 透析液の量が灌流液の量と一致しない場合、プローブは凝固した血液によってブロックされる可能性があります。プローブは、可視物質がプローブ膜の先端から剥がれるまで膵臓タンパク質溶液に入れることができます。</li>
</ol>

<ol><li>van Rensburg, W. J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-mortem+evidence+of+a+diverse+distribution+pattern+of+atherosclerosis+in+the+South+African+population%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Post-mortem evidence of a diverse distribution pattern of atherosclerosis in the South African population.</a> Scientific Reports. 12 (1), 11366(2022).</li>
<li>Katz, A. J., Chen, R. C., Usinger, D. S., Danus, S. M., Zullig, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+disease+prevention+and+management+of+pre-existent+cardiovascular+disease+in+a+cohort+of+prostate+cancer+survivors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cancer+Survivorship%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular disease prevention and management of pre-existent cardiovascular disease in a cohort of prostate cancer survivors.</a> Journal of Cancer Survivorship. , (2022).</li>
<li>Rødevand, L., Tesli, M., Andreassen, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+disease+risk+in+people+with+severe+mental+disorders%3A+an+update+and+call+for+action%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular disease risk in people with severe mental disorders: an update and call for action.</a> Current Opinion in Psychiatry. 35 (4), 277-284 (2022).</li>
<li>Izumi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+circulating+cathepsin+K+on+the+coronary+calcification+and+the+clinical+outcome+in+chronic+kidney+disease+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+and+Vessels%22%5BJournal%5D)">Impact of circulating cathepsin K on the coronary calcification and the clinical outcome in chronic kidney disease patients.</a> Heart and Vessels. 31 (1), 6-14 (2016).</li>
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<li>Bernardi, P. M., Barreto, F., Dalla Costa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+a+LC-MS%2FMS+method+for+evaluating+lung+penetration+of+tobramycin+in+rats+by+microdialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+and+Biomedical+Analysis%22%5BJournal%5D)">Application of a LC-MS/MS method for evaluating lung penetration of tobramycin in rats by microdialysis.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 134, 340-345 (2017).</li>
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<li>Dmitrieva, N., Rodríguez-Malaver, A. J., Pérez, J., Hernández, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+release+of+neurotransmitters+from+superficial+and+deep+layers+of+the+dorsal+horn+in+response+to+acute+noxious+stimulation+and+inflammation+of+the+rat+paw%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pain%22%5BJournal%5D)">Differential release of neurotransmitters from superficial and deep layers of the dorsal horn in response to acute noxious stimulation and inflammation of the rat paw.</a> European Journal of Pain. 8 (3), 245-252 (2004).</li>
<li>Li, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+sampling+and+HPLC-MS%2FMS+quantification+of+sinomenine%2C+ligustrazine%2C+gabapentin%2C+paracetamol%2C+pregabalin+and+amitriptyline+in+rat+blood+and+brain+extracellular+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharmaceutica+Sinica%22%5BJournal%5D)">Microdialysis sampling and HPLC-MS/MS quantification of sinomenine, ligustrazine, gabapentin, paracetamol, pregabalin and amitriptyline in rat blood and brain extracellular fluid.</a> Acta Pharmaceutica Sinica. 55 (9), 2198-2206 (2020).</li>
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<li>Samson, R., Ennezat, P. V., Le Jemtel, T. H., Oparil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+disease+risk+reduction+and+body+mass+index%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Hypertension+Reports%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular disease risk reduction and body mass index.</a> Current Hypertension Reports. , (2022).</li>
<li>Kim, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((School+racial+segregation+and+long-term+cardiovascular+health+among+Black+adults+in+the+US%3A+A+quasi-experimental+study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Medicine%22%5BJournal%5D)">School racial segregation and long-term cardiovascular health among Black adults in the US: A quasi-experimental study.</a> PLoS Medicine. 19 (6), 1004031(2022).</li>
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<li>Guvenc-Bayram, G., Yalcin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+intermediary+role+of+the+central+cyclooxygenase+%2F+lipoxygenase+enzymes+in+intracerebroventricular+injected+nesfatin-1-evoked+cardiovascular+effects+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">The intermediary role of the central cyclooxygenase / lipoxygenase enzymes in intracerebroventricular injected nesfatin-1-evoked cardiovascular effects in rats.</a> Neuroscience Letters. 756, 135961(2021).</li>
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</ol>

著者は開示するものは何もありません。

CVDは、中国で徐々に発生率が増加している診療所で一般的な慢性疾患であり、発症年齢は若くなる傾向があり、ほとんどの患者の懸念とパニックを引き起こします20,21。世界の主要な死因であるCVDは、脳梗塞やその他の死亡率の高い疾患を誘発し、患者の健康生活を深刻に脅かす可能性があります22。虚血性心疾患、心筋症、アテローム性動脈硬化症、高血圧、脳卒中、および心不全を含むCVDは、心臓に血液を供給する動脈が狭くなったり硬化したりすると発生します23,24。CVDを診断するための多くの手段が存在しますが、血液検査は依然として最も便利で最速です。CVDに関連する早期マーカーの正確で高感度かつ迅速な決定は、疾患の病態生理学的状態を迅速に診断および理解することができます。したがって、CVD患者の診断ニーズの高まりは、高品質で代表的な血液サンプルを収集することを必要とします<...

生活のペースの加速と心理的圧力の増加に伴い、心血管疾患(CVD)は若年、中年、高齢者に発生する傾向があります1,2。CVDの罹患率と死亡率は高く、急性発症、急速な進行、および病気の長期経過の特徴があり、患者の安全に深刻な影響を及ぼします3。CVDの発生は、コレステロール、血清脂質、血糖値、心筋酵素、プロテインキナーゼK 4,5,6などの一部の血液成分の変化と密接に関連している可能性があります。患者の関連する状況は、定期的な血液検査項目を分析することによって最も迅速に管理することができます。したがって、血液サンプルの品質が検査結果の精度を決定します。しかし、従来の採血方法には避けられない欠点があり、外傷面積が大きい、採血量が少ない、オペレーターの要件が高い、薬物の変化をリアルタイムで反映できない、血液サンプルの前処理が面倒、実験動物の大量消費、動物の倫理要件を満たさないなど、実験結果に深刻な影響を及ぼします7,8,9.医療技術の継続的な進歩に伴い、採血の質もより高い要件を提唱しています。したがって、上記の欠点を克服するための新しい採血技術の開発が急務です。
マイクロ透析は、透析の原則10に基づくin vivoサンプリング技術です。非平衡条件下では、測定される化合物は、濃度勾配に沿って組織から組織に埋め込まれた微小透析プローブに拡散および灌流され、透析液とともに連続的に除去され、生体組織からサンプリングする目的を達成する11、12。従来のサンプリング方法と比較して、マイクロ透析技術は次の点で素晴らしい利点を持っています13,14,15:血液中のさまざまな化合物の変化の継続的なリアルタイム追跡。サンプリングは面倒な前処理を必要とせず、サンプリングサイトでのターゲット化合物の濃度を真に表すことができます。プローブを体のさまざまな部分に埋め込んで、標的化合物の吸収、分布、代謝、排泄、毒性を調べることができます。取得したサンプルには、生物学的高分子(>20 kD)は含まれていません。したがって、高品質の血液サンプルは、CVDと民族医学によって治療されるメカニズムのより良い解釈を保証します。
マイクロ透析サンプリングシステムは、一般に、マイクロインジェクションポンプ、接続チューブ、動物フリームーブメントタンク、マイクロ透析プローブ、およびサンプルコレクター16で構成されています。微小透析システムの装置の最も重要な部分として、一般的な微小透析プローブは、同心プローブ、可撓性プローブ、リニアプローブ、およびシャントプローブ17を備える。これらのうち、フレキシブルプローブは、ソフトで非金属のプローブであり、主に、覚醒し、自由に動く、または麻酔された動物の血管および心臓、筋肉、皮膚、脂肪などの末梢組織からサンプルを収集するために使用される13。血管または組織と接触すると、プローブを柔軟に曲げることができるため、プローブまたはサンプリング部位への不可逆的な損傷を回避できます。プローブ技術の継続的な発展に伴い、さまざまな分野でのマイクロ透析技術の応用も深まっています。この論文では、採血用に設計された柔軟なプローブを介して、非侵襲的マイクロ透析技術によってラットの心臓血液を動的かつ継続的に取得しました。

<table><tbody><tr><td>動物麻酔システム</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>R500IE</td><td></td></tr><tr><td>動物温度維持装置</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>69020</td><td></td></tr><tr><td>血液微量透析プローブ</td><td> CMA Microdialysis AB</td><td>T55347</td><td></td></tr><tr><td>カテーテル</td><td> CMA Microdialysis AB</td><td>T55347</td><td></td></tr><tr><td>Citrate</td><td>Merck Chemical Technology (Shanghai) Co., Ltd</td><td>251275</td><td></td></tr><tr><td>電気シェーバー</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>CP-5200</td><td></td></tr><tr><td>FEP チューブ</td><td> CMA Microdialysis AB</td><td>3409501</td><td></td></tr><tr><td>動物用自由移動タンク</td><td> CMA Microdialysis AB</td><td>CMA120</td><td></td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Merck Chemical Technology (Shanghai) Co., Ltd</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>止血鉗子</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>F21020-16</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>R510-22</td><td></td></tr><tr><td>マイクロハサミ</td><td>Beyotime Biotechnology Co., Ltd</td><td>FS221</td><td></td></tr><tr><td>Microdialysisコレクションチューブ</td><td> CMA Microdialysis AB</td><td>7431100</td><td></td></tr><tr><td>マイクロダイアリシスコレクター</td><td> CMA Microdialysis AB</td><td>CMA4004</td><td></td></tr><tr><td>Microdialysis in vitro スタンド</td><td> CMA Microdialysis AB</td><td>CMA130</td><td></td></tr><tr><td>マイクロダイアリシスマイクロインジェクションポンプ</td><td> CMA Microdialysis AB</td><td>788130</td><td></td></tr><tr><td>Microdialysis シリンジ (1.0 mL)</td><td> CMA Microdialysis AB</td><td>8309020</td><td></td></tr><tr><td>Microdialysis チューブアダプター</td><td> CMAマイクロダイアリシスAB</td><td>3409500</td><td></td></tr><tr><td>微多孔質フィルター膜</td>メル<td>クミリポア株式会社</td><td></td><td></td>R0DB36622</tr><tr><td>非吸収性外科用縫合糸</td><td>上海天清生物材料有限公司</td><td>S19004</td><td></td></tr><tr><td>手術台</td><td>Yuyan Scientific Instrument Co., Ltd</td><td>30153</td><td></td></tr><tr><td>眼科用鉗子</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>F12016-15</td><td></td></tr><tr><td>クエン酸ナトリウム</td><td>Merck Chemical Technology (Shanghai) Co., Ltd</td><td>1613859</td><td></td></tr><tr><td>スプレイグ・ドーリー (SD) ラット</td><td>Chengdu Dossy Experimental Animals Co., Ltd</td><td>SYXK(<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/64531/64531eq01.jpg" style="margin: auto;">)2019-049</td><td></td></tr>外科<tr><td>用ハサミ</td><td>レイワードライフテクノロジー株式会社</td><td>S14014-15</td><td></td></tr><tr><td>外科用ハサミ</td><td>上海Bingyu流体技術有限公司</td><td>BY-103</td><td></td></tr><tr><td>シリンジ</td><td>針 CMAのマイクロ透析AB</td><td>T55347</td><td></td></tr><tr><td>超音波洗剤</td><td>広東Goote超音波Co.、株式会社</td><td>KMH1-240W8101</td><td></td></tr></tbody></table>

非侵襲的微小透析技術 による ラット心臓からの動的連続採血

Dynamic Continuous Blood Extraction from Rat Heart via Noninvasive Microdialysis Technique

血液成分の動的分析は、心筋梗塞、不整脈、アテローム性動脈硬化症、心原性肺水腫、肺塞栓症、脳塞栓症などの心血管疾患およびそれらに関連する疾患を理解する上で非常に重要です。同時に、生きたラットにおける連続心臓採血技術を突破して、独特の民族医学療法の有効性を評価することが急務である。この研究では、血液微小透析プローブをラットの右頸静脈に正確かつ非侵襲的な外科的処置で移植しました。次に、オンラインマイクロ透析サンプル収集システムに接続することにより、心臓血液サンプルを2.87 nL /分から2.98 mL / minの速度で収集しました。さらに重要なことに、取得した血液サンプルは、4°Cのマイクロ透析容器に一時的に保存できます。 ラット心臓からの微小透析ベースのオンライン連続採血プログラムは、血液サンプルの品質を大幅に保証し、全身性心血管疾患に関する研究の科学的合理性を進歩および活性化し、血液学の観点から民族医学療法を評価しています。

本プロトコールにより、意識のあるラットから心臓血液を微小透析装置に設定されたサンプリングパラメータに従って得ることができた。正常な血液サンプルは真っ赤でなければなりませんが、低酸素症、潜在的な血栓、または貧血症の動物は濃い紫色または濃い赤を持っている可能性があります。血液マイクロダイアリシス法で得られたサンプルは無色透明透明で、高速液体クロマトグラフィーや質量分析法を用いることで、さまざまな疾患の血清マーカーや薬物や代謝物の血液分布の分析に利用できます。パラメータセットおよび採取した単血の量を 表1に示す。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64531/64531fig01.jpg"> 図1:血液マイクロダイアリシスに必要な機器・装置 。 (A)動物麻酔システム。(<s...

本プロトコルは、マイクロダイアリシス技術を用いたラット心臓血液のリアルタイムかつ動的収集のための簡便かつ効率的な方法を記載する。

Dynamic analysis of blood components is of great importance in understanding cardiovascular diseases and their related diseases, such as myocardial ...

ラット心臓からの動的連続採血技術は、血液成分を分析する上で非常に重要であり、循環器疾患とその関連疾患の理解に貢献しています。従来のサンプリング方法と比較して、この手法には、in vivo、リアルタイム、動的、非侵襲的であるという利点があり、生物学的微小分子や滴定サンプルの前処理がなく、外国の試験に前処理されません。この技術は、心血管疾患に適用できるだけでなく、高相液体クロマトグラフィーおよび質量分析と組み合わせて血液バイオマーカーを検出することにより、疾患の診断と治療にも役立つはずです。この方法は、心筋梗塞、無呼吸、アテローム性動脈硬化症などの心血管疾患の調査に使用できます。さらに、心原性肺水腫および肺および脳塞栓症にも適用されます。実験準備を行った後、透析ユニットプローブのインレットをシリンジ針、チューブアダプター、およびFEPチューブに取り付けます。抗凝固剤クエン酸デキストロース溶液を配管システムに灌流することにより、マイクロ透析配管システムの開存性を確認します。軟部組織と血管周囲筋膜の鈍的解剖によって右頸静脈を露出させる切開を行います。4-0外科用縫合糸を使用して、心臓の遠位端にある右頸静脈に取り外し可能なスリップノットを作り、血流を一時的に遮断します。次に、心臓近くの右頸静脈を切開します。針状のカテーテルスタイレットをラット心臓の近位端に向かって右頸静脈に挿入します。血液マイクロダイアリシスプローブをカテーテルに挿入し、カテーテルスタイレットの斜め切開に沿って眼科用鉗子を使用してプローブを埋め込みます。ガイドカテーテルスタイレットを取り外し、プローブの半透膜を右頸静脈に完全に浸します。心臓の遠位端にある取り外し可能なスリップノットを解き、右頸静脈の血流を回復させます。次に、4-0外科用縫合糸を使用して、プローブを右頸静脈と結紮します。覚醒しているラットを自由に動くタンクに入れ、プローブを微小透析システムに接続します。次いで、抗凝固剤クエン酸デキストロース溶液を毎分2マイクロリットルの速度で1時間灌漑し、プローブ透析膜を平衡化する。微小透析血液サンプルを収集し、摂氏4度のフラクショナルコンテナに一時的に保管します。プローブが右頸静脈にあることを再確認するには、ラットを解剖します。微小透析プローブを右頸静脈から取り外し、超純水に入れます。プローブをパイプラインに接続し、超純水で一晩すすぎ、パイプとプローブ内の残留塩分を完全に洗い流します。正常な血液サンプルは真っ赤に見えましたが、低酸素サンプルでは潜在的な血栓が観察されました。血液マイクロダイアリシス技術によって得られたサンプルは、無色透明透明であった。膜の破壊やプローブの滑りや変位を避けるために、プローブをラット頸静脈に配置して浸すときは注意が必要です。マイクロダイアリシス技術によって得られた血液サンプ

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Research

JoVE Journal

Medicine

医学

このプロトコルは、単離され、灌流されたラット心臓から心臓間質液を収集する方法を記載している。冠状静脈流出液灌流液から間質液透過液を物理的に分離するために、Langendorff灌流心臓を反転させ、心臓表面上に形成された経液透過液（間質液）を軟質ラテックスキャップを用いて収集する。...

単離されたラット心臓からのインタースティシャル透過性収集のための逆心モデル

ここでは、腹側海馬脳波との組み合わせで、てんかんと非てんかんラットのアスパラギン酸とグルタミン酸のリリースを分析する体内マイクロダイアリシス法について述べる。アスパラギン酸とグルタミン酸の細胞外濃度は、病気のさまざまな段階と相関があります。...

自由行動ラットの脳波記録中に興奮性アミノ酸の透析

ここでは、動物施設で標準的な装置で行うことができますし、生理学的または薬理学的に適用することができます実験のラットの心電図検査と動脈内の血圧 (BP)...

心電図の同時記録と侵襲的血圧ラットにおける測定

本稿では、低侵襲アプローチを用いてラットの心筋虚血とその後の慢性再灌流を行う効率的な方法を提示する。さらに、ラットの左心室血力学的機能は、心エコー検査および単離された作業心臓法によって評価される。...

ラットの心筋梗塞を誘導する半最小侵襲法と、単離した働く心臓システムによる心機能の評価

細胞および分子機能実験の心臓病学のゴールドスタンダードは心筋細胞です。この記事では、マウス心筋細胞を単離するための非ランゲンドルフ法への適応について説明します。...

マウス心筋細胞を一貫して単離するための簡単で効果的な方法

本プロトコールは、大動脈カニュール化および 元インビボ 新生児マウス心臓の逆行性灌流を記載する。...

ランゲンドルフ調製における新生児マウス心臓の使用のための修正技術

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脳波記録中のラットの側尾静脈からの脳脊髄液および血液のサンプリング

このプロトコルは圧力容積のコンダクタンス技術を使用して左心室の圧力および容積を測定する方法を記述する。この方法により、薬物が心臓に及ぼす影響を継続的にリアルタイムでモニタリングすることができます。...

圧力-体積導電率カテーテルを用いたラット左心室に対するフェルラ酸の影響のリアルタイム検出

このプロトコルは、光学的および電気的双方向バイオインターフェーシングのための高度な材料製造と ex vivo...

健康および虚血 性ex vivo ラット心臓における双方向電気および光電子界面

学ぶ 微小透析法によるラット心臓からの非侵襲的動的連続採血技術。リアルタイムで血液成分をモニタリングし、心血管疾患のバイオマーカー解析や診断・治療への応用が可能です。

非侵襲的微小透析技術によるラット心臓からの動的連続採血

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