Name: in vitroでのナノ粒子およびナノ構造表面の抗菌活性の評価 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-04-21T14:40:00.000+00:00
Duration: 11 min 52 s
Description: 学ぶナノ粒子とナノ構造表面の抗菌活性評価法。一貫性のある結果を得るためのin vitro技術を用いた4つの方法を紹介し、様々な微生物種との相互作用研究に役立つ。

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著者らは、米国国立科学財団(NSF CBET賞1512764およびNSF PIRE 1545852)、国立衛生研究所(NIH NIDCR 1R03DE028631)、カリフォルニア大学(UC)リージェンツ教員開発フェローシップ、研究シード助成金委員会(Huinan Liu)、およびパトリシアホルトトーレスに授与されたUC-リバーサイド大学院研究メンターシッププログラム助成金からの財政的支援に感謝します。著者らは、カリフォルニア大学リバーサイド校の先端顕微鏡および微量分析のための中央施設(CFAMM)がSEM / EDSの使用について、およびペリー・チャン博士がXRDの使用について提供した支援に感謝しています。著者らはまた、実験とデータ分析を支援してくれたモーガン・エリザベス・ネイターとサムヒサ・トゥムクールに感謝したい。この記事に記載されている意見、調査結果、結論、または推奨事項は著者のものであり、必ずしも国立科学財団または国立衛生研究所の見解を反映しているわけではありません。

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著者には利益相反はありません。

ナノ粒子およびナノ構造表面の抗菌活性を特徴付けるための4つのin vitro法(A-D)を提示しました。これらの方法のそれぞれは、ナノ材料に応答して経時的な細菌の増殖および生存率を定量化するが、初期の細菌播種密度、増殖、および経時的な生存率を測定するために使用される方法にはいくつかのばらつきが存在する。これらの方法のうちの3つ、直接共培養法(A)17、直接培養法(C)14、および集束接触暴露法(D)16は、単位体積あたりのCFUをカウントすることにより、ナノ材料への曝露期間後の細菌の増殖と生存率を定量化します。比較すると、直接露光法(B)は、離散的なリアルタイム光学密度(OD600)測定を介して細菌の増殖を定量化します。この方法は、CFUを定量するための時間的制約がある場合、および/または速度論的研究にリアルタイムの細菌密度の読み取りが必要な場合、直接共培養、直接培養、および集束接触曝露法にも適用できます。直接暴露法で試験する細菌種に有効...

米国だけでも、毎年170万人が院内感染(HAI)を発症し、これらの感染症の17人に1人が死亡しています1。さらに、HAIの治療費は年間280億ドルから450億ドルの範囲であると推定されています1,2。これらのHAIは、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌(MRSA)3,4および緑膿菌4が優勢であり、これらは一般的に慢性創傷感染症から分離され、通常、良好な患者転帰を生み出すために広範な治療と時間を必要とします。
過去数十年にわたって、これらおよび他の病原性細菌に関連する感染症を治療するために、複数の抗生物質クラスが開発されてきました。例えば、リファマイシン類似体は、MRSA、他のグラム陽性およびグラム陰性感染症、ならびにマイコバクテリウム属感染症の治療に使用されています5。1990年代には、増加する結核菌感染症を効果的に治療するために、追加の薬物をリファマイシン類似体と組み合わせてその有効性を高めました。しかし、結核菌症例の約5%がリファンピシン5,6に耐性を残しており、多剤耐性菌7に対する懸念が高まっています。 現在、抗生物質だけではHAIの治療には十分ではない可能性があり、これにより代替抗菌療法の継続的な探索が引き起こされています1。
銀(Ag)8,9,10および金(Au)11などの重金属、およびナノ粒子(NP)形態の二酸化チタン(TiO 2)12および酸化亜鉛(ZnO)13のようなセラミックス(それぞれAgNP、AuNP、TiO2 NP、およびZnONP)は、それらの抗菌活性について調べられ、潜在的な抗生物質の代替品として同定されている。さらに、マグネシウム合金(Mg合金)14,15,16、酸化マグネシウムナノ粒子17,18,19,20,21、水酸化マグネシウムナノ粒子[それぞれnMgOおよびnMg(OH)2]などの生体吸収性材料22,23,24、も検討されている。しかし、ナノ粒子の以前の抗菌研究では、一貫性のない材料と研究方法を使用していたため、比較が困難または不可能であり、本質的に矛盾するデータが得られました18,19。例えば、銀ナノ粒子の最小発育阻止濃度(MIC)および最小殺菌濃度(MBC)は、異なる研究において有意に異なっていた。Ipeら25は、グラム陽性菌およびグラム陰性菌に対するMICを決定するために、平均粒径~26nmのAgNPの抗菌活性を評価した。緑膿菌、大腸菌、黄色ブドウ球菌、MRSAの同定されたMICは、それぞれ2 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、および10 μg/mLでした。対照的に、Parvekarら26は、平均粒径5nmのAgNPを評価した。この場合、AgNP MICと0.625 mg / mLのMBCが黄色ブドウ球菌に対して有効であることがわかりました。さらに、Looら27は、4.06nmのサイズのAgNPを評価した。大腸菌をこれらのナノ粒子に曝露すると、MICおよびMBCは7.8μg/mLと報告されました。最後に、Aliら28は、平均サイズが18nmの球状AgNPの抗菌特性を調べました。緑膿菌、大腸菌、MRSAをこれらのナノ粒子に曝露すると、MICはそれぞれ27 μg/mL、36 μg/mL、27 μg/mL、36 μg/mL、MBCはそれぞれ36 μg/mL、42 μg/mL、30 μg/mLと同定されました。
ナノ粒子の抗菌活性はここ数十年で広く研究され報告されてきましたが、研究間の直接比較を可能にするために使用される材料と研究方法の基準はありません。このため、直接共培養法(A法)と直接暴露法(B法)の2つの方法を提示し、材料と方法の一貫性を保ちながらナノ粒子の抗菌活性を特徴付け、比較します。
ナノ粒子に加えて、ナノ構造表面も抗菌活性について調べられています。これらには、単層カーボンナノシート、カーボンナノチューブ、グラファイト29などの炭素ベースの材料、ならびに純粋なMgおよびMg合金が含まれる。これらの各材料は、炭素系材料によって細胞膜に課せられる物理的損傷や、Mgが分解する際の活性酸素種(ROS)の放出による代謝過程またはDNAの損傷など、少なくとも1つの抗菌メカニズムを示しています。さらに、亜鉛(Zn)とカルシウム(Ca)を組み合わせてMg合金を形成すると、Mgマトリックスの粒径の微細化が促進され、Mgのみのサンプル14と比較して、基板表面への細菌接着が減少します。抗菌活性を実証するために、直接的および間接的な表面接触を伴う細菌コロニー形成単位(CFU)の定量を通じて、ナノ構造材料上およびナノ構造材料周辺の細菌接着を経時的に決定する直接培養法(方法C)を紹介します。
サイズ、形状、配向など、表面上のナノ構造の形状は、材料の殺菌活性に影響を与える可能性があります。例えば、Linら16 は、陽極酸化および電気泳動堆積(EPD)によって、Mg基板の表面に異なるナノ構造MgO層を作製した。 in vitroでナノ構造表面への一定期間の曝露後、 黄色ブドウ球菌 の成長は、未処理のMgと比較して大幅に減少した。これは、未処理の金属Mg表面に対する細菌接着に対するナノ構造表面のより大きな効力を示した。本稿では、様々なナノ構造表面の抗菌特性のさまざまなメカニズムを明らかにするために、対象領域内の細胞表面相互作用を決定する集束接触露光法(方法D)について説明します。
この記事の目的は、さまざまなナノ粒子、ナノ構造表面、および微生物種に適用できる4つのin vitroメソッドを提示することです。比較可能性のために一貫性のある再現性のあるデータを生成するための各方法の主な考慮事項について説明します。具体的には、ナノ粒子の抗菌性を調べるために、直接共培養法17および直接露光法が用いられる。直接共培養法により、最小発育阻止濃度と最小殺菌濃度(それぞれMICとMBC90-99.99)を個々の種について決定でき、最も強力な濃度(MPC)を複数の種について決定できます。直接暴露法により、最小阻害濃度でのナノ粒子の静菌または殺菌効果を、経時的なリアルタイムの光学濃度測定値によって特徴付けることができます。直接培養14法は、ナノ構造表面に直接的および間接的に接触している細菌を検査するのに適している。最後に、細菌の直接適用と細胞-ナノ構造界面での細菌増殖の特性評価を通じて、ナノ構造表面上の特定の領域の抗菌活性を調べるために、集束接触曝露16法を提示します。この方法は、日本工業規格JIS Z 2801:200016から修正されたもので、微生物と表面の相互作用に着目し、微生物培養におけるバルク試料分解が抗菌活性に及ぼす影響を排除することを目的としています。

<table><tbody><tr><td>1.5 mL微量遠心チューブ</td><td>Milipore Sigma</td><td>Z336777</td><td></td></tr><tr><td>80 L NTRL認証対流乾燥オーブン&nbsp;</td><td>MTIコーポレーション</td><td>BPG-7082</td><td>https://www.mtixtl.com/BPG-7082.aspx</td></tr><tr><td>(ヒドロキシメチル)アミノメタン緩衝液pH 8.5;トリスバッファ&nbsp;</td><td>シグマ・アルドリッチ&nbsp;</td><td>42457</td><td></td></tr><tr><td>アナスペック&nbsp;チオフラビン T 超高純度グレード</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>50-850-291</td><td></td></tr><tr><td>電子増倍電荷結合素子 デジタルカメラ&nbsp;</td><td>浜松</td><td>C9100-13</td><td></td></tr><tr><td>ファルコン 15 mL コニカルチューブ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>14-959-49B</td><td></td></tr><tr><td>グルトアルデヒド</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>G5882</td><td></td></tr><tr><td>血球計算盤</td><td>Brightline, Hausser Scientific</td><td>1492</td><td></td></tr><tr><td>誘導結合プラズマ-発光分析 (ICP-OES)</td><td>PerkinElmer</td><td>8000</td><td></td></tr><tr><td>逆顕微鏡</td><td>Nikon</td><td>Eclipse Ti-S</td><td></td></tr><tr><td>Luria Bertani Broth</td><td>Sigma Life Science&nbsp;</td><td>L3022</td><td></td></tr><tr><td>Luria Bertani Broth + 寒天</td><td>Sigma ライフサイエンス&nbsp;</td><td>L2897</td><td></td></tr><tr><td>マクロチューブ 5.0&nbsp;&nbsp;</td><td>ベンチマーク科学</td><td>C1005-T5-ST</td><td></td></tr><tr><td>酸化マグネシウムナノ粒子</td><td>米国研究ナノマテリアル株式会社</td><td>株式#:&nbsp;US3310&nbsp;&nbsp;&nbsp;M</td><td>MgO、99+%、20 nm</td></tr><tr><td>MS セミミクロ天びん</td><td>メトラー・トレド</td><td>MS105D</td><td></td></tr><tr><td>ニトロセルロースペーパー</td><td>フィッシャーブランド</td><td>09-801A</td><td></td></tr><tr><td>非組織処理 12ウェルポリスチレンプレート</td><td>ファルコン コーニングブランド&nbsp;</td><td></td><td></td>351143</tr><tr><td>非組織処理された48ウェルポリスチレンプレート</td><td>Falcon Corning Brand&nbsp;</td><td></td><td></td>351178</tr><tr><td>非組織処理96ウェルポリスチレンプレート</td><td>Falcon Corning Brand&nbsp;</td><td></td><td></td>351172</tr><tr><td>ペトリ皿 100 mm</td><td>VWR</td><td>470210-568</td><td></td></tr><tr><td>シャーレ、15 mm</td><td>フィッシャーブランド</td><td>FB0875713A</td><td></td></tr><tr><td>pH メーター</td><td>VWR</td><td>SP70P</td><td></td></tr><tr><td>走査型電子顕微鏡 (SEM)</td><td>TESCAN&nbsp;</td><td>Vega3 SBH</td><td></td></tr><tr><td>Sonicator</td><td>VWR</td><td>97043-936</td><td></td></tr><tr><td>卓上遠心分離機</td><td>Fisher Scientific</td><td>accuSpin Micro 17</td><td></td></tr><tr><td>卓上遠心分離機&nbsp;</td><td>エッペンドルフ</td><td>遠心分離機5430</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン大豆寒天</td><td>MP</td><td>1010617</td><td></td></tr><tr><td>トリプチン大豆ブロス</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>22092-500G</td><td></td></tr><tr><td>UV-Vis分光光度計&nbsp;</td><td>Tecan</td><td>Infinite 200 PRO</td><td>https://lifesciences.tecan.com/plate_readers/infinite_200_pro</td></tr><tr><td>VWR Benchmark Incu-shaker 10L</td><td>VWR</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>X線パワーデフラクション</td><td>&nbsp;Panalytical</td><td>N/A</td><td>PANalytical Empyrean Series 2</td></tr></tbody></table> (英語)

in vitroでのナノ粒子およびナノ構造表面の抗菌活性の評価

Evaluation of Antimicrobial Activities of Nanoparticles and Nanostructured Surfaces In Vitro

銀、酸化亜鉛、二酸化チタン、酸化マグネシウムなどのナノ粒子およびナノ構造表面の抗菌活性は、臨床および環境環境および消耗品で以前に調査されてきました。しかし、使用される実験方法と材料の一貫性の欠如は、同じナノ構造タイプと細菌種の研究の間でさえ、矛盾する結果に至りました。ナノ構造を製品設計の添加剤またはコーティングとして採用したい研究者にとって、これらの相反するデータは臨床現場での利用を制限します。 
このジレンマに立ち向かうために、この記事では、ナノ粒子とナノ構造表面の抗菌活性を決定するための4つの異なる方法を提示し、さまざまなシナリオでのそれらの適用性について説明します。一貫した方法を適応させることで、研究間で比較し、さまざまなナノ構造タイプや微生物種に対して実装できる再現性のあるデータにつながることが期待されます。ナノ粒子の抗菌活性を決定する2つの方法と、ナノ構造表面の抗菌活性を決定する2つの方法を紹介します。 
ナノ粒子の場合、直接共培養法を使用してナノ粒子の最小阻害濃度および最小殺菌濃度を決定し、直接暴露培養法を使用して、ナノ粒子曝露に起因するリアルタイムの静菌活性と殺菌活性を評価することができます。ナノ構造表面の場合、直接培養法を使用してナノ構造表面に間接的および直接接触する細菌の生存率を決定し、集束接触暴露法を使用してナノ構造表面の特定の領域での抗菌活性を調べます。ナノ粒子とナノ構造表面の抗菌特性を決定する際に in vitro 研究デザインのために考慮すべき重要な実験変数について説明します。これらの方法はすべて比較的低コストであり、習得が比較的簡単で一貫性のために再現可能な技術を採用しており、幅広いナノ構造タイプと微生物種に適用できます。

酸化マグネシウムナノ粒子およびナノ構造表面の抗菌活性の同定は、異なる材料タイプおよび微生物種に適用可能な4つの in vitro 方法を使用して提示されている。
方法Aおよび方法Bは、ラグフェーズ(メソッドA)およびログフェーズ(メソッドB)でナノ粒子に24時間以上曝露された場合の細菌活性を調べます。方法AはMICおよびMBCに関する結果を提供し、方法Bはナノ粒子の阻害効果と殺菌効果を決定します。方法Cはナノ構造表面との直接的および間接的な接触による細菌活性を調べ、方法Dは細胞-ナノ構造界面の選択された領域での細菌活性を24時間以上調べます。
使用した方法を図1および図2に説明し、その結果を図3、図4、図5、図6、図7、および <...

ナノ粒子やナノ構造表面の抗菌活性を in vitro 技術を用いて評価する4つの方法を紹介します。これらの方法は、さまざまなナノ粒子およびナノ構造表面と広範囲の微生物種との相互作用を研究するために適応させることができる。

The antimicrobial activities of nanoparticles and nanostructured surfaces, such as silver, zinc oxide, titanium dioxide, and magnesium oxide, have been ...

プロトコルは、予備段階の調査からより複雑な表面検査まで、ナノ粒子およびナノ構造表面の抗菌活性を調べる方法を提供します。研究間で比類のないデータをもたらした前述の方法とは異なり、これらの方法は、異なるナノ粒子材料、ナノ構造材料、および微生物種間で一貫した比較可能な結果を生成します。方法AおよびBにおいてナノ粒子の均一な分布を維持することは困難であり得る。サンプルを徹底的にボルテックスすることでナノ粒子懸濁液を確保し、アリコート間で3〜4回ピペッティングすると懸濁液が維持されます 一晩増殖した細菌培養物1ミリリットルを1.5ミリリットルのマイクロ遠心チューブに分注することにより、培養細菌の収集を開始します。十分な数のアリコートを作成した後、それらを遠心分離して目的の着座密度に到達します。上清を回収容器に集める。そして、細胞ペレットを0.5ミリリットルの新鮮な増殖培地に再懸濁する。2本のチューブからの懸濁液を混ぜ合わせ、遠心分離を繰り返します。遠心化後、新鮮な増殖培地で2回目の洗浄を行い、チューブを遠心分離する前に、2本のチューブの内容物を1本に組み合わせることを繰り返します。3回目の洗浄を0.33ミリリットルのトリス緩衝液またはヒドロキシエチルアミノメタン緩衝液で行います。それぞれ0.33ミリリットルの容量の3つの懸濁液を1つの1.5ミリリットルのマイクロ遠心分離機に混ぜ合わせます。遠心化後、ペレット化された細胞から上清を除去し、細胞懸濁液またはラグフェーズ細菌播種培養として知られる1ミリリットルの新鮮なトリス緩衝液に細胞ペレットを再懸濁します。細菌およびナノ粒子培養物を形成するために、12ウェル非組織処理ポリスチレンプレートの各ウェルに2ミリリットルの細菌播種培養物を分注する。事前に秤量された酸化マグネシウム粒子を含む5ミリリットルのマイクロ遠心チューブごとに、3ミリリットルの細菌播種培養物を追加します。そしてチューブを短時間ボルテックスして、酸化マグネシウムナノ粒子を細菌と混合する。混合後、1ミリリットルの酸化マグネシウムナノ粒子懸濁液を3つの別々のウェルに分注し、酸化マグネシウムナノ粒子の各事前測定重量の三重サンプルを作成した。サンプルを摂氏37度、120rpmで一晩インキュベートします。そして、ピペットを使用して3ミリリットルのサンプルを個々の15ミリリットルの円錐管に移します。次に、適切な数の列に対して行Bから行Gの各ウェルに180マイクロリットルのトリスバッファーを加えて、96ウェルプレートで1〜10段階希釈を実行します。細菌サンプルを含む15ミリリットルの円錐管を短時間ボルテックスし、50マイクロリットルの細菌サンプルを行Aの個々のウェルに加えます次に、行Aから、20マイクロリットルの細菌サンプルを行Bの対応するウェルに移し、短時間混合します。滅菌ピペットチップを使用して、20マイクロリットルを行Bのウェルから行Cの対応するウェルに移し、行Gまでこれを続け、行Bの10から負の10から行Gの負の6への段階希釈を完了します。 プレート全体に広げて細胞培養物を分散させる。ウェルプレートを摂氏37度で一晩インキュベーターシェーカーに入れ、寒天プレートを摂氏37度で24時間インキュベートします。プレートを調べ、約25〜300個のコロニーを有するプレートを数えます。可能であれば、同じ希釈値のプレートを選択してください。試験する材料ごとに、増殖培地に3つの200マイクロリットルアリコートを3つのウェルに添加し、細菌培養液の200マイクロリットルアリコート3つを追加ウェルに追加のウェルに追加して、一晩細菌サンプルを希釈します。96ウェルプレートをプレートリーダーに入れてスキャンします。必要に応じて、600ナノメートルまたはOD600での光学密度が約0.01に達するまで、ブロスまたは一晩細菌培養液を添加し続けます。細菌ナノ粒子懸濁液および滅菌培地ナノ粒子懸濁液を調製するには、15ミリリットルの円錐管の三重セットから1ミリリットルの細菌培養物または培地を除去する。そして、それを事前に測定されたナノ粒子を含む5ミリリットルの遠沈管に加えます。チューブをボルテックスして溶液を混合します。5ミリリットルの遠沈管から15ミリリットルの円錐管に1ミリリットルのアリコートを移すことによって、ナノ粒子を均一に分配する。完了したら、各サンプル200マイクロリットルを96ウェルプレートの個々のウェルに分注します。前述の着座密度を決定した後、サンプルとコントロールを48ウェル非組織処理ポリスチレンプレートの個々のウェルに追加します。次に、0.75ミリリットルの細胞懸濁液をサンプルとコントロールを含む各ウェルに分注します。48ウェルプレートをインキュベーターシェーカーに入れ、摂氏37度で24時間、120RPMで振とうします。インキュベーション後、各グループから2つのサンプルを収集し、標識された5ミリリットルのマイクロ遠心チューブに個別に移します。各チューブに2ミリリットルの改訂されたシミュレートされた体液(RSBF)を追加します。滅菌した亜硝酸セルロース紙を直径1センチメートルにトリミングして準備します。カットしたニトロセルロース紙を、適切な培地を含む寒天プレートに置きます。次に、50マイクロリットルの希釈した細菌培養物をろ紙に加えてから、各サンプル表面の中央に50マイクロリットルの適切な培地を追加します。滅菌ピンセットを使用して、オーガーの表面から硝酸セロース紙を持ち上げます。硝酸セルロース紙を慎重に裏返し、細菌が50マイクロリットルの培地および目的のナノ構造表面に接触するようにサンプル表面に置きます。サンプルが培養中に分解可能な場合は、トリスバッファーとの接触を避けるために、その下にホルダーを置いて持ち上げます。ウェルを含むサンプルに1ミリリットルのトリスバッファーを加えて湿度を維持します。一晩インキュベートした後、各サンプル表面からニトロセルロース紙を収集し、5ミリリットルのトリスバッファーに入れます。収集したろ紙とナノ表面材料サンプルを5秒間ボルテックスします。サンプルからトリスバッファー懸濁液を採取し、個々の新鮮な収集チューブに入れます。方法Aを使用した抗菌効果により、酸化マグネシウムナノ粒子1ミリリットルあたり1ミリグラムの最小および阻害濃度(MIC)、およびグラム陰性大腸菌および緑膿菌に対してそれぞれ酸化マグネシウムナノ粒子1ミリリットルあたり1.0および1.6ミリグラムの最小殺菌濃度(MBC 99.9)が特定されました。グラム陽性表皮ブドウ球菌、黄色ブドウ球菌、およびメチシリン耐性黄色ブドウ球菌(MRSA)は、それぞれ1ミリリットルあたり0.5、0.7、および1ミリグラムのMIC値を示しました。1ミリリットルあたり1.6および1.2ミリグラムのNBC 99.99値は、それぞれ表皮および黄色ブドウ球菌について同定された。MRSAはNBC90を超えて減少しませんでしたが。1ミリリットルあたり1.2および1ミリグラムのMICは、薬剤感受性および薬剤耐性カンジダ種、CアルビカンスおよびCアルビカンスフルコナゾール耐性、またはFRでそれぞれ同定された。対照的に、酸化マグネシウムナノ粒子は、1ミリリットルあたり1および0.7ミリグラム、またはそれぞれC.グラブラタおよびCグラブラタエキノカンジン耐性、またはERのMIC値を示した。各候補種は1ミリリットルあたり0.7〜1.2ミリグラムのNBC 90に達しましたが、C.glabrata ERのみが1ミリリットルあたり1.2ミリグラムでNBC 99.9に減少しました。方法Bでは、ナノ粒子に曝露されたMRSAは指数関数的に成長し、ODは0.85になりました。酸化マグネシウムナノ粒子1ミリリットルあたり1.2ミリグラムおよびトリメトプリム1ミリリットルあたり6.25ミリグラムへの曝露は、それぞれ80.2%および81.6%の細菌増殖の減少をもたらした。同様に、水酸化マグネシウムナノ粒子1ミリリットルあたり2.9ミリグラムは、細菌の増殖を70.3%に減少させ、バンコマイシン1ミリリットルあたり1マイクロリットルへの曝露は、MRSAの増殖の99.99%減少をもたらし、酸化マグネシウムおよび水酸化マグネシウムナノ粒子の静菌活性を示唆した。方法Cは、間接接触による細菌増殖の阻害を示さなかった。結果は、ZC21が、テストされたすべてのサンプルについて、MRSAの接着と成長に対して最も強い抗菌活性を持っていることを示しました。方法Dでは、1.9A、1.9 AA、およびEPDサンプル、またはそれらのペアのろ紙に生存可能な黄色ブドウ球菌は特定されませんでした。しかし、ひざまずいた後にEPDサンプルにさらされると、ナノ構造表面とパレッドろ紙上のいくつかの細胞への細菌の増殖が減少しました。ナノ粒子およびナノ構造表面の抗菌活性を特定することで、慢性創傷やインプラント関連感染症に関連するものなど、バイオエンジニアリングアプリケーションにおける追加の調査が行われました。

evaluation-antimicrobial-activities-nanoparticles-nanostructured

Research

JoVE Journal

Bioengineering

バイオエンジニアリング（生体工学）

遷移金属と炭素の組み合わせから設計されたナノ粒子複合材料を含む媒体を使ったチューブを考えてみましょう。抗生物質耐性のグラム陽性菌とグラム陰性菌を別々のチューブに試験サンプルとして導入します。未処理の細菌を陰性対照として、抗生物質処理済みの細菌を陽性対照として含めましょう。振ってサンプルを培養します。グラム陰性菌では、多孔質の外膜と薄いペプチドグリカン層がナノ粒子の侵入を促進し、膜の破壊を引き起こします。ナノ粒子は活性酸素種の生成を引き起こし、DNA、タンパク質、膜を損傷させ、細菌の死を増加させます。グラム陽性菌では、テイコ酸で濃縮された厚いペプチドグリカン層がナノ粒子の浸透を制限し、細菌の死を抑えます。次に、培地を使って細菌の懸濁液を連続的に希釈します。希釈液を寒天に盛り込み、コロニー形成を促すために培養し、コロニー数を数えます。テストサンプル中のコロニー数は対照群よりも少なく、ナノ粒子の抗菌効果が確認されています。しかし、この効果はグラム陰性菌の方がグラム陽性菌よりも強かった。...

病原性細菌に対するナノ粒子複合体の抗菌活性の評価

Source: Holt-Torres, P. S. et al. Evaluation of Antimicrobial Activities of Nanoparticles and Nanostructured Surfaces In Vitro. J. Vis. Exp. (2023)This video demonstrates the use of the focused-contact exposure method to evaluate the antibacterial activity of nanostructured surfaces. It outlines the steps involved in establishing direct contact between bacteria and the nanostructured surface, incubation, bacterial collection, and colony counting to assess viability.

Assessing the Antibacterial Activity of Nanostructured Surfaces Using a Focused-Contact Exposure Method

ここでは、酵素の抗菌活性を迅速にスクリーニングし、特性評価するためのプロトコルを紹介します。マイクロスライド拡散アッセイと色素放出アッセイは、標的細菌基質を利用して、定性的および定量的な酵素活性評価を行います。...

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銀ナノ粒子とその抗菌活性と細胞毒性の評価変更多層カーボンナノ チューブの合成

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バイオ エンジニア リング アプリケーション用先端材料の抗菌特性

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インビトロおよびインビボでの鼻自己組織化ナノエマルジョン腫瘍ワクチンの調製、特性、毒性、および有効性評価

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本研究では、沈殿法を用いて酸化亜鉛ナノ粒子を合成しました。合成された粒子の抗菌効果は、多剤耐性メチシリン耐性 黄色ブドウ球 菌(MRSA)および 緑膿菌 菌株に対して試験されました。...

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