Name: コムギ中のイミダクロプリドの吸収、転座、分布の決定 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 11 s
Description: 学ぶイミダクロプリドのコムギにおける吸収、転座、分布の決定法。LC-MS-MSを用いて高感度に検出し、根と葉での動態を解析する。農薬の環境影響評価と適正使用に貢献する研究手法である。

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この研究は、中国国家自然科学基金会(第42277039号)の支援を受けました。

1.小麦種子の発芽
<ol><li>完全な顆粒、無傷の胚、均一なサイズ(長さ:6 mm±0.5 mm)の小麦種子(ジマイ20)を1,000個選択します。</li>
	<li>333.3mLの30%H2O2溶液を1Lメスフラスコに移し、イオン交換水で希釈して1Lの10%H2O2溶液を調製した。小麦種子を10%H 2 O2溶液に15分間浸して、種子表面を消毒します(図1)。</li>
	<li>小麦の種子を毎回10秒間、滅菌水で5回すすぎます。</li>
	<li>湿った滅菌濾紙が入ったガラスのペトリ皿に胚を上に向けて小麦の種子を均等に広げます(図2)。ペトリ皿を30°C、相対湿度80%の人工気候インキュベーターに入れます。小麦の種子が発芽して根付くまで、暗所で3日間培養します。</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64741/64741fig01.jpg"> 図1:小麦種子の消毒。コムギ種子を10%H2O2溶液(ビーカー中)に15分間浸し、種子表面を消毒した。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64741/64741fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64741/64741fig02.jpg"> 図2:小麦種子の発芽。 小麦種子を、湿った滅菌濾紙を含むガラスシャーレに均等に広げた。ペトリ皿を人工気候インキュベーターに入れて小麦種子を発芽させた。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64741/64741fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
2.小麦苗の栽培
<ol><li>551 mgのホーグランド基礎塩混合物を1 Lの脱イオン水に溶解し、1/2ホーグランド栄養溶液(0.75 mmol/L K 2 SO 4、0.1 mmol/L KCl、0.6 mmol/L MgSO 4、4.0 × 10-2 mmol/L FeEDTA、1.0 ×10−3 mmol/L H 3 BO3、1.0 × 10−3 mmol/L MnSO 4を含む)を調製する。 1.0 × 10−3ミリモル/L ZnSO 4、1.0 × 10−4ミリモル/L CuSO 4、および5.0 × 10−6ミリモル/L Na2 MoO 4)。</li>
	<li>小麦の種子(ステップ1.4)が発芽した後、水耕栽培用の1/2ホーグランド栄養溶液100mLを含む水耕栽培装置( 材料表を参照)に15本の小麦苗を置きます(図3)。水耕栽培装置全体を人工気候インキュベーター( 材料の表を参照)に入れ、25°C、相対湿度80%で7日間、16時間の明/8時間の暗明周期でインキュベートします。</li>
</ol><img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64741/64741fig03.jpg"> 図3:コムギ苗の水耕栽培。 コムギ苗を100mLの1/2ホーグランド養液中で0日、3日、7日間水耕栽培した。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64741/64741fig03large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
3. コムギ植物をイミダクロプリド溶液に曝露する実験
<ol><li>7日間の水耕栽培期間の後、小麦植物を0.5 mg / Lまたは5 mg / Lのイミダクロプリドを含む1/2ホーグランド栄養溶液に移植して、イミダクロプリド曝露実験を実施します。各水耕栽培装置で15本の小麦植物を育てます。イミダクロプリド濃度グループごとに15個の水耕栽培装置を設置して、サンプリング中に適切なサンプルが採取されるようにします。</li>
	<li>水耕栽培装置全体を人工気候インキュベーターに3日間置き、25°C、相対湿度80%、明長16時間/暗明周期8時間。</li>
	<li>暴露期間中、小麦の根(小麦植物あたり0.2 g)と葉(小麦植物あたり0.5 g)を毎日収集します。5つおきの水耕栽培装置からの小麦サンプルを並列グループとして統合し、サンプルのイミダクロプリド含有量を決定します。</li>
</ol>4.小麦からイミダクロプリドを抽出する手順
<ol><li>コムギ根からのイミダクロプリドの抽出<ol><li>実験誤差を避けるために、小麦の根を毎回10秒間流す滅菌水で4回洗浄し、根の表面に吸着したイミダクロプリドを取り除きます。</li>
		<li>小麦の根をハサミで約1cmに細断します(図4)。細かく刻んだ小麦の根10.00 gの重さを量り、50 mLの遠沈管に入れます。</li>
		<li>10 mLのアセトニトリルを遠沈管に加え、チューブをボルテクサー上で1分間ボルテックスします。次に、4 gの無水MgSO4 と1.5 gのNaClを遠沈管に加え、すぐにチューブを30秒間ボルテックスします。チューブを6,000 x gで5分間遠心分離します。</li>
		<li>使い捨てシリンジで上清を吸引し、シリンジフィルター(孔径0.22μm)に通してサンプルを採取します。</li>
	</ol></li>
	<li>コムギ葉からのイミダクロプリドの抽出(図5)<ol><li>新鮮な小麦の葉をハサミで約1cmに細切りにします(図4)。細かく刻んだ小麦の葉10.00 gを量り、50 mLの遠沈管に入れます。</li>
		<li>10 mLのアセトニトリルを遠沈管に加え、チューブをボルテクサー上で1分間ボルテックスします。</li>
		<li>4 gの無水MgSO4 と1.5 gのNaClを遠心管に加え、すぐにチューブを30秒間ボルテックスします。</li>
		<li>チューブを6,000 x gで5分間遠心分離します。</li>
		<li>遠心分離後、黒鉛化カーボンブラック(GCB)50 mgと無水MgSO4 150 mgを入れた5 mL遠沈管に上清2 mLを加え(サンプルから色素と水分を除去するため)、遠沈管を30秒間ボルテックスします(図6)。チューブを6,000 x gで5分間遠心分離します。</li>
		<li>使い捨てシリンジで上清を吸引し、シリンジフィルター(孔径0.22μm)に通してサンプルを採取します。</li>
	</ol></li>
</ol><img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64741/64741fig04.jpg"> 図4:細かく刻んだ小麦の根と葉。 新鮮な小麦の根と葉をハサミで約1cmに細断した。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64741/64741fig04large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64741/64741fig05.jpg"> 図5:コムギ葉中のイミダクロプリドの抽出。 サンプル中のイミダクロプリドをQuEChERS法を用いて抽出した(プロトコルのステップ4.2.1〜4.2.4)。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64741/64741fig05large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64741/64741fig06.jpg"> 図6:コムギ葉中のイミダクロプリドの精製。 除染剤は50 mg GCB + 150 mg MgSO4でした。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64741/64741fig06large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
5.イミダクロプリドの定量
<ol><li>0.2〜250 μg/Lのイミダクロプリド濃度から得られた標準曲線(y = 696.61x + 56.411、R = 1)に基づいて、液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析(LC-MS-MS)を使用してサンプル中のイミダクロプリドを定量します。(図7)。質量分析計には、C18 カラム(100 mm x 2.1 mm、3 μm)とエレクトロスプレーイオン化源(ESI+)が装備されていました。溶出プログラムとイオン源パラメータを 表1に示します。</li>
</ol><img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64741/64741fig07.jpg"> 図7:コムギ葉中のイミダクロプリドのクロマトグラムおよび質量分析。 上のパネルは、イミダクロプリドのクロマトグラムを示す(保持時間= 0.93分)。下のパネルは、0.93分でのイミダクロプリドの質量分析を示し、イミダクロプリドの生産の応答強度(m / z = 208.8)を示しています。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64741/64741fig07large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>カラム温度</td>
			<td>40 °C</td>
		</tr><tr><td>溶剤A</td>
			<td>99.9%水/0.1%ギ酸(V / V)</td>
		</tr><tr><td>溶剤B</td>
			<td>アセトニ トリル</td>
		</tr><tr><td rowspan="5">溶出プログラム</td>
			<td>0–0.5分, A = 20%</td>
		</tr><tr><td>0.5〜2分、A = 20%〜50%</td>
		</tr><tr><td>2–3 分, A = 50%</td>
		</tr><tr><td>3〜3.1分、A = 50%〜20%</td>
		</tr><tr><td>3.1〜5分、A = 20%</td>
		</tr><tr><td>流量(ミリリットル/分)</td>
			<td>0.3</td>
		</tr><tr><td>注入量(μL)</td>
			<td>5</td>
		</tr><tr><td>キャピラリー温度(°C)</td>
			<td>330</td>
		</tr><tr><td>気化器温度(°C)</td>
			<td>350</td>
		</tr><tr><td>シースガス流量(Arb)</td>
			<td>40</td>
		</tr><tr><td>補助ガス流量(Arb)</td>
			<td>20</td>
		</tr><tr><td>スプレー電圧(V)</td>
			<td>3900</td>
		</tr><tr><td>衝突ガス圧(mTorr)</td>
			<td>1.5</td>
		</tr><tr><td>プリカーサーイオン</td>
			<td>256.1</td>
		</tr><tr><td>プロダクトイオン/衝突エネルギー(eV)</td>
			<td>208.8/16</td>
		</tr></tbody></table>表1:液体クロマトグラフィー-質量分析法の溶出プログラムとイオン源パラメータ。

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著者は、利益相反がないことを宣言します。すべての著者が原稿を読み、承認しました。この研究は以前に発表されておらず、他の査読付きジャーナルでも検討されていません。

近年、農薬イミダクロプリドの前処理及び残留の検出のための方法が頻繁に報告されている。Badawyら23は、温室条件下で栽培されたトマト果実中のイミダクロプリドの含有量を決定するために高速液体クロマトグラフィーを使用し、0.0125〜0.15μg/ mLの範囲のイミダクロプリドの良好な直線性を報告しました。Zhaiら24は、LC-MS-MSを用いて、チャイナのイミダクロプリドの残留物を研究した。本研究では、QuEChERS法を用いてコムギの根および葉からイミダクロプリドを抽出した。迅速かつ効率的な方法として、QuEChERS法は、土壌25および植物20,26(唐辛子、トマト、キャベツ、小麦など)サンプルからイミダクロプリドを抽出するのに非常に適しており、広く使用されています。現在の研究の目的は、イミダクロプリドの回復が一貫しており、決定要件を満たしているかどうかを判断することでした...

今日の農学では、農薬の使用は作物の収量を増やすために不可欠です。ネオニコチノイド系殺虫剤は、昆虫神経系のニコチン性アセチルコリン受容体を制御することによって膜電位バランスを変化させ、それによって昆虫の中枢神経系の正常な伝導を阻害し、昆虫の麻痺および死をもたらす1。従来の殺虫剤と比較して、ネオニコチノイドには、新しい作用機序、高い殺虫活性、強力な根の吸収などの利点があり、農薬市場で非常に成功しています2,3。ネオニコチノイドの販売量は、2014年に世界の農薬市場の27%を占めると報告されました。ネオニコチノイドの平均年間成長率は2005年から2010年まで11.4%で、そのうち約7%が中国で登録されました4,5,6。2016年末から2017年前半にかけて、中国での農薬の売上高は下落した後、回復し始め、農薬の価格は上昇し続け、その中でネオニコチノイド系殺虫剤は大幅な価格上昇を示しました7。これまでに、3世代のネオニコチノイド殺虫剤が開発されており、それぞれニコチンの塩化ピリジン、チアゾリル、およびテトラヒドロフラン基を含有する8。
イミダクロプリドは、分子式がC9H10ClN5O2である第一世代のネオニコチノイド殺虫剤を表し、無色の結晶である。イミダクロプリドは、主にアブラムシ、ウンカ、ミールワーム、アザミウマなどの害虫を防除するために使用され9 、米、小麦、トウモロコシ、綿花などの作物、ジャガイモなどの野菜、果樹に適用できます。農薬の長期的、実質的、継続的な施用により、益虫と害虫の天敵の両方が急速に減少し、一部の農業害虫は農薬に耐性を持つようになり、農薬の継続的かつ増加量という悪循環が生じています10。さらに、農薬の広範な施用は、土壌の質の悪化、農産物中の残留農薬の残留、およびその他の生態学的問題を引き起こし、農業生態環境に重大な損害を与えるだけでなく11 、人間の健康に深刻な脅威をもたらします12。農薬散布は、土壌微生物と土壌動物の成長と質に深刻な影響を及ぼします13。農薬の不当または過度の使用は、土壌および水環境、動植物、さらには人命に重大なセキュリティリスクを引き起こしました14。近年、農薬の広範な施用に伴い、作物中の過剰な残留農薬の問題がより深刻になっています。イミダクロプリドを使用して野菜収量を増加させると、野菜中のイミダクロプリドの吸収率は、イミダクロプリドの量と残留物の増加とともに増加しました15。主要な食用作物として、小麦の生産と安全性の両方が重要です。したがって、小麦に使用される農薬の残留と流通政策を明確にする必要があります。
近年、水、土壌、植物からイミダクロプリド残留物を抽出するための多くの方法が開発されています。QuEChERS法(迅速、簡単、安価、効果的、堅牢、安全)は、固相マイクロ抽出技術と分散固相抽出技術を組み合わせた新しい方法であり、抽出溶媒としてアセトニトリルを使用し、それぞれNaClと無水MgSO4を使用してサンプル中の混合不純物と水を除去します16。.QuEChERS法は、最小限のガラス製品を必要とし、簡単な実験ステップを備えているため、最も人気のある農薬抽出方法の1つとなっています17。イミダクロプリドの検出では、液体クロマトグラフィー(LC)で1 × 10-9 g18という低い検出限界を達成し、ガスクロマトグラフィー(GC)で1 × 10-11 g 19を達成しました。それらの高い分解能と感度のために、LC-MSおよびGC-MSは、1 × 10-13から1 × 10-14 g20,21のさらに低いイミダクロプリド検出限界を示しています。したがって、これらの技術は、微量イミダクロプリド残基の分析に適しています。
本研究では、小麦中のイミダクロプリド残留物の分布を研究するために、イミダクロプリドを標的汚染物質として選択し、小麦を試験作物として選択しました。このプロトコルは、水耕栽培条件下で栽培された小麦植物のさまざまな部分におけるイミダクロプリドの吸収と貯蔵を探索することにより、小麦中の農薬イミダクロプリドの濃縮と移動の包括的な分析の方法を詳述しています。本研究は、小麦中の残留農薬のリスク評価の理論的基礎を提供し、残留農薬を減らすための農業生産活動における農薬の合理的な適用を導き、作物生産の安全性を向上させることを目的としています。

<table><tbody><tr><td>アセトニトリル</td><td>Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co., Ltd.</td><td>01-06-1995</td><td>HPLC、グラジエントグレード、>99.9%</td></tr><tr><td>分析天びん</td>に適しています <td>ザルトリウスラボインスツルメンツ Co.Ltd。</td><td>GL124-1SCN</td><td></td></tr><tr><td>人工気候インキュベーター&nbsp;&nbsp;</td><td>上海バディアン機器有限公司</td><td>HK320</td><td></td></tr><tr><td>遠心分離機</td><td>Eppendorf China Co., Ltd.</td><td>Centrifuge5804</td><td></td></tr><tr><td>使い捨てシリンジ</td><td>Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co., Ltd.</td><td>Z116866</td><td>容量5mL、目盛り付き0.2mL、非滅菌</td></tr><tr><td>ギ酸</td><td>Sigma-Aldrich(Shanghai)Trading Co. Ltd.</td><td>Y0001970</td><td>欧州薬局方参照標準</td></tr><tr><td>グラファイトカーボンブラック(GCB)</td><td>Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co., Ltd.</td><td>V900058</td><td>45 &mu;m</td></tr><tr><td>H2O2</td><td>Sigma-Aldrich(上海)商 Co.Ltd.</td><td>31642</td><td>30%(w / w)</td></tr><tr><td>ホーグランド'基礎塩混合物上海</td><td>Yu Bo Biotech Co.、Ltd.</td><td>NS1011</td><td>無水、試薬グレードの</td></tr><tr><td>水耕栽培機器</td><td>江蘇栄城農業科学技術開発 Co.Ltd。</td><td></td><td></td>SDZ04BD</tr><tr><td>Hypersil BDS C18カラム</td><td>Thermo Fisher Scientific (China) Co., Ltd.</td><td>28103-102130</td><td></td></tr><tr><td>イミダクロプリド</td><td>Sigma-Aldrich (上海) Trading Co., Ltd.</td><td>Y0002028</td><td>欧州薬局方参照標準</td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co., Ltd.</td><td>208094</td><td>無水試薬グレード、>97%</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich(上海)トレーディング Co.Ltd。</td><td>S9888試薬</td><td>グレード、99%</td></tr><tr><td>pHメーター</td>上海<td>サンダー磁気機器工場</td><td>PHSJ-3F</td><td></td></tr><tr><td>フィトトロンボックス</td><td>ハルビンドンリアン電子技術有限公司</td><td>HPG-280B</td><td></td></tr><tr><td>ピペット</td><td>Eppendorf China Co., Ltd.</td><td>研究プラス</td><td></td></tr><tr><td>シリンジ</td><td>フィルターSigma-Aldrich(上海)トレーディング Co.Ltd。</td><td>SLGV033N</td><td>ナイロン、0.22&micro;m 細孔径、33 mm、非滅菌</td></tr><tr><td>超高速液体クロマトグラフィー、タンデム、トリプル四重極質量分析</td><td>Thermo Fisher Scientific (China) Co. Ltd.</td><td>UltiMate 3000</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>TSQ Quantum Access MAX</td><td></td></tr><tr><td>Vortexミキサー</td><td>Shanghai Yetuo Technology Co., Ltd.</td><td>Vortex-2</td><td></td></tr>小麦<tr><td>種子</td><td>LuKe種子産業</td><td></td><td>Jimai 20</td></tr></tbody></table>

コムギ中のイミダクロプリドの吸収、転座、分布の決定

Determination of the Absorption, Translocation, and Distribution of Imidacloprid in Wheat

殺虫剤の一種であるネオニコチノイドは、その新しい作用機序、高い殺虫活性、および強力な根の取り込みのために広く使用されています。世界で最も広く使用されている殺虫剤であるイミダクロプリドは、代表的な第一世代のネオニコチノイドであり、作物、野菜、果樹の害虫駆除に使用されています。イミダクロプリドのこのような幅広い用途により、作物中のその残留物はますます精査されています。本研究では,15本のコムギ苗を0.5 mg/Lまたは5 mg/Lのイミダクロプリドを含む培地に入れ,水耕栽培を行った。コムギの根および葉におけるイミダクロプリドの含有量は、コムギ中のイミダクロプリドの移動および分布を探索するために、1日、2日、および3日間の水耕後に決定された。その結果,コムギの根と葉の両方でイミダクロプリドが検出され,根のイミダクロプリドの含有量は葉よりも高かった。さらに、コムギ中のイミダクロプリド濃度は、曝露時間の増加とともに増加した。3日間の曝露後、0.5 mg/L処理群のコムギの根および葉は、それぞれ4.55 mg/kg±1.45 mg/kgおよび1.30 mg/kg±0.08 mg/kgイミダクロプリドを含み、5 mg/L処理群の根および葉は0.62 mg/kgおよび8.71 mg/kg±0.14 mg/kgイミダクロプリド±42mg/kgおよび8.71mg/kgを含み、 それぞれ。本研究の結果は、作物中の残留農薬のより良い理解を可能にし、農薬の環境リスク評価のためのデータ参照を提供します。

イミダクロプリドの検出限界(LOD)は5.76 × 10-14 gであり、小麦の根または葉におけるイミダクロプリドのLODは0.01 μg/kgでした。マトリックス効果は観察されなかった。コムギ中のイミダクロプリドの回収収率を 表2に示す。イミダクロプリド濃度0.5 mg/Lおよび5 mg/Lに曝露されたコムギ根からのイミダクロプリドの回収収率は,それぞれ94.0%-97.6%および98.8%-99.2%であった。変動係数はそれぞれ1.92%と0.20%でした。0.5 mg/Lおよび5 mg/Lのイミダクロプリド濃度に曝露されたコムギ葉からのイミダクロプリドの回収収率は、それぞれ88.2%-91.4%および92.5%-93.4%であった。変動係数はそれぞれ1.85%と0.53%でした。
コムギの根及び葉におけるイミダクロプリド濃度を 表3に示す。イミダクロプリドはコムギの根と葉の両方で検出され、葉よりも根の含有量が高かった。イミダクロプリド含有量は、より長い曝露時間とともに増加した。3日間の曝...

ここでは、液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析(LC-MS-MS)を使用して、水耕条件下で小麦中のイミダクロプリドの吸収、転座、および分布を決定するためのプロトコルを示します。その結果、イミダクロプリドはコムギに吸収され、コムギの根と葉の両方でイミダクロプリドが検出された。

Neonicotinoids, a class of insecticides, are widely used because of their novel modes of action, high insecticidal activity, and strong root uptake. ...

この方法は、イミダクロプリドが小麦にどのように吸収、輸送、分布するかに答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、土壌、水、植物、およびその他のサンプル中のイミダクロプリドを測定するために広く使用できるイミダクロプリド検出の高感度です。小麦種子を発芽させるには、完全な顆粒、無傷の胚、および均一なサイズを有する1000個の適切な種子を選択する。種子を10%過酸化水素水に15分間浸して表面を消毒します。次に、毎回10秒間滅菌水を流して種子を5回すすぎます。次に、湿った滅菌ろ紙が入ったガラスのペトリ皿に胚を上に向けて小麦の種子を均等に広げます。ペトリ皿を摂氏30度、相対湿度80%に維持された人工気候インキュベーターに入れます。小麦の種子が発芽して根が発達するまで、暗闇で3日間培養します。小麦の種子が発芽した後、100ミリリットルのハーフホーグランド栄養溶液を含む水耕栽培装置に15本の小麦苗を置きます。次に、水耕栽培のセットアップ全体を、摂氏25度、相対湿度80%の人工気候インキュベーターに7日間置きます。2つの異なるイミダクロプリド濃度で農薬曝露実験を設定するには、イミダクロプリド1リットルあたり0.5ミリグラムまたは1リットルあたり5ミリグラムのいずれかを含むハーフホーグランド栄養溶液を含む水耕栽培装置を準備します。サンプリング中に適切なサンプルを確保するために、各イミダクロプリド濃度グループに15個の水耕装置をセットアップします。現在、15の小麦植物を7日間の水耕栽培期間を、準備された各水耕栽培装置に移植します。水耕栽培のセットアップ全体を人工気候インキュベーターに摂氏25度、相対湿度80%で3日間置きます。イミダクロプリド曝露期間を通して、毎日植物から根と葉を集めてください。各イミダクロプリド濃度について、15の水耕装置の5分の1からの小麦サンプルを並列グループとして統合します。小麦の根からイミダクロプリドを抽出するには、ハサミを使用して小麦の根を約1センチメートルに細断します。細かく刻んだ小麦の根10グラムの重さを量り、50ミリリットルの遠沈管に入れます。次に、10ミリリットルのアセチルニトリルを遠沈管に加え、チューブを1分間ボルテックスしてから、4グラムの無水硫酸マグネシウムと1.5グラムの塩化ナトリウムをチューブに加えます。すぐにチューブを30秒間ボルテックスします。次に、チューブを6, 000 Gで5分間遠心分離します。使い捨てシリンジで上清を吸引し、0.22ミクロンのシリンジフィルターに通してサンプルを取得します。小麦の葉からイミダクロプリドを抽出するには、ハサミを使用して新鮮な葉を約1センチメートルの断片に細断します。細かく刻んだ小麦の葉10グラムの重さを量り、50ミリリットルの遠沈管に入れます。50ミリリットルの遠沈管とボルテックスで細断した小麦の葉10グラムに10ミリリットルのアセトニトリルを加え、1分間ボルテックスします。次に、混合物を無水硫酸マグネシウムと塩化ナトリウムで処理し、前述のように遠心分離します。サンプルから色素沈着と水分を除去するには、遠心分離後に得られた上清2ミリリットルを取り、黒鉛化カーボンブラックと無水硫酸マグネシウムを含む5ミリリットルの遠沈管に加えます。30秒間のボルテックス混合の後、チューブを6, 000Gで5分間遠心分離し、続いて使い捨てシリンジで上清を吸引し、0.22ミクロンのシリンジフィルターを通過させてサンプルを得た。液体クロマトグラフィータンデム質量分析を使用して、原稿に記載されているように小麦サンプルからのイミダクロプリドの量を定量します。コムギ試料からのイミダクロプリドの回収率は、イミダクロプリド1リットル当たり5ミリグラムに曝露された試料からの平均回収率と比較して、イミダクロプリド1リットル当たり0.5ミリグラム以下に曝露されたコムギの根および葉からの平均回収率を示した。イミダクロプリドは、1日曝露後でもコムギの根と葉の両方で検出され、植物への急速な吸光度とコンダクタンスを示しています。イミダクロプリド含量は曝露3日目の方が1日目よりも高く、イミダクロプリド濃度は葉よりも根で一貫して高かった。対照と比較してイミダクロプリドに曝露された植物におけるイミダクロプリド曝露の3日後でさえ、植物成長の明らかな阻害は観察されなかった。処理されたサンプルのルート濃度係数(RCF)は1より大きく、小麦がイミダクロプリドに対して濃縮効果があることを示しています。しかし,葉の転座係数(TF)は1未満であり,小麦の根から葉への移動が容易ではないことが示唆された。最も重要なステップは、イミダクロプリドの抽出と精製です。これらのステップ中にイミダクロプリドが損失なく抽出されることを確認してください。

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#946;-1,3-グルカナーゼおよびペルオキシダーゼのジ ウラフィス・ノキサ 病侵入に対するコムギ細胞壁防御機構の物理化学的性質の解明

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ハイスループットマイクロプレートアッセイを用いてウォーターズ、土壌、および底質中の微生物細胞外酵素活性の測定

学ぶイミダクロプリドのコムギにおける吸収、転座、分布の決定法。LC-MS-MSを用いて高感度に検出し、根と葉での動態を解析する。農薬の環境影響評価と適正使用に貢献する研究手法である。

コムギ中のイミダクロプリドの吸収、転座、分布の決定

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