Name: 血管および腫瘍イメージング用の明るいNIR-II蛍光プローブ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-17T14:55:00.000+00:00
Duration: 5 min 51 s
Description: 学ぼう、マウスを用いたNIR-II蛍光イメージングの詳細なプロトコル。血管構造と腫瘍環境の高解像度可視化により、生体内での疾患研究と臨床応用への可能性を示します。

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この作業の一部は、NSFC(82273796、82111530209)、中央政府の地方科学技術開発を指導するための特別基金(XZ202202YD0021C、XZ202102YD0033C、XZ202001YD0028C)、湖北省科学技術イノベーション重点プロジェクト(2020BAB058)、中央大学の基礎研究基金、およびチベット自治区科学技術開発のためのCOVID-19予防および管理プログラムからの助成金によって部分的に支援されました。

NIR-IIイメージング研究のための動物実験は、国際実験動物管理協会(AALAC)を授与された武漢大学動物実験センターで実施されました。すべての動物実験は、実験動物の世話と使用に関する中国動物福祉委員会のガイドラインに従って実施され、武漢大学動物実験センターの動物管理使用委員会(IACUC)によって承認されました。
6週齢の雌のBALB/cヌードマウス(~20g)を本研究に用いた。
1. NIR-IIイメージングの準備
<ol><li>市販の黒い段ボール( 材料表を参照)をキャリアの中央に置きます。次に、サンプルがキャリアの中央(イメージングデバイスに配置されたステージ)になるように、サンプルを黒い段ボールの上に置きます。 注意: 白い段ボールと比較して、黒い段ボールはNIR-IIイメージング中のバックグラウンド干渉が少なくなります。</li>
	<li>NIR-IIプローブの波長に基づいて適切なフィルターを選択してください。長押し(>2秒)を押して、システムがフィルターを光学イメージングパスに移動したときに、画面インターフェイスのフィルターモデルに対応するボックス領域(900 LPなど)を制御します。</li>
	<li>キャリアコンソール制御領域のタッチスクリーンインターフェイスで プラットフォーム を長押しして、キャリアコンソールが起動するようにします。プラットフォームを長押しして、キャリアコンソール を 下げます。</li>
	<li>プラットフォームの高さを「0mm」(高さ調整)に調整し、自動フォーカスを使用してNIR-II画像を鮮明にします。</li>
</ol>2. 近赤外色素(HLY1)の合成
<ol><li>合成実験に必要な原料を秤量する。それらが劣化しないようにしてください。</li>
	<li>化合物 1 (200 mg, 0.18 ミリモル)、PdCl 2(dppf)2 CH 2 Cl 2 (28 mg, 0.04 ミリモル)、N-フェニル-N-(4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)フェニル)ナフタレン-2-アミン (170 mg, 0.4 ミリモル)、および K 2CO3 (46 mg, 0.34 ミリモル) をテトラヒドロフラン (THF) 溶液に 25 mL ナスフラスコに加えます。混合物をN2雰囲気下75°Cで4時間撹拌する(図1A)。 注:化合物1およびN-フェニル-N-(4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)フェニル)ナフタレン-2-アミンの合成手順については、Liら21を参照してください。化学構造を図1Aに示す。</li>
	<li>周囲温度まで冷却した後、蒸留(DI)水(80 mL)で反応を停止し、DCM(ジクロロメタン)/H2O(30 mL)で混合物を抽出します(3回)。粗生成物をカラムクロマトグラフィー16(石油エーテル:DCM=10 :1)で精製し、HLY1を緑色固体(78mg、収率30%)とした。</li>
	<li>後で使用するために、染料HLY1を冷蔵庫内の窒素保護下に置きます。これは最大6ヶ月間保存できます。</li>
</ol>3. 水持続性ナノプローブの作製
<ol><li>HLY1(1 mg)および両親媒性封入材料、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[アミノ(ポリエチレングリコール)-2k(DSPE-PEG2k、10 mg; 材料の表を参照)を計量します。</li>
	<li>カプセル化マトリックスとしてDSPE-PEG2kを採用してHLY1ドット20 を作製し(ナノ沈降法12)(図1C)。HLY1をTHF(1mL)に溶解し、25°Cで超音波処理しながらDSPE-PEG2k水溶液(9mL)を含むビーカーにゆっくりと加える。 続いて、透析20により混合物からTHFを除去する。</li>
	<li>上記の溶液を限外ろ過18 (7100 x g で10分間)で遠心的に濃縮し、将来の使用のために4°Cの冷蔵庫に入れます。これは最大1ヶ月間保存できます。 注意: DSPE-PEG2k によってロードされたナノプローブ水溶液は、0°C以上で保存し、できるだけ早く使用する必要があります。</li>
</ol>4. 担がんマウスの作製
<ol><li>4T1マウス乳がん細胞(4T1)をダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)で培養し、10%(v/v)ウシ胎児血清(FBS)および1%(v/v)ペニシリン-ストレプトマイシンを添加し( 材料の表を参照)、5%CO2 を含む加湿インキュベーター内で37°Cで維持します。</li>
	<li>NIR-II蛍光イメージング実験では、4T1細胞(5 x 107)を24時間培養し、トリプシン(1 mL)で消化し、無血清DMEM(4 mL)で2回洗浄します。</li>
	<li>イソフルラン(2%)で処理することによりマウスを麻酔する。マウスの足の指や足の裏を刺激して適切な麻酔を確認し、マウスが反応するかどうかを観察します。反応がない場合は、麻酔が十分であることを意味します32。</li>
	<li>次いで、インスリン注射針を用いて、4T1細胞混合物を皮下注射(100μL)を通してマウスに注入する。 注:NIR-II画像検査は、接種後~2週間、腫瘍が~100mm3の体積に成長したときに実施されました。NIR-II腫瘍イメージングの前に、腫瘍の大きさを確認してください。腫瘍サイズは、本研究11のために電子ノギスによって推定されました。</li>
</ol>5. 生体内 近赤外蛍光イメージング
<ol><li>イソフルラン(2%)で処理してマウスを麻酔し、光学NIR-IIイメージングシステムを使用してマウスの全身のNIR-IIイメージングを実行します( 材料の表を参照)。 注:マウスの死を避けるために、麻酔薬の投与量に注意してください。一般的に、麻酔は5〜10分間続きます。マウスのつま先や足の裏を刺激し、マウスが反応するかどうかを観察します。反応がない場合は、麻酔で十分であることを意味します。</li>
	<li>HLY1ドット(0.8 mg/mL、200 μL)の溶液を服用します。HLY1ドットを麻酔をかけたマウスに静脈内注射し、3分後に、NIR-IIイメージングシステムを用いてマウスの全身の血管のNIR-II蛍光イメージングを行う。マウスの頭にさらに焦点を合わせて、脳血管イメージングを収集します。 注意: イメージング中は清潔な実験用手袋を使用すると、きれいなNIR-II画像を取得できます。</li>
	<li>マウスにHLY1ドットを注入してから5分後に画像を収集し、ImageJソフトウェアを使用してデータを処理します。光学NIR-IIイメージングシステムの機器パラメータは、90mW/cm2 (808nmレーザー)です。</li>
	<li>実験が完了したら、制度的に承認されたプロトコルに従って動物を安楽死させます。. 注:本研究では、動物を過剰なイソフルラン32にさらすことによって安楽死させました。</li>
</ol>

<ol><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Versatile+types+of+inorganic%2Forganic+NIR-IIa%2FIIb+fluorophores%3A+from+strategic+design+toward+molecular+imaging+and+theranostics%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Reviews%22%5BJournal%5D)">Versatile types of inorganic/organic NIR-IIa/IIb fluorophores: from strategic design toward molecular imaging and theranostics.</a> Chemical Reviews. 122 (1), 209-268 (2022).</li>
<li>Zhou, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mn-loaded+apolactoferrin+dots+for+in+vivo+MRI+and+NIR-II+cancer+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Materials+Chemistry+C%22%5BJournal%5D)">Mn-loaded apolactoferrin dots for in vivo MRI and NIR-II cancer imaging.</a> Journal of Materials Chemistry C. 7 (31), 9448-9454 (2019).</li>
<li>Zhang, F., Tang, B. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+luminescent+probes+for+bioimaging+and+biosensing%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Science%22%5BJournal%5D)">Near-infrared luminescent probes for bioimaging and biosensing.</a> Chemical Science. 12 (10), 3377-3378 (2021).</li>
<li>Yao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+bright%2C+renal-clearable+NIR-II+brush+macromolecular+probe+with+long+blood+circulation+time+for+kidney+disease+bioimaging%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition%22%5BJournal%5D)">A bright, renal-clearable NIR-II brush macromolecular probe with long blood circulation time for kidney disease bioimaging.</a> Angewandte Chemie International Edition. 61 (5), 202114273(2022).</li>
<li>Gao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+engineering+of+near-infrared-II+photosensitizers+with+steric-hindrance+effect+for+image-guided+cancer+photodynamic+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Functional+Materials%22%5BJournal%5D)">Molecular engineering of near-infrared-II photosensitizers with steric-hindrance effect for image-guided cancer photodynamic therapy.</a> Advanced Functional Materials. 31 (14), 2008356(2021).</li>
<li>Ding, F., Fan, Y., Sun, Y., Zhang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+1000+nm+emission+wavelength%3A+recent+advances+in+organic+and+inorganic+emitters+for+deep-tissue+molecular+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Healthcare+Materials%22%5BJournal%5D)">Beyond 1000 nm emission wavelength: recent advances in organic and inorganic emitters for deep-tissue molecular imaging.</a> Advanced Healthcare Materials. 8 (14), 1900260(2019).</li>
<li>Yang, Y., Zhang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+fluorophores+for+in+vivo+bioimaging+in+the+second+near-infrared+window%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">Molecular fluorophores for in vivo bioimaging in the second near-infrared window.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 49 (9), 3226-3246 (2022).</li>
<li>Ding, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymethine+thiopyrylium+fluorophores+with+absorption+beyond+1000+nm+for+biological+imaging+in+the+second+near-infrared+subwindow%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Polymethine thiopyrylium fluorophores with absorption beyond 1000 nm for biological imaging in the second near-infrared subwindow.</a> Journal of Medicinal Chemistry. 62 (4), 2049-2059 (2019).</li>
<li>Cheng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+diketopyrrolopyrrole+Nir-Ii+fluorophores+and+Ddr+inhibitors+for+in+vivo+chemo-photodynamic+therapy+of+osteosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Engineering+Journal%22%5BJournal%5D)">Novel diketopyrrolopyrrole Nir-Ii fluorophores and Ddr inhibitors for in vivo chemo-photodynamic therapy of osteosarcoma.</a> Chemical Engineering Journal. , 136929(2022).</li>
<li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nir-Ii+chemiluminescence+molecular+sensor+for+in+vivo+high-contrast+inflammation+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition%22%5BJournal%5D)">Nir-Ii chemiluminescence molecular sensor for in vivo high-contrast inflammation imaging.</a> Angewandte Chemie International Edition. 59 (42), 18380-18385 (2020).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+second+near-infrared+Ru%28Ii%29+polypyridyl+complex+for+synergistic+chemo-photothermal+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">A second near-infrared Ru(Ii) polypyridyl complex for synergistic chemo-photothermal therapy.</a> Journal of Medicinal Chemistry. 65 (3), 2225-2237 (2022).</li>
<li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+wavelength-emissive+Ru%28Ii%29+metallacycle-based+photosensitizer+assisting+in+vivo+bacterial+diagnosis+and+antibacterial+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Long wavelength-emissive Ru(Ii) metallacycle-based photosensitizer assisting in vivo bacterial diagnosis and antibacterial treatment.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 119 (32), 2209904119(2022).</li>
<li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+of+emissive+Ruthenium%28II%29+metallacycle+over+1000+nm+wavelength+for+in+vivo+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Construction of emissive Ruthenium(II) metallacycle over 1000 nm wavelength for in vivo biomedical applications.</a> Nature Communications. 13 (1), 2009(2022).</li>
<li>Wang, S., Li, B., Zhang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+fluorophores+for+deep-tissue+bioimaging%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Central+Science%22%5BJournal%5D)">Molecular fluorophores for deep-tissue bioimaging.</a> ACS Central Science. 6 (8), 1302-1316 (2020).</li>
<li>Sun, Y., Sun, P., Li, Z., Qu, L., Guo, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+flavylium-inspired+far-red+to+NIR-II+dyes+and+their+applications+as+fluorescent+probes+for+biomedical+sensing%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Society+Reviews%22%5BJournal%5D)">Natural flavylium-inspired far-red to NIR-II dyes and their applications as fluorescent probes for biomedical sensing.</a> Chemical Society Reviews. 51 (16), 7170-7205 (2022).</li>
<li>Shen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rational+design+of+NIR-II+AIEgens+with+ultrahigh+quantum+yields+for+photo-+and+chemiluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Rational design of NIR-II AIEgens with ultrahigh quantum yields for photo- and chemiluminescence imaging.</a> Journal of the American Chemical Society. 144 (33), 15391-15402 (2022).</li>
<li>Mu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chemistry+of+organic+contrast+agents+in+the+NIR-II+window%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition%22%5BJournal%5D)">The chemistry of organic contrast agents in the NIR-II window.</a> Angewandte Chemie International Edition. 61 (14), 202114722(2022).</li>
<li>Lu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIR-II+fluorescence%2Fphotoacoustic+imaging+of+ovarian+cancer+and+peritoneal+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Research%22%5BJournal%5D)">NIR-II fluorescence/photoacoustic imaging of ovarian cancer and peritoneal metastasis.</a> Nano Research. 15 (10), 9183-9191 (2022).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+Cd-Mof+NIR-II+fluorophores+for+gastric+ulcer+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Chemical+Letters%22%5BJournal%5D)">Novel Cd-Mof NIR-II fluorophores for gastric ulcer imaging.</a> Chinese Chemical Letters. 32 (10), 3061-3065 (2021).</li>
<li>Lin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+near-infrared+II+aggregation-induced+emission+dots+for+in+vivo+bioimaging%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Science%22%5BJournal%5D)">Novel near-infrared II aggregation-induced emission dots for in vivo bioimaging.</a> Chemical Science. 10 (4), 1219-1226 (2018).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small-molecule+fluorophores+for+near-infrared+IIb+imaging+and+image-guided+therapy+of+vascular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22CCS+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Small-molecule fluorophores for near-infrared IIb imaging and image-guided therapy of vascular diseases.</a> CCS Chemistry. 4 (12), 3735-3750 (2022).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+NIR-II+organic+fluorophores+for+bioimaging+beyond+1550+nm%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Science%22%5BJournal%5D)">Novel NIR-II organic fluorophores for bioimaging beyond 1550 nm.</a> Chemical Science. 11 (10), 2621-2626 (2020).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organic+NIR-II+dyes+with+ultralong+circulation+persistence+for+image-guided+delivery+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Organic NIR-II dyes with ultralong circulation persistence for image-guided delivery and therapy.</a> Journal of Controlled Release. 342, 157-169 (2022).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembled+NIR-II+fluorophores+with+ultralong+blood+circulation+for+cancer+imaging+and+image-guided+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medicinal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Self-assembled NIR-II fluorophores with ultralong blood circulation for cancer imaging and image-guided surgery.</a> Journal of Medicinal Chemistry. 65 (3), 2078-2090 (2022).</li>
<li>Li, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+small-molecule+fluorophores+for+in+vivo+NIR-IIa+and+NIR-IIb+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Communications%22%5BJournal%5D)">Novel small-molecule fluorophores for in vivo NIR-IIa and NIR-IIb imaging.</a> Chemical Communications. 56 (22), 3289-3292 (2020).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+the+development+of+NIR-II+organic+emitters+for+biomedicine%5BTitle%5D)+AND+%22Coordination+Chemistry+Reviews%22%5BJournal%5D)">Recent advances in the development of NIR-II organic emitters for biomedicine.</a> Coordination Chemistry Reviews. 415, 213318(2020).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((long-fluorescence-lifetime+dyes+for+deep-near-infrared+bioimaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">long-fluorescence-lifetime dyes for deep-near-infrared bioimaging.</a> Journal of the American Chemical Society. 144 (31), 14351-14362 (2022).</li>
<li>Li, C., Chen, G., Zhang, Y., Wu, F., Wang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+fluorescence+imaging+technology+in+the+near-infrared-II+window+for+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Advanced fluorescence imaging technology in the near-infrared-II window for biomedical applications.</a> Journal of the American Chemical Society. 142 (35), 14789-14804 (2020).</li>
<li>Li, B., Lin, J., Huang, P., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+probes+for+luminescence+lifetime+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotheranostics%22%5BJournal%5D)">Near-infrared probes for luminescence lifetime imaging.</a> Nanotheranostics. 6 (1), 91-102 (2022).</li>
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<li>Ji, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acceptor+engineering+for+NIR-II+dyes+with+high+photochemical+and+biomedical+performance%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Acceptor engineering for NIR-II dyes with high photochemical and biomedical performance.</a> Nature Communications. 13 (1), 3815(2022).</li>
<li>Hou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salidroside+intensifies+mitochondrial+function+of+CoCl2-damaged+Ht22+cells+by+stimulating+Pi3k-Akt-Mapk+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Phytomedicine%22%5BJournal%5D)">Salidroside intensifies mitochondrial function of CoCl2-damaged Ht22 cells by stimulating Pi3k-Akt-Mapk signaling pathway.</a> Phytomedicine. , (2022).</li>
<li>Jiang, Y., Pu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+probes+for+autofluorescence-free+optical+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Reviews%22%5BJournal%5D)">Molecular probes for autofluorescence-free optical imaging.</a> Chemical Reviews. 121 (21), 13086-13131 (2021).</li>
</ol>

著者は開示するものは何もありません。

NIR-I蛍光イメージングは、腫瘍および血管イメージングにある程度使用できますが、NIR-I蛍光色素の最大発光波長(<900 nm)が制限されているため、組織浸透性および腫瘍シグナルバックグラウンド比が不十分になります33,34。画像解像度が低く低いと、画像フィードバック治療の結果と実際の治療効果との間に偏差が生じる可能性があります。さらに、ほとんどのNIR-I蛍光色素は光学的安定性が低く、代謝が非常に速いため、イメージングプロセスが不安定になります。NIR-I蛍光色素は組織浸透性が低く不安定であるため、腫瘍および血管イメージングへの応用は大きく制限されています35。NIR-I光と比較して、NIR-II蛍光イメージングには、光子の散乱と吸収が大幅に減少し、組織の自己蛍光が低く、体組織の浸透が強く、時空分解能が優れているという利点があります36。
この記事では、安定性に優れ...

蛍光イメージングは、基礎研究で一般的に使用される分子イメージングツールであり、クリニックでの外科的腫瘍切除のガイドにもよく使用されます1。蛍光イメージングの本質的な原理は、サンプル(組織、臓器など)の照射後にレーザーによって放出された蛍光を受信するためにカメラを使用することです。2.プロセスは数ミリ秒以内に完了します 3.蛍光イメージング波長は、紫外(200-400 nm)、可視領域(400-700 nm)、近赤外I(NIR-I、700-900 nm)、近赤外II(NIR-II、1000-1700 nm)4,5,6に分けることができます。生体組織内のヘモグロビン、メラニン、デオキシヘモグロビン、ビリルビンなどの内因性分子は、可視領域の光に強い吸収と散乱効果があるため、光の透過と感度が大幅に低下し、可視光波長での蛍光イメージングに悪影響を及ぼします7,8,9。
NIR-II蛍光イメージングは、光子の吸収と散乱が低く、イメージング速度が速く、画像のコントラスト(または感度)が高い10,11。蛍光波長が増加するにつれて、生体組織における蛍光の吸収および散乱は徐々に減少し、NIR-II領域の自己蛍光は極めて低い12。したがって、NIR-IIウィンドウは、組織の浸透深さを大幅に増加させ、より高い解像度と信号対雑音比13,14,15を取得します。NIR-IIウィンドウは、NIR-IIa(1300-1400nm)およびNIR-lIb(1500-1700nm)ウィンドウ16にさらに細分することができる。これまでに、無機材料単層カーボンナノチューブ、希土類ナノ粒子、量子ドット、有機材料半導体ポリマーナノ粒子、低分子色素、凝集誘起発光材料など、いくつかの画期的なNIR-II材料が報告されています。 1,17,18,19,20,21,22。無機ナノ材料は肝臓や脾臓などに蓄積しやすく、長期的な生体毒性の可能性があります23。有機低分子蛍光色素は、代謝が速く、毒性が低く、修飾が容易で、構造が明確であるという利点があり、臨床使用のための最も有望なプローブです24。
NIR-II光学イメージングシステムは、NIR-IIプローブからNIR-II蛍光シグナルを効果的に収集し、正確な機能的、解剖学的、および分子画像をレンダリングできるため、蛍光バイオイメージングの重要なコンポーネントでもあります25,26。NIR-IIイメージングシステムは、主に短波赤外線カメラ、ロングパス(LP)フィルター、レーザー、およびコンピュータープロセッサで構成されています。 生体内NIR-II蛍光イメージングは、疾患のメカニズムと生命の性質を解明するための最も実行可能なイメージングアプローチの1つと考えられています27,28,29。NIR-IIイメージング技術は、癌細胞検出、ダイナミックイメージング、in vivoターゲットトレーシング、標的治療などの生物医学分野で、特に腫瘍学研究で広く使用されています30,31。しかし、イメージングプローブや機器におけるNIR-IIイメージング技術の高い技術的要件を考慮すると、さまざまな分野の研究者の実用化を困惑させ、制限することもできません。そこで、NIR-IIイメージングプローブの作製とNIR-IIイメージングの応用について、本稿で詳しく紹介します。

<table><tbody><tr><td>無水ピリ</td><td>ジンペリメド&nbsp;</td><td>110-86-1</td><td></td></tr><tr><td>無水硫酸ナトリウム</td><td>中国国民薬Co.、Ltd</td><td>SY006376</td><td></td></tr><tr><td>黒い段ボール</td><td>蘇州Yingrui光学技術有限公司</td><td>AO00158</td><td></td></tr><tr><td>カラムクロマトグラフィー</td><td>エネルギー化学</td><td>E080498</td><td></td></tr><tr><td>ジフェニルホスフィンパラジウム二塩化</td>物 <td>Sigma-Aldrich</td><td>B2161-1G</td><td></td></tr><tr><td>DSPE-PEG2000</td><td>ポンシュア</td><td>PS-E1</td><td></td></tr><tr><td>ダルベッコ改造イーグル ミディアム&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>8121587</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Biofroxx</td><td>EZ6789D115</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>Gibco</td><td>2166090RP</td><td></td></tr><tr><td>イソフルラン</td><td>GLPBIO</td><td>GC45487-1</td><td></td></tr><tr><td>K2CO3</td><td>マックリン</td><td>P816305-5g</td><td></td></tr><tr><td>N. N '- ジメチルホルムアミド</td><td>中国国民薬有限公司</td><td>1968年2月12日</td> NIR-IIイメージング機器蘇州英瑞光学技術有限公司 16011109 N-スルフェナニリドエナリーケミカル&nbsp;<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>1250030-5g</td><td></td></tr><tr><td>PdCl<サブ>2</サブ>(dppf)<サブ>2</サブ>CH<サブ>2</サブ>Cl<サブ>2</サブ></td><td>TCI&nbsp;</td><td>B2064-1g</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>テトラヒドロフラン</td><td>中国国家医薬品有限公司</td><td>M005197</td><td></td></tr><tr><td>テトラトリフェニルホスフィンパラジウム</td><td>Immochem</td><td>1021232-5g</td><td></td></tr><tr><td>テトラトリフェニルホスフィンパラジウム</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1021232-5g</td><td></td></tr><tr><td>塩化トリブチルスズ</td><td>Immochem</td><td></td><td></td>QH004335</tr><tr><td>トリメチルクロロシラン</td><td>中国国家医薬品有限公司</td><td>40060560</td><td></td></tr></tbody></table>

血管および腫瘍イメージング用の明るいnir-ii蛍光プローブ

A Bright NIR-II Fluorescence Probe for Vascular and Tumor Imaging

新しいイメージング技術として、近赤外II(NIR-II、1000-1700 nm)蛍光イメージングは、その高感度、深部組織の浸透、および空間的および時間的解像度による優れたイメージングにより、生物医学分野で大きな可能性を秘めています。しかし、医学や薬学など、緊急に必要な分野でNIR-II蛍光イメージングの実装を容易にする方法は、関連する研究者を困惑させています。このプロトコルでは、D-A-D(ドナー-アクセプター-ドナー)骨格を持つNIR-II蛍光分子プローブHLY1の構築とバイオイメージングアプリケーションについて詳しく説明します。HLY1は良好な光学特性と生体適合性を示した。さらに、マウスにおけるNIR-II血管および腫瘍のイメージングは、NIR-II光学イメージングデバイスを用いて行った。リアルタイムの高解像度NIR-II蛍光画像を取得して、腫瘍や血管疾患の検出をガイドしました。プローブの準備からデータ取得まで、イメージング品質が大幅に向上し、生体内イメージングにおけるデータ記録用のNIR-II分子プローブの信頼性が保証されます。

水に使用可能なHLY1ドットの蛍光強度と明るさは、NIR-IIイメージング装置によって決定されました。90% fwTHF/H2O混合物中のHLY1の蛍光強度はTHF溶液中の5倍であり、HLY1の顕著なAIE特徴を示した(図1B)。さらに、HLY1ドットは1,500 nm LPフィルター下で強い蛍光シグナルを発し、HLY1ドットがNIR-IIbイメージングに使用できることを示しています(図1D)。HLY1ドットの最大吸収波長は740nm、最大発光波長は1,040nmでした(図2A)。また、HLY1ドットの流体力学的サイズは、動的光散乱(DLS)により145nmであることが決定された(図2B)。HLY1ドット(0.2 mL、0.8 mg / mL)を、血管イメージングのために尾静脈注射 を介して 正常なBalb / cマウスに...

本プロトコルは、NIR-II光学画像化装置を用いたマウスの詳細なリアルタイムNIR-II蛍光画像化動作を記載する。

血管および腫瘍イメージング用の明るいNIR-II蛍光プローブ

As an emerging imaging technology, near-infrared II (NIR-II, 1000-1700 nm) fluorescence imaging has significant potential in the biomedical field, owing ...

近赤外から蛍光ナノプローブによって高解像度の血管および腫瘍イメージングが実現され、血管疾患および癌を指示するための正確で効果的な方法を提供しました。NIR-IIウィンドウでの生体内イメージングは、生体を深く見ることを可能にし、生物医学研究と臨床応用の機会を生み出します。撮像装置のキャリアの中央に市販の黒い段ボールを置き、近赤外IIまたはNIR-IIの撮像の準備をする。次に、サンプルを黒い段ボールの上に置き、キャリアの中央にくるようにします。適切なフィルターを選択したら、プラットフォームの高さ調整を実行します。キャリアコンソールコントロールエリアのタッチスクリーンインターフェイスでプラットフォームのオプションを長押しして、上に移動します。そして、プラットフォームを長押しして下に移動します。NIR-II色素HLY1を合成した後、DSPE-PEG-2Kをカプセル化マトリックスとして用いたナノ沈降法によりHLY1ドットを作製した。これを行うには、摂氏25度で超音波処理するために、DSPE-PEG-2Kの10ミリグラムの溶液を含むビーカーを9ミリリットルの水に入れます。次に、1ミリグラムのHLY1を1ミリリットルのテトラヒドロフランまたはTHFに溶解します。そして、超音波処理を受けているDSPE-PEG-2K水溶液に溶液をゆっくりと加えます。続いて、透析によって混合物からTHFを除去する。上記の溶液を7, 100 Gで10分間限外ろ過しながら遠心的に濃縮した後、将来の使用のために摂氏4度の冷蔵庫に入れます。in vivoイメージングのために、HLY1ドットを麻酔したマウスに静脈内注射する。そして3分後、光学NIR-IIイメージングシステムを用いてマウスの全身の血管のNIR-II蛍光イメージングを行う。マウスの頭にさらに焦点を合わせて、脳血管イメージングを収集します。光学NIR-IIイメージングシステムの機器パラメータを90ミリワット/平方センチメートルと808ナノメートルレーザーに設定します。マウスにHLY1ドットを注入してから5分後に画像を収集し、ImageJソフトウェアを使用してデータを処理します。90%水を含む90%THF溶液中のHLY1の蛍光強度は、THF溶液中の5倍であり、HLY1の顕著な凝集誘発発光またはAIEの特徴を示した。HLY1ドットは、1, 500ナノメートルのローパスまたはLPフィルターの下で強い蛍光シグナルを発し、NIR-IIbイメージングへの適合性を確立しました。HLY1ドットの最大吸収波長と発光波長はそれぞれ740ナノメートルと1,040ナノメートルでした。さらに、HLY1ドットの流体力学的サイズは、動的光散乱によって145ナノメートルであると決定された。HLY1ドットを投与したマウスでは、後肢の大脳血管および微小血管を1,500ナノメートルLPフィルター下でのNIR-IIイメージングによって明確に同定した。また、担癌マウスの4つのT1腫瘍は、NIR-IIイメージングによっても明瞭に視認され、HLY1ドットの透過性および保持またはEPR効果の増強を示した。以上の結果から、HLY1ドットは血管や腫瘍のイメージングに適用可能な明るいNIR-II蛍光プローブであることが示唆されました。in vivoおよびNIR-II蛍光イメージング下での水懸濁可能なナノプローブの調製は、手順の最も重要な部分です。

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Research

JoVE Journal

Medicine

医学

プラークの生物学の2次元血管内分子イメージングのための我々は詳細に新しい近赤外蛍光（NIRF）カテーテルを...

炎症性プラークの赤外蛍光（NIRF）血管内分子イメージング、マルチモーダルアプローチの近くin vivoでの動脈硬化のイメージングに

近赤外蛍光（NIRF）を使用して、最近開発されたイメージング技術は、リンパ系の癌転移、免疫応答、創傷修復、および他のリンパ関連疾患に果たす役割の解明に役立つことがあります。...

マウスのリンパ脈管構造の非侵襲的光イメージング

本論文では、ダイナミック造影蛍光ビデオ顕微鏡を用いてインビボで腫瘍の微小血管を分析する手法を提案する。二つの定量的なパラメータを取得した：機能性腫瘍の血管分布を反映した毛細血管密度、および内皮の壁の漏出インデクス反映漏れ。...

蛍光共焦点ビデオ顕微鏡を使用して腫瘍血管新生のin vivoイメージング

新規高分解能<em生体内で&gt;</em腫瘍増殖と治療に頭蓋内構造物の動的応答を研究する&gt;イメージング技術

私たちは、サポシンC（SAPC） -ジオレオイルホスファチジルセリン（DOPS）ナノベシクルで配信蛍光マーカーのin vivo定量のためのマルチアングル回転光学イメージング（MAROI）システムについて説明します。癌および関節炎のマウスモデルを用いて、我々はMAROI信号曲線分析が正確なマッピングおよび疾患過程の生物学的特徴付けのために使用することができる方法を実証する。...

蛍光SAPC-DOPSナノベシクルを用いて脳腫瘍、関節炎のin vivo光イメージング中

近赤外線蛍光(NIRF)イメージングは、術中の腫瘍の局在化と外科的断端の状態の評価を可能にすることにより、乳がん手術の治療結果を改善する可能性があります。蛍光腫瘍模倣封入体を含む組織模擬乳房ファントムを使用して、乳がん患者におけるNIRFイメージングの潜在的な臨床応用を標準化およびトレーニング目的で評価できます。...

乳がん手術における潜在的近赤外蛍光イメージングアプリケーションを評価するための組織シミュレーファントム

このプロトコルは細胞特異的蛍光マーカーを発現するトランスジェニック マウスの生体イメージングを説明します。生体イメージングは、プロセスの顕微可視化が可能な埋込型の windows...

腫瘍関連血管系を使用しての生体顕微鏡が背高度な蛍光トランスジェニック マウスの皮下脂肪のウィンドウの部屋

がん転移臨床生体内で追跡のためのプロトコルについて述べる。それは、非侵襲的 [18F] テトラフルオロホウ酸-ペット、および合理化された前のヴィヴォ確認のため蛍光蛋白質によって検出されたナトリウム...

放射性核種蛍光レポーターの遺伝子齧歯動物腫瘍モデルで腫瘍の進行を追跡するイメージング

このプロトコルは、二重生物発光イメージングによって腫瘍の進行および血管新生をリアルタイムで監視する腫瘍担持マウスモデルの確立について説明する。...

腫瘍進行と血管新生の二重生物発光イメージング

デュアルモードのイメージングシステムは、皮膚組織の酸素化と血管機能の非接触評価のために開発されました。...

皮膚組織の酸素化と血管機能のデュアルモードイメージング

学ぼう、マウスを用いたNIR-II蛍光イメージングの詳細なプロトコル。血管構造と腫瘍環境の高解像度可視化により、生体内での疾患研究と臨床応用への可能性を示します。

血管および腫瘍イメージング用の明るいNIR-II蛍光プローブ

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