Name: マウス子宮仙靭帯と骨盤底器官の分離と特性評価 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-03T13:25:00.000+00:00
Duration: 5 min 47 s
Description: 学ぶマウス子宮仙靭帯と骨盤底器官の分離法。解剖学的付着を維持しながら組織を採取し、妊娠や骨盤臓器脱に関する生体力学的研究の前臨床モデルを確立する方法です。

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この研究は、CUボルダーサマーアンダーグラウンドリサーチオポチュニティプログラム(UROP)助成金(CB)、NSF大学院研究フェローシップ(LS)、シュミットサイエンスフェローシップ(C.L.)、コロラド大学リサーチ&イノベーションシードグラントプログラム(V.F.、S.C.、およびK.C.への2020年賞)、およびコロラド大学のアンシュッツボルダーネクサスシードグラント(VFおよびK.C.に)によってサポートされました。ローディングチャンバーの設計を手伝ってくれたタイラー・タトル博士と、有益な議論をしてくれたCalveラボのメンバーに特別な謝辞を送ります。

すべての動物実験および手順は、コロラド大学ボルダー校の動物管理および使用委員会によって承認されたプロトコル#2705に従って実施されました。本研究では、6週齢の雌C57BL / 6Jマウスを使用しました。動物は商業的な供給源から入手した( 材料表を参照)。
1.動物の準備
<ol><li>制度的に承認された方法に従って動物を安楽死させる。 注:本研究では、米国獣医師会のガイドラインに沿ってCO 2吸入を使用しました(チャンバー容積の30%から70%の変位率 CO2 /分)、続いて頸部脱臼、成功した安楽死を確実にするために。<ol><li>可能であれば、マウスアレルゲンの拡散を最小限に抑えるためにフードの下で作業してください。マウスの動きと呼吸が止まったら、2分以上待って応答がないことを確認します。 注意: マウスが妊娠中または産後の場合、子犬は個別に安楽死させる必要があります。子犬E15.5以上は、解剖中に斬首する必要があります。</li>
	</ol></li>
	<li>解剖パッド、11枚羽根メス、湾曲した細い鋭利なハサミ、2対の鉗子、湾曲した鉗子、5-0ポリグラクチン縫合糸、解剖顕微鏡、および6本のピンを使用して解剖セットアップを準備します(図1、 材料表を参照)。</li>
	<li>パッドの上にマウスを置き、前肢を下に固定します(図2A)。ハサミで腹部を約1〜1.5 cm切開します(図2B)。はさみをそっと使用して、切開部の頭蓋側、尾側、および外側の皮膚を分離します(図2C、D)。</li>
	<li>マウスを背側にひっくり返し、後肢に向かって皮膚をそっと剥がして、解剖部位から皮膚を取り除きます(図2E-H)。</li>
	<li>マウスを四肢に固定し(図2I)、胸部から骨盤まで腹部を約1cm切開します(図2J)。 注意: 下にある臓器を傷つけないように注意してください。</li>
	<li>臓器を胸部に向かってそっと押して、視野をクリアします(図2K)。 注意: 水分補給を維持するために、1x PBSで組織を洗浄します。</li>
	<li>骨盤底からすべての脂肪組織を取り除きます(図2L-N)。 注意: 鉗子を使用して、目的の臓器や組織から脂肪をそっと引き抜き、取り除きます。</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65074/65074fig01.jpg"> 図1:解剖を実行するために必要なすべてのツールを備えたクリーンなワークスペース。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65074/65074fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65074/65074fig02.jpg"> 図2:マウスの骨盤腔と胸腔の皮膚の除去と開口部。 (A)すべての手足を固定します。(B)初期切開。(C)はさみを使用して下にある筋膜から皮膚を分離します。(D)皮膚を切断し、除去の準備をします。(E-G)マウスの周りを回って皮膚を引き剥がします。(H)背側から皮膚を完全に除去する。(I)胴体から皮膚を完全に除去し、マウスの手足を再び固定します。(J)腹部の開口部。(K)開いた腹部のビュー。(L)臓器を視野外に移動する。(m)脂肪を除去する。(N)クリアされた骨盤底のビュー。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65074/65074fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
2. USLハーベスティング
<ol><li>卵巣から子宮角を切り取り(図3B)、視野から引き離し、頸部接続部で切断します(図3C)。 注意: 子宮角は、 図3Aの回路図に従って識別できます。水分補給を維持するために1x PBSで組織を洗浄します。</li>
	<li>尿管を膀胱接続部から切り離します(図3D)。 注:これは、USLとの混同を避けるためです。</li>
	<li>結腸を子宮頸部のできるだけ近くで切ります(図3E、F)。 注意: 水分補給を維持するために、1x PBSで組織を洗浄します。</li>
	<li>マウスと解剖パッドを解剖スコープの下に置き、USLを視覚化します(図3G)。</li>
	<li>鉗子をそっと使用して、USLから周囲の脂肪を取り除きます。 注意: 2番目の鉗子のペアを使用して子宮頸部を小さな角度で持ち上げ、USLが子宮頸部と交差する場所の視覚化を強化します。水分補給を維持するために1x PBSで組織を洗浄します。</li>
	<li>両方のUSLの頸部端の周りに5-0ポリグラクチン縫合糸を結びます(図4B、C)。 注意: USLは、回路図と倍率画像を使用して識別できます(図4I-K)</li>
	<li>この研究では、1つのUSLを形態学的または生化学的分析(すなわち、ラマン顕微鏡、免疫組織化学、組織学)に使用します。USLの頸部の端を切り取り、子宮頸部の一部を取り付けたままにし、USLの底から筋肉の一部を切り取ります(図4D)。解剖した組織を1x PBSの浴に入れて、組織を水和状態に保ちます(図4G、H)。</li>
	<li>残りのUSLは、機械的テストとイメージングに使用します。機械的セットアップを容易にするために、子宮頸部を取り付けたまま、USLの頸部端を切断します(図4D)。 注意: 子宮頸部組織は、機械的テスト中にUSLを固定するためのアンカーとして機能します。</li>
	<li>関心のあるすべての組織が採取されたら(ステップ3〜5)、大腿骨を骨盤から脱臼させます(図4E)。 注意: 大腿骨頭が寛骨臼カップから関節を離すと、かすかなカチッという音が聞こえるはずです。</li>
	<li>骨盤骨の遠位端と近位端から骨盤骨を切り取り、約10 mmの全組織を残します(図4F)。解剖した組織を1x PBSに入れます。</li>
</ol><img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65074/65074fig03.jpg"> 図3:USL解剖のための骨盤底のクリア 。 (A)解剖学の概略図。(B)卵巣接続部で子宮角を切断する。(C)子宮角を切り落とす。(D)尿管の切断。(E)結腸の切断。(F)直腸とUSLの明確なビュー。(G)マウスと解剖パッドを解剖スコープの下に置きます。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65074/65074fig03large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65074/65074fig04.jpg"> 図4:USLとその周辺組織の図とUSLの解剖。 (A)USLを取り巻く解剖学的ランドマークの概略図。(B)頸部の端に縫合糸を結ぶ。(C)USLの頸部端を切り取る。(D)仙骨接続部での生化学的分析に使用するUSLを切り取る。(E)骨盤骨からの大腿骨の切断。(F)骨盤の近位端を切断する。(G)USLを35mmのペトリ皿で解剖する。(H)35mmのペトリ皿に骨盤が取り付けられたUSL。(I)0.75倍の倍率でのUSLと直腸。(J)USLから脂肪を除去する。(K)1.0倍の倍率でのUSLのクリーニング。スケールバー = 2 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65074/65074fig04large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
3.膀胱摘出
<ol><li>脂肪が取り除かれたら、鉗子で膀胱を持ち、約40°の角度でゆっくりと持ち上げます(図5A)。</li>
	<li>はさみで、子宮頸部の真上の遠位側から膀胱を切り取ります(図5B)。</li>
	<li>組織を1x PBSの入った浴に入れて、組織を水和状態に保ちます(図5H)。</li>
</ol>4.直腸収穫
<ol><li>USLが子宮頸部から切り離され、膀胱が解剖されたら、鉗子で子宮頸部を約40°の角度で持ち上げます。直腸と子宮頸部をつなぐ直腸膣筋膜があります。メスで、この接続をそっと切断します(図5C、D)。</li>
	<li>ハサミを使用して恥骨結合で恥骨を切ります。ワークスペースをゆっくりと広げて、組織の挿入物への視覚的なアクセスを増やします。</li>
	<li>鉗子で直腸を胸部に向かってそっと引っ張り、ハサミを使って直腸を後側から肛門までたどります。肛門で直腸を切断します(図5E)。</li>
	<li>組織を1x PBSに入れて、組織を水和状態に保ちます(図5I)。</li>
</ol>5.子宮頸部 - 膣複合体収穫
<ol><li>USLが子宮頸部から取り外された後、鉗子を使用して子宮頸部を保持します。ハサミを使用して子宮頸部を外陰部のできるだけ近くで切ります(図5F、G)。 注意: 膣の遠位端を視覚的に見るために、恥骨結合を必ず切断してください。</li>
	<li>組織を1x PBSに入れて、組織を水和状態に保ちます(図5J)。</li>
</ol><img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65074/65074fig05.jpg"> 図5:膀胱、直腸、および子宮頸部/膣の解剖。 (A)膀胱を斜めに保持します。(B)膀胱を切断する。(C)子宮頸部と直腸をつなぐ腱を切断する。(D)1.0倍の倍率での腱。(E)直腸を切断する。(F)鉗子で子宮頸部をつかむ。(G)膣の遠位端での切断。(H)35mmのペトリ皿に入った膀胱。(I)35mmのペトリ皿に入った直腸。(J)35mmのペトリ皿に入った子宮頸部-膣組織複合体。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65074/65074fig05large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
6.組織特性評価のためのサンプル調製
<ol><li>USLの機械的および視覚的分析<ol><li>骨盤アタッチメント付きのUSLをカスタム染色ウェル内のT字型壁に配置して、染色溶液に完全に浸るようにします(ウェルのCAD図面は、補足コーディングファイル1および補足コーディングファイル2にあります)。 注意: 縫合糸と鉗子を使用して、配置に役立ててください。</li>
		<li>遊離アミン基を染色する市販の色素(5 μL、 材料表を参照)を2.5 mLの1x PBSで希釈し、溶液をカスタム染色ウェルに加え、4°Cのロッカーで組織を2時間染色します。 注:染色ウェルに加える前に、溶液をボルテックスしてください。</li>
		<li>染色の最後の15分間に、市販の死細胞核染色剤2.5 μL( 材料表を参照)を溶液に加えます。 注:染色ウェルに加える前に溶液をボルテックスします。</li>
	</ol></li>
	<li>USLのラマン分析<ol><li>カスタムウェルに含まれるポリジメチルシロキサン(PDMS)ブロックにUSLを直線で固定します。 注:PDMSは、サンプルを目的の構成にピン留めできるように、ソフト基板として使用されます。さまざまな寸法のブロックは、製造元の指示に従って2つの成分を混合し( 材料表を参照)、ペトリ皿に鋳造し、重合後、メスの刃でPDMSを必要な形状に切断することによって作成できます。</li>
		<li>縫合ループと骨盤筋に昆虫ピンでピン留めします。1x PBSで組織を水和します。</li>
	</ol></li>
	<li>残りの組織<ol><li>残りの組織を液体窒素または適切な包埋化合物でスナップ凍結します, 目的の分析に応じて.</li>
		<li>その後の分析(免疫組織化学的または生化学的アッセイなど)まで、組織を-80°Cで保存します。</li>
	</ol></li>
</ol>

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</ol>

著者は開示するものは何もありません。

女性の生殖組織に対する構造的損傷の影響は十分に研究されておらず、POP研究のために簡単にアクセスできる動物モデルが必要です。マウスは、ヒトの生殖研究を模倣できる費用対効果の高いモデルです16。女性の生殖器系の研究への関心が高まっているため、これらの組織の研究を支援する方法が必要です。このニーズに対処するために、この研究では、構造的および機能的分析のためにマウス骨盤底組織を解剖および準備する方法が確立されています。
解剖を成功させるためには、十分な時間と注意が必要です。マウスの生殖組織は小さくてもろいです。脂肪が除去されたときにUSLまたは他の組織に損傷を与えないように、特にUSLと骨盤内臓器の周囲の脂肪を取り除くときは、細部に注意を払う必要があります。解剖顕微鏡を使用して、訓練を受けていない目が簡単に混乱する可能性のあるUSLと脂肪の違いを特定するのに役立つことが重要です。尿管を取り外すと、膀胱と子宮頸部への挿入ポイントが互いに接近しているため、USLとの混同を避けるのに役立ちます。USLの周りに縫合糸を結ぶときは、鉗子を使用してUS...

女性の約50%が骨盤臓器脱(POP)の影響を受けています1,2。これらの女性の約11%は、成功率が低い外科的修復を受けるための基準を満たしています(~30%)3,4。POPは、USLと骨盤底筋が適切なサポートを提供できないために、骨盤内臓器(すなわち、膀胱、子宮、子宮頸部、および直腸)のいずれかまたはすべてが自然な位置から降下することを特徴としています5。この状態は、素因3,6に加えて、解剖学的機能障害および結合組織の破壊、ならびに神経筋損傷を伴う。POPは、年齢、体重、パリティ、分娩タイプ(すなわち、経腟分娩または帝王切開出産)などの複数の要因に関連しています。これらの要因は、すべての骨盤底組織の機械的完全性に影響を与えると考えられており、妊娠と同等性がPOP5,7,8の主な推進力であると考えられています。
子宮仙骨靭帯(USL)は、子宮、子宮頸部、膣の重要な支持構造であり、子宮頸部を仙骨につなぎます4。USLの損傷により、女性はPOPを発症するリスクが高くなります。妊娠と出産はUSLに追加の負担をかけ、怪我を誘発し、POPの可能性を高める可能性があると考えられています。USLは、靭帯に沿って不均一に分布する平滑筋細胞、血管、リンパ管で構成される複雑な組織であり、頸部、中間部、仙骨部の9つの異なるセクションに分けることができます。USLの機械的完全性は、コラーゲン、エラスチン、プロテオグリカンなどの細胞外マトリックス(ECM)成分に由来します5、9、10。I型コラーゲン線維は、靭帯組織の主要な耐荷重引張成分であることが知られているため、USL障害およびPOP11に関与している可能性があります。
女性におけるPOPの原因、有病率、および影響に関する知識が不足しています。POPの適切な動物モデルの開発は、女性の骨盤底の理解を深めるために必要です。マウスとヒトは、尿管、直腸、膀胱、卵巣、丸い靭帯など、骨盤内に同様の解剖学的ランドマークを持っています9、およびUSLと子宮、子宮頸部、仙骨との同様の交点。さらに、マウスは遺伝子操作が容易であり、POP9の研究のための容易にアクセスでき、費用効果の高いモデルになる可能性があります。 
この研究では、未経産(つまり、妊娠していない)マウスからUSLとさまざまな骨盤底組織にアクセスして分離する方法を開発しました。抽出したUSLを酵素消化(すなわち、コラーゲンおよびグリコサミノグリカンを除去する)にかけ、引張荷重下での機械的応答を決定するために試験し、概念実証研究において生化学的組成を評価した。無傷の組織を分離する能力は、骨盤底コンポーネントのさらなる機械的および生化学的特性評価を容易にし、これは出産、妊娠、およびPOPに関連する傷害リスクの理解を深めるための重要な第一歩です。

<table><tbody><tr><td>11ブレード</td><td>フィッシャー</td><td>3120030</td><td>取り外し可能なブレード</td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>フィ</td><td>ッシャーBP399-1110x</td>濃度<td>コン</td></tr><tr><td>ドロイチナーゼABC</td><td>シグマ</td><td>C3667-10UN</td><td>酵素から希釈&nbsp;</td></tr><tr><td>コラゲナーゼI型</td><td>ワージントン生化学</td><td>LS004194</td><td>酵素&nbsp;</td></tr><tr><td>共焦点顕微鏡</td><td>ライカ</td><td>STELLARIS 5</td><td>直立構成</td></tr><tr><td>解剖顕微鏡</td><td>ライカ</td><td>S9E</td><td>カメラ付き</td></tr><tr><td>デュモン #5 鉗子</td><td>フィッシャー</td><td>NC9626652</td><td>細い先端</td></tr><tr><td>メス C57BL/6J マウス</td><td>ジャクソン 研究室</td><td>#: 000664</td><td></td></tr><tr><td>FemtoTools マイクロマニピュレーター</td><td>FemtoTools</td><td>FT-RS1002</td><td>100 mN ロードセル</td></tr><tr><td>FST湾曲鉗子</td><td>フィッシャー</td><td>NC9639443</td><td>湾曲先端</td></tr><tr><td>FSTシャープ9mmはさみ&nbsp;</td><td>フィッシャー</td><td>NC9639443</td><td>解剖はさみ</td></tr>ゴー<tr><td>スト染料780&nbsp;</td><td>とんぼ</td><td>13-0865-T500</td><td>遊離アミン染色</td></tr><tr><td>キムワイプ</td><td>フィッシャー</td><td>06-666</td><td>50ワイプの箱</td></tr><tr><td>OCT</td><td>ティッシュテック</td><td>4583</td><td>ティッシュ保存に使用</td></tr><tr><td>PDMS</td><td>サーモフィッシャー</td><td>044764.AK</td><td>メーカーの指示に従ってください</td></tr><tr><td>ペトリ皿 35 mm</td><td>フィッシャー</td><td>FB0875711A</td><td>解剖組織ポリ</td></tr><tr><td>グラクチンに使用5-0 縫合</td>糸 <td>Veter.Sut</td><td>VS385VL</td><td>針付き</td></tr><tr><td>レニショー InVia ラマン顕微鏡</td><td>レニショー</td><td>PN192(EN)-02-A</td><td>共焦点対物レンズ付き</td></tr><tr><td>ロッキングプラットフォーム</td><td>VWR</td><td>10127-876</td><td>2段プラットフォーム</td></tr><tr><td>サージカルグローブ</td><td>フィッシャー</td><td>52818</td><td>解剖用&nbsp;</td></tr><tr><td>Sytox</td><td>Thermo Fisher</td><td>S11381</td><td>核染色&nbsp;</td></tr><tr><td>Tピン</td><td>フィ</td><td>ッシャーS99385</td><td>解剖用&nbsp;</td></tr><tr><td>トランスファーピペット</td><td>フィ</td><td>ッシャー13-711-7M</td><td>解剖用&nbsp;</td></tr><tr><td>アンダーパッド</td><td>フィッシャー</td><td>22037950</td><td>解剖パッドを覆うために</td></tr></tbody></table>

マウス子宮仙靭帯と骨盤底器官の分離と特性評価

Isolation and Characterization of the Murine Uterosacral Ligaments and Pelvic Floor Organs

骨盤臓器脱(POP)は、骨盤底の完全性、構造、および機械的サポートに影響を与える状態です。骨盤底の臓器は、筋肉、靭帯、骨盤筋膜など、さまざまな解剖学的構造によって支えられています。子宮仙靭帯(USL)は重要な耐荷重構造であり、USLの損傷によりPOPを発症するリスクが高くなります。本プロトコルでは、ラマン分光法を用いたUSL生化学的組成と機能に関する独自のデータの取得、および機械的挙動の評価とともに、マウスUSLと骨盤底器官の解剖について説明します。マウスは前臨床研究にとって非常に貴重なモデルですが、マウスUSLの解剖は困難で複雑なプロセスです。この手順は、USLを含むマウス骨盤底組織の解剖をガイドし、複数の評価と特性評価を可能にするアプローチを提示します。この研究は、基礎科学者やエンジニアによる骨盤底組織の解剖を支援し、USLおよび骨盤底の状態に関する研究や、マウスモデルを使用した女性の健康の前臨床試験へのアクセスを拡大することを目的としています。

野生型マウスの解剖の各ステップは、プロトコルに関連する関連ビデオおよび図に詳述されている。この研究では、6週齢の雌C57BL / 6Jマウスを使用しました(補足表1)。異なる酵素で処理されたUSLを含む3つのサンプルグループ、対照(無処理)、コラゲナーゼ処理群、およびコンドロイチナーゼ処理群を分析しました。USLの平滑筋、神経、リンパ管は、原線維性コラーゲンとグリコサミノグリカン(GAG)5が豊富なECMに囲まれており、組織に機械的完全性をもたらすと考えられています。酵素処理は、これらのECM成分を破壊し、ラマン分光法と機械的(引張)試験を使用して生化学的および機械的違いを解決する可能性を実証するために選択されました。
消化のために、すべてのUSLをサーモミキサーに入れ、1 mLの溶液中で37°Cおよび300 rpmで3時間入れました。対照USLを1x PBSの溶液に入れ、コラゲナーゼ処理したUSLを1.0 U/mLのコラゲナーゼタイプIの溶液に入れ、コンドロイチナーゼで処理したUSLを2.0 U/m...

この記事では、女性の生殖組織の研究を拡大するために、マウスの子宮頸部、直腸、膀胱を含む子宮仙靭帯およびその他の骨盤底組織を解剖するための詳細なプロトコルを紹介します。

Pelvic organ prolapse (POP) is a condition that affects the integrity, structure, and mechanical support of the pelvic floor. The organs in the pelvic ...

このプロトコルは、骨盤臓器脱(POP)などの子宮仙骨靭帯および骨盤底の状態に関する研究のアクセシビリティを拡大し、ミラーリング骨盤底組織の解剖を容易にします。この技術により、解剖学的付着を維持し、周囲の骨盤底器官を回収しながら、マウスから両方の子宮仙靭帯を分離することができます。私たちの方法は、妊娠や病気が組織の機械的挙動にどのように影響するかについてのこの研究を可能にする前臨床モデルを確立します。この方法は、女性の健康関連研究のための新しいツールを確立します。主な闘争は、子宮仙骨靭帯の特定と取り扱いです。私のアドバイスは、これらの組織は小さくて壊れやすいので、十分な時間と注意を払うことです。安楽死させたマウスをパッドの上に置き、四肢を固定することから始めます。ハサミで腹部を1〜1.5センチの長さで切開します。切開部の頭蓋側、尾側、外側の皮膚をそっと分離します。マウスを裏返して背側を上に向け、後肢に向かって皮膚をそっと剥がします。手足を固定し、胸部から骨盤まで腹部に1センチの長さの切開を行います。臓器を胸部に向かってそっと押して、はっきりと見えるようにします。一対の鉗子を使用してPBSで洗浄した後、骨盤脂肪組織を引っ張ってきれいにします。子宮角を特定し、卵巣からそれらを切り取ります。次に、それらを視野から引き出し、頸部接続を切断します。膀胱接続から尿管を切断します。結腸を子宮頸部のできるだけ近くで切ります。パッド付きのマウスを解剖スコープの下に置き、子宮仙骨靭帯を視覚化します。鉗子を使用して、子宮仙骨靭帯から周囲の脂肪をそっと取り除きます。両方の靭帯の頸部の端の周りに5-0縫合糸を結びます。子宮仙骨靭帯の頸部端を切り取り、子宮頸部の一部を取り付けたままにします。次に、靭帯の底から筋肉を切り取ります。解剖した組織をPBSを含む浴に入れて、組織の水分補給を維持します。残りの組織の頸部端を切断し、機械的試験および画像診断のために子宮頸部を取り付けたままにする。脂肪が取り除かれたら、鉗子で膀胱を持ち、約40度の角度でゆっくりと持ち上げます。はさみを使用して、子宮頸部の真上の遠位側で膀胱を切断します。水分補給を維持するために、膀胱をPBSの入ったお風呂に入れます。次に、鉗子を使用して、子宮頸部を約40度の角度で持ち上げます。直腸と子宮頸部をつなぐ直腸膣筋膜を特定し、メスとの接続を切断します。はさみを使用して、恥骨合成で恥骨を切断します。骨盤底をゆっくりと広げて、組織の挿入の視認性を高めます。鉗子で子宮頸部を持ち、できるだけ外陰部の近くで切ります。水分補給を維持するために組織をPBSに入れます。鉗子を使用して、直腸を胸部に向かってそっと引っ張ります。直腸を特定し、肛門でそれを切断します。水分補給を維持するために直腸をPBSに入れます。関心のあるすべての組織が採取されると、骨盤から大腿骨が脱臼します。骨盤骨を遠位端と近位端から切り取ります。解剖した組織をPBSに入れます。酵素処理は、子宮仙靭帯が所定の全球変位で経験する平均軸方向ピークと弛緩ストレッサーを減少させるように見え、コラーゲンとグリコサミノグリカンが靭帯の軸方向の硬さに寄与していることを示しています。機械的に試験された各試料の平均軸ひずみは、酵素処理されたサンプルの全体的な軸ひずみが対照サンプルと同等またはそれ以上であったことを示しており、巨視的ストレスの減少は、より小さな株ではなく酵素処理によるものであることが示唆されています。子宮仙骨靭帯の中間部のラマン分光法は、酵素処理がマウス子宮仙靭帯の生化学的組成を変化させたことを示唆しています。コラゲナーゼ処理された子宮仙靭帯は、コラーゲン含有量が減少し、水分とヒアルロン酸が減少しました。コンドロイチナーゼ処理された子宮仙靭帯は、ヒアルロン酸が少なく、水分とコラーゲンの含有量も低かった。特にUSLとその周辺組織の損傷を避けるためにUSLと骨盤内臓器の周りの沈着物が必要であるという事実をクリアするときは、細部への注意が非常に重要です。POPに影響を与えると仮定した遺伝的変異を有するマウスを使用して、USLおよび他の骨盤底組織についてさらなる調査を行うことができます。私たちのプロトコルは、USLの機械的挙動がPOPの重要な危険因子である妊娠の機能をどのように変化させるかについての調査を含む、さまざまな新しい研究をすでに可能にしています。

isolation-characterization-murine-uterosacral-ligaments-pelvic-floor

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

フラスコに細胞の付着の速度に基づいて、筋骨格系の軟部組織から成体幹細胞を単離する。...

ソフト筋骨格組織から幹細胞を単離する

慢性前立腺炎/慢性骨盤痛症候群の前臨床モデルを誘導するために、新生児の母体の分離 - 私たちは、初期生活ストレスパラダイムを受けた雄のC57BL / 6マウスの前立腺におけるperigenital機械的感度および肥満細胞の活性化を測定しています。...

新生児母子分離のマウスモデルにおけるPerigenital感度と前立腺肥満細胞の活性化の評価

このプロトコルは、固定アームのトロカール誘導挿入の有無にかかわらず、単一の膣切開技術を使用して、ヒツジの直腸膣中隔のメッシュ移植を記述する。...

ヒツジモデルにおける経膣メッシュの挿入

ここで挙筋アニ裂孔サイズの測定を標準化するためのプロトコルを提示 磁気共鳴イメージングによる。目的は、休息と骨盤脱一貫性のある解剖学的骨ランドマークを使用しての男女の患者における値の負担の比較、画像解析から生体力学的推論を抽出することです。...

男性と女性で骨盤臓器脱の磁気共鳴画像による挙筋アニ裂孔拡大の定量化

このプロトコルは、培養中のVX2細胞を増殖させ、ウサギの後精膜リンパ節転移を伴う子宮内膜癌の直腸VX2モデルを作成する標準化された方法を提示する。オルトトピック子宮内膜癌モデルは、リンパ節転移の診断のための新規イメージングモダリティの前臨床研究にとって重要である。...

生体内伝播および培養VX2細胞から作られた後腹部リンパ管リンパデノパシーを有するオルトトピック子宮内膜癌モデル

子宮収縮は女性の幸福のために重要である。しかし、病理学的に収縮性が増加すると、特に若い女性では月経困難を引き起こす可能性がある。ここでは、月経困難の治療に使用できる平滑筋弛緩剤の有効性を迅速に評価できる簡単なex...

マウス生殖管自発的運動性を評価するためのEx Vivo法とデータ解析のためのMATLABベースの子宮運動追跡アルゴリズム

主要な骨盤神経節には、骨盤器官を内面的に活性化する副交感神経および交感神経が含まれている。ここでは解剖方法を説明し、これらの神経節および関連する神経の同定のための回路図を提供する。これらの方法は、これらの神経節のインビボでの実験的操作またはさらなる研究のための除去事後分析に適用することができる。...

男性および女性ラットにおける骨神経神経と関連神経の解剖

本明細書に記載されたロボット技術は、腹膜反射の下に位置する局所進行(T3/T4)直腸癌に対するロボット支援全メソレクタル切除および横方向骨盤リンパ節解離に対する段階的なアプローチを詳述することを目的とする。...

局所進行中低直腸癌に対するロボット支援全中腸切除および横骨盤リンパ節切断

骨盤臓器脱は世界中の何百万人もの女性に影響を及ぼしていますが、それでもいくつかの一般的な外科的介入の失敗率は40%にもなります。この状態を調査するための標準的な動物モデルの欠如は、進歩を妨げます。子宮仙靭帯懸垂および in vivo...

子宮仙靭帯サスペンションラットモデルの開発

ここでは、腹腔鏡下非メッシュ子宮頸管縫縮胸部固定術として知られる新しいアプローチを紹介します 骨盤臓器脱(LNMCPUP)の子宮温存を伴う 子宮を温存したい患者のための。永久子宮頸管縫合糸は、丸い靭帯を介して子宮を腸骨靭帯に吊り下げるために使用されます。...

腹腔鏡下非メッシュ子宮頸管縫縮術胸部固定術と骨盤臓器脱の子宮温存

子宮内癒着 (IUA) は、子宮内膜損傷の最も一般的な病理学的結果であり、生殖機能を著しく損ないます。外傷と感染は、IUA...

二重損傷による子宮内癒着のラットモデルの確立:掻爬術と感染

学ぶマウス子宮仙靭帯と骨盤底器官の分離法。解剖学的付着を維持しながら組織を採取し、妊娠や骨盤臓器脱に関する生体力学的研究の前臨床モデルを確立する方法です。

マウス子宮仙靭帯と骨盤底器官の分離と特性評価

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