アレルギー性接触皮膚炎評価のためのマウス耳モデル

このモデルは、ACDの病因を調査するために使用できるだけでなく、重要な意味を持つ新しい治療法の前臨床進化にも適用できます。これは、実験期間が短い、操作が簡単、明らかな症状、高い成功率など、多くの利点を備えた安定した効率的な動物モデルです。私たちの実験プロトコルは非常に詳細で操作が簡単です。

プロトコルの各ステップに正しく従ってください。モデリングを開始する前に、マウスを1週間環境に順応させ、食物と水に自由にアクセスできるようにします。モデリング当日は、紫外線ランプと75%アルコールを使用して、環境とカウンタートップを清掃および消毒します。

綿棒を使用してマウスの腹部に石鹸水を塗布し、ブレードまたはシェーバーで発毛方向の領域を剃ります。マウスの体重を量り、各グループの体重変化を比較します。腹部感作刺激を行う前に、シェービングによって誘発されたマウス腹部皮膚への軽微な損傷の完全な回復を確認してください。

0.5%DNFB溶液を調製し、アセトンとオリーブオイルの混合物を4対1の比率で希釈します。ピペットガンを使用して、DNFB溶液を完全に混合するために20回ブローおよび混合する。0.5%DNFB溶液をピペッターで腹部剃毛部の中央に25マイクロリットル塗布し、ピペッター先端の滑らかな面で軽く広げて均一に分散させます。

DNFB刺激を30秒間行った後、マウスがDNFB溶液をこすり落とさないように、寝具のない空のケージにマウスを置きます。溶液が完全に乾いたら、マウスを元のケージに戻し、食べ物と水を自由にアクセスできるようにします。耳の感作刺激については、マウスの体を向き、耳介の外側の境界を下に向けて、DNFB刺激中に溶液が外耳道に入らないようにします。

4日目と10日目に、ピペッターを使用して、20マイクロリットルのビヒクルまたは0.2%DNFB溶液を左耳介の内面にゆっくりと均一に塗布し、ピペッターの滑らかな側を使用して溶液を穏やかに分配します。右耳は治療せずに放置してください。DNFB溶液が乾くまで待ち、マウスをケージに戻します。

腹部および耳の感作刺激後、1日目から2日ごとにマウスの体重を測定します。各マウスの体重をゼロ日目と比較し、体重の変化に応じてマウスの体重に対するACDの効果を評価した。マウスの耳の高解像度写真をキャプチャして、初日から2日ごとにACDの臨床症状を記録します。

ノギスを使用して、正確な結果を得るために毎日同じ時間に耳介の厚さを測定します。バーニアキャリパーが内側へのクランプを継続するのを止めますampマウスの耳への組織の損傷を防ぐために、わずかな詰まりがある場合。位置を固定し、両耳のデータを記録します。

3つのデータの平均を記録し、耳の腫れをマイクロメートル単位で評価します。11日目の炎症性腫脹の程度を評価するには、0.5%エバンスブルー染料溶液を調製し、PBSで希釈します。固定具でマウスを固定するには、蓋を開け、マウスの尾を持ち、マウスの頭を固定具に向け、マウスが本能的に固定具に登るようにします。

ふたを覆います。マウスの尻尾を蓋の穴から出させ、固定具の長さを調整してマウスの尻尾全体を露出させます。アルコール綿球で尾を繰り返し拭くか、温水に30秒間浸し、尾の付け根をそっとつまんで満たし、両側の静脈を広げます。

冷光源の照射下で、1 mmインスリン針を使用して、Evans Blue Dye溶液をマウス尾静脈にゆっくりと注入します。マウスの耳の写真を撮るために15分待ちます。DNFB群のマウスの耳は、ACDに匹敵する明らかな臨床症状を示し、敏感な領域は発赤、乾燥、びらん、および滲出の典型的な症状を示しました。

しかし、純水の耳投与または溶媒制御は、DNFB群と同様の症状を生じさせなかった。DNFB群では、未治療の右耳と比較して、DNFB刺激後に左耳の厚さが有意に増加した。対照群と車両群に有意差はなかった。

DNFB群マウスの左耳は、右耳とは視覚的に異なるエバンスブルー染料の注射後に濃い青色に変わった。対照群およびビヒクル群のマウスの左右の耳はほぼ同じ色であった。マウスの体重増加は、DNFB、または単純なビヒクル刺激によってわずかに遅くなりましたが、有意な体重減少は得られませんでした。

マウスの耳にDNFB刺激を繰り返すと、脾臓の肥大と脾臓指数の増加がもたらされました。対照的に、ビヒクル群のマウスの脾臓指数は有意に変化しなかった。DINFB溶液が完全に混合され、外耳道に流れ込まずにマウスの耳に均一に塗布されていることを確認してください。

これがモデリングの成功の鍵です。