Name: アレルギー性接触皮膚炎評価のためのマウス耳モデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-24T14:55:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: 学ぶアレルギー性接触皮膚炎のマウス耳モデル構築法。DNFBを用いた感作誘導と耳介肥厚・エバンスブルー染色による評価手法を解説。免疫学・皮膚科学研究の前臨床評価に有用です。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

この研究は、中国国家自然科学財団(NSFC)からN.-Nの支援を受けました。(81904212);江蘇省漢方薬科学技術プロジェクト(YB201995);中国ポスドク特別助成事業(2020T130562)

マウスのすべてのケアと治療は、揚州大学の施設動物管理使用委員会によって確立されたガイドラインに従っており、プロジェクトライセンスSYXK(SU)2022-0044の下で施設動物管理および使用委員会によって承認されました。この研究では、6〜8週齢のBALB / cオスおよびメスマウスを使用しました。各グループは6匹のマウスで構成されていました( 材料表を参照)。ケージは、食物と水に自由にアクセスできる温度制御されたチャンバー(22±2°C、12時間の明暗サイクル)に置かれました。実験フロー図を 図1に示します。
1.動物の準備
<ol><li>環境に1週間順応した後、モデリングを開始します。</li>
	<li>マウスを操作する前に、紫外線ランプと75%アルコール消毒剤を使用して、環境とカウンタートップを洗浄および消毒します。 注意: 外的要因の影響を避けるために、マウスの耳に識別用のマーキングを行うことはできません。背中や尾の染色を代わりに使用することができます。</li>
	<li>小さな綿棒を使用して、マウスの腹部に石鹸水を塗布します(サイズは約1〜2 cm2)。モデリングの開始時(0日目;図2A)。 注意: 脱毛にまっすぐなかみそりの刃を使用するには、熟練したオペレーターが必要です。正しく行わないと、皮膚の炎症を引き起こす可能性があります。脱毛には、脱毛クリーム、バリカン、または安全かみそりの使用を検討してください。</li>
	<li>マウスの体重を量り、各グループの体重変化を比較します。</li>
</ol>2.腹部感作刺激
<ol><li>シェービングによって引き起こされる腹部の皮膚への軽微な損傷の完全な回復を確実にする。剃毛の2日後(2日目)に腹部感作を適用します。</li>
	<li>0.5%DNFB溶液を調製します:DNFBをアセトン:オリーブオイルの混合物で4:1の比率で希釈します(例:400 μLのアセトンと100 μLのオリーブオイルを混合; 材料表を参照)。ピペットガンを使用して20回ブローおよび混合し、DNFB溶液を完全に混合します。マウスへのDNFB溶液の各投与の前に、それを3〜5回吹き付けて混合する。 注意: 使用前に溶液を準備し、直射日光から保護するためにアルミホイルで包みます。</li>
	<li>25 μLの0.5%DNFB溶液をピペッターでマウスの腹部の剃毛領域の皮膚に塗布します(図2B)。</li>
	<li>DNFB溶液を腹部シェービングエリアの中央に滴下し、ピペッターチップの滑らかな面で軽く広げて均一に分散させます。</li>
	<li>DNFB刺激後30秒で、マウスを寝具のない空のケージに入れて、DNFB溶液がこすれないようにします。DNFB溶液が完全に乾いたら(約2分間)、マウスを元のケージに戻します。</li>
	<li>DNFB溶液は人間の皮膚に強く刺激するため、取り扱うときは手袋を着用してください。</li>
</ol>3.耳感作刺激
<ol><li>上記のように0.2%DNFB溶液、ビヒクル溶液(アセトンとオリーブオイルの4:1混合物)、および純水を調製します。</li>
	<li>マウスの体の向きを合わせ、DNFB刺激中に溶液が外耳道に入らないように、操作全体を通して耳介の外側の境界を下向きにします。</li>
	<li>4、6、8、および10日目に、ピペッターを使用して、20 μLの0.2%DNFB溶液またはビヒクル溶液をマウスの左耳介の内面にゆっくりと均一に塗布します。DNFB溶液が外耳道に入るのを防ぐために、ピペッターチップの滑らかな側を使用して、投与中にDNFB溶液を穏やかに分配します。右耳は未治療のままにします(図2C)。</li>
	<li>DNFB溶液が乾くまで待ち、マウスをケージに戻します(約30秒)。</li>
	<li>DNFBソリューションを取り扱うときは手袋を着用してください。</li>
</ol>4.マウスの体重とACDの症状を記録する
<ol><li>マウスの体重を毎日測定し、1日目から開始し、0日目に対応する体重と比較します。マウスの体重に対するACDの効果を体重変化(g)±平均の標準誤差(SEM)として評価する。</li>
	<li>マウスの耳の高解像度写真を撮り、1日目から2日ごとにACDの臨床症状を記録します。</li>
</ol>5.耳介の厚さの測定
<ol><li>1日目から2日ごとに耳介の厚さを測定します。両耳を詳細に測定して記録します。</li>
	<li>ノギス( 材料表を参照)を使用して、正確な結果を得るために毎日同時に耳介の厚さを測定します(図3A)。バーニアキャリパーが内側へのclを継続するのを止めますampマウスの耳への組織の損傷を防ぐために、わずかな詰まりがある場合。位置を固定し、データを記録します。</li>
	<li>各耳介の3つの異なる場所から厚さを収集します(図3B)。3 つのデータの平均を有効な値として記録します。耳の腫れをマイクロメートル(μm)±平均の標準誤差(SEM)で評価します。</li>
</ol>6.炎症性腫脹の程度の評価
<ol><li>0.5%エバンスブルー染料( 材料表を参照)溶液を調製します:11日目にリン酸緩衝生理食塩水(PBS)でエバンスブルー染料を希釈します。エバンスの青い染料は人間にわずかに有毒であるため、常に白衣と手袋を着用してください。</li>
	<li>固定具でマウスを固定します:固定具の蓋を開け( 材料の表を参照)、マウスの尾を持ち、マウスの頭を固定具に向け、マウスを本能的に固定具に登らせます。蓋を覆い、マウスの尻尾を蓋の穴から出させ、固定具の長さを調整してマウスの尻尾全体を露出させます。</li>
	<li>アルコール綿球で尾を繰り返し拭くか、温水に30秒間浸し、尾の根元をそっとつまんで両側の静脈を満たして拡張します。冷光源の照射下で注入を行う。</li>
	<li>1 mmのインスリン針を使用して、エバンスブルー染料溶液をマウス尾静脈にゆっくりと注入します。15分待ってから、マウスの耳の写真を撮ります。 注意: マウスをテーブルの上に置き、そっと保持して、画像取得のために耳の領域を露出させます。エバンスブルー染料溶液を注射し、対応する適応症を観察した直後に、頸部脱臼を使用してマウスを安楽死させます。</li>
</ol>

<ol><li>Neale, H., Garza-Mayers, A. C., Tam, I., Yu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+allergic+contact+dermatitis.+Part+I%3A+Clinical+features+and+common+contact+allergens+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Academy+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Pediatric allergic contact dermatitis. Part I: Clinical features and common contact allergens in children.</a> Journal of the American Academy of Dermatology. 84 (2), 235-244 (2021).</li>
<li>Koppes, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+knowledge+on+biomarkers+for+contact+sensitization+and+allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Contact+Dermatitis%22%5BJournal%5D)">Current knowledge on biomarkers for contact sensitization and allergic contact dermatitis.</a> Contact Dermatitis. 77 (1), 1-16 (2017).</li>
<li>Martin, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+chemical-induced+innate+immunity+in+allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of chemical-induced innate immunity in allergic contact dermatitis.</a> Allergy. 66 (9), 1152-1163 (2011).</li>
<li>Kimber, I., Basketter, D. A., Gerberick, G. F., Dearman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunopharmacology%22%5BJournal%5D)">Allergic contact dermatitis.</a> International Immunopharmacology. 2 (2-3), 201-211 (2002).</li>
<li>Vocanson, M., Hennino, A., Rozieres, A., Poyet, G., Nicolas, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effector+and+regulatory+mechanisms+in+allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Effector and regulatory mechanisms in allergic contact dermatitis.</a> Allergy. 64 (12), 1699-1714 (2009).</li>
<li>Gamradt, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitory+checkpoint+receptors+control+CD8%2B+resident+memory+T+cells+to+prevent+skin+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Inhibitory checkpoint receptors control CD8+ resident memory T cells to prevent skin allergy.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 143 (6), 2147.e9-2157.e9 (2019).</li>
<li>Fraginals, R., Blasi, N. A., Lepoittevin, J. P., Benezra, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+successful+murine+model+for+contact+sensitization+to+a+sesquiterpene-alpha-methylene-gamma-butyrolactone%3A+sensitization+to+alantolactone+in+four+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">A successful murine model for contact sensitization to a sesquiterpene-alpha-methylene-gamma-butyrolactone: sensitization to alantolactone in four strains of mice.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 97 (3), 473-477 (1991).</li>
<li>Knop, J., Riechmann, R., Neumann, C., Macher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+suppressor+mechanisms+in+allergic+contact+dermatitis%3A+5.+Evidence+that+inhibition+of+suppressor+T+lymphocytes+by+Corynebacterium+parvum+is+mediated+by+interferon%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Modulation of suppressor mechanisms in allergic contact dermatitis: 5. Evidence that inhibition of suppressor T lymphocytes by Corynebacterium parvum is mediated by interferon.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 79 (6), 385-388 (1982).</li>
<li>Polak, L., Scheper, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen-specific+T-cell+lines+in+DNCB-contact+sensitivity+in+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Antigen-specific T-cell lines in DNCB-contact sensitivity in guinea pigs.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 80 (5), 398-402 (1983).</li>
<li>Witten, V. H., March, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+of+the+mechanism+of+allergic+eczematous+contact+dermatitis.+II.+Use+of+C14+labelled+2%3A4-dinitrochlorobenzene+in+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Studies of the mechanism of allergic eczematous contact dermatitis. II. Use of C14 labelled 2:4-dinitrochlorobenzene in guinea pigs.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 31 (2), 97-102 (1958).</li>
<li>Knop, J., Riechmann, R., Macher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+suppressor+mechanism+in+allergic+contact+dermatitis.+IV.+Selective+inhibition+of+suppressor+T-lymphocytes+by+serum+obtained+from+Corynebacterium+parvum+treated+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Modulation of suppressor mechanism in allergic contact dermatitis. IV. Selective inhibition of suppressor T-lymphocytes by serum obtained from Corynebacterium parvum treated mice.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 77 (6), 469-473 (1981).</li>
<li>Rubic-Schneider, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GPR91+deficiency+exacerbates+allergic+contact+dermatitis+while+reducing+arthritic+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">GPR91 deficiency exacerbates allergic contact dermatitis while reducing arthritic disease in mice.</a> Allergy. 72 (3), 444-452 (2017).</li>
<li>Stampf, J. L., Benezra, C., Byers, V., Castagnoli Jr, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+tolerance+to+poison+ivy+urushiol+in+the+guinea+pig+by+epicutaneous+application+of+the+structural+analog+5-methyl-3-n-pentadecylcatechol%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Induction of tolerance to poison ivy urushiol in the guinea pig by epicutaneous application of the structural analog 5-methyl-3-n-pentadecylcatechol.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 86 (5), 535-538 (1986).</li>
<li>Dhingra, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+profiling+of+contact+dermatitis+skin+identifies+allergen-dependent+differences+in+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Molecular profiling of contact dermatitis skin identifies allergen-dependent differences in immune response.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 134 (2), 362-372 (2014).</li>
<li>Maguire Jr, H. C., Kaidbey, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+photoallergic+contact+dermatitis%3A+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Experimental photoallergic contact dermatitis: a mouse model.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 79 (3), 147-152 (1982).</li>
<li>Qiu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dysregulated+sebum-microbial+metabolite-IL-33+axis+initiates+skin+inflammation+in+atopic+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">A dysregulated sebum-microbial metabolite-IL-33 axis initiates skin inflammation in atopic dermatitis.</a> The Journal of Experimental Medicine. 219 (10), e2021397(2022).</li>
<li>Kim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-inflammatory+activities+of+Dictamnus+dasycarpus+Turcz.%2C+root+bark+on+allergic+contact+dermatitis+induced+by+dinitrofluorobenzene+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Anti-inflammatory activities of Dictamnus dasycarpus Turcz., root bark on allergic contact dermatitis induced by dinitrofluorobenzene in mice.</a> Journal of Ethnopharmacology. 149 (2), 471-477 (2013).</li>
<li>Zhou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+6%27-acetylpaeoniflorin+on+dinitrochlorobenzene-induced+allergic+contact+dermatitis+in+BALB%2Fc+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Immunologic+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of 6'-acetylpaeoniflorin on dinitrochlorobenzene-induced allergic contact dermatitis in BALB/c mice.</a> Immunologic Research. 64 (4), 857-868 (2016).</li>
<li>Donglang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+on+different+skin+pruritus+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparative study on different skin pruritus mouse models.</a> Frontiers in Medicine. 8, 630237(2021).</li>
<li>Yang, N., Shao, H., Deng, J., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Network+pharmacology-based+analysis+to+explore+the+therapeutic+mechanism+of+Cortex+Dictamni+on+atopic+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Network pharmacology-based analysis to explore the therapeutic mechanism of Cortex Dictamni on atopic dermatitis.</a> Journal of Ethnopharmacology. 304, 116023(2023).</li>
</ol>

著者らは、この研究における利益相反はないと報告している。

マウスの耳にACD様症状を誘発するためのここで説明するプロトコルは、ACDの病態生理学を研究するため、および新薬開発のためのスクリーニングツールとして使用できます。
ACDモデルを確立するには、初期感作とその後の刺激の2つの重要なステップがあります。腹部は通常、最初の感作部位であるが、その後の刺激部位はわずかに異なって選択された。以前の研究では、ほとんどの学者がマウスの背中や首にACDモデルを確立するためにDNFB / DNCBやオキサゾロンなどの化学増感剤を使用することを選択しており、マウスのモデリング領域を脱毛させるためにブレードまたはトリマーを使用することは避けられません17,18,19。ただし、このステップは皮膚バリアを簡単に破壊し、その後の実験に影響を与える可能性があります。さらに、滴下した薬剤は、首筋の面積が広く、周囲の毛の影響により、均一に分布しにくく、近くの毛に吸収されやすくなりま...

アレルギー性接触皮膚炎(ACD)は、接触部位の湿疹様症状、中等症の場合は浮腫および紅斑、重症の場合は丘疹、びらん、滲出、さらには大規模な瘢痕を特徴とする一般的な皮膚疾患です1。それは人口の最大20%に影響を及ぼし、あらゆる年齢の人々に影響を与える可能性があります2。ACDは、アレルゲンに繰り返し曝露された個人によく発生し、自宅や職場での1つ以上のアレルゲンに対する個人の免疫応答によって引き起こされる可能性があります3。IV型遅延型過敏症は、ACD4における免疫応答の主なタイプと考えられている。アレルゲンに繰り返しさらされている皮膚の領域では、循環メモリーT細胞が大量に蓄積し、免疫および炎症反応を誘発します3,5,6。この研究の目的は、ACDの発症における免疫学的および炎症反応のさらなる調査のための信頼できる実験室技術を提案することです。
ACDの発症は通常、化学物質への繰り返しの曝露によって引き起こされる接触過敏症によるものです。多くの研究者が、病気の発症をシミュレートするために、過去数十年にわたって、家妃マウス7,8、モルモット9,10、およびその他の動物でさまざまなACD動物モデルを開発しました。実験方法のほとんどは、腹部感作(誘導)と背中または耳たぶへの刺激の提供(刺激)の2つの段階で構成されています。一般的に使用される化学物質には、主に1-フルオロ-2,4-ジニトロベンゼン(DNFB)/ 1-クロロ-2,4-ジニトロベンゼン(DNCB)8,9,11、オキサゾロン12、ウルシオール13などがあります。その中で、DNFBとDNCBが最も広く使用されており、1958年10月に最初に報告されました10。ニッケル感作モデル14や光アレルギー性接触皮膚炎モデル15も多用される。
ACDモデルを構築するための実験的方法を提示する。この方法は、以前の研究に基づいて、複数の実験と比較して要約および最適化されています。他のACDモデルと比較して、このモデルには、小さな個人差、短い実験期間、少量の化学刺激など、いくつかの利点があります。さらに、この研究は、経済的であるだけでなく、遺伝子ノックアウトまたはトランスジェニックマウスの準備のためのより多くの選択肢があるマウスに適用できます16。また、耳の厚さの測定、炎症性滲出液の測定のためのエバンスブルー染料の使用など、実験でACDの進行状況を監視するために使用されるさまざまな方法についても説明します。このモデルは、マウスの耳、血液、脾臓、およびその他のサンプルを実験室で分析してACDの病因を調査できるだけでなく、特定のプロモーションの重要性を持つ新しい治療法の前臨床評価にも適用できます。

<table><tbody><tr><td>1-フルオロ-2,4-ジニトロベンゼン(DNFB)</td><td>メルク</td><td>200-734-3</td><td>1-フルオロ-2,4-ジニトロベンゼン、&ge;99%</td></tr><tr><td>アセトン</td><td>Sinopharm化学試薬Co.、株式会社</td><td>10000418</td><td>&ge;アルミ箔99.5%</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Cleanwrap</td><td>CF-2</td><td></td></tr><tr><td>Evans blue dye</td><td>Solarbio</td><td>314-13-6</td><td>染料含有量約 80%</td></tr><tr><td>マウス固定器</td><td>ZHUYANBANG</td><td>GEGD-SM1830</td><td></td></tr><tr><td>オリーブオイル</td><td>Solarbio</td><td>8001-25-0</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>ピペットチップ</td><td>Biofount</td><td>FT-200</td><td>10 - 200 &mu;l</td></tr><tr><td>ピペッター</td><td>エッペンドルフ AG</td><td>3123000250</td><td>20 - 200 &mu;l</td></tr><tr><td>カミソリ刃</td><td>Shanghai Gillette Co. Ltd.</td><td>74-S</td><td></td></tr><tr><td>ノギス</td><td>Delixi Electric</td><td>DECHOTVCS1200</td><td></td></tr></tbody></table>

アレルギー性接触皮膚炎評価のためのマウス耳モデル

A Mouse Ear Model for Allergic Contact Dermatitis Evaluation

皮膚は人体の最初の防衛線であり、環境化学物質に最もさらされている臓器の1つです。アレルギー性接触皮膚炎(ACD)は、局所的な発疹、発赤、および皮膚病変として現れる一般的な皮膚疾患です。ACDの発生と発症は、遺伝的要因と環境要因の両方の影響を受けます。近年、多くの学者がACDの一連のモデルを構築していますが、これらのモデルの実験プロトコルはすべて異なるため、読者がそれらをうまく確立することは困難です。したがって、安定した効率的な動物モデルは、アトピー性皮膚炎の病態をさらに研究するために非常に重要です。本研究では、マウスの耳にACD様症状を誘発するための1-フルオロ-2,4-ジニトロベンゼン(DNFB)を用いたモデリング手法を詳述し、モデリング中に皮膚炎の重症度を評価するためのいくつかの方法について説明します。この実験プロトコルは、いくつかの実験でうまく適用されており、ACD研究の分野で一定の促進的役割を果たしています。

DNFB刺激を繰り返すと、DNFB群のマウスの耳はACDに匹敵する明らかな臨床症状を示し、敏感な領域は発赤、乾燥、さらにはびらんや滲出の典型的な症状を示しました。しかし、純水の耳投与(対照群)または溶媒対照(ビヒクル群)は同様の症状を生じさせなかった(図4)。
一方、DNFB群では、未治療の右耳と比較して、DNFB刺激後に左耳の厚さが有意に増加したのに対し(図5A)、対照群と車両群では有意差がなかった(図5B)。DNFB群マウスの左耳は、モデリングの11日目にエバンスブルー染料を注入した後、明らかに紺色に変わり、右耳とは視覚的に異なっていました。しかしながら、対照群およびビヒクル群におけるマウスの左右の耳はほぼ同じ色であった(図5C)。
さらに、マウスの体重変化を解析した。マウスの体重増加は...

ここでは、1-フルオロ-2,4-ジニトロベンゼン(DNFB)によるマウス耳のアレルギー性接触皮膚炎の誘発方法と、アレルギー性接触皮膚炎の重症度を評価する方法について説明します。

Skin is the human body&#39;s first line of defense and one of the most exposed organs to environmental chemicals. Allergic contact dermatitis (ACD) is a ...

このモデルは、ACDの病因を調査するために使用できるだけでなく、重要な意味を持つ新しい治療法の前臨床進化にも適用できます。これは、実験期間が短い、操作が簡単、明らかな症状、高い成功率など、多くの利点を備えた安定した効率的な動物モデルです。私たちの実験プロトコルは非常に詳細で操作が簡単です。プロトコルの各ステップに正しく従ってください。モデリングを開始する前に、マウスを1週間環境に順応させ、食物と水に自由にアクセスできるようにします。モデリング当日は、紫外線ランプと75%アルコールを使用して、環境とカウンタートップを清掃および消毒します。綿棒を使用してマウスの腹部に石鹸水を塗布し、ブレードまたはシェーバーで発毛方向の領域を剃ります。マウスの体重を量り、各グループの体重変化を比較します。腹部感作刺激を行う前に、シェービングによって誘発されたマウス腹部皮膚への軽微な損傷の完全な回復を確認してください。0.5%DNFB溶液を調製し、アセトンとオリーブオイルの混合物を4対1の比率で希釈します。ピペットガンを使用して、DNFB溶液を完全に混合するために20回ブローおよび混合する。0.5%DNFB溶液をピペッターで腹部剃毛部の中央に25マイクロリットル塗布し、ピペッター先端の滑らかな面で軽く広げて均一に分散させます。DNFB刺激を30秒間行った後、マウスがDNFB溶液をこすり落とさないように、寝具のない空のケージにマウスを置きます。溶液が完全に乾いたら、マウスを元のケージに戻し、食べ物と水を自由にアクセスできるようにします。耳の感作刺激については、マウスの体を向き、耳介の外側の境界を下に向けて、DNFB刺激中に溶液が外耳道に入らないようにします。4日目と10日目に、ピペッターを使用して、20マイクロリットルのビヒクルまたは0.2%DNFB溶液を左耳介の内面にゆっくりと均一に塗布し、ピペッターの滑らかな側を使用して溶液を穏やかに分配します。右耳は治療せずに放置してください。DNFB溶液が乾くまで待ち、マウスをケージに戻します。腹部および耳の感作刺激後、1日目から2日ごとにマウスの体重を測定します。各マウスの体重をゼロ日目と比較し、体重の変化に応じてマウスの体重に対するACDの効果を評価した。マウスの耳の高解像度写真をキャプチャして、初日から2日ごとにACDの臨床症状を記録します。ノギスを使用して、正確な結果を得るために毎日同じ時間に耳介の厚さを測定します。バーニアキャリパーが内側へのクランプを継続するのを止めますampマウスの耳への組織の損傷を防ぐために、わずかな詰まりがある場合。位置を固定し、両耳のデータを記録します。3つのデータの平均を記録し、耳の腫れをマイクロメートル単位で評価します。11日目の炎症性腫脹の程度を評価するには、0.5%エバンスブルー染料溶液を調製し、PBSで希釈します。固定具でマウスを固定するには、蓋を開け、マウスの尾を持ち、マウスの頭を固定具に向け、マウスが本能的に固定具に登るようにします。ふたを覆います。マウスの尻尾を蓋の穴から出させ、固定具の長さを調整してマウスの尻尾全体を露出させます。アルコール綿球で尾を繰り返し拭くか、温水に30秒間浸し、尾の付け根をそっとつまんで満たし、両側の静脈を広げます。冷光源の照射下で、1 mmインスリン針を使用して、Evans Blue Dye溶液をマウス尾静脈にゆっくりと注入します。マウスの耳の写真を撮るために15分待ちます。DNFB群のマウスの耳は、ACDに匹敵する明らかな臨床症状を示し、敏感な領域は発赤、乾燥、びらん、および滲出の典型的な症状を示しました。しかし、純水の耳投与または溶媒制御は、DNFB群と同様の症状を生じさせなかった。DNFB群では、未治療の右耳と比較して、DNFB刺激後に左耳の厚さが有意に増加した。対照群と車両群に有意差はなかった。DNFB群マウスの左耳は、右耳とは視覚的に異なるエバンスブルー染料の注射後に濃い青色に変わった。対照群およびビヒクル群のマウスの左右の耳はほぼ同じ色であった。マウスの体重増加は、DNFB、または単純なビヒクル刺激によってわずかに遅くなりましたが、有意な体重減少は得られませんでした。マウスの耳にDNFB刺激を繰り返すと、脾臓の肥大と脾臓指数の増加がもたらされました。対照的に、ビヒクル群のマウスの脾臓指数は有意に変化しなかった。DINFB溶液が完全に混合され、外耳道に流れ込まずにマウスの耳に均一に塗布されていることを確認してください。これがモデリングの成功の鍵です。

a-mouse-ear-model-for-allergic-contact-dermatitis-evaluation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

アレルギー性​​喘息の実験モデルマウスは、疾患の病因を研究し、新しい治療法を開発するための新たな可能性を提供します。これらのモデルはよくアレルギー性​​免疫応答、気道炎症、肺病態生理を支配する因子を測定するのに適しています。...

アレルゲン誘発性喘息のマウスモデル

このビデオでは、ヒト化マウスモデル(人間の皮膚を模倣したマウスモデル)でUV感度を測定する方法を説明しています。皮膚に紅斑や浮腫を引き起こす可能性のある紫外線の最小紅斑線量(MED)を決定します。この方法は、UV感受性を低下させるために使用される薬物の有効性を見つけるのに役立ちます。...

最小紅斑性用量アッセイ:マウスモデルにおけるUV感度の測定方法

このビデオは、マウスモデルで皮膚の炎症を誘発することにより、試験抗原を評価するin...

皮膚の炎症を誘発することにより抗原に対する免疫応答を評価する技術

このビデオは、マウスのマラセチア誘発性皮膚感染を示しています。マラセチアオイル懸濁液は、傷ついた耳に塗布され、耳組織の炎症と腫れを引き起こします。その後、耳を解剖し、均質化し、寒天プレート上に広げて成長させます。コロニーの数は、皮膚の炎症に起因する真菌の負担を示しています。...

マウスモデルにおけるマラセチア誘発性皮膚炎症と真菌負荷解析

肥満細胞および好塩基球の活性化によって特徴付けられるアレルギー反応は、IgEの架橋および前炎症性メディエーターの放出によって駆動される。アレルギー反応の定量的評価は、アレルゲンチャレンジ後の血管透過性の変化を監視するためにエバンスブルー色素を用いることによって達成することができる。...

マウスにおけるローカルアナフィラキシーの測定

ここでは、分岐の形態形成および末梢神経、血管、免疫細胞分布のパターンを視覚化することを可能にする全体の大人マウス耳介皮膚に高解像度全体マウント画像処理手法について述べる。...

大人の耳の皮膚の共焦点顕微鏡を全取り付ける: 神経血管分岐の形態形成と免疫細胞の分布を検討するモデル システム

皮膚が負傷したに生得の免疫反応のリアルタイム検出とマウスの黄色ブドウ球菌感染症のためのアプローチを説明します。比較する LysM EGFP でマウス (蛍光好中球を所有) する LysM EGFP...

マウスのモデルを評価する生得の免疫反応黄色ブドウ球菌感染症

接触過敏症(CHS)は、アレルギー性接触皮膚炎(ACD)のマウス実験モデルである。CHSは、胸部および腹部の剃毛された皮膚を塗ることによって反応性ハプテンによる感作に基づいており、その後の耳の皮膚の課題を希釈ハプテンで、様々な方法で評価される腫脹反応を引き起こす。...

アレルギー性接触皮膚炎のマウスモデルとしての接触過敏症

このプロトコルは、オレイン酸と Cutibacterium...

複合ニキビのラットモデル

この研究は、皮外(EC)免疫を通じてマウスの免疫応答を調節する皮膚の役割を示しています。タンパク質抗原によるEC免疫は、接触過敏症の免疫応答を抑制したり、病原体に関連する分子パターンと組み合わせることで皮膚誘発性の抑制を逆転させることができます。EC免疫は、針を使わない効果的な免疫療法として有望視されています。...

上皮誘導免疫調節のマウスモデル

学ぶアレルギー性接触皮膚炎のマウス耳モデル構築法。DNFBを用いた感作誘導と耳介肥厚・エバンスブルー染色による評価手法を解説。免疫学・皮膚科学研究の前臨床評価に有用です。

アレルギー性接触皮膚炎評価のためのマウス耳モデル

さらに動画を探す