Name: メチシリン耐性 黄色ブドウ球菌 (MRSA)感染に対するナノエマルジョンアジュバントワクチンの免疫応答の評価 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-09-01T12:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: 学ぶナノエマルジョンアジュバントワクチンの調製と免疫応答評価法。低エネルギー乳化法でMRSA抗原を用いたワクチンを作製し、ELISAと動物実験で免疫効果と保護効果を検証する。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

この研究は、中国の国家重点研究開発プログラムのNo.2021YFC2302603、NSFCの第32070924および32000651、および重慶の自然科学財団プロジェクトプログラムのNo.2019jcyjA-msxmx0159によってサポートされました。

<ol><li>Cheung, G. Y. C., Bae, J. S., Otto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenicity+and+virulence+of+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Pathogenicity and virulence of Staphylococcus aureus.</a> Virulence. 12 (1), 547-569 (2021).</li>
<li>Lakhundi, S., Zhang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus%3A+molecular+characterization%2C+evolution%2C+and+epidemiology%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+Reviews%22%5BJournal%5D)">Methicillin-resistant Staphylococcus aureus: molecular characterization, evolution, and epidemiology.</a> Clinical Microbiology Reviews. 31 (4), e00020(2018).</li>
<li>Mancuso, G., Midiri, A., Gerace, E., Biondo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+antibiotic+resistance%3A+the+most+critical+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">Bacterial antibiotic resistance: the most critical pathogens.</a> Pathogens. 10 (10), 1310(2021).</li>
<li>Goullé, J. P., Grangeot-Keros, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aluminum+and+vaccines%3A+Current+state+of+knowledge%5BTitle%5D)+AND+%22Medecine+et+Maladies+Infectieuses%22%5BJournal%5D)">Aluminum and vaccines: Current state of knowledge.</a> Medecine et Maladies Infectieuses. 50 (1), 16-21 (2020).</li>
<li>Shi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccine+adjuvants%3A+Understanding+the+structure+and+mechanism+of+adjuvanticity%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Vaccine adjuvants: Understanding the structure and mechanism of adjuvanticity.</a> Vaccine. 37 (24), 3167-3178 (2019).</li>
<li>Geoghegan, S., O'Callaghan, K. P., Offit, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccine+safety%3A+myths+and+misinformation%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Vaccine safety: myths and misinformation.</a> Frontiers in Microbiology. 11, 372(2020).</li>
<li>Pandey, P., Gulati, N., Makhija, M., Purohit, D., Dureja, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoemulsion%3A+a+novel+drug+delivery+approach+for+enhancement+of+bioavailability%5BTitle%5D)+AND+%22Recent+Patents+on+Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Nanoemulsion: a novel drug delivery approach for enhancement of bioavailability.</a> Recent Patents on Nanotechnology. 14 (4), 276-293 (2020).</li>
<li>Ko, E. J., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunology+and+efficacy+of+MF59-adjuvanted+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Vaccines+%26+Immunotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Immunology and efficacy of MF59-adjuvanted vaccines.</a> Human Vaccines & Immunotherapeutics. 14 (12), 3041-3045 (2018).</li>
<li>Chen, B. H., Inbaraj, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoemulsion+and+nanoliposome+based+strategies+for+improving+anthocyanin+stability+and+bioavailability%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Nanoemulsion and nanoliposome based strategies for improving anthocyanin stability and bioavailability.</a> Nutrients. 11 (5), 1052(2019).</li>
<li>Zuo, Q. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+protective+immunity+of+a+novel+subunit+fusion+vaccine+in+a+murine+model+of+systemic+MRSA+infection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the protective immunity of a novel subunit fusion vaccine in a murine model of systemic MRSA infection.</a> PLoS One. 8 (12), e81212(2013).</li>
<li>Sun, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+systemic+and+mucosal+immunity+against+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus+infection+by+a+novel+nanoemulsion+adjuvant+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Induction of systemic and mucosal immunity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus infection by a novel nanoemulsion adjuvant vaccine.</a> International Journal of Nanomedicine. 10, 7275-7290 (2015).</li>
<li>National Pharmacopoeia Committee. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Chinese+Pharmacopoeia%22">Chinese Pharmacopoeia</a>. , China Medical Science and Technology Press. Beijing. 1088(2020).</li>
<li>Kontomaris, S. V., Stylianou, A., Malamou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atomic+force+microscopy+nanoindentation+method+on+collagen+fibrils%5BTitle%5D)+AND+%22Materials%22%5BJournal%5D)">Atomic force microscopy nanoindentation method on collagen fibrils.</a> Materials. 15 (7), 2477(2022).</li>
<li>Zeng, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+immunodominant+epitope-specific+monoclonal+antibody+cocktail+improves+survival+in+a+mouse+model+of+Staphylococcus+aureus+bacteremia%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">An immunodominant epitope-specific monoclonal antibody cocktail improves survival in a mouse model of Staphylococcus aureus bacteremia.</a> The Journal of Infectious Diseases. 223 (10), 1743-1752 (2021).</li>
<li>Roy, U., Kornitzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme-iron+acquisition+in+fungi%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Heme-iron acquisition in fungi.</a> Current Opinion in Microbiology. 52, 77-83 (2019).</li>
<li>Saeed, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+toxins+in+musculoskeletal+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopaedic+Research%22%5BJournal%5D)">Bacterial toxins in musculoskeletal infections.</a> Journal of Orthopaedic Research. 39 (2), 240-250 (2021).</li>
<li>Xu, Q., Zhou, A., Wu, H., Bi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+in+vivo+evaluation+of+baicalin-loaded+W%2FO+nanoemulsion+for+lymphatic+absorption%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Development+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Development and in vivo evaluation of baicalin-loaded W/O nanoemulsion for lymphatic absorption.</a> Pharmaceutical Development and Technology. 24 (9), 1155-1163 (2019).</li>
<li>Singh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoemulsion%3A+Concepts%2C+development+and+applications+in+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Nanoemulsion: Concepts, development and applications in drug delivery.</a> Journal of Controlled Release. 252, 28-49 (2017).</li>
<li>Kadakia, E., Shah, L., Amiji, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mathematical+modeling+and+experimental+validation+of+nanoemulsion-based+drug+transport+across+cellular+barriers%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Research%22%5BJournal%5D)">Mathematical modeling and experimental validation of nanoemulsion-based drug transport across cellular barriers.</a> Pharmaceutical Research. 34 (7), 1416-1427 (2017).</li>
<li>Bhattacharjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DLS+and+zeta+potential-What+they+are+and+what+they+are+not%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">DLS and zeta potential-What they are and what they are not.</a> Journal of Controlled Release. 235, 337-351 (2016).</li>
<li>Francis, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+vaccine+technologies%5BTitle%5D)+AND+%22The+Veterinary+Clinics+of+North+America.+Small+Animal+Practice%22%5BJournal%5D)">Recent advances in vaccine technologies.</a> The Veterinary Clinics of North America. Small Animal Practice. 48 (2), 231-241 (2018).</li>
<li>Tripathi, N. K., Shrivastava, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+developments+in+recombinant+protein-based+dengue+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Recent developments in recombinant protein-based dengue vaccines.</a> Frontiers in Immunology. 9, 1919(2018).</li>
<li>Wilder-Smith, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+vaccine+development%3A+status+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Bundesgesundheitsblatt+Gesundheitsforschung+Gesundheitsschutz%22%5BJournal%5D)">Dengue vaccine development: status and future.</a> Bundesgesundheitsblatt Gesundheitsforschung Gesundheitsschutz. 63 (1), 40-44 (2020).</li>
<li>Korneev, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+sepsis+and+septic+shock%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Mouse models of sepsis and septic shock.</a> Molecular Biology. 53 (5), 799-814 (2019).</li>
</ol>

著者は、この作業に利益相反がないことを宣言します。

細菌の細胞壁に固定され、鉄で調節された表面タンパク質であるIsdBは、ヘム鉄15を得るプロセスにおいて重要な役割を果たします。アルファ毒素であるHlaは、MRSAで知られている最も効果的な細菌毒素の1つであり、真核細胞に細孔を形成し、接着および上皮細胞を妨害する可能性があります16。本研究では、IsdBとHlaの抗原遺伝子をベースに、遺伝子工学技術を用いて新規組換えMRSA抗原タンパク質(HI)を構築し、発現させました。次に、低エネルギー乳化法によるナノエマルジョンワクチンを開発し、このワクチンの安定性と有効性を評価しました。例えば、生体内での長期安定性、構造、形状、吸収、効果などのいくつかの特性は、エマルション液滴7の大きさに大きく影響される。結果は、粒子サイズが、インビボでのナノエマルジョンの輸送および抗原提示細胞によるそれらの食作用に影響を及ぼす重要な因子であることを示した<sup ...

メチシリン耐性 黄色ブドウ球菌 (MRSA)は、世界中の集中治療室(ICU)病棟1、心臓病科、および火傷科で最も高い感染率の1つである日和見病原体です。MRSAは感染率、死亡率が高く、薬剤耐性が広く、臨床治療において大きな困難を示しています2。2017年に世界保健機関(WHO)が発表した抗生物質耐性菌のグローバル優先リストでは、MRSAは最も重要なカテゴリー3にリストされました。したがって、MRSA感染に対するワクチンが緊急に必要とされています。
アルミニウムアジュバントは長い間使用されており、アジュバント補助メカニズムは比較的明確で、安全で、効果的で、忍容性が良好です4。アルミニウムアジュバントは、現在広く使用されているタイプのアジュバントである。一般に、アルミニウム塩粒子に吸着された抗原は、安定性を改善し、注射部位が抗原を取り込む能力を高め、良好な吸収と徐放を提供すると考えられています5。現在、アルミニウムアジュバントの主な欠点は、アジュバント効果を欠くか、またはいくつかのワクチン候補抗原に対して弱いアジュバント効果しか示さないことである6。さらに、アルミニウムアジュバントはIgEを介した過敏反応を誘導します5。したがって、より強力な免疫応答を刺激するための新規アジュバントを開発する必要があります。
ナノエマルジョンアジュバントは、油、水、界面活性剤、および共界面活性剤7で構成されるコロイド分散系である。さらに、アジュバントは熱力学的に安定で等方性であり、オートクレーブ処理または高速遠心分離による安定化が可能で、穏やかな調製条件下で自発的に形成することができます。いくつかのエマルジョンアジュバント(MF59、NB001-002シリーズ、AS01-04シリーズなど)が現在市場に出回っているか、臨床研究段階にありますが、それらの粒子サイズは160nmを超えています8。したがって、ナノスケール(1〜100 nm)の医薬品の利点(すなわち、大きな比表面積、小さな粒子サイズ、表面効果、高い表面エネルギー、小さなサイズの効果、およびマクロ量子トンネル効果)を十分に活用することはできません。本プロトコールでは、直径サイズ1〜100nmのナノエマルジョン技術に基づく新規アジュバントが良好なアジュバント活性を示すことが報告されている9。組換えサブユニットワクチン抗原タンパク質HI(α-ヘモリシン変異体[Hla]およびFeイオン表面決定因子B[IsdB]サブユニットN2活性断片融合タンパク質)をテストしました。物性や安定性の検討、筋肉内投与後の特異的抗体応答の評価、マウス全身感染モデルを用いたワクチンの防御効果の試験など、一連の手順を確立した。

<table><tbody><tr><td>5424-小型高速遠心分離機FA-45-24-11</td><td>ドイツ・エッペンドルフ&nbsp;</td><td></td><td></td>5424000495</tr><tr><td>96ウェルプレート</td><td>Corning Incorporated, USA</td><td>CLS3922</td><td></td></tr><tr><td>AFM Dimension FastScan</td><td>BRUKER, Germany&nbsp;</td><td>ヌル</td><td></td></tr><tr><td>アルコールランプ</td><td>深センYibaxunテクノロジー株式会社、中国</td><td>YBS-AA-11408</td><td></td></tr><tr><td>Balb / cマウス&nbsp;</td><td>北京HFKバイオサイエンス株式会社&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BCIP/NBT</td><td>福州Maixinバイオテクノロジー開発会社、中国</td><td>BCIP/NBT</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad 6.0 マイクロプレートリーダー</td><td>Bio-Rad Laboratories Incorporated Limited Co., CA, USA</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>BL21 コンピテントセル</td><td>Merck millipore,ドイツ</td><td>70232-3CN</td><td></td></tr><tr><td>BSA-100G</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>B2064-100G</td><td></td></tr><tr><td>遠心分離機5810 R</td><td>エッペンドルフ、ドイツ&nbsp;</td><td></td><td></td>5811000398</tr><tr><td>Coomassie明るい青色G-250染色液</td><td>MIKX、中国</td><td>DB236</td><td></td></tr><tr><td>脱色液</td><td>BOSTER、中国</td><td>AR0163-2</td><td></td></tr><tr><td>電気加熱常温耕運機HH-B11-420</td><td>上海Yuejin医療機器工場、中国</td><td>ヌル</td><td></td></tr><tr><td>電気泳動装置</td><td>北京Liuyi機器工場、中国</td><td>DYCZ-25D</td><td></td></tr><tr><td>ゲル画像</td><td>タノン、米国</td><td>ヌル</td><td></td></tr><tr><td>グルタチオン-セファロース樹脂GST</td><td>Mei5bio、中国</td><td>アフィニティークロマトグラフィー樹脂</td><td></td></tr><tr><td>H2SO4</td><td>成都KESHI化学有限公司、中国</td><td>7664-93-9HI</td><td></td></tr><tr><td>組換えタンパク質</td><td>第三軍事医科大学、中国</td><td>110-27-0</td><td></td></tr><tr><td>HRP - ヤギ抗マウスIgG</td><td>バイオドラゴン、中国</td><td>BF03001</td><td></td></tr><tr><td>HRP - ヤギ抗マウスIgG1</td>バイオ<td>ドラゴン、中国</td><td>BF03002R</td><td></td></tr><tr><td>HRP - ヤギ抗マウスIgG2a</td><td>バイオドラゴン、中国</td><td>BF03003R</td><td></td></tr><tr><td>HRP - ヤギ抗マウスIgG2b</td><td>バイオドラゴン、中国</td><td>BF03004R</td><td></td></tr><tr><td>接種ループ</td><td>海門Feiyue Co.、LTD、中国</td><td>YR-JZH-1UL</td><td></td></tr><tr><td>IsdBおよびHLAクローン</td><td>上海ジェレバイオテクノロジー株式会社、中国</td><td>ヌル</td><td></td></tr><tr><td>イソプロピルナツメグ(医薬品アジュバント)</td><td>SEPPIC、フランス</td><td>ヌル</td><td></td></tr><tr><td>イソプロピル-&β;-D-1-メルカプトガラクトピラノシド</td><td>fdbio、中国</td><td>FD3278-1</td><td></td></tr><tr><td>LBブイヨン培養培地</td><td>北京AOBOXバイオテクノロジー株式会社、中国</td><td>02-136</td><td></td></tr><tr><td>Lnfrared理学療法ランプ</td>広<td>州Runman医療機器有限公司、中国</td><td>7600</td><td></td></tr><tr><td>低温冷蔵遠心分離機</td><td>エッペンドルフ、ドイツ&nbsp;</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>Malvern NANO ZS</td><td>Malvern Instruments Ltd., UK</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>MH(A) medium</td><td>Beijing AOBOX Biotechnology Co., LTD,China</td><td>02-051</td><td></td></tr><tr><td>MH(B) medium</td><td>Beijing AOBOX Biotechnology Co., LTD,China</td><td>02-052</td><td></td></tr><tr><td>マイクロプレート洗浄機 405 LSRS</td><td>Bio Tek Instruments,Inc Highland&nbsp;パーク、米国</td><td>ヌル</td><td></td></tr><tr><td>Mini-TBCコンパクトフィルム転写装置</td><td>BeiJingDongFangRuiLi Co.、LTD、中国</td><td>1658030</td><td></td></tr><tr><td>MMCパッキング</td><td>TOSOH(SHANGHAI)CO.、LTD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>0022818 MRSA252</td><td>米国、ATCC</td><td>ヌル</td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop紫外線分光光度計</td><td>サーモサイエンティフィック、米国</td><td>ヌル</td><td></td></tr><tr><td>New FlashTMタンパク質任意のKDページタンパク質電気泳動ゲルキット</td><td>DAKEWE、中国</td><td>8012011</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>バイオシャープ、中国</td><td>ヌル</td><td></td></tr><tr><td>PCR、アンプ</td><td>サーマルサイクラー、米国</td><td>ヌル</td><td></td></tr><tr><td>pGEX標的遺伝子組換えプラスミド</td><td>上海Jerehバイオテクノロジー株式会社、中国</td><td>B3528G</td><td></td></tr><tr><td>リンタングステン酸</td><td>G-CLONE、中国</td><td>CS1231-25g</td><td></td></tr><tr><td>ピペット</td><td>エッペンドルフ、ドイツ&nbsp;</td><td></td><td></td>3120000844</tr><tr><td>ポリオキシエチル化ヒマシ油(医薬品アジュバント)</td><td>アラジン、中国</td><td>K400327-1kg</td><td></td></tr><tr><td>一次抗体</td><td>実験室自作:血清ヌル陽性の免疫マウスから</td><td></td> 詳細については<td>参考文献11を参照してください</td></tr><tr><td>プロピレングリコール(医薬品アジュバント)</td><td>Sigma-Aldrich、米国</td><td>P4347-500ML</td><td></td></tr><tr><td>タンパク質マーカー</td><td>Thermo Scientufuc、米国</td><td>26616</td><td></td></tr><tr><td>PVDF Transfer membrane</td><td>Invitrogen,USA</td><td>88518</td><td></td></tr><tr><td>走査型電子顕微鏡</td><td>日本電子</td><td>JSM-IT800</td><td></td></tr><tr><td>Sodium pentobarbital</td><td>Merck,Germany</td><td>Tc-P8411</td><td></td></tr><tr><td>Talos L120C TEM</td><td>Thermo Fisher, USA</td><td>null</td><td></td></tr><tr><td>TMB color solution</td><td>TIAN GEN, China</td><td>PA107-01</td><td></td></tr><tr><td>タートルキット</td><td>厦門Bioendoテクノロジー株式会社ES80545</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td>マッ<td>クリン、中国</td><td>9005-64-5</td><td></td></tr></tbody></table>

メチシリン耐性 黄色ブドウ球菌 (mrsa)感染に対するナノエマルジョンアジュバントワクチンの免疫応答の評価

Evaluating the Immune Response of a Nanoemulsion Adjuvant Vaccine Against Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) Infection

ナノエマルジョンアジュバントワクチンは、その小さな粒子サイズ、高い熱安定性、および有効な免疫応答を誘導する能力のために広く注目を集めている。しかし、新しいナノエマルジョンアジュバントワクチンの免疫応答を評価するための一連の包括的なプロトコルを確立することが不可欠です。したがって、この記事では、ワクチンの物理化学的特性(透過型電子顕微鏡[TEM]、原子間力顕微鏡[AFM]、および動的光散乱[DLS]による)、ワクチン抗原およびシステムの安定性(高速遠心分離試験、熱力学的安定性試験、SDS-PAGE、およびウェスタンブロットによる)、および特異的免疫応答(IgG1、 IgG2a、およびIgG2b)。このアプローチを使用して、研究者は、致死MRSA252マウスモデルにおける新規ナノエマルジョンアジュバントワクチンの保護効果 を正確に評価することができる。これらのプロトコルにより、有効なアジュバントの可能性の観点から最も有望なナノエマルジョンワクチンアジュバントを同定することができる。さらに、この方法は、将来の開発のために新しいワクチンを最適化するのに役立ちます。

ナノエマルジョンアジュバントワクチンを調製するためのプロトコル、ならびにこのワクチンのインビトロおよびインビボ試験を評価した。TEM、AFM、およびDLSを使用して、このサンプルの表面のゼータ電位と粒子サイズの重要な特性を決定しました(図1)。SDS-PAGEとウェスタンブロッティングでは、遠心分離後、沈殿物と上清中の抗原量が有意に分解されず、ワクチンが構造的に無傷で特異的で免疫原性があることが示されました(図2)。ナノエマルジョンアジュバントワクチンは、総IgG、IgG1、およびIgG2a抗体価を有意に増加させた。ワクチンの免疫原性は有意に改善された(図3A-C)。抗原群の450 nmにおける血清IgG2b OD値が最も高かった(1:500 PBSで希釈)(図3D)。致死MRSA252マウスモデル...

本プロトコルは、新規ナノエマルジョンアジュバントワクチンの物理的特性、免疫応答、および インビボ 防御効果を調製および評価する。

メチシリン耐性 黄色ブドウ球菌 (MRSA)感染に対するナノエマルジョンアジュバントワクチンの免疫応答の評価

Nanoemulsion adjuvant vaccines have attracted extensive attention because of their small particle size, high thermal stability, and ability to induce ...

実証されたプロトコルは、直接的かつ効果的な実験アプローチと、新規ウイルスアジュバントの免疫応答効果に対する詳細なステップを強調しました。このプロトコルは、アジュバントワクチンの基本的な免疫評価法を研究に提供するだけでなく、それらの質量安定性を決定することもできます。はじめに、MRSA HI抗原タンパク質の1ミリリットル当たり10ミリグラムの作業溶液を取り、それに、3つの賦形剤、ミリスチン酸イソプロピル、ポリオキシエチレンヒマシ油、及びプロピレングリコールを順次添加し、質量比を1〜6〜3に維持する。混合物をよくかき混ぜてから、滅菌した純水を徐々に加えて、システム容量が10ミリリットルになるまでします。低エネルギー乳化法によってナノエマルジョンワクチンを調製するには、毎分500回転、摂氏25度で約20分間攪拌する。続いて、1ミリリットル当たり1ミリグラムのタンパク質を含有するナノエマルジョンワクチンが透明な透明な液体として得られる。酵素結合免疫吸着アッセイまたはELISAプレートの抗原コーティングのために、コーティング溶液でHIタンパク質抗原を1ミリリットルあたり10マイクログラムに希釈し、ELISAプレートでウェルあたり100マイクロリットルの希釈抗原を追加します。プレートを摂氏4度で一晩インキュベートします。インキュベーション後、ウェルあたり300マイクロリットルのPBSTでプレートを洗浄します。ウェルを1ウェルあたり300マイクロリットルのシーリング溶液で37°Cで2時間密封し、次に297マイクロリットルのPBSTを加えて各実験群のマウス血清3マイクロリットルを100倍に希釈し、希釈した血清をボルテックスします。各血清サンプルについて、コーティングされたELISAプレートにウェルあたり100マイクロリットルの希釈血清を追加します。同様に、396マイクロリットルのPBSTに4マイクロリットルのポジティブまたはネガティブコントロール血清を添加し、続いてボルテックス混合することにより、ポジティブコントロールおよびネガティブコントロール血清をPBSTで100倍に希釈します。ダブルレシオ希釈を行うには、コーティングされたELISAプレートの最初の列に200マイクロリットルの以前に希釈した実験血清を追加し、次に1列目と12列目を除くすべてのウェルに100マイクロリットルのPBSTを追加します。次に、ピペットガンを100マイクロリットルに調整し、PBSTを含む1列目から2列目に100マイクロリットルの血清を移します。ピペットガンを使用して2列目の内容物を10回混合します。同様に、行11まで血清の希釈を1回〜2回連続して行う。完了したら、行11から100マイクロリットルの液体を廃棄します。100マイクロリットルの希釈陰性および陽性血清を、サンプルテンプレートに続く行12の対応する各ウェルに追加します。ELISAプレートをラップで密封し、摂氏37度で1時間インキュベートします。一方、二次抗体抗マウスIgG HRPをPBSTを加えて10, 000倍に希釈する。1時間のインキュベーション後、ELISAプレートをウェルあたり300マイクロリットルのPBSTで洗浄して未結合抗体を洗浄し、次に100マイクロリットルの希釈二次抗体を各ウェルに加え、プレートを摂氏37度で40分間インキュベートします。ウェルあたり300マイクロリットルのPBSTでプレートを洗浄し、次に各ウェルに100マイクロリットルのTMB発色溶液を追加します。プレートを摂氏37度に置き、光から10分間離します。その後、50マイクロリットルの2モル硫酸で直ちに反応を終了する。酵素マーカーを使用して415ナノメートルの光学濃度またはOD値を、終了後15分以内に検出します。新規ナノエマルジョンワクチンの物理的特性を透過型電子顕微鏡と原子間力顕微鏡を用いて解析した。動的光散乱を用いて、試料の粒度分布およびゼータ電位を決定した。SDS-PAGEおよびウェスタンブロッティングは、沈殿物および上清中の抗原量が遠心分離後に有意に遅延しないことを示し、ワクチンが構造的に無傷で特異的で免疫原性であることを示しています。ナノエマルジョンアジュバントワクチンは、マウスの総IgG、IgG1、およびIgG2a抗体価を有意に増加させた。タンパク質ワクチンの免疫原性は有意に改善された。450ナノメートルでの血清IgG2b OD値は、PBSを1〜5, 000希釈で使用した場合に最も高かった。MRSA 252マウスの致死モデルは、ナノエマルジョンワクチンが良好な防御効果を示し、MRS A 252による細菌感染を効果的に阻害し、感染したマウスの生存率を改善することを反映した。ナノ乳化の調製および植物への血清の添加が最も重要である。また、抗体価を検出するところは、より広く且つ液体ベースに補正するように注意すべきである。アジュバント以外にも、この方法は、プラスチックやデリバリーシステムなどの他の数学アレイの免疫進化にも使用できます。

evaluating-immune-response-nanoemulsion-adjuvant-vaccine-against

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

このビデオは、マウスモデルで実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)を誘発するための抗原アジュバントエマルジョンを生成する効率的な均質化技術を示しています。このエマルジョンは、水相に自己抗原であるミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質(MOG)を含み、不活化病原菌を含む連続的な油相に囲まれています。エマルジョンは、抗原の持続的な放出を確保し、免疫応答を持続させます。...

自己免疫性脳脊髄炎を誘発するための抗原アジュバントエマルジョンの調製

このビデオは、免疫済みマウスの新規ナノエマルジョンアジュバントワクチンに対する抗体免疫応答を評価する方法を示しています。免疫化は、IgG抗体価を決定することによって確認されたように、抗体応答を増強します。...

マウス血清中の試験ワクチンに対する免疫グロブリンGレベルの測定

このビデオは、ナノエマルジョン腫瘍ワクチンの製造を示しています。合成ペプチドとアジュバントを運ぶ安定した石油貯留層デポは、低エネルギーナノエマルジョンによって製造され、腫瘍免疫療法に大きな期待が寄せられています。...

ナノエマルジョンアジュバントワクチンの調製

私たちは、ワクチン接種のマウスモデルにおいて、ナノ粒子による免疫に対する抗原特異的CD8+...

ナノ粒子ワクチン接種後の抗原特異的CD8 + T細胞応答の分析のための全動物イメージングとフローサイトメトリー技術

このプロトコルは、ナノエマルジョンオフィオポゴニンDアジュバントが効果的な細胞性免疫応答を促進するかどうかを評価するための詳細な方法を提示する。...

インビトロ ナノエマルジョンワクチンアジュバントオフィオポゴニンDの細胞活性評価

ここでは、インビトロおよびインビボでの鼻自己組織化ナノエマルジョン腫瘍ワクチンの調製および評価のための詳細な方法を提示する。...

インビトロおよびインビボでの鼻自己組織化ナノエマルジョン腫瘍ワクチンの調製、特性、毒性、および有効性評価

多発性硬化症の動物モデルである実験的自己免疫性脳脊髄炎を誘発するために、マウスを自己抗原および完全なフロイントアジュバントを含む油中水型エマルジョンで免疫する。これらのエマルジョンの調製にはいくつかのプロトコルがありますが、ここでは、エマルジョン調製のための迅速で単純で標準化された均質化プロトコルを示します。...

実験的自己免疫性脳脊髄炎を誘発するための抗原/アジュバントエマルジョンを調製するための迅速、簡便、標準化されたホモジナイズ法

ナノ粒子やナノ構造表面の抗菌活性を in vitro...

in vitroでのナノ粒子およびナノ構造表面の抗菌活性の評価

このプロトコルでは、抗原特異的な全身性および粘膜応答を促進するためのアジュバントとして使用されるカチオン性ナノエマルジョンカプセル化レチノイン酸(RA)を開発しました。FDA承認のRAをナノエマルジョンに添加することにより、ナノエマルジョンの筋肉内注射後、抗原特異的sIgAが膣および小腸で促進された。...

卵子特異的な全身および粘膜応答を促進するためのアジュバントとしてのカチオン性ナノエマルジョン内包レチノイン酸

ドリップ流反応器と回転するディスクの原子炉とオープンシステムの流れのバイオフィルムを利用するためのプロトコルを詳細に表示されます。...

用ドリップ流れと回転円板の原子炉の使用黄色ブドウ球菌バイオフィルム分析

学ぶナノエマルジョンアジュバントワクチンの調製と免疫応答評価法。低エネルギー乳化法でMRSA抗原を用いたワクチンを作製し、ELISAと動物実験で免疫効果と保護効果を検証する。

メチシリン耐性黄色ブドウ球菌 (MRSA)感染に対するナノエマルジョンアジュバントワクチンの免疫応答の評価

さらに動画を探す

メチシリン耐性 黄色ブドウ球菌 (MRSA)感染に対するナノエマルジョンアジュバントワクチンの免疫応答の評価

さらに動画を探す

メチシリン耐性黄色ブドウ球菌 (MRSA)感染に対するナノエマルジョンアジュバントワクチンの免疫応答の評価