May 19th, 2023
本プロトコルは、エントロピー法と組み合わせたBox-Behnken計画応答曲面に基づいて、高地大麦ワインで処理された鉄板櫅の加工技術を最適化するための効率的な方法を記載しています。
毒性作用のある医薬品の議論が進んでいるため、毒性の軽減は臨床応用にとって非常に重要です。高地大麦ワインを使用した鉄板櫀の最適化された進行技術は、シンプルで、目に見え、安定しています。これは、工業生産にこの差異を提供することができます。
エントロピー法と組み合わせたBox-Behnken設計は、最適化された条件のテーブル間観察を可能にし、化学、薬学、および食品の精度で広く使用されています。手順を実演するのは、私の研究室の修士課程の学生であるLiqiong Yuです。はじめに、500グラムの黒高地大麦米を取り、米の5倍の量に水を加えます。
ご飯を約2時間、または残りの水分が吸収されるまで炊きます。炊き上がったらご飯を注ぎ、気温が37度まで下がるまで待ちます。ご飯に4グラムの麹を加え、よく混ぜます。
缶を密封し、容器を脱脂綿で包みます。その後、7日間煮込みます。7日目に300ミリリットルの水を加え、容器を再密封します。
8日目に、ワインを取り除きます。そしてそれを300ミリリットルの水と交換してください。容器を適切に密封し、1日発酵させます。
集めたワインを容器に入れます。次に、鉄翅(TBC)を容器に正確に計量し、高地大麦ワインを加えて1日浸します。翌日、恒温電気乾燥炉で乾燥させます。
試験試料溶液を調製するには、円錐フラスコ内でTBC処理物粉末2グラムを正確に計量し、40%アンモニア溶液を添加する。次に、イソプロパノールと酢酸エチルの50ミリリットル混合物を等しい比率で30分間超音波支援抽出を行う。高原大麦ワイン添加試験を行うには、それぞれ30グラムの厚さ1.0センチメートルのTBCを持つ5つのグループを設定します。
TBCを含む各グループにさまざまな量のハイランド大麦ワインを加え、スライスを12時間浸します。浸漬時間テストを実行するには、それぞれ30グラムの厚さ1.0センチメートルのTBCを持つ5つのグループを設定します。TBCを、すべてのグループでTBCの5倍の量で、異なる時間間隔で高地大麦ワインに浸します。
スライスの厚さテストを実行するには、さまざまなスライスの厚さで30グラムのTBCを使用して5つのグループを設定します。TBCを全グループでTBCの5倍の量の高原大麦ワインで24時間浸します。前述のように、処理された製品を使用して、各テストグループのテストサンプル溶液を準備します。
次に、HPLCにより各試料のピーク面積を求める。検量線を使用して、モノエステル-ジテルペノイドアルカロイド(MDA)およびジエステル-ジテルペノイドアルカロイド(DDA)の量を推定します。MDAの含有量とDDAの総含有量を評価指標として、各評価指標の重み係数とエントロピー法による包括的なスコアリングを決定します。
式 2 を使用して MDA の内容を標準化し (XIJ は I 番目のサンプルの J 番目の標識の値)、式 3 を使用して DDA の合計の内容を標準化します。式4を使用してI番目の評価指標PIJの下でJ回目の試行の確率を計算し、式5を使用して情報エントロピーHJを計算します。式 6 を使用して指標の重み WJ を計算し、式 7 を使用して指標の包括的なスコアリングを計算します。コンピュータでソフトウェアを開きます。
新規計画、応答曲面の順にクリックし、ボックス-ベンケン計画を選択します。影響因子の数と、スタディ内の実験の情報レベルを入力し、続行をクリックします。応答値の数を入力し、[完了]をクリックしてプロセスを完了します。
次に、式2〜7による総合スコアリングを応答として設定します。次に、計画結果に従ってTBCを高地大麦ワインで処理し、応答曲面用に設計された17のシナリオに基づいて実験を完了します。前述のようにサンプル溶液を調製し、HPLCを使用してMDAとDDAの合計含有量を計算します。
[分析] をクリックして、データとモデル情報を分析します。トップメニューのANOVAによる統計的検証を実行し、結果表を観察します。最適化をクリックし、数値をクリックして、予測された最適プロセス条件を表示します。
分析、モデルグラフ、3D曲面の順にクリックして、ソフトウェアによって3次元プロットとしてプロットされた応答曲面分析を表示します。ベンゾイルアコニン、アコニチン、3-デオキシアコニチン、および3-アセチルアコニチンのピーク面積の相対標準偏差によって評価された精度試験結果は、機器の精度が良好であることを示した。安定性試験は、すべてのサンプル溶液が24時間安定であることを示唆した。
そして、再現性試験の結果は、この方法の再現性が重要であることを示した。回収実験の結果,平均回収率はベンゾイルアコニンで99.7%,アコニチンで100.84%,3-デオキシアコニチンで103.27%,3-アセチルアコニチンで100.92%であった。高地大麦ワインで処理されたTBCの一因子試験では、高地大麦ワインの量はTBCの5倍、浸漬時間は36時間、スライスの厚さは1.0センチメートルであることが明らかになりました。
ここでは、応答曲面モデルの実験計画と結果を表にしています。効果の強さによる因子の順序は,高地大麦酒添加で高く,薬草のスライス厚,浸漬時間で高かった。後続の結果の精度を向上させるためには、1つの要因の条件ごとに3つの実験期間を設けることが不可欠です。
最適化偏光技術は、他の有毒な医療用医薬品を製造するための毒性イントネーションを研究するための情報とガイドラインを提供することができます。
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このプロトコルは、高地大麦酒を使用してTiebangchuiの処理技術を最適化する効率的な方法を概説しています。このアプローチは、Box-Behnken設計反応面とエントロピー法を組み合わせて、処理の安定性と可視性を向上させます。
Standardizing the processing of toxic ethnomedicines like Tiebangchui is critical for ensuring safety and consistency in pharmaceutical R&D pipelines. The integration of Box-Behnken design with the entropy method enables robust optimization of processing parameters, directly supporting reproducibility and industrial scalability. This approach enhances predictive confidence at the interface of discovery and process development, reducing risk in downstream applications.
This optimization method bridges early discovery and process development, informing both lead identification and preclinical material supply.