Name: ニワトリ胚脳をモデルとしてヒト膠芽腫細胞挙動の in vivoおよび ex vivo 解析(英語) (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 53 s
Description: 学ぶニワトリ胚脳モデルを用いたヒト膠芽腫細胞のin vivoおよびex vivo挙動解析。L1CAM発現と血管沿い浸潤メカニズムをタイムラプス顕微鏡で観察し、脳腫瘍研究の新たな手法を確立する。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

この研究の一部は、国立がん研究所からのD.S.G.への助成金(R03CA227312)と、リサディーンモーズリー財団からの寛大な助成金によって資金提供されました。生きたGBM検体は、ヘレンF.グラハムがんセンターおよび研究所の組織調達センターを通じて患者の同意を得て入手しました。A.R.への資金提供は、国立研究資源センターと国立衛生研究所のトランスレーショナルサイエンス推進センター(UL1TR003107)から提供されました。N.P.、A.L.、Z.W.、およびKSへの夏の学部研究フェローシップは、デラウェア大学の学部研究プログラムによって提供されました。

ヒト膠芽腫細胞の挙動を研究するためのモデルとしてニワトリ胚脳を使用

<ol><li>Cretu, A., Fotos, J. S., Little, B. W., Galileo, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+and+rat+glioma+growth%2C+invasion%2C+and+vascularization+in+a+novel+chick+embryo+brain+tumor+model%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Human and rat glioma growth, invasion, and vascularization in a novel chick embryo brain tumor model.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 22 (3), 225-236 (2005).</li>
<li>Yang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L1+stimulation+of+human+glioma+cell+motility+correlates+with+FAK+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuro-Oncology%22%5BJournal%5D)">L1 stimulation of human glioma cell motility correlates with FAK activation.</a> Journal of Neuro-Oncology. 105 (1), 27-44 (2011).</li>
<li>Mohanan, V., Temburni, M. K., Kappes, J. C., Galileo, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L1CAM+stimulates+glioma+cell+motility+and+proliferation+through+the+fibroblast+growth+factor+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">L1CAM stimulates glioma cell motility and proliferation through the fibroblast growth factor receptor.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 30 (4), 507-520 (2013).</li>
<li>Anderson, H. J., Galileo, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small-molecule+inhibitors+of+FGFR%2C+integrins+and+FAK+selectively+decrease+L1CAM-stimulated+glioblastoma+cell+motility+and+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Oncology%22%5BJournal%5D)">Small-molecule inhibitors of FGFR, integrins and FAK selectively decrease L1CAM-stimulated glioblastoma cell motility and proliferation.</a> Cellular Oncology. 39 (3), 229-242 (2016).</li>
<li>Pace, K. R., Dutt, R., Galileo, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomal+L1CAM+stimulates+glioblastoma+cell+motility%2C+proliferation%2C+and+invasiveness%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Exosomal L1CAM stimulates glioblastoma cell motility, proliferation, and invasiveness.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (16), 3982(2019).</li>
<li>Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+organotypic+cultures+of+nervous+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method for organotypic cultures of nervous tissue.</a> Journal of Neuroscience Methods. 37 (2), 173-182 (1991).</li>
<li>Ohnishi, T., Matsumura, H., Izumoto, S., Hiraga, S., Hayakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+model+of+glioma+cell+invasion+using+organotypic+brain+slice+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">A novel model of glioma cell invasion using organotypic brain slice culture.</a> Cancer Research. 58 (14), 2935-2940 (1998).</li>
<li>Humpel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+brain+slice+cultures%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Organotypic brain slice cultures: A review.</a> Neuroscience. 305, 86-98 (2015).</li>
<li>Aaberg-Jessen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasion+of+primary+glioma-+and+cell+line-derived+spheroids+implanted+into+corticostriatal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Clinical+and+Experimental+Pathology%22%5BJournal%5D)">Invasion of primary glioma- and cell line-derived spheroids implanted into corticostriatal slice cultures.</a> International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 6 (4), 546-560 (2013).</li>
<li>Matsumura, H., Ohnishi, T., Kanemura, Y., Maruno, M., Yoshimine, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+glioma+cell+invasion+by+confocal+laser+scanning+microscopy+in+a+novel+brain+slice+model%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of glioma cell invasion by confocal laser scanning microscopy in a novel brain slice model.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 269 (2), 513-520 (2000).</li>
<li>Ren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasion+and+anti-invasion+research+of+glioma+cells+in+an+improved+model+of+organotypic+brain+slice+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Tumori%22%5BJournal%5D)">Invasion and anti-invasion research of glioma cells in an improved model of organotypic brain slice culture.</a> Tumori. 101 (4), 390-397 (2015).</li>
<li>Fayzullin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-lapse+phenotyping+of+invasive+glioma+cells+ex+vivo+reveals+subtype-specific+movement+patterns+guided+by+tumor+core+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Time-lapse phenotyping of invasive glioma cells ex vivo reveals subtype-specific movement patterns guided by tumor core signaling.</a> Experimental Cell Research. 349 (2), 199-213 (2016).</li>
<li>Jensen, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+characterization+of+a+tumor+stem+cell-based+glioblastoma+invasion+model%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Establishment and characterization of a tumor stem cell-based glioblastoma invasion model.</a> PloS One. 11 (7), e0158746(2016).</li>
<li>Marques-Torrejon, M. A., Gangoso, E., Pollard, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+glioblastoma+tumour-host+cell+interactions+using+adult+brain+organotypic+slice+co-culture%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Modelling glioblastoma tumour-host cell interactions using adult brain organotypic slice co-culture.</a> Disease Models & Mechanisms. 11 (2), 031435(2018).</li>
<li>Tamura, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+spatiotemporal+dynamics+of+human+glioma+stem+cell+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Brain%22%5BJournal%5D)">Visualization of spatiotemporal dynamics of human glioma stem cell invasion.</a> Molecular Brain. 12 (1), 45(2019).</li>
<li>Yang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+slice+culture+based+on+in+ovo+electroporation+for+chicken+embryonic+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+and+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Organotypic slice culture based on in ovo electroporation for chicken embryonic central nervous system.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (3), 1813-1826 (2019).</li>
<li>Murrell, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+of+multipotent+stem+cells+from+the+adult+human+brain%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Expansion of multipotent stem cells from the adult human brain.</a> PloS One. 8 (8), e71334(2013).</li>
<li>Fotos, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+time-lapse+microscopy+and+high-resolution+tracking+of+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">Automated time-lapse microscopy and high-resolution tracking of cell migration.</a> Cytotechnology. 51 (1), 7-19 (2006).</li>
<li>Tufan, A. C., Akdogan, I., Adiguzel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shell-less+culture+of+the+chick+embryo+as+a+model+system+in+the+study+of+developmental+neurobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroanatomy%22%5BJournal%5D)">Shell-less culture of the chick embryo as a model system in the study of developmental neurobiology.</a> Neuroanatomy. 3 (1), 8-11 (2004).</li>
<li>Shoin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chick+embryo+assay+as+chemosensitivity+test+for+malignant+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Japanese+Journal+of+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Chick embryo assay as chemosensitivity test for malignant glioma.</a> Japanese Journal of Cancer Research. 82 (10), 1165-1170 (1991).</li>
<li>Hagedorn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accessing+key+steps+of+human+tumor+progression+in+vivo+by+using+an+avian+embryo+model%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Accessing key steps of human tumor progression in vivo by using an avian embryo model.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 102 (5), 1643-1648 (2005).</li>
<li>Balciūniene, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histology+of+human+glioblastoma+transplanted+on+chicken+chorioallantoic+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Medicina%22%5BJournal%5D)">Histology of human glioblastoma transplanted on chicken chorioallantoic membrane.</a> Medicina. 45 (2), 123-131 (2009).</li>
<li>De Magalhães, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+a+new+In+vivo+tumor+spheroid+based+shell-less+chorioallantoic+membrane+3-D+model+in+bioengineering+research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Science+and+Engineering%22%5BJournal%5D)">Applications of a new In vivo tumor spheroid based shell-less chorioallantoic membrane 3-D model in bioengineering research.</a> Journal of Biomedical Science and Engineering. 3 (1), 20-26 (2010).</li>
<li>Szmidt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphology+of+human+glioblastoma+model+cultured+in+ovo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Morphology of human glioblastoma model cultured in ovo.</a> Journal of Veterinary Research. 56 (2), 261-266 (2012).</li>
<li>Jaworski, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+tumor+morphology+and+structure+from+U87+and+U118+glioma+cells+cultured+on+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Comparison of tumor morphology and structure from U87 and U118 glioma cells cultured on chicken embryo chorioallantoic membrane.</a> Journal of Veterinary Research. 57 (4), 593-598 (2013).</li>
<li>Yuan, Y. J., Xu, K., Wu, W., Luo, Q., Yu, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+the+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+in+neurosurgery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Application of the chick embryo chorioallantoic membrane in neurosurgery disease.</a> International Journal of Medical Sciences. 11 (12), 1275-1281 (2014).</li>
<li>Urbańska, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+silver+nanoparticles+%28AgNPs%29+on+proliferation+and+apoptosis+of+in+ovo+cultured+glioblastoma+multiforme+%28GBM%29+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale+Research+Letters%22%5BJournal%5D)">The effect of silver nanoparticles (AgNPs) on proliferation and apoptosis of in ovo cultured glioblastoma multiforme (GBM) cells.</a> Nanoscale Research Letters. 10, 98(2015).</li>
<li>DeBord, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chick+chorioallantoic+membrane+%28CAM%29+as+a+versatile+patient-derived+xenograft+%28PDX%29+platform+for+precision+medicine+and+preclinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">The chick chorioallantoic membrane (CAM) as a versatile patient-derived xenograft (PDX) platform for precision medicine and preclinical research.</a> American Journal of Cancer Research. 8 (8), 1642-1660 (2018).</li>
<li>Han, J. M., Jung, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+anticancer+effect+of+a+combination+of+berbamine+and+arcyriaflavin+A+against+glioblastoma+stem-like+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Synergistic anticancer effect of a combination of berbamine and arcyriaflavin A against glioblastoma stem-like cells.</a> Molecules. 27 (22), 7968(2022).</li>
<li>Ruiz-Ontañon, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+plasticity+confers+migratory+and+invasive+advantages+to+a+population+of+glioblastoma-initiating+cells+that+infiltrate+peritumoral+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Cellular plasticity confers migratory and invasive advantages to a population of glioblastoma-initiating cells that infiltrate peritumoral tissue.</a> Stem Cells. 31 (6), 1075-1085 (2013).</li>
<li>Cage, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+patterns+of+human+medulloblastoma+dissemination+in+the+developing+chick+embryo+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Distinct patterns of human medulloblastoma dissemination in the developing chick embryo nervous system.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 29 (4), 371-380 (2012).</li>
<li>Darrigues, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biobanked+glioblastoma+patient-derived+organoids+as+a+precision+medicine+model+to+study+inhibition+of+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Biobanked glioblastoma patient-derived organoids as a precision medicine model to study inhibition of invasion.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (19), 10720(2021).</li>
</ol>

どの著者も利益相反を持っていません。

中脳(視蓋)脳室に細胞を注入するためのプロトコルの重要なステップには、卵子の脈絡膜の血管を損傷しないこと、または注射前および注射中に胚を囲むことが含まれますが、胚のすぐ周囲の羊膜は穏やかに引っ張って保持することができます細胞を中脳に注入するときに頭を配置します。羊膜は比較的丈夫で、細かい鉗子で引っ張って頭を配置し、片手でしっかりと保持し、もう一方の手で脳の中央にある大きくて丸い構造である視蓋に細胞を注入することができます。一般に、注入された胚の生存率は、未知の要因に応じて25%から75%の範囲であり、生存する事実上すべての胚は、視蓋に少なくとも小さな腫瘍を含んでいます。生存可能な脳スライスを生成するための重要なステップには、スライス中にアガロースが脳に付着し、メンブレンインサートに配置されるまで組織とスライスを冷たく保つために、過剰な液体の組織を吸い取ることが含まれます。細胞タイプが異なればスフェロイドの形成速度とサイズも異なるため、poly-HEMAプレート上のメッキ細胞密度とスフェロイドを採取するまでの時間は、細胞タイプごとに最適化する必要があります。
ここでの研究は、脳スライスの生存率に関する正式な縦断的研究の対象となっていません。Yangらは、ここで用いたものと同様のニワトリ胚脳スライス培養物を使用し、少なくとも7日間、スライスの良好な生存率を示した16。以前の研究では、OT組織を最適ではない培地に保持すると、多くのピノティック核が組織に出現したことが示されましたが、これはここでの研究のスライスでは発生しませんでした。さらに、スライスが最適でない条件で変性すると、血管が断片化し、ラミニン陽性球の列として現れる(図示せず)。したがって、ここでの生存率は電気生理学や活性カスパーゼ-3発現などの方法では確認されていませんが、最適ではない培養条件下で見られた細胞死の指標はここには現れませんでした。
OTは、最大の心室を備えた最も注入しやすい領域であるため、in vivo脳腫瘍実験に焦点を当ててきました。胚が卵黄の上にアクセスできるほど小さい最新の日であるE5では、すべての脳領域が薄い心室ゾーンにすぎないため、脳室に注射を行う必要があります。それにもかかわらず、これらの注射は、脳実質に浸潤する細胞を有する埋め込み腫瘍を首尾よくもたらす。時々、結果として生じる腫瘍は前脳または小脳に見られますが、これは一般的ではありません。E15視蓋のエクスビボスライスは、主にここでの実験に使用されてきたため、エクスビボ共培養の結果はインビボ注射実験と相関させることができます。ただし、前脳スライスも適しており、視蓋と比較して表面積が大きく、心室が非常に薄いため、前脳はin vivo注射と相関していないex vivo共培養により適している可能性があります。
ここでは、 in vivo 注射、組織固定、振動組織スライサー切片、ラミニンやその他のマーカーの免疫染色を行うと、血管に近接した脳組織中のGBM細胞とGSCの高解像度画像が得られることが実証されています。腫瘍細胞と血管の相互関係を決定する機能は、共焦点ソフトウェアと製造元の指示を使用して共焦点光学切片のzスタックから3Dボリュームレンダリングを作成することによって大幅に促進されました。GFP、mCherry、およびDiD標識細胞の広視野蛍光顕微鏡を使用したタイムラプスイメージングが可能でした。しかし、高蛍光スフェロイドに近接していた遊走細胞は、スフェロイドからの「輝き」によって不明瞭になることがありました。この望ましくない影響は、広視野画像を収集するための露光時間を慎重に調整することで、いくらか最小限に抑えることができます。共焦点Zスタックを用いた経時的なタイムラプスイメージング(4D)により、スフェロイドから焦点が合っていない輝きがなくなり、暗い背景で移動する細胞が鮮明に定義されました。これはプロトコルには記載されていませんでしたが、脳スライスが6ウェルプラスチックプレートの透明なメンブレンインサート上にある間に実行された広視野タイムラプスイメージングと同様に実行されました。共焦点タイムラプスイメージングは、個々の細胞とその挙動の著しく鮮明な画像をもたらしますが、10 z平面/点のzスタックを20時間にわたって10分間隔で収集するマルチポイントタイムラプス実験は、スキャンヘッド検流計の広範な使用です。これにより検流計の寿命が大幅に短くなる可能性があるため、この方法は慎重に使用されます。
ニワトリ胚系は、GBM細胞の挙動を調べるin vivo注射およびex vivo共培養実験の両方に非常に適していますが、このモデル系にはいくつかの制限があります。他の異種移植システムと同様に、ヒト細胞が移植される環境はヒトの脳ではありませんが、GBM細胞の挙動はげっ歯類モデルおよびヒト患者の挙動を模倣しているように見えます。E5でin vivo注射実験を行った後、腫瘍は通常、E15まで10日間形成されます。これは明らかに、腫瘍形成と細胞浸潤のすべての側面を研究するのに十分な時間ではありません。しかし、ここでは、固形腫瘍が脳実質に形成され、細胞が腫瘍内で相互作用して再編成され、この比較的短い期間内に血管に沿ってびまん性に重大な脳浸潤が発生することが実証されています。in vivoニワトリ胚系に対する別の制限は、ニワトリ胚発生中に作動する大きな卵黄および胚外循環系のために、薬物または他の治療に適さないことである。局所液体薬物治療は、胚からはるかに大きな卵黄塊への拡散のために、脳内の非常に変動した未知の濃度をもたらすであろう。同様に、非常に繊細な胚外循環系への薬物の静脈内注射は、血管から漏れたり拡散したりし、脳内の濃度が不明になります。これがex vivoスライス培養法が採用された主な理由の1つであり、タイムラプス顕微鏡で細胞の挙動を観察および追跡できるだけでなく、ディッシュ4でGBM細胞の挙動を変えることに成功した治療をより適切な脳組織環境でテストできるようにしました。
ニワトリ胚同所性脳腫瘍モデルシステムの開発は、GBM腫瘍形成および浸潤性細胞挙動の研究に利用可能なシステムおよびツールへの重要な追加と見なされている。受精鶏卵はほとんどの地域で容易に入手できる可能性が高く、げっ歯類に比べて安価であり、動物の世話費用がなく、胚は非常に弾力性があり、感染に耐性があり(つまり、ほとんどの作業はベンチトップで行われます)、胚は非常に操作可能であり、殻のない培養で成長することができます19、およびニワトリの胚は脊椎動物とは見なされないため、NIHガイドラインによるIACUCの承認を必要としません(制度上の要件異なる場合があります)。したがって、これらの複数の利点は、質問や実験をその制限内にあるものに限定する場合、ニワトリ胚システムを非常に魅力的にします。複数のGBM細胞研究がニワトリ胚を用いて他の人によって行われているが、これらはほぼ独占的に胚20、21、22、23、24、25、26、27、28、29および四肢芽30の絨毛尿膜(CAM)を利用している。、そして脳ではありません。E231に髄芽腫をニワトリの脳に移植した報告もあります。間違いなく、ここで説明したように、同所性異種移植片モデルシステムとしてのニワトリ胚の使用は、CAMを使用した研究よりもヒトGBM腫瘍生物学にとってはるかに意味のある結果をもたらすはずです。
これらの研究は、ヒトGBM細胞とGSCの挙動の研究にニワトリ胚脳腫瘍モデルシステムを十分に活用し始めたばかりですが、他の研究が用途を拡大し、さらなる潜在的なアプリケーションを見つけることが期待されています。このシステムは、GBM腫瘍の形成と細胞の挙動を制御するメカニズムを明らかにするだけでなく、特定の患者の細胞に対する特定の薬物や物質の前臨床試験を可能にすることが想像できます。例えば、脳スライス培養が事前に設定されていれば、腫瘍細胞、外科的腫瘍切除からの断片、または患者由来のGBMオルガノイド32 を ex vivo 共培養に直接配置することができ、さまざまな治療法を数日で評価することができます。同様に、解離した患者細胞を ovoの E5中脳に直接注入して、腫瘍を形成して脳実質に浸潤する能力を評価することができます。したがって、ここでの方法と代表的な結果の説明が、脳腫瘍研究のためのこの非常に十分に活用されていないシステムの使用の増加を促進し、奨励することが期待されています。

癌細胞の挙動のin vitro研究は、in vivo異種移植片モデルにおける腫瘍形成および細胞浸潤中に観察されるより複雑な挙動の間に機能する潜在的なメカニズムを分析するためにしばしば使用されます。たとえば、膠芽腫(GBM)の場合、in vitro研究では、新しいニワトリ胚異種移植片脳腫瘍モデル1,2,3,4,5において、腫瘍形成および脳浸潤中にL1CAMがどのように機能する可能性があるかのメカニズムが明らかになりました。in vitro実験とin vivo実験は有用な方法で互いに補完し合っていますが、結果の相関方法には大きなギャップがあります。例えば、皿上のGBM細胞の運動性の機構解析は非常に人工的な状況であり、in vivo異種移植片モデルは、腫瘍形成と細胞挙動の静的な時点またはエンドポイント分析のみを明らかにすることができます。げっ歯類またはニワトリ胚のいずれかを使用したin vivo研究は、これらの異種移植片モデルで細胞が脳組織に侵入している間の細胞の挙動を監視するのに容易ではありません。それにもかかわらず、ニワトリ胚異種移植片モデルは、接着タンパク質L1CAMがヒトT98G GBM細胞の侵襲能力において刺激的役割を果たすことを実証した2,5。
この問題に対する適切な解決策は、ex vivoモデルと呼ばれる器官型脳スライス培養モデルを用いて、in vivoおよびin vitroの両方の方法を橋渡しすることによって達成することができる。このex vivoモデルでは、生きた脳組織を数百ミクロンの厚さで数週間まで維持できるため、がん細胞を移植し、実際の組織での挙動を経時的に観察し、実験のエンドポイントでより詳細なマーカー分析を行うことができます。
一般的な有機型スライス培養法は、半透明または透明な多孔質膜の上に数百ミクロンの厚さの脳スライスを培養し、組織を空気にさらしたままにし、栄養培地が膜の下から組織を維持することを可能にすることでした(Stoppini et al.6を参照)。この方法のさまざまなバリエーションが、異なる媒体または異なるメンブレンインサートの使用など、さまざまな研究に使用されてきました。さまざまなメンブレンインサートには、直径30 mm、35 mm培養皿6の多孔質(0.4 μm)メンブレンインサート、および6ウェルプレート7用の細胞培養インサート(0.4 μm)が含まれます。さまざまな培地には、50%MEM / HEPES + 25%熱不活性化馬血清+ 25%ハンクス平衡塩溶液(HBSS)8、50%還元血清培地+ 25%馬血清+ 25%HBSS9などがあります。半透明または透明なメンブレンが蛍光標識されたGBM細胞と共に使用される場合、そのような培養物は、倒立広視野または共焦点蛍光顕微鏡10、11、12、13、14、15を用いて下から画像化することができる。
げっ歯類を用いて多くのin vivo同所性脳腫瘍異種移植片およびex vivo有機型脳スライス培養モデルが確立されているが、上で引用したように、ニワトリ胚(Gallus gallus)はこれらの目的のために十分に活用されていない。しかしながら、ニワトリ胚は、ヒトおよびラットグリオーマ浸潤の両方の研究のためのin vivo同所性異種移植片モデルとして使用できることが実証されている1、2、5。ニワトリ胚脳への異種移植細胞は、げっ歯類モデルで観察されたものと同様の侵入パターンを示しており、GBM腫瘍細胞分析のためのin vivoモデルとしてのニワトリ胚の使用をさらに支持している。ひよこ胚はまた、安価であり、げっ歯類よりも簡単に維持でき(つまり、ラボインキュベーターの卵殻で)、取り扱いがはるかに簡単であるため、短期間のin vivoGBM研究にとって魅力的な選択肢となっています。最近の記事では、スライスが少なくとも7日間生存可能であった正常な脳発達中の軸索の形成および成長のためのニワトリ胚脳スライス培養の使用が記載されている16。しかしながら、組織環境におけるGBM細胞挙動のex vivo分析のためのそのようなニワトリ胚脳スライス培養の使用は不足している。この記事では、ヒトGBM細胞とGBM幹細胞(GSC)のin vivoの初期ニワトリ胚脳への移植、およびex vivoでの生きたニワトリ胚脳スライス培養へのGBM細胞の導入について説明します。これらの調製物から得られる結果として生じる腫瘍および細胞浸潤パターンのいくつかの代表例も提供される。

<table><tbody><tr><td>1 cm x 1 cmの正方形の穴のペーパーパンチ</td><td>Birabira</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>1 mm生検パンチペン</td><td>Robbins Instruments</td><td>20335</td><td></td></tr><tr><td>6ウェルインサートプレート(コーニングトランズウェル)</td><td>ミリポアシグマ</td><td>CLS3450</td><td></td></tr><tr><td>9 "使い捨てパスツールピペット</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>13-678-20C</td><td></td></tr><tr><td>15 mL遠心分離チューブフィ</td><td>ッシャーサイエンティフィック</td><td>05-539-12</td><td></td></tr><tr><td>24ウェルプレート</td><td>Corning Costar</td><td>3526</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 遠心分離管</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>05-539-9</td><td></td></tr><tr><td>寒天</td><td>フィッシャーバイオ試薬</td><td>BP1423-500</td><td>固定脳埋め込み用</td></tr><tr><td>Alexafluor 488-標識GAM IgG</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>115-605-146</td><td></td></tr><tr><td>Alexafluor 647-標識GAM IgG</td><td>JacksonImmunoresearch</td><td>115-545-146</td><td></td></tr><tr><td>アルミ ホイル</td><td>ReynoldsWrap</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A-9518</td><td></td></tr><tr><td>抗インテグリン α-6 モノクローナル抗体 GOH3</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-19622</td><td></td></tr><tr><td>anti-L1CAM モノクローナル抗体 UJ127</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-53386</td><td></td></tr><tr><td>anti lamininモノクローナル抗体</td><td>Developmental Studies Hybridoma Bank</td><td>3H11</td><td></td></tr><tr><td>anti-nestin monoclonal antibody 10c2</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-23927</td><td></td></tr><tr><td>anti-Sox2 monoclonal antibody E-4</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-365823</td><td></td></tr><tr><td>B27 supplement without vitamin A</td><td>GIBCO</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>bisbenzimide (Hoechst 33258)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B2883</td><td>核</td></tr><tr><td>染色 細胞培養インキュベーター</td><td>Forma</td><td></td><td>standard 加湿 CO2インキュベータ</td></tr>ー <tr><td>遠心分離機</td><td>ベックマン・コールター</td><td></td><td></td></tr><tr><td>共焦点顕微鏡</td><td>ニコンインスツルメンツ</td><td>C2si+</td><td>カスタムメイドセルインキュベーターチャンバー付き</td></tr><tr><td>共焦点顕微鏡対物レンズ</td><td>ニコンインスツルメンツ</td><td></td><td>プランアポレンズ、S プランフロー ELWD 20x 0.45 NA 共焦点タイムラプスイメージング用対物レンズ</td></tr><tr><td>共焦点顕微鏡ソフトウェア</td><td>ニコンインスツルメンツ</td><td>NIS エレメント</td><td>バージョン5.2</td></tr><tr><td>湾曲したフォレセップ</td><td>ス ワールド精密インストゥルメント</td><td>504478</td><td></td></tr><tr><td>湾曲したハサミ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td></td><td></td></tr><tr><td>湾曲したヘラ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>14-375-20</td><td></td></tr><tr><td>シアノアクリレート接着剤</td><td>Krazy</td>接着剤 <td>KG-585 12R</td><td></td></tr><tr><td>D-グルコース</td><td>ミリポア Sigma</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>DiD 遠赤色蛍光色素</td><td>Invitrogen</td><td>V22887</td><td>Vybrant DiD</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D5671</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D8437</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D4540</td><td></td></tr><tr><td>ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水(PBS)</td><td>シグマアルドリッチ</td><td>P5493-1L</td><td></td></tr><tr><td>卵インキュベーター</td><td>ヒュミエール</td><td></td><td></td></tr><tr><td>電気テープ(厚さ10ミル/ 254&マイクロ;m)</td><td>スコッチ</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>エタノール 200 プルーフ</td><td>デコン研究所</td><td>2701</td><td></td></tr><tr><td>ファスト グリーン FCF 染料</td><td>アボカド研究 化学薬品</td><td>16520</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>ジェミニ バイオ製品</td><td>900-108</td><td></td></tr><tr><td>濾紙</td><td>フィッシャー サイエンティフィック</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ガーゼ</td><td>ダイナレックス</td><td>3353</td><td></td></tr><tr><td>ガラス 毛細血管マイクロインジェクション用</td><td>ワールド精密機器</td><td>TW100-4</td><td></td></tr><tr><td>グリセロール</td><td>フィッシャーバイオ試薬</td><td>BP228-1</td><td>マウンティングメディア用</td></tr><tr><td>GSC(ヒト神経膠芽腫幹細胞)</td><td>該当</td><td></td>なし <td>ガリレオ研究室の患者GBM検体からGSC培地で分離し、レンチウイルスベクターをコードするGFPで形質導入します。&nbsp;使用した細胞は、継代10〜30の間であった。</td></tr><tr><td>ハンクス平衡塩溶液(HBSS)</td><td>コーニング</td><td>21-020-CV</td><td></td></tr><tr><td>血球計算計</td><td>ハウサー科学</td><td></td><td></td></tr>ヘ<tr><td>パリン</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>BP2524-100HEPES</td><td></td></tr><tr><td>バッファー</td><td>シグマアルドリッチ</td><td>H0887</td><td></td></tr>馬<tr><td>血清(HI)</td><td>ギブコ</td><td>26050-088ヒト</td><td></td></tr><tr><td>FGF-2</td>バイオ<td>ビジョン</td><td>4037-1000</td><td></td></tr><tr><td>ヒトTGF-&α;</td><td>BioVision</td><td>4339-1000</td><td></td></tr><tr><td>逆位相差顕微鏡</td><td>ニコンインスツルメンツ</td><td>TMS</td><td>培養細胞の日常的な観察用</td></tr><tr><td>KCl</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>BP366</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>P284</td><td></td></tr><tr><td>ラボフィルム</td><td>パラフィルム</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ラボクエイクShaker</td><td>LabIndustries</td><td>T400-110</td><td></td></tr><tr><td>L-Glut:Pen:Strep</td><td>Gemini Bio-products</td><td>400-110</td><td></td></tr><tr><td>低溶融アガロース</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>BP1360</td><td>ライブブレイン埋め込み用</td></tr><tr><td>マトリックス</td><td>コーニング マトリゲル</td><td>354234</td><td></td></tr><tr><td>ミディアム 199</td><td>GIBCO</td><td>11150-059</td><td></td></tr><tr><td>MEM</td><td>コーニング</td><td>10-010-CV</td><td></td></tr><tr><td>金属製ビブラトームブロック</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>マイクロピペットチップ(20、200、1,000&マイクロ;L)</td><td>フィッシャーブランド</td><td></td><td></td></tr><tr><td>マイクロピペッター(20、200、1,000&マイクロ;L)</td><td>ギルソン</td><td></td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡カバーガラス(厚さ1.5番)</td><td>フィッシャーブランド</td><td>12544A</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td>フィ<td>ッシャーサイエンティフィック</td><td>S271</td><td></td></tr><tr><td>NaH<サブ>2</サブ>PO<サブ>4</サブ>+ H<サブ>2</サブ>O</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>S369</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO<サブ>3</サブ</td><td>>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>BP328</td><td></td></tr><tr><td>正常なヤギの血清</td><td>ミリポア Σ</td><td>526-M</td><td></td></tr><tr><td>N-プロピル ガレート</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3130</td><td>封入剤用</td></tr><tr><td>パラフィルム</td><td>パラフィルム パラホル</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ムアルデヒド</td><td>電子顕微鏡 科学</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5493-1L</td><td></td></tr><tr><td>ペンシル</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>プレーン顕微鏡スライドフィ</td><td>ッシャーブランド</td><td>12-550-A3</td><td></td></tr><tr><td>プラスチック35mmペトリ皿</td><td>ベクトンディキンソン</td><td>351008</td><td></td></tr><tr><td>空気圧ピコポンプ</td><td>世界精密インストゥルメンツ</td><td>PV830</td><td></td></tr><tr><td>ポリ(2-ヒドロキシエチルメタクリレート)&nbsp;(ポリHEMA)</td><td>シグマ アルドリッチ</td><td>P-3932</td><td></td></tr><tr><td>カミソリ刃</td><td>固定脳スライスを切断するための</td>ダブルエッジ <td>PACE</td><td></td></tr><tr><td>サファイアナイフ</td><td>デラウェア州 生き</td><td>た脳スライスを切断するための</td>ダイヤモンドナイフ <td></td></tr><tr><td>メス</td><td>TruMed</td><td>1001</td><td></td></tr><tr><td>カコジル酸ナトリウム緩衝液 0.2 M pH 7.4</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>11652</td><td></td></tr><tr><td>試料室ビブラトーム</td><td>カスタムメイド</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ステレオ解剖顕微鏡</td><td>ニコンインスツル</td><td>メンツ SMZ1500</td><td>落射蛍光</td></tr>ストレートフォ<tr><td>レップ</td>を装備 ワールドプレシジョンイン<td>ストゥルメンツ</td><td>500233</td><td></td></tr><tr><td>ストレートハサミ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ショ糖</td><td>マリンクロット</td><td>7723</td><td></td></tr><tr><td>タイムラプス蛍光顕微鏡(広視野蛍光)</td><td>ニコンインスツルメンツ</td><td>TE2000-E</td><td>カスタムメイドの細胞インキュベーターチャンバー付き(Fotos et al., 2006を参照)</td></tr><tr><td>組織培養皿 ポリスチレン 100 mm</td><td>細胞培養用</td>サー<td>モフィッシャーサイエンティフィック</td><td>130182</td></tr> 組織<tr><td>培養皿 ポリスチレン 60 mm</td><td>ベクトン・ディキンソン</td><td>細胞</td><td>培養用</td>353004</tr><tr><td>トランスファーピペット</td><td>American Central Scientific Co.</td><td>FFP011</td><td></td></tr><tr><td>透明テープ</td><td>スコッチ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>トリトン X-100</td><td>シグマ アルドリッチ</td><td>T-8787</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン (0.25%) + 2.21 mM EDTA</td><td>コーニング</td><td>25-053-CI</td><td></td></tr><tr><td>U-118 MG ヒト GBM 細胞株</td><td>ATCC</td><td>HTB-15</td><td>細胞に L1CAM 接着タンパク質の全エクトドメイン配列をコードするレンチウイルスベクターを形質導入し、次にレンチウイルスベクターを形質導入しましたpUltra-hotエンコーディングmCherry.&nbsp;パッセージ番号は不明です。</td></tr><tr><td>真空ポンプ</td><td>コールパーマー</td><td>EW-07532-40</td><td>「エアカデット」</td></tr>振動<tr><td>組織スライサー</td><td>ビブラトーム</td><td>3000</td><td>ライブおよび固定脳スライスの切断用</td></tr></tbody></table>

ニワトリ胚脳をモデルとしてヒト膠芽腫細胞挙動の in vivoおよび ex vivo 解析(英語)

Using the Chick Embryo Brain as a Model for In Vivo and Ex Vivo Analyses of Human Glioblastoma Cell Behavior

ニワトリ胚は、脊椎動物の発生の研究、特に実験的操作のための理想的なモデルシステムです。ニワトリ胚の使用は、 in vivoでの ヒト膠芽腫(GBM)脳腫瘍の形成および周囲の脳組織への腫瘍細胞の浸潤性を研究するために拡張されています。GBM腫瘍は、蛍光標識細胞の懸濁液を ovoのE5中脳(視蓋)心室に注射することによって形成することができる。 
GBM細胞によっては、脳室と脳壁内にコンパクトな腫瘍がランダムに形成され、細胞群が脳壁組織に浸潤します。腫瘍のある固定E15テクタの厚い組織切片(350 μm)を免疫染色して、共焦点zスタック画像の3D再構成によって分析すると、浸潤細胞が血管に沿って移動することが多いことを明らかにすることができます。生きたE15の中脳および前脳スライス(250-350 μm)をメンブレンインサート上で培養し、蛍光標識したGBM細胞を非ランダム位置に導入して、血管に沿って発生する可能性のある細胞浸潤を分析するための ex vivo 共培養を約1週間にわたって行うことができます。これらの ex vivo 共培養は、広視野または共焦点蛍光タイムラプス顕微鏡によってモニターして、生細胞の挙動を観察することができます。 
次に、共培養スライスを固定し、免疫染色し、共焦点顕微鏡で分析して、浸潤が血管または軸索に沿って発生したかどうかを判断できます。さらに、共培養システムは、異なる細胞タイプおよび色の凝集体を異なる正確な位置に配置し、細胞の動きを観察することにより、潜在的な細胞間相互作用を調べるために使用することができる。薬物処理は ex vivo 培養で行うことができますが、これらの処理は in ovo システムと互換性がありません。これらの2つの相補的なアプローチにより、高度に操作可能な脊椎動物の脳環境におけるヒトGBM細胞の挙動と腫瘍形成の詳細かつ正確な分析が可能になります。

ニワトリ胚は、 ovo および ex vivo 脳スライス共培養におけるヒト膠芽腫(GBM)脳腫瘍の研究に使用されます。GBM細胞の挙動は、 ex vivo 共培養におけるタイムラプス顕微鏡によって記録することができ、両方の調製物は、詳細な3D共焦点分析によって実験エンドポイントで分析することができる。

The chick embryo has been an ideal model system for the study of vertebrate development, particularly for experimental manipulations. Use of the chick ...

私たちの研究範囲は、脳組織における膠芽腫細胞の拡散を促進するメカニズムの解明を試みることです。具体的な質問は、膠芽腫細胞の種類または状態の違い、およびこれらの細胞が非常に侵襲的であることを促進する分子メカニズムを中心に展開します。たとえば、L1CAM発現はどのように侵襲性を促進しますか?in vitroモデルとin vivoモデルの両方が、膠芽腫細胞の挙動を正確に分析するには不十分です。in vitroモデルは、ほぼ確実にin vivo細胞の挙動を修正し、過度に単純化します。in vivoモデルでは、発生した行動を簡単に観察することはできませんが、代わりに、行動が発生した後の分析が可能です。我々は、ニワトリ胚脳が、in vivoおよびin vivoスライス培養の両方でヒト脳腫瘍細胞の挙動を研究するための優れたモデルであることを示した。また、膠芽腫細胞によるL1CAM発現は、細胞の増殖、浸潤、および腫瘍内の配置に大きな影響を与える可能性があることも確立しました。ニワトリ胚を使用することのいくつかの利点に加えて、当社のex-vivoスフェロイドプロトコルは、追加の損傷なしに細胞を生きたスライスに導入しますが、他の細胞導入方法には、組織に穴を開けて細胞を移植することが含まれます。さらに、このプロトコルは、in vivo技術では不可能なライブタイムラプスイメージングを可能にします。私たちの発見は、ニワトリ胚が癌研究、特に脳腫瘍の優れたモデルであり、げっ歯類モデルの資金、施設、または専門知識を持っていないかもしれない人々がはるかに容易に利用できるため、科学界にとって非常に有益であることを示唆しています。今後も、脳組織、特に血管に沿った膠芽腫細胞の浸潤を制御する分子メカニズムに着目していきます。もう一つの重要な問題は、膠芽腫幹細胞が明確で安定した表現型であるか、または必要なときに採用できる機能状態であるかです。それは治療に大きな影響を及ぼします。

using-chick-embryo-brain-as-model-for-vivo-ex-vivo-analyses-human

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

表現型の野生型アストロサイトと神経幹細胞は、floxed、条件付き発癌性対立遺伝子で操作され、ウイルスCre媒介組換えを介して形質転換されたマウスから採取され、同系で免疫能力のある同腹仔の脳に形質転換細胞を同所性注射することにより、in vitroおよびin...

モデル星細胞腫発症機序体外とインビボ皮質アストロサイトまたは条件付き、遺伝子改変マウスから神経幹細胞を使用した

この研究では、3D脳腫瘍モデル、すなわち in vitro 培養、in ovo モデル、 およびin vivo...

膠芽腫のパルス電界治療のための柔軟な有機電子デバイス

ここでは、遺伝子操作されたモデルマウス腫瘍に由来する細胞の頭蓋内注射によって樹立されたGBMの前臨床同所性マウスモデルについて述べる。このモデルは、ヒトGBMの疾患の特徴を示しています。トランスレーショナル研究のために、マウス脳腫瘍は in vivoMRI および組織病理学によって追跡される。...

多形性膠芽腫の並進同所性モデル

大脳皮質の発達における遺伝子の機能の迅速な評価を行うために、我々は関与する方法を説明...

神経形態形成の研究のための方法：<em&gt;エキソビボ</em胎児マウス大脳皮質&gt; RNAiのエレクトロポレーション

技術が広くマイクロバブルと超音波を用いたマウスにおける血液脳関門を開くために記述されています。このテクニックを使用して、マンガンは、マウスの脳に投与することができる。マンガンは脱分極の神経細胞に蓄積するMRI造影剤であるため、このアプローチは、神経活動のイメージングを可能にします。...

超音波血液脳関門の破壊とマンガン増強MRIを用いた脳機能イメージングの試み

この資料では、1つは、模倣することができるようにする方法について説明します。...

全体の開発、 ショウジョウバエの脳のex vivoで培養

ここでは、のために必要なツールを開発...

ex vivoでマウス神経上皮における単一細胞分裂のライブイメージング

Optogeneticsは、行動神経科学の実験で使用するための強力なツールとなっています。このプロトコルは、レーザーシステムの設計とセットアップのステップバイステップガイドを提供し、ほとんどのげっ歯類の行動試験パラダイムと互換性のある複数の同時in...

齧歯類の中枢神経系の生体光遺伝学的刺激

私たちは、ニューロンの形態とその経時的な発達を視覚化するためのエレクトロポレーションとその後の共焦点レーザースキャンまたは多光子顕微鏡による嗅覚ニューロンのin...

モデルとしての嗅覚系は、軸索の成長パターンと形態を研究するインビボ

このビデオでは、我々は生きたマウスの背側脊髄の上に慢性光学イメージング室を移植するための手順を説明します。室、外科的手順、および慢性のイメージングを見直し、実証されている。...

縦断のために脊髄商工を移植するための手順インビボイメージング

学ぶニワトリ胚脳モデルを用いたヒト膠芽腫細胞のin vivoおよびex vivo挙動解析。L1CAM発現と血管沿い浸潤メカニズムをタイムラプス顕微鏡で観察し、脳腫瘍研究の新たな手法を確立する。

ニワトリ胚脳をモデルとしてヒト膠芽腫細胞挙動の in vivoおよび ex vivo 解析(英語)

さらに動画を探す