Name: 気孔系譜細胞における膜輸送事象を研究するための画像ベースの手法 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 31 s
Description: 学ぶ 気孔系譜細胞における膜輸送事象の画像ベース解析手法。共焦点顕微鏡と薬理学的処理を用いてArabidopsis thalianaのタンパク質動態を可視化し、植物の非生物ストレス応答メカニズムの理解に貢献します。

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この研究は、国立科学財団(IOS-2217757)(X.Q.)およびアーカンソー医科大学(UAMS)ブロンソン財団賞(H.Z.)の支援を受けました。

1.溶液の調製
<ol><li>15 mLの漂白剤を35 mLの蒸留水および50 μLのTriton X-100と混合して、種子滅菌溶液を調製します。</li>
	<li>BFA粉末をエタノールに溶解して最終濃度10 mM(ストック)にしてブレフェルジンA(BFA)溶液を調製します。Wm粉末をDMSOに溶解してワートマニン(Wm)溶液を最終濃度10mM(ストック)に調製する。</li>
</ol>2.種をまく
<ol><li>必要なトランスジェニック植物のそれぞれから10〜50個の種子を1.5 mLのマイクロ遠心チューブに分注します。各チューブに1 mLの種子殺菌液を加え、シェーカーで10分間チューブを静かに反転させて完全に混合します。</li>
	<li>種子殺菌液を捨て、1 mLのオートクレーブ滅菌蒸留水で種子を5回洗浄します。</li>
	<li>各チューブに300 μLのオートクレーブ滅菌蒸留水を加え、1%(w / v)スクロースと0.75%(w / v)寒天を含む半強度MS培地に種子を播種します。必要に応じて、対応する抗生物質を培地に補給します。</li>
	<li>プレートを逆さまにして4°Cの暗所で2日間保持し、発芽を同期させます。</li>
	<li>2日後、プレートを22°Cで16時間の明暗サイクル(80 μmol/m2/s1)で成長室に移します。 これは発芽後の最初の日(1 dpg)と見なされます。</li>
	<li>さらなる成長のために10 dpgで苗を土壌に移植します。</li>
</ol>3. 二色F1トランスジェニック植物の調製
<ol><li>ERL1-YFPを有するホモ接合トランスジェニック植物(植物A)とRFP標識マーカータンパク質RFP-Ara7を有するホモ接合トランスジェニック植物(植物B)20を、22°Cで16時間の明/8時間の暗サイクル(80 μmol/m2/s1)の生育室で開花するまで並べて育てます。</li>
	<li>植物Aから若い花序を選択してください遺伝的交配のために花序にちょうど開こうとしている1つの花を保ちます。古い花とシリケをすべて取り除きます。さらに、将来の混乱を避けるために、若い花と花の分裂組織を慎重に取り除きます。</li>
	<li>鋭いピンセットを使用して、がく片、花びら、雄しべを取り除き、未開封の花をそっと解剖します。雌しべを花序に残すだけです。</li>
	<li>植物Bの開いた花から成熟した雄しべを取り、花粉粒を植物Aの解剖された雌しべの柱頭に沈着させます。</li>
	<li>この手動で交配した花に、その父、母、および遺伝的交配の日付を示すことによってラベルを付けます。花を成熟させ、珪藻が黄色/茶色に変わったら(交配後~20日後)F1種子を収穫します。YFP信号とRFP信号の両方を持つ成功したF1プラントを確認します。</li>
</ol>4.薬理学的治療
<ol><li>BFA処理では、生後7日齢の苗の子葉を取り除き、残りの苗を模擬溶液(0.3%エタノール)または30μM BFA溶液のいずれかに浸し、1分間真空にし、サンプルを30分間浸漬してからイメージングします。</li>
	<li>麦汁マニン処理では、7日齢の苗の子葉を取り除き、残りの苗を0.25%DMSO溶液または25 mMの麦汁マニンに浸し、1分間真空をかけ、サンプルを30分間浸してからイメージングします。</li>
	<li>サンプルの真空処理では、1.5 mLの微量遠心管に500 μLの対応する薬液を加え、解剖した苗を溶液に浸します。10 mLのシリンジをマイクロ遠心チューブにしっかりと取り付け、1分間真空にします(図1)。シリンジを取り外し、サンプルを必要な時間溶液に保持します。イメージングの準備のために苗をそっと取り出します。</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65257/65257fig01.jpg"> 図1:シンプルな真空装置。 真空処理のために、1.5 mLのマイクロ遠心チューブに10 mLのシリンジが取り付けられています。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65257/65257fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
5. イメージングのためのサンプル調製
<ol><li>鋭いかみそりの刃を使用して、処理されたサンプルから本物の葉を解剖します。スライドガラスの上の水滴に本物の葉をそっと入れ、軸側を上に保ちます。泡を閉じ込めないようにしながら、本物の葉をカバーガラスでゆっくりと覆います。</li>
</ol>6. 共焦点イメージング
注:この研究では、ライカSP8倒立走査型共焦点顕微鏡を使用して、サンプルの蛍光信号を画像化しました。
<ol><li>ビームパスの設定<ol><li>YFP励起には514nmレーザーを選択してください。高いレーザー出力を使用して信号強度を高め、高画質を実現します。ただし、5%を超えるレーザー出力は光退色のリスクがあり、サンプルの健康に影響を与える可能性があります。サンプル信号が暗すぎない場合は、低いレーザー強度から始めます。</li>
		<li>検出のためにPMT/HyDをオンにし、YFP蛍光色素のスペクトルに基づいて発光バンドの上限と下限の閾値を定義します。YFP信号を収集するために、530〜570nmの検出ウィンドウを設定します。</li>
		<li>2番目の色のシーケンシャルイメージング:Seqボタンをクリックして、新しいチャンネルを追加します。デフォルトでは、以前に設計されたYFPビームパスはシーケンス1になります。シーケンス2では、RFP励起に561 nmレーザーを選択し、RFP信号を収集するために570〜630 nmの検出ウィンドウを設定します。</li>
	</ol></li>
	<li>スキャン条件の設定(図2)<ol><li>気孔前駆細胞内の細胞内膜交通活動をイメージングするには、イメージング用のシステム上の63x/1.2 W Corrレンズを選択します。</li>
		<li>形式は、ピクセル単位の画像サイズを参照します。1,024 ピクセル x 1,024 ピクセルから始めて、ズーム倍率と目標設定に基づいてこれを最適化して、パブリケーション品質の解像度を高めます。</li>
		<li>速度とは、レーザーが各ピクセルを通過するときのスキャンヘッドの速度を指します。スキャン速度が遅いと信号対雑音比が向上することがよくありますが、急速に変化する膜輸送イベントを効率的にキャプチャできない場合があります。400 Hzの速度から始めて、サンプルの特定の状況に基づいてこれを最適化します。</li>
		<li>ズーム係数は、対物レンズを変更せずに関心領域を拡大するために使用されます。ズーム倍率 1 から始めて、実験の特定のニーズに基づいてこれを最適化します。</li>
		<li> 線の平均とは、平均結果を得るために各X線をスキャンする回数を指します。線の平均を大きくすると、結果の画像のノイズが減少しますが、スキャン時間とレーザー光への露光時間も長くなります。膜輸送イベントを画像化するには、高いライン平均を使用しないでください。2倍のライン平均から始めて、必要に応じて最適化します。</li>
	</ol></li>
	<li>時系列の収集 注:膜輸送イベントを研究する場合、細胞内エンドソームの急速な動きを記録するために時系列が必要になることがよくあります。<ol><li>[集録モード]で、xytスキャンモードを選択して時系列ユーティリティを有効にします。</li>
		<li>[時間間隔] で、時点間の待機期間を決定します。または、[最小化]をクリックして、画像を次々にすぐに撮影します。7秒の時間間隔を次の時系列実験で使用しました。</li>
		<li>[期間] を選択し、実験を実行する合計時間を入力します。または、[フレーム]を選択して、収集するフレーム数を定義します(図3)。</li>
	</ol></li>
	<li>セル全体の膜輸送イベントに関する3次元情報を収集するには、Zスタックスキャンモードを使用します。Zスタック画像の最大強度投影は、多くの場合、分析に使用されます。<ol><li>アクイジションモードでxyzスキャンモードを選択すると、Z-Stackユーティリティにアクセスできるようになります。</li>
		<li>[Z 幅] オプションを選択します。[スキャン モード]で、[開始]ボタンと[終了]ボタンを使用して、Z スタックの上部の画像と下部の画像を定義します。</li>
		<li>Z ステップの太さを定義するには、Z ステップのサイズをクリックします。または、Z スタックの全範囲をカバーするために撮影する画像の数を定義します。サンプル間の一貫性を確保するには、zステップのサイズを定義します(図4)。</li>
	</ol></li>
	<li>画像処理<ol><li>zスタック画像の最大強度投影は、共焦点ソフトウェア(http://www.leica-microsystems.com)によって生成されます。プライマリ [プロセス] タブで、まず、左端の [プロジェクトを開く] タブの下にある目的の z-stack ファイルを選択します。次に、[プロセスツール]という名前の中央のタブに切り替え、[投影]機能を選択し、[メソッド]のドロップダウンパネルで[最大]を選択して、[適用]ボタンをクリックします。Z スタック投影イメージが [開いているプロジェクト] タブの下に生成されます。</li>
		<li>時系列画像のビデオはフィジー(https://imagej.net/Fiji)によって生成されます。[ファイル] タブで、[開く] 関数を使用して、すべての時系列画像を正しい順序で開きます。[画像]タブで、[スタック]関数を見つけ、[スタックする画像]を選択してビデオを生成します。希望のフレームレート(ビデオ1の場合は5フレーム/秒)で.avi形式でファイルを保存します。</li>
	</ol></li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65257/65257fig02.jpg"> 図2:XY寸法のスキャンモードパネル。 スキャンモードパネルは、イメージスキャン条件を設定するために使用します。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65257/65257fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65257/65257fig03.jpg"> 図3:xytスキャンモードでの時系列ユーティリティ。 時系列ユーティリティは、一連の画像を連続して収集するためのイメージング条件を設定するために使用されます。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65257/65257fig03large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65257/65257fig04.jpg"> 図4:xyzスキャンモードでのzスタックユーティリティ。 z-stackユーティリティは、z軸上の一連の画像を収集するためのイメージング条件を設定するために使用されます。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65257/65257fig04large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>

共焦点イメージングによるERL1ダイナミクスの時空間的研究

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<li>Nwaneshiudu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+to+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Introduction to confocal microscopy.</a> Journal of Investigative Dermatology. 132 (12), (2012).</li>
<li>Sanderson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols%22%5BJournal%5D)">Multi-photon microscopy.</a> Current Protocols. 3 (1), 634(2023).</li>
</ol>

著者は利益相反を宣言しません。

膜内システムは、真核細胞の細胞質を異なる区画に分離し、これらの細胞小器官の特殊な生物学的機能を可能にします。貨物タンパク質と高分子を適切なタイミングで最終目的地に送達するために、多数の小胞がこれらの細胞小器官間を往復するように誘導されます。高度に制御された膜輸送イベントは、細胞の生存率、発生、および成長において基本的な役割を果たします。この重要で複雑なプロセスを規制するメカニズムはまだよくわかっていません。
ここでは、膜タンパク質の細胞内局在の観察、異なる蛍光タンパク質でタグ付けされた2つの膜タンパク質間の共局在の解析、時系列画像を用いた膜タンパク質の動的運動のモニタリング、細胞全体をカバーするzスタックイメージングによる膜タンパク質に関する3次元情報の収集など、いくつかのアプローチについて述べました。ここで説明する膜輸送イベントに加えて、これらのアプローチは他の生物学的プロセスにも簡単に適用できます。例えば、時系列イメージングは、発生過程をモニタするために長期間(数日間)にわたって行うことができる30。zスタックイメージングは、細胞...

膜輸送は、タンパク質、脂質、その他の生物学的産物を含む膜成分(貨物とも呼ばれる)を、真核細胞内の異なる細胞小器官間または原形質膜を横切って細胞外空間との間で分配する保存された細胞プロセスです1。このプロセスは、核膜、小胞体、ゴルジ体、液胞/リソソーム、原形質膜、および複数のエンドソームで構成される膜内システムと呼ばれる膜と細胞小器官の集まりによって促進されます1。膜内システムは、これらの細胞小器官間を往復する動的小胞を使用して、膜成分の修飾、パッケージング、および輸送を可能にします。膜輸送イベントは、細胞の発生、成長、および環境適応に不可欠であるため、厳格で複雑な規制下にあります2。現在、分子生物学、ケミカルバイオロジー、顕微鏡、質量分析における複数のアプローチが開発され、膜輸送の分野に適用されており、膜内システムの時空間調節の理解を大幅に進めています3,4。分子生物学は、目的のタンパク質の遺伝子発現を変更したり、目的のタンパク質を特定のタグで標識したりするなど、膜輸送に関与する推定プレーヤーの古典的な遺伝子操作に使用されます。ケミカルバイオロジーのツールには、特定のルート4,5の交通を特に妨害する分子の使用が含まれます。質量分析は、生化学的アプローチによって機械的に単離された細胞小器官の成分を同定するのに強力です3,4。しかし、膜の交通は動的で多様で複雑な生物学的プロセスです1。さまざまな条件下で生細胞における膜輸送プロセスを可視化するには、光学顕微鏡法が不可欠なツールです。イベントの効率、動力学、および多様性を測定する際の課題を克服するために、高度な顕微鏡技術が継続的に進歩しています4。ここでは、化学/薬理生物学、分子生物学、および顕微鏡法で広く採用されている方法論に焦点を当て、自然に単純化され実験的にアクセス可能なシステムである気孔発生プロセスにおける膜輸送イベントを研究します。
気孔は、植物の空中表面上の微細孔であり、内部細胞と環境との間のガス交換を容易にするために開閉する6,7,8。したがって、気孔は光合成と蒸散に不可欠であり、植物の生存と成長に不可欠な2つのイベントです。気孔の発達は、環境の合図によって動的に調整され、植物の周囲への適応を最適化します9。2002年の研究にさかのぼり、受容体タンパク質Too Many Mouths(TMM)の同定は、モデル植物シロイヌナズナ10における気孔発生の分子メカニズムを調査する新しい時代への扉を開きました。わずか数十年後、古典的なシグナル伝達経路が同定されました。上流から下流まで、この経路には、表皮パターニング因子(EFP)ファミリーの分泌ペプチドリガンド群、EREETA(ER)ファミリーのいくつかの細胞表面ロイシンリッチリピート(LRR)受容体キナーゼ、LRR受容体タンパク質TMM、MAPKカスケード、およびスピーチレス(SPCH)、MUTE、FAMA、およびSCREAM(SCRM)11,12,13,14を含むいくつかのbHLH転写因子が含まれます 15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26。以前の研究では、受容体キナーゼの1つであるER-LIKE 1(ERL1)が、EPF知覚時に活発な細胞内挙動を示すことが示されています20。ERL2はまた、原形質膜といくつかの細胞内オルガネラとの間の動的に輸送する27。膜輸送ステップを遮断すると、異常な気孔パターニングが生じ、葉表面28上に気孔クラスターが生じる。これらの結果は、膜交通が気孔の発達に不可欠な役割を果たしていることを示唆しています。本研究では、タンパク質間細胞内共局在解析と膜輸送阻害剤を用いた薬理学的治療を組み合わせて、ERL1動態を時空間的に調べるためのプロトコルについて述べる。

<table><tbody><tr><td>10 mLシリンジ</td><td>VWR</td><td>BD309695</td><td>真空サンプル</td></tr><tr><td>ブレフェルジンA(BFA)</td><td>シグマ</td><td>B7651</td><td>膜密輸薬</td></tr><tr><td>共焦点顕微鏡</td><td>ライカ</td><td>レシアSP8 TCS LAS-Xソフトウェアパッケージ</td><td>付き イメージング</td></tr><tr><td>解剖鉗子</td><td>VWR</td><td>82027-402</td><td>遺伝的クロス</td></tr><tr><td>フィジー</td><td>NIH</td><td>https://imagej.net/Fiji</td><td>画像処理</td></tr><tr><td>Leica LAS AFソフトウェア</td><td>Leica</td><td>http://www.leica-microsystems.com</td><td></td></tr><tr><td>ERL1-YFP</td><td></td><td></td><td>Qi, X. et alの画像処理トランスジェニックシード.受容体の細胞内動態に対するシグナル伝達ペプチドの多様な作用は、気孔細胞の運命を決定します。イーライフ。9、doi:10.7554/eLife.58097、(2020年)。</td></tr><tr><td>RFP-Ara7</td><td></td><td></td>のトランスジェニックシード <td>Ebine, K. et al.植物特異的なRAB GTPase ARA6によって制御される膜輸送経路。Nat Cell Biol. 13 (7), 853-859, doi:10.1038/ncb2270, (2011).</td></tr><tr><td>ワートマニン(Wm)</td><td>Sigma</td><td>W1628</td><td>膜密売麻薬</td></tr></tbody></table>

気孔系譜細胞における膜輸送事象を研究するための画像ベースの手法

Image-Based Methods to Study Membrane Trafficking Events in Stomatal Lineage Cells

真核細胞では、タンパク質や脂質などの膜成分が膜内システム内の目的地に時空間的に輸送されます。これには、新たに合成されたタンパク質の細胞表面または細胞外への分泌輸送、細胞外または原形質膜成分の細胞内細胞輸送、および細胞内オルガネラ間の貨物のリサイクルまたは往復輸送などが含まれます。膜輸送イベントは、すべての真核細胞の発生、成長、および環境適応にとって重要であるため、厳しい規制下にあります。細胞外空間からのリガンドシグナルを知覚する細胞表面受容体キナーゼは、分泌輸送とエンドサイトーシス輸送の両方を受けます。ここでは、原形質膜に局在するロイシンリッチリピート受容体キナーゼERL1を使用して膜輸送イベントを研究するために一般的に使用されるアプローチについて説明します。アプローチには、植物材料の調製、薬理学的処理、および共焦点イメージングのセットアップが含まれます。ERL1の時空間制御を監視するために、本研究では、ERL1と多胞体マーカータンパク質RFP-Ara7との共局在解析、これら2つのタンパク質の時系列解析、および膜輸送阻害剤であるブレフェルジンAとワートマニンで処理したERL1-YFPのzスタック解析について説明します。

以前の研究では、ERL1は動的な膜輸送イベントを受ける活性受容体キナーゼであることが示されました20。ERL1は、原形質膜上の膜貫通LRR受容体キナーゼです。小胞体で新たに合成されたERL1はゴルジ体で処理され、さらに原形質膜に輸送されます。原形質膜上のERL1分子は、それらの細胞外LRRドメイン18を用いてEPFリガンドを知覚することができる。EPF1を含む阻害性EPFによって活性化されると、ERL1はエンドソーム内に内在化され、多小胞体(MVB)に輸送され、次いで分解のために液胞に輸送されてシグナル20を終結させる。対照的に、気孔形成を促進する拮抗的なEPFL9リガンド14は、小胞体にERL1を保持します。あるいは、原形質膜に局在するERL1は、エンドソームと原形質膜20との間でリサイクルすることができる。
ここでは、ERL1プロ モ...

ここでは、原形質膜受容体キナーゼの膜輸送イベントを研究するために、一般的に使用されるいくつかの方法を紹介します。この原稿では、植物材料の調製、薬理学的処理、共焦点イメージングのセットアップなど、詳細なプロトコルについて説明しています。

In eukaryotic cells, membrane components, including proteins and lipids, are spatiotemporally transported to their destination within the endomembrane ...

この技術は、気孔の発達における膜輸送イベント、植物の空中表面の微細孔を研究し、光合成と蒸散を促進します。植物の気孔の発達を研究するために様々な技術が使用されている。これには、分子生物学、細胞生物学または顕微鏡検査、ケミカルバイオロジー、質量分析、生化学、および構造生物学が含まれます。個々の気孔は非同期的に形成されます。各ストーマは、3つの超越細胞運命遷移によって形成される。したがって、特定の細胞運命で十分な気孔系統細胞を収集することは、大きな課題の1つです。膜輸送は、細胞の生存と増殖に不可欠です。気孔系統細胞も例外ではありません。このプロトコルは、気孔系統細胞における膜輸送事象を研究するために一般的に使用されるアプローチに対処します。植物は気候変動に直面して困難な環境に直面しています。気孔は植物のガス交換の通路であり、適応のための環境ストレスに対して非常に柔軟です。私たちは、気孔系統細胞における特定のタンパク質の膜輸送に焦点を当てることにより、非生物的ストレスが気孔の発達にどのように影響するかを研究することに興味を持っています。

image-based-methods-to-study-membrane-trafficking-events-stomatal

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

我々は、生菌に対する気孔の応答にアクセスするためのシンプルで再現性のプロトコルを開発しました。表皮皮の使用と比較して、この方法では、葉の傷や操作を最小限に抑えることが以前に報告した。...

全葉のイメージングを使用して細菌細胞をライブに気孔反応を評価する

我々は、気孔の分化を文書化、開発の数日間にわたって表皮の共焦点イメージングのための植物の子葉を固定化するためにチャンバースライドやメディアを使用してプロトコルを記述します。フルオロフォアタグ付きタンパク質は、細胞分裂や細胞型分化の過程でそれらの可能な役割の理解を深め、表現と細胞内局在によって動的に追跡することができます。...

の長期、高分解能共焦点タイムラプスイメージング<em&gt;シロイヌナズナ子葉</em発芽過程&gt;表皮

出典:Wagner, K. et al., Studying Membrane Protein Trafficking in Drosophila Photoreceptor Cells Using eGFP-tagged Proteins. J. Vis. Exp.

ショウジョウバエの視細胞における膜タンパク質輸送の研究

偏光ベース全内部反射蛍光顕微鏡（pTIRFM）は、細胞膜動態のリアルタイム検出を可能にする。この記事では、調節性エキソサイトーシスの間に膜のリモデリングの研究のためpTIRFMの実装について説明します。技術は、直接的または間接的に、膜形状の変化を伴う細胞生物学における他のプロセスに一般化である。...

pTIRFMによる画像形成細胞膜変形は

このプロトコルの目的は、気孔複合体の細胞皮質内に、GFPタグPATROL1、膜輸送タンパク質のドットを点滅示す可変角度落射蛍光顕微鏡で植物細胞表面上の蛍光標識タンパク質のダイナミクスを監視する方法を示すことですシロイヌナズナ 。...

可変角度落射蛍光顕微鏡を用いて植物細胞表面ダイナミクスのリアルタイムイメージング

細胞内レベルでは、シグナル伝達イベントは発生的および環境的な手がかりによって動的に調節されます。ここでは、タバコの一過性発現システムを使用して、動的なタンパク質間相互作用を監視し、植物細胞におけるシグナル伝達の空間的構成を明らかにするプロトコルについて説明します。...

タバコ一過性発現系を使用したMAPKシグナル伝達経路の空間再編のイメージング

このプロトコルでは、生理学的およびその他の生物学的研究に役立つ濃縮細胞を準備する方法について説明します。...

気孔テープ剥離: 細胞試料の調製法の改良

マクロピノサイトーシスは、膜フリルとしても知られるF-アクチンに富むシート状の膜突起の形成によって開始される高度に保存された内球性プロセスである。マクロピノサイトーシス溶質インターナリゼーションの速度の増加は、様々な病理学的状態に関与している。このプロトコルは、走査型電子顕微鏡を用いて インビトロで 膜ラッフル形成を定量する方法を提示する。...

走査型電子顕微鏡による膜ラッフル形成の可視化

この論文では、気孔の発達を制御する遺伝子を特徴付けるために、表皮剥離を使用しない2つの表現型法について説明します。最初の方法は、トルイジンブルーO染色植物表皮を使用して気孔表現型を分析する方法を示しています。2番目の方法は、気孔リガンドを同定し、それらの生物学的活性を監視する方法を説明する。...

表皮表現型スコアリング による 気孔発生に関与する遺伝子の同定

本プロトコルは、表皮ピーリング、クリアリング技術、AI支援画像解析を用いて、2つの異なる種の気孔および表皮形質を比較評価する方法を提示します。この目的は、農業応用および広範な植物研究において、気孔機能の基盤となる細胞構造を高スループットかつ再現性のある定量化を可能にすることです。...

ピーリング、クリアリング、AI画像解析を用いた気孔および表皮の特徴の特徴づけ

学ぶ 気孔系譜細胞における膜輸送事象の画像ベース解析手法。共焦点顕微鏡と薬理学的処理を用いてArabidopsis thalianaのタンパク質動態を可視化し、植物の非生物ストレス応答メカニズムの理解に貢献します。

気孔系譜細胞における膜輸送事象を研究するための画像ベースの手法

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