Analysis of Transgenerational Epigenetic Inheritance in <em>C. elegans</em> Using a Fluorescent Reporter and Chromatin Immunoprecipitation (ChIP)

Chengyin Li; Phoebe A. W. Bhagoutie; Victor Lao; Arneet L. Saltzman

doi:10.3791/65285

線虫の世代間エピジェネティック遺伝の蛍光レポーターとクロマチン免疫沈降(ChIP)による解析

JoVE Journal
Genetics

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JoVE Journal Genetics

Analysis of Transgenerational Epigenetic Inheritance in C. elegans Using a Fluorescent Reporter and Chromatin Immunoprecipitation (ChIP)

線虫の世代間エピジェネティック遺伝の蛍光レポーターとクロマチン免疫沈降(ChIP)による解析

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10:28 min

May 5, 2023

DOI: 10.3791/65285-v

Chengyin Li*¹, Phoebe A. W. Bhagoutie*¹, Victor Lao¹, Arneet L. Saltzman¹

¹Department of Cell and Systems Biology,University of Toronto

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このプロトコルはC .のelegansのRNAi誘導されたサイレンシングおよび準のchromatinの修正のエピジェネティックな遺伝を調査するRNAの干渉およびChIPの試金を記述する。

私たちの研究室では、クロマチン関連タンパク質、ヒストン修飾、および低分子RNA経路因子が、発生と世代を超えたエピジェネティックな遺伝の文脈でどのように連携するかを調べています。GFPレポーターを用いたRNA遺伝アッセイは、非常に強力なツールとなっています。このプロトコールでは、ワームの調製、スコアリング、継代、および再現性のある結果の生成に役立つChIPサンプルの調製を標準化する方法を説明しています。

生殖細胞系に発現する導入遺伝子を研究する際の実験的課題の1つは、動物の生殖細胞系における影響を単離することです。現在、ChIPには全動物を用いていますが、将来的にはクロマチン、特に生殖細胞系で調べるアッセイを開発したいと考えています。当研究室では、ヒストンのメチル化と、その痕跡を認識するタンパク質に興味を持っています。

今後は、導入遺伝子におけるRNAi遺伝や内因性配列の制御など、これらのクロマチンリーダーとsmall RNA経路の相互作用について調べていきたいと考えています。

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