Name: Trypanosoma cruziの3つのIn Vitroライフサイクルステージにおける超微細構造拡大顕微鏡 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-12T14:50:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: 学ぶ Trypanosoma cruziの3つのin vitroライフサイクルステージにおける超微細構造拡大顕微鏡法。ナノスケール構造の3次元再構成を可能にし、従来の顕微鏡で高解像度イメージングを実現する革新的なプロトコルです。

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注: 図1 は、完全な実験計画を示しています。
<img alt="トリパノソーマ症のライフサイクル図;顕微鏡の準備;膨張顕微鏡;免疫蛍光。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65381/65381fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> 
図1:T. cruziの3つのin vitroライフサイクルステージのU-ExMワークフロー <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65381/65381fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
1. ポリ-D-リジンコーティングされたカバースリップの調製
<ol>
	<li>10 cm x 10 cm四方のシーリングフィルムをペトリ皿に入れます。カバースリップを無水エタノールに浸して、35mmのガラスシャーレで洗います。</li>
	<li>エタノールバスからピンセットでカバースリップを取り外し、余分な液体をティッシュペーパーで排出します。カバースリップをシーリングフィルムの上に置きます。</li>
	<li>残りのエタノールを顕微鏡グレードの紙で吸収します。カバーガラスの中央にポリ-D-リジンの0.1% v/v溶液を加え、先端で広げて表面の約80%を覆います。ペトリ皿を閉じ、37°Cで1時間インキュベートします。 注:22 mm2 カバースリップの場合、200 μLのポリ-D-リジン溶液を使用してください。12 mmの丸型カバースリップには、100 μLのポリ-D-リジン溶液を使用します。</li>
	<li>カバーガラスを超純水で3回洗います。真空で吸引して、各洗浄の間に水分を取り除きます。4°Cで最大1週間保管します。</li>
</ol>
2. 溶液の調製
<ol>
	<li>38%(w / w)のアクリル酸ナトリウム(SA)のストック溶液を調製します。<ol>
		<li>攪拌しながら、19 gのSAを31 mLのヌクレアーゼフリー水にゆっくりと加えます。 注:このソリューションは非常に粘性があります。ピペッティングの際はご注意ください。</li>
		<li>SAが完全に溶解したら、滅菌容器に保管します。4°Cに保ち、6か月ごとに交換してください。 注:SAは、ブランドによってはポリアクリル酸ナトリウムによる汚染の兆候を示すことがあり、これはストック溶液を調製するときに黄色がかった濁りに変わるときに目立ちます。その場合は慎重に使用してください。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>40%(w / v)アクリルアミド(AA)の原液と2%(w / v)N、N'-メチレンビスアクリルアミド(BIS)の原液を準備します。各化合物を超純水に溶解し、0.22μmの滅菌シリンジフィルターでろ過します。滅菌容器に入れて4°Cで保存してください。 注意:AAとBISは非常に有毒な物質です。ドラフトの下で作業し、適切な保護要素(手袋、防護服、マスク、安全メガネ)を使用してください。</li>
	<li>37%ホルムアルデヒド(FA)溶液38μLと40%アクリルアミドストック溶液50μL(ステップ2.2)を912μLのリン酸緩衝生理食塩水(PBS; 表1)1.4%ホルムアルデヒドと2%アクリルアミドの最終濃度を得るため。 注:CP溶液は常に新鮮に調製し、ピペッティングするときは非常に正確です。例えば、P1000ピペットを使用して900μLのPBSを採取し、P20ピペットを使用して残りの12μLのPBSを採取します。</li>
	<li>モノマー溶液を調製します 注意: 調製後すぐに溶液を使用しないでください。使用する前に少なくとも24時間-20°Cで保管してください。<ol>
		<li>38% SA溶液500 μL(ステップ2.1)、40% AA溶液250 μL、BIS溶液50 μL(ステップ2.2)、10x PBS100 μLを混合します(表1)。</li>
		<li>この最終容量900 μLを1.5 mL microcentrifuge tubesに10x 1.5 mL入りで分注し、それぞれ90 μLのモノマー溶液を添加します。-20°Cで最大2週間保存してください。 注:SA溶液は粘性が高いため、ピペッティング時にチップに留まる場合があります。注意して、すべてを分配してください。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>変性液を調製します<ol>
		<li>超純水で調製した350 mMドデシル硫酸ナトリウム(SDS)溶液114.3 mLと、超純水で調製した4 M塩化ナトリウム溶液10 mLを混合します。250mLのビーカーで攪拌しながらトリス12gを加えます。 注意:SDSは非常に有毒です。手袋、防護服、マスク、安全メガネを着用してドラフトの下で使用してください。</li>
		<li>塩酸の濃縮溶液でpHを9に調整します。超純水で最大200mLを調製し、4°Cの滅菌フラスコで保存します。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>10%過硫酸アンモニウム(APS)溶液と10%TEMED溶液を調製します。<ol>
		<li>0.1gのAPSを1mLの超純水に溶解します。</li>
		<li>10% TEMED溶液1 mLを超純水で調製します。</li>
		<li>1.5 mLの微量遠心分離用滅菌チューブに両溶液のアリコート100 μLを調製し、-20°Cで最大1か月間保存します。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>パラホルムアルデヒド溶液を調製します。<ol>
		<li>パラホルムアルデヒド2gをPBS40mLに溶解し、60°Cで撹拌します。 溶液が白色から無色に変わるまで、1 M NaOHを滴下します。 注意:ホルムアルデヒドは非常に有毒です。手袋、防護服、マスク、安全メガネを着用してドラフトの下で使用してください。</li>
		<li>溶液を室温で冷却し、NaOHを含むpHを最終容量50mLで7.2に調整します。0.22 μm滅菌シリンジフィルターでろ過し、滅菌容器で保存します。</li>
		<li>1.5 mLの滅菌微量遠心チューブに1 mLのアリコートを調製し、-20°Cで保存します。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>パラホルムアルデヒド/グルタルアルデヒド溶液を調製します。<ol>
		<li>0.2 gのパラホルムアルデヒドを3.5 mLの超純水と50 μLの16 M NaOH溶液に加えます。溶液を60°Cに加熱して、パラホルムアルデヒドを溶解します。</li>
		<li>冷まして、70%グルタルアルデヒドを300μL加えます。超純水で5mLまで、PBSで10mLまで容量を上げます。 注意:パラホルムアルデヒドとグルタルアルデヒドは非常に有毒です。手袋、防護服、マスク、安全メガネを着用してドラフトの下で使用してください。</li>
		<li>1.5 mLの滅菌微量遠心チューブに1 mLのアリコートを調製し、-20°Cで保存します。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3.寄生虫培養物の調製
<ol>
	<li>T. cruzi epimastigotesを育てます。<ol>
		<li>T-25フラスコ(成長領域25 cm2 )で無菌培養を使用し、10%の子牛胎児血清(FCS; 表 1)。</li>
		<li>キャップがしっかりと閉まっていることを確認し、培養フラスコを垂直に28°Cに保ち、インキュベーションします。各継代培養中にノイバウアーチャンバー内で細胞計数することにより、寄生虫の増殖をモニターします。 注:この研究で使用したDm28c株の場合、対数期培養物中のエピマスティゴテスの濃度は1〜5 x 107 寄生虫/ mLです。</li>
		<li>10% FCSを添加したLIT培地中の対数期培養液から、2 x 106 エピマスティゴート/mLの懸濁液を調製します。懸濁液を5,000 x g で室温(RT)で10分間遠心分離します。PBSで1〜2回洗浄し、200μLのPBSに再懸濁します。</li>
		<li>ポリ-D-リジンで以前にコーティングされた丸い12mmカバーガラス(セクション1)に接着します。室温で15〜20分間インキュベートします。架橋防止手順(セクション4)に進みます。 注:あるいは、寄生虫をカバースリップに付着する前に、冷たいメタノールで7分間、またはパラホルムアルデヒド/グルタルアルデヒド溶液(ステップ2.8)でRTで10分間エピマスティゴテスを固定します。固定寄生虫は4°Cで最大1週間保存することができます。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>感染したVero細胞からアマスチゴテスを取得します。<ol>
		<li>滅菌済みの12 mm丸型カバースリップを24ウェル組織培養プレートの底に置きます。2% ウシ胎児血清(FCS)を添加したダルベッコの改変イーグル培地(DMEM)に 2 x 105 Vero 細胞/mL の懸濁液を調製します。懸濁液500μLをウェルあたり播種します。 </li><li></li><li></li><li> </li></ol></li><li><ol><li> </li><li></li><li> </li></ol></li></ol><ol><li><li> </li></ol><ol><li> </li><li></li><li> </li><li> </li><li> </li><li></ol><img alt="ゲル中の細胞カプセル化;A-B:氷上のシャーレ。C:ゲル下の細胞の図、カバーガラスのセットアップ。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65381/65381fig02.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65381/65381fig02large.jpg" target="_blank"></a><ol><li><li><li> </li><li><ol><li><li> </li><li> </li></ol></li></ol><ol><li><li> </li><li> </li><li><li> </li><li><li></ol><ol><li><li> </li><li></li><li><li> </li><li><ol><li></li><li><li></li><li> </li></ol></li></ol>

<meta charset="utf8"></head><body>Trypanosoma cruziのIn Vitroライフサイクルにおける超微細構造拡大顕微鏡法

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<li>Chozinski, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+microscopy+with+conventional+antibodies+and+fluorescent+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Expansion microscopy with conventional antibodies and fluorescent proteins.</a> Nature Methods. 13 (6), 485-488 (2016).</li>
<li>Ku, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+and+scalable+super-resolution+imaging+of+three-dimensional+protein+localization+in+size-adjustable+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Multiplexed and scalable super-resolution imaging of three-dimensional protein localization in size-adjustable tissues.</a> Nature Biotechnology. 34 (9), 973-981 (2016).</li>
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<li>Trinks, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subdiffraction-resolution+fluorescence+imaging+of+immunological+synapse+formation+between+NK+cells+and+A.+fumigatus+by+expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Communications+Biology%22%5BJournal%5D)">Subdiffraction-resolution fluorescence imaging of immunological synapse formation between NK cells and A. fumigatus by expansion microscopy.</a> Communications Biology. 4 (1), 1151(2021).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>0.22マイクロメートル滅菌シリンジフィルター PES</td><td>メンブレン溶液</td><td>SFPES030022S</td><td></td></tr><tr><td>1 Lビーカー</td><td>ショット・デュラン</td><td>10005227</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL SPINWIN マイクロ遠心分離チューブ</td><td>ターソン</td><td>T38-500010</td><td></td></tr><tr><td>10 mL 使い捨て滅菌セリンジ</td><td>NP</td><td>66-32</td><td></td></tr><tr><td>10 mL 血清学的ピペット 滅菌</td><td>ジェット バイオフィル</td><td>GSP211010</td><td></td></tr><tr><td>12 mm カバースリップ</td><td>Merienfeld GmbH</td><td>01 115 20</td><td>ラウンド カバースリップ</td></tr><tr><td>12 ウェルプレート</td><td>ジェット バイオフィル</td><td>TCP011012</td><td></td></tr><tr><td>22 mm カバースリップ</td><td>コーニング</td><td>2845-22</td><td>スクエア カバースリップ</td></tr><tr><td>24 ウェルプレート</td><td>ジェット バイオフィル</td><td>TCP-011-024</td><td></td></tr><tr><td>250 mL ビーカー</td><td>ショット デュラン</td><td>C108.1</td><td></td></tr><tr><td>3 mL パスツールピペット</td><td>Deltalab</td><td>200037</td><td></td></tr><tr><td>35 mm ガラス底皿</td><td>松波ガラス ind</td><td>D11130H</td><td></td></tr><tr><td>4&prime;,6-ジアミジン-2&prime;-フェニルインドール二塩酸塩</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D9542</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>5 ml 血清ピペット</td><td>滅菌 Jet Biofil</td><td>GSP010005</td><td></td></tr><tr><td>6-well plates</td><td>Sarstedt</td><td>83.3920</td><td></td></tr><tr><td>アクリルアミド</td><td>BioRad</td><td>1610101</td><td></td></tr><tr><td>過硫酸アンモニウム</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A3678-25G</td><td>APS</td></tr><tr><td>ATTO 647 NHS エステル</td><td>BOC Sciences</td><td>F10-0107</td><td>汎プロテオームラベリング用</td></tr><tr><td>Biosaftyキャビネット</td><td>Telstar</td><td>Bio II A/P</td><td></td></tr><tr><td>ウシ アルブミンナトリウム</td><td>Sigma</td><td>Aldrich A7906</td><td>BSA</td></tr><tr><td>CO2 インキュベーター</td><td>三洋電機</td><td>MCO-15A</td><td></td></tr><tr><td>共焦点顕微鏡</td><td>ツァイス</td><td>LSM 880</td><td></td></tr><tr><td>ディスポーザブル ペトリディッシュ</td><td>ターソン</td><td>460095</td><td>直径 90 mm</td></tr><tr><td>DMEM、高グルコース</td><td>サーモフィッシャー Cientific</td><td>12100046</td><td>パウダー</td></tr><tr><td>電子デジタルノギス</td><td>レーダー</td><td>レーダー レーダー</td><td></td></tr><tr><td>エタノール アブソリュート</td><td>Supelco</td><td>1,00,98,31,000</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Calf Serum</td><td>Internegocios SA</td><td>FCS FRA 500</td><td>Sterile and heat-inactivated</td></tr><tr><td>Fiji image processing package</td><td>ImageJ</td><td></td><td>doi:10.1038/nmeth.2019</td></tr><tr><td>ホルムアルデヒド 37%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F8775</td><td>FA</td></tr><tr><td>Glass Petridish</td><td>Marienfeld Superior</td><td>PM-3400300</td><td>60 mm diameter</td></tr><tr><td>Glucosa D(+)</td><td>Cicarelli</td><td></td><td></td>716214</tr><tr><td>グルタルアルデヒド 70%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G7776</td><td></td></tr><tr><td>ヤギ抗マウスIgG 二次抗体 Alexa Fluor 555</td><td>Invitrogen</td><td>A-21422</td><td></td></tr><tr><td>ヤギ抗ウサギIgG 二次抗体 FICT</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>115-095-003</td><td></td></tr><tr><td>メスシリンダー</td><td>Nalgene</td><td>3663-1000</td><td></td></tr><tr><td>目盛り付きガラスフラスコ</td><td>Glassco</td><td>GL-274.202.01</td><td>100 mL</td></tr><tr><td>ヒーティング ブロック</td><td>IBR</td><td></td><td>自社製</td></tr><tr><td>Hemin</td><td>Frontier Scientific</td><td>H651-9</td><td></td></tr><tr><td>塩酸 36.8-38.0%</td><td>Ciccarelli</td><td>918110</td><td></td></tr><tr><td>アイス バケツ</td><td>Corning</td><td>1167U68</td><td></td></tr><tr><td>インキュベーター</td><td>Tecno Dalvo</td><td>TOC130</td><td></td></tr><tr><td>肝臓注入</td><td>Difco</td><td>226920</td><td></td></tr><tr><td>マグネティックスターラー&ヒーター</td><td>ラボコンパニオン</td><td>HP-3000</td><td></td></tr><tr><td>金属ヘラ</td><td>SALTTECH</td><td>200MM</td><td></td></tr><tr><td>金属ピンセット</td><td>マリエンフェルド スーペリア</td><td>PM-6633002</td><td></td></tr><tr><td>メタノール絶対</td><td>Cicarelli</td><td>897110</td><td></td></tr><tr><td>微量遠心チューブ 1.5mL</td><td>ターソン</td><td>500010-N</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡グレードの紙 KimWipes</td><td>Kimtech Science</td><td>B0013HT2QW</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q water sistem</td><td>Merk Millipore</td><td>IQ-7003</td><td></td></tr><tr><td>マウス抗αチューブリンクローン DM1A</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T9026</td><td></td></tr><tr><td>マウス抗PFR</td><td>精製抗体</td><td></td><td>Ariel Silber博士(USP)</td></tr><tr><td>N,N&acute;-methylenbisacrilamide</td><td>ICN</td><td>193997</td><td>ビス</td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Cicarelli</td><td>834214</td><td></td></tr><tr><td>ノイバウアーチャンバー</td><td>Boeco</td><td>BOE 01</td><td></td></tr><tr><td>p1000 ピペット</td><td>ギルソン</td><td>ピペットマン P1000</td><td></td></tr><tr><td>p1000 ピペットチップ</td><td>ターソン</td><td>TAR-521020B</td><td></td></tr><tr><td>p20 ピペット</td><td>ギルソン</td><td>ピペットマン P20</td><td></td></tr><tr><td>p20 ピペットチップ</td><td>ターソン TAR-527108</td><td></td><td></td></tr><tr><td>p200ピペット</td><td>Gilson</td><td>PIPETMAN P200</td><td></td></tr><tr><td>p200 ピペットチップ</td><td>Tarson</td><td>TAR-521010Y</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6148</td><td>PFA</td></tr><tr><td>pH / ORP / &deg;Cメートル</td><td>HANNA Instruments</td><td>HI 2211</td><td></td></tr><tr><td>Poly-D-Lysine 0.1%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8920</td><td></td></tr><tr><td>塩化カリウム</td><td>Cicarelli</td><td>867212</td><td>KCl</td></tr><tr><td>Razor blade</td><td>Printex</td><td>BS 2982:1992</td><td></td></tr><tr><td>シーリングフィルム "Parafilm M"</td> <td>Bemis</td><td>PM996</td><td></td></tr><tr><td>アクリル酸ナトリウム</td><td>Sigma Aldrich</td><td>408220-25G</td><td>SA</td></tr><tr><td>重炭酸</td>ナトリウム <td>Cicarelli</td><td>929211</td><td>NaHCO3</td></tr><tr><td>塩化ナトリウム</td><td>Cicarelli</td><td>750214</td><td>NaCl</td></tr><tr><td>Dodecyl Sulfate</td><td>BioRad</td><td>1610302</td><td>SDS</td></tr><tr><td>Hidroxide</td><td>ナトリウム Merk</td><td>1-06498</td><td>NaOH</td></tr><tr><td>Sorvall ST 16 遠心分離機</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック 75004380</td><td></td><td></td></tr><tr><td>T-25 フラスコ</td><td>Corning</td><td>430639</td><td></td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Invitrogen</td><td>15524-010</td><td></td></tr><tr><td>ティッシュペーパー</td><td>エリート</td><td></td><td></td></tr><tr><td>トリプトース</td><td>メルク</td><td>1106760500</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>BioRad</td><td>1610719</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Biopack</td><td>2003-07</td><td>ポリソルベート 20</td></tr><tr><td>真空ポンプ</td><td>Silfab</td><td>N33-A</td><td></td></tr><tr><td>Vero細胞</td><td>ATCC</td><td>CRL-1587</td><td></td></tr><tr><td>Vortex MIxer</td><td>Dragon Lab</td><td>MX-S</td><td></td></tr></tbody></table>

trypanosoma cruziの3つのin vitroライフサイクルステージにおける超微細構造拡大顕微鏡

Ultrastructural Expansion Microscopy in Three In Vitro Life Cycle Stages of Trypanosoma cruzi

プロトコールが適切に実施されている場合(図1)、サンプルは平面的で半透明のゲルとして表示され、水中で最大4〜4.5倍まで拡張できます(図3A)。この膨張により、約70nmの有効分解能が得られましたが、これは最終的な膨張係数と使用するイメージングシステムによって異なる場合があります。2回目の拡大プロセスと共焦点顕微鏡での画像取得の後、約4.5の拡張係数を観察することができました。この膨張を定量化するために、ステップ7.1の前後でゲルを測定しました。また、非拡大寄生虫および拡大寄生虫のα-チューブリン抗体でエピマチゴテを標識しました(図3B)。
抗チューブリン抗体のような細胞骨格マーカーで染色したところ、エピマスティゴート、トリポマスティゴート、アマスチゴートにおいて、微小管の膜下コルセットとべん毛軸索におけるこのタンパク質の正しい局在が観察され、T. cruziの3つのin vit...

Trypanosoma cruziの3つのIn Vitroライフサイクルステージにおける超微細構造拡大顕微鏡

We describe here the application of ultrastructure expansion microscopy (U-ExM) in Trypanosoma cruzi, a technique that allows increasing the spatial ...

ultrastructural-expansion-microscopy-three-vitro-life-cycle-stages

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

このプロトコルでは透明なゼブラフィッシュ幼虫に蛍光に分類されたt.

調査cruzi トリパノソーマの原因運動In Vivo動物モデルとしてのゼブラフィッシュ稚魚の確立

シャーガス病のcruziエージェントには、長期的な無症候性感染症臨床的に認められた病理に突然発展するが生成されます。次の研究プロトコルでは、親から子孫に性的送信T.

男性と女性からのナイーブの仲間にアメリカトリパノソーマの性行

ここでは、CRISPR/Cas9システムを用いてトリパノノーマ・クルジの細胞外アマスティゴテに遺伝子ノックアウトを導入するプロトコルについて述べた。成長表現型は、アックスアンマスティゴテ培養の細胞カウントまたは宿主細胞侵入後の細胞内アマスティゴテスの増殖のいずれかによって追跡することができる。...

CRISPR/Cas9システムを用いたトリパノソマ・クルジのアマスティゴットステージに遺伝子ノックアウトを直接導入

シャーガス病の原因物質である トリパノソーマ・クルジの3つのライフサイクル段階におけるβ-ガラクトシダーゼ活性を測定するハイスループット比色アッセイについて述べる。このアッセイは、トリパノサイド化合物を容易、迅速、かつ再現性のある方法で同定するために使用することができる。...

インビトロ β-ガラクトシダーゼを発現する寄生虫を用いた トリパノソーマクルジ のすべてのライフサイクル段階に対する薬物スクリーニング

本プロトコルは、無傷で除去された臓器および組織における増殖および休眠中の トリパノソーマクルジ...

無傷の清澄化臓器における トリパノソーマクルジ感染細胞、休眠中のアマスティゴート、およびT細胞の定量的3Dイメージング

ここで提供されるプロトコルは、 Trypanosoma cruzi...

薬効研究のためのシャーガス病モデルマウスのIn vivo生物発光イメージングの謎解き

ママはmagnetosome活性化に関与することが示されていたユニークなMagnetosome関連するタンパク質である。ここでは、からママ欠失変異体（MamAΔ41）の精製のプロトコールを提示...

の精製 M. magneticum株AMB - 1 Magnetosome関連タンパク質MamAΔ41

この記事では、線虫の胚発生の初期のイベントの可視化のための手法について説明...

の初期発生のタイムラプス顕微鏡線虫（Caenorhabditis elegans）

造血幹細胞および前駆細胞（HSPCs）および骨髄ニッチの間の相互作用の性質は、ほとんど理解されている。カスタムハードウェアの修正および多段階取得プロトコルは、ex vivo画像骨髄エリア内ホーミング標識HSPCs、追跡相互作用及び運動に二光子共焦点顕微鏡の使用を可能にする。...

成体マウス頭蓋冠骨髄中の造血幹細胞および前駆細胞のin vivo 4次元トラッキングで

この原稿は、透過型電子顕微鏡により懸濁細胞を可視化するために使いやすく、低コストの低温固定の方法を記載しています。...

プランジ凍結：透過型電子顕微鏡での懸濁細胞の超微細構造と免疫学的研究のためのツール

学ぶ Trypanosoma cruziの3つのin vitroライフサイクルステージにおける超微細構造拡大顕微鏡法。ナノスケール構造の3次元再構成を可能にし、従来の顕微鏡で高解像度イメージングを実現する革新的なプロトコルです。

Trypanosoma cruziの3つのIn Vitroライフサイクルステージにおける超微細構造拡大顕微鏡

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