Name: 実験的自己免疫性脳脊髄炎における自己抗原の免疫原性増強における 抗酸菌パラ結核の アジュバント活性 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-12T14:55:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: 学ぶ実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）誘導法。C57BL/6マウスを用い、抗酸菌パラ結核をアジュバントとして自己抗原の免疫原性を増強する手法を解説。神経疾患の病態理解と治療戦略開発に貢献します。

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本研究は、日本学術振興会の助成を受けています(助成番号。特開23K14675)。

すべてのマウス実験は、順天堂大学医学部の施設動物管理使用委員会(承認番号290238)によって承認され、国立衛生研究所の動物実験ガイドラインに従って実施されました。
1.実験に関する一般的なコメント
<ol><li>動物施設の個々のケージにマウスを、23°C±2°C、湿度50%±10%の制御された病原体のない条件下で、餌と水への 自由摂取 を伴う12時間の明暗サイクルで飼育します。</li>
	<li>抗原およびCFAを含まないリン酸緩衝生理食塩水(PBS)をマウスに注射し、それぞれ陰性対照および陽性対照として使用する。</li>
</ol>2. マイコバクテリア抗原の調製
<ol><li>10%OADC(オレイン酸、アルブミン、デキストロース、カタラーゼ)、0.005%Tween 80、および2 mg / LのマイコバクチンJが豊富なミドルブルック液体培地7H9で、37°CのT25組織培養フラスコで2週間、M .パラ結核K-10 株を増殖させます。 目視検査でコロニーの成長を定期的に評価します。 注意: パラ結核菌 は、バイオセーフティレベル2(BSL-2)施設で取り扱ってください。</li>
	<li>濃縮培養器500 mL三角フラスコを、1.7 × 105 コロニー形成単位(CFU)/mLの懸濁液とともに、最終容量200 mL(ステップ2.1と同じ培地)で1週間振とう培養器で増殖させます。 注:汚染生物が結果に影響を与える可能性があるため、細菌をミドルブルック7H10固体培地に接種して、コロニーの形態を決定し、 パラ結核菌の従来のポリメラーゼ連鎖反応(PCR)検出キットで純度を確認する必要があります。</li>
	<li>細菌懸濁液を70°Cで5〜10分間不活化し、3,000 × g で10分間遠心分離します。秤量したペレットをPBSで2回洗浄し、超音波処理により破砕し、-20°Cで保存した。</li>
	<li>ペレットを滅菌容器に移し、ドライアイスまたは液体窒素で凍結します。すぐに凍結乾燥チャンバーに移します。</li>
	<li>凍結乾燥(真空下で-50°Cで4時間)機械のマニュアルに従った M.パラ結核 。</li>
	<li>凍結乾燥が終了したら、凍結乾燥機からステンレス鋼容器を取り出し、バイオクリーニングベンチに移します。ステンレス容器の内壁に付着した乾燥したMAPの塊をステンレスヘラで取り除き、できるだけ細かく粉砕します。</li>
	<li>電子天秤を使用して粉砕細胞を計量し、10 mg/mLの濃度の無菌10 mLバイアルに手動で入れます。 注:細胞密度は、サンプル1リットルあたりの乾燥重量のグラム数として定量化しました。3週間後、1 mg(湿重量)の細菌細胞ペレットには、約2.5 × 108 CFU が含まれています。.</li>
</ol>3. MOG 35-55 エマルジョンの調製
<ol><li>乾燥した パラ結核菌 (10 mg)のバイアル1本の内容物を乳鉢と乳棒で微粉末に粉砕し、不完全なフロイントアジュバントに10 mLを加えて10 mg/mLのストック溶液を得ます。-4°Cで保存してください。</li>
	<li>免疫化の前に、ストック溶液を最終濃度4 mg/mLに希釈してください。</li>
	<li>ペプチドMOG35-55 をddH2Oで最終濃度2 mg/mLに希釈し、-20°Cで保存します。</li>
	<li>ホモジナイザーを使用して、MOG35-55 溶液(2 mg/mL)をステップ3.2の等量のアジュバント(4 mg/mL)と5 mLチューブ内で濃厚なエマルジョンが形成されるまで混合します。10秒の混合ごとに、溶液を氷の上に20秒間置き、チューブを回転させてすべての溶液を回収します。</li>
	<li>エマルジョンを1 mLシリンジに移し、すべての空気を取り除き、27 Gの針を追加します。これでエマルジョンは注射の準備が整いました。 手記。調製中にMOG35-55 の粘性エマルジョンのいくらかの損失が起こるので、必要な量の1.5倍を調製することが最善である。</li>
</ol>4.動物の予防接種
<ol><li>動物へのストレスを最小限に抑えるために、イソフルランを吸入して動物に麻酔をかけます。</li>
	<li>エマルジョン(200μL/マウスのMOG35-55)を腰部に皮下注射します。</li>
	<li>百日咳毒素(200 ng /マウスを含む100 μL)の用量を、免疫後0日目と2日目に腹腔内投与します。. 注意:百日咳毒素は免疫系に複数の抑制効果があります。摂取や目や皮膚との接触を避けてください。</li>
</ol>5.臨床評価
<ol><li>マウスの体重と臨床徴候を毎日監視します。.次のスコアリングシステムを使用します:0 =臨床徴候なし。1 =弛緩した尾。2 =右反射の障害および後肢の衰弱。3 =後肢の完全な麻痺;4 =前肢の部分的な麻痺を伴う後肢の完全な麻痺;5 =瀕死の状態。 注:臨床徴候の最初の観察時に、動物は水と食物へのアクセスの増加を提供されます。げっ歯類のチャウチャウを柔らかくして湿らせてから、フードホッパーからケージの床に置きます。脱水動物の場合、皮下液補給が投与されるか、またはげっ歯類の固形飼料スラリーが経口経管栄養を介して与えられる。マウスがこの種の援助を3日以上必要とする場合、安楽死が行われます。</li>
	<li>動物の痛みや苦痛を回避または最小限に抑えるには、次の人間のエンドポイントを使用します:体重減少が20%を超える、臨床スコア≥4.0、スコア3での右反射の欠如、および動物が24時間飼料または水にアクセスできない場合。 注:マウスは、ペントバルビタール(≥150 mg / kg)の腹腔内注射によるEAE誘導後30日目に安楽死させました。</li>
</ol>

自己免疫性脳脊髄炎における マイコバクテリウム・パラ結核 による免疫原性増強

<ol><li>Bittner, S., Afzali, A. M., Wiendl, H., Meuth, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin+oligodendrocyte+glycoprotein+%28MOG35-55%29+induced+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+%28EAE%29+in+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG35-55) induced experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (86), e51275(2014).</li>
<li>Constantinescu, C. S., Farooqi, N., O'Brien, K., Gran, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+autoimmune+encephalomyelitis+%28EAE%29+as+a+model+for+multiple+sclerosis+%28MS%29%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) as a model for multiple sclerosis (MS).</a> British Journal of Pharmacology. 164 (4), 1079-1106 (2011).</li>
<li>Lu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pertussis+toxin+induces+angiogenesis+in+brain+microvascular+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Research%22%5BJournal%5D)">Pertussis toxin induces angiogenesis in brain microvascular endothelial cells.</a> Journal of Neuroscience Research. 86 (12), 2624-2640 (2008).</li>
<li>Awate, S., Babiuk, L. A., Mutwiri, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+action+of+adjuvants%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of action of adjuvants.</a> Frontiers in Immunology. 4, 114(2013).</li>
<li>Kubota, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adjuvant+activity+of+Mycobacteria-derived+mycolic+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Heliyon%22%5BJournal%5D)">Adjuvant activity of Mycobacteria-derived mycolic acids.</a> Heliyon. 6 (5), e04064(2020).</li>
<li>Nicolo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+tuberculosis+in+the+adjuvant+modulates+the+balance+of+Th+immune+response+to+self-antigen+of+the+CNS+without+influencing+a+%26%2334%3Bcore%26%2334%3B+repertoire+of+specific+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunology%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium tuberculosis in the adjuvant modulates the balance of Th immune response to self-antigen of the CNS without influencing a &#34;core&#34; repertoire of specific T cells.</a> International Immunology. 18 (2), 363-374 (2006).</li>
<li>O'Connor, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adjuvant+immunotherapy+of+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%3A+immature+myeloid+cells+expressing+CXCL10+and+CXCL16+attract+CXCR3%2BCXCR6%2B+and+myelin-specific+T+cells+to+the+draining+lymph+nodes+rather+than+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Adjuvant immunotherapy of experimental autoimmune encephalomyelitis: immature myeloid cells expressing CXCL10 and CXCL16 attract CXCR3+CXCR6+ and myelin-specific T cells to the draining lymph nodes rather than the central nervous system.</a> Journal of Immunology. 188 (5), 2093-2101 (2012).</li>
<li>Libbey, J. E., Fujinami, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+autoimmune+encephalomyelitis+as+a+testing+paradigm+for+adjuvants+and+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Experimental autoimmune encephalomyelitis as a testing paradigm for adjuvants and vaccines.</a> Vaccine. 29 (17), 3356-3362 (2011).</li>
<li>Cossu, D., Yokoyama, K., Hattori, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conflicting+role+of+Mycobacterium+species+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neurology%22%5BJournal%5D)">Conflicting role of Mycobacterium species in multiple sclerosis.</a> Frontiers in Neurology. 8, 216(2017).</li>
<li>Cossu, D., Yokoyama, K., Sakanishi, T., Momotani, E., Hattori, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adjuvant+and+antigenic+properties+of+Mycobacterium+avium+subsp.+paratuberculosis+on+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroimmunology%22%5BJournal%5D)">Adjuvant and antigenic properties of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis on experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Journal of Neuroimmunology. 330, 174-177 (2019).</li>
<li>Biet, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipopentapeptide+induces+a+strong+host+humoral+response+and+distinguishes+Mycobacterium+avium+subsp.+paratuberculosis+from+M.+avium+subsp.+avium%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Lipopentapeptide induces a strong host humoral response and distinguishes Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis from M. avium subsp. avium.</a> Vaccine. 26 (2), 257-268 (2008).</li>
<li>Cossu, D., Yokoyama, K., Tomizawa, Y., Momotani, E., Hattori, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+humoral+immunity+to+mycobacterial+antigens+in+Japanese+patients+affected+by+inflammatory+demyelinating+diseases+of+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Altered humoral immunity to mycobacterial antigens in Japanese patients affected by inflammatory demyelinating diseases of the central nervous system.</a> Scientific Reports. 7 (1), 3179(2017).</li>
<li>Cossu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mucosal+immune+response+induced+by+oral+administration+of+heat-killed+Mycobacterium+avium+subsp.+paratuberculosis+exacerbates+EAE%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroimmunology%22%5BJournal%5D)">A mucosal immune response induced by oral administration of heat-killed Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis exacerbates EAE.</a> Journal of Neuroimmunology. 352, 577477(2021).</li>
<li>Cossu, D., Yokoyama, K., Sakanishi, T., Sechi, L. A., Hattori, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacillus+Calmette-Guerin+Tokyo-172+vaccine+provides+age-related+neuroprotection+in+actively+induced+and+spontaneous+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+models%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Immunology%22%5BJournal%5D)">Bacillus Calmette-Guerin Tokyo-172 vaccine provides age-related neuroprotection in actively induced and spontaneous experimental autoimmune encephalomyelitis models.</a> Clinical and Experimental Immunology. 6, (2023).</li>
</ol>

著者は、開示すべき利益相反はありません。

パラ結核菌10を含むアジュバントで乳化したペプチドMOG35-55を使用して、C57BL / 6Jマウスで重度のEAEを積極的に誘導するための堅牢な代替プロトコルを実証しました。この方法によるEAEの誘導は、CFAとの共通プロトコールによって誘発されたものよりも重篤な疾患をもたらした。この違いは、抗酸菌11の細胞壁における脂質成分の違いに起因する可能性がある。実際、他の抗酸菌とは異なり、パラ結核菌は、グリコペプチド脂質の代わりに細胞壁表面にリポペンタペプチド抗原を産生します11。このリポペンタペプチドは、他の密接に関連する種と交差反応せず、自己免疫疾患患者における強い特異的体液性応答の標的であることが示されています12。マイコバクテリアは、免疫応答において異なる役割を果たす病原体関連分子パターンを有する9.例えば、パラ結核菌に...

実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)は、ヒト脱髄障害の研究のための一般的なモデルです1。EAEにはいくつかのモデルがある:強力なアジュバントと組み合わせた異なるミエリンペプチドを用いた能動免疫、ミエリン特異的CD4+リンパ球のin vitro導入による受動免疫、および自発的EAE2のトランスジェニックモデル。これらの各モデルには、発症期、エフェクター期、慢性期など、EAEのさまざまな側面を研究できる特定の機能があります。EAEのミエリン希突起膠細胞糖タンパク質(MOG)モデルは、単核炎症浸潤、末梢白質における脱髄、および疾患ピーク1後の回復の低下を特徴とするため、慢性神経炎症および脱髄の免疫媒介メカニズムを研究するための優れたモデルです。
MOG-EAEは、完全フロイントアジュバント(CFA)中のペプチドMOG35-55 で感受性マウスを免疫し、続いて百日咳毒素を腹腔内注射することによって誘導されます。これにより、血液脳関門の透過性が高まり、末梢で活性化されたミエリン特異的T細胞が中枢神経系(CNS)に到達し、そこで再活性化されます3。CFAは、抗原提示細胞による抗原の取り込みと、体液性および細胞を介した応答に関連するサイトカインの発現を増強することにより、EAEの誘導に重要な役割を果たします4。このメカニズムは、主に油中に乳化された 結核 菌の死滅の存在によるものであり、その成分は免疫系に強い刺激を与える5。実際、EAEの誘導は、抗原チャレンジ6中に存在するマイコバクテリウムの量に直接関係しています。
不完全なフロイントアジュバント7へのマイコバクテリウム・ブチリカムなどの他の死滅抗酸菌の添加、およびアジュバントの組み合わせ8の効果は、EAEの臨床経過を調節し、その結果、結果の再現性に影響を与える可能性があります。反芻動物のヨーネ病の病因物質であるマイコバクテリウム・アビウム亜種パラ結核(MAP)は、その抗原成分が多発性硬化症および視神経脊髄炎スペクトラム障害の患者において強力な体液性および細胞性応答を誘発することができるため、ヒトCNS9の炎症性疾患と関連している9。したがって、このプロトコルでは、CFAの結核菌をパラ結核菌に置き換えることにより、MOG-EAEを誘導するための代替的で再現性のある方法を示します。

<table><tbody><tr><td>抗マウスCD115抗体</td><td>Biolegend、米国</td><td>細胞</td><td>蛍光測定用135505 1:1,000</td></tr><tr><td>抗マウスCD11b抗体</td><td>Biolegend、米国</td><td>101215</td>細胞<td>蛍光測定用 1:1,000</td></tr><tr><td>抗マウスCD11c抗体</td><td>Biolegend、米国</td><td>117313</td>細胞<td>蛍光測定用1:1,000</td></tr><tr><td>抗マウスCD16/32&nbsp; 抗体</td><td>Biolegend、米国</td><td>101302</td><td>細胞蛍光測定 1:1,000</td></tr><tr><td>抗マウス CD4&nbsp; 抗体</td><td>Biolegend, 米国</td><td></td><td>116004 細胞蛍光測定用 1:1,000</td></tr><tr><td>抗マウス CD8a&nbsp; 抗体</td><td>Biolegend, 米国</td><td>100753</td><td>細胞蛍光測定 1:1,000</td></tr><tr><td>抗マウス I-A/I-E 抗体</td><td>Biolegend, 米国</td><td>107635</td><td>細胞蛍光測定 1:1,000</td></tr><tr><td>抗マウス Ly-6C&nbsp; 抗体</td><td>Biolegend, 米国</td><td></td><td>細胞蛍光測定用128023 1:1,000</td></tr><tr><td>BBL Middlebrook OADC Enrichment</td><td>Thermo Fisher Scientific, USA</td><td>BD 211886</td><td>for isolation and cultivation of mycobacteria</td></tr><tr><td>C57BL/6J mice</td><td>Charles River Laboratory, Japan</td><td></td><td>3 weeks old, オスとメス</td></tr><tr><td>FBS 10279-106</td><td>Gibco Life Techologies, USA</td><td>42F9155K</td><td>細胞培養用, 37°C;C</td></tr><tr><td>凍結乾燥機</td><td>Eyela、東京、日本</td><td>FDU-1200</td><td>細菌凍結乾燥</td></tr><tr><td>不完全eフロイントのための使用前アジュバント</td><td>Difco Laboratories, MD, USA</td><td>263810</td><td>for use in adjuvant</td></tr><tr><td>Middlebrook 7H9 Broth</td><td>Difco Laboratories, MD, USA</td><td>90003-876</td><td>help in the growth of</td></tr><tr><td>Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis K-10</td><td>ATCC, USA</td><td>BAA-968</td><td>bacteria from usine origin</td></tr><tr><td>Mycobacterium tuberculosis H37 Ra, Desiccated</td><td>BD Biosciences, USA</td><td>743-26880-EA</td><td>アジュバント</td></tr><tr><td>マイコバクチンJ</td><td>連合研究所、ミズーリ州、米国</td><td></td><td>成長促進剤</td></tr><tr><td>ミエリンオリゴデンドロサイト糖脂質(MOG)35-55</td><td>AnaSpec、米国</td><td>AS-60130-10</td><td>脳炎ペプチド</td></tr><tr><td>オボアルブミン(257-264)</td><td>シグマアルドリッチ、米国</td><td>S7951-1MG</td><td>陰性対照抗原&nbsp;増殖アッセイ</td></tr>百<tr><td>日咳毒素溶液</td>富士<td>フイルム和光、大阪日本</td><td>168-22471</td><td>グラム陰性菌 Bordetella pertussiから、血液脳関門透過性を増加</td></tr>させる <tr><td>ポリトロンホモジナイザー PT 3100</td> 抗原<td>をアジュバントと</td>混合するための<td>キネマティカ</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 L-グルタミン</td><td>Gibco Life Techologies, USA</td><td>11875093</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>用 チミジン、[メチル-3H]、2% エタノール、1 mCi</td><td>PerkinElmer, Waltham, MA, USA</td><td>NET027W001MC</td><td>増殖アッセイ用, 使用 (1 &mu;Ci/well)</td></tr><tr><td>Zombie NIR Fixable Viability Kit</td><td>Biolegend, USA</td><td>423105</td><td>&nbsp;細胞蛍光測定, 細胞生存率</td></tr></tbody></table>

実験的自己免疫性脳脊髄炎における自己抗原の免疫原性増強における 抗酸菌パラ結核の アジュバント活性

Adjuvant Activity of Mycobacterium paratuberculosis in Enhancing the Immunogenicity of Autoantigens During Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

ミエリン希突起膠細胞糖タンパク質(MOG)によって誘発される実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)は、不活化 結核菌を含む完全フロイントアジュバント(CFA)で乳化したMOGペプチドによる免疫を必要とします。マイコバクテリウムの抗原成分は樹状細胞を活性化してT細胞を刺激し、トール様受容体 を介して Th1応答を促進するサイトカインを産生します。したがって、抗原チャレンジ中に存在するマイコバクテリアの量と種は、EAEの発生に直接関係しています。このメソッド論文は、加熱死菌ア ビウム 亜種 パラ結核 株K-10を含む改変不完全フロイントアジュバントを使用してC57BL/6マウスにEAEを誘導するための代替プロトコルを提示します。
マイコバクテリウム・アビウム複合体のメンバーであるM.パラ結核は、反芻動物のヨーネ病の原因物質であり、多発性硬化症を含むいくつかのヒトT細胞媒介性疾患の危険因子として同定されています。全体として、抗酸菌パラ結核を免疫したマウスは、結核菌H37Ra株を含むCFAを同じ用量の4 mg / mLで免疫したマウスよりも発症が早く、疾患の重症度が高かった。マイコバクテリウム・アビウム亜種パラ結核(MAP)株K-10の抗原決定基は、Tリンパ球(CD4+ CD27+)、樹状細胞(CD11c+ I-A/I-E+)、および単球(CD11b+ CD115+)の数が有意に多いことを特徴とする、エフェクター期に強力なTh1細胞応答を誘導することができました)CFAで免疫したマウスと比較した脾臓における。さらに、MOGペプチドに対する増殖性T細胞応答は、M.パラ結核免疫マウスで最も高かったようです。製剤中のパラ結核菌を含むアジュバント中で乳化された脳炎原(例えば、MOG35-55)の使用は、EAEの誘導段階でミエリンエピトープ特異的CD4+ T細胞をプライミングするための樹状細胞を活性化するための代替的かつ検証された方法であり得る。

C57BL/6マウスの群(合計n = 15/群)を、パラ結核菌を含むエマルジョン中のMOG35-55で、またはCFAとの一般的な方法で免疫した。マウスのすべてのグループは、14〜17日で観察された障害の単一のピークを特徴とする急性単相性疾患を示し、その後10日間にわたって症状が部分的に回復しました(図1A)。パラ結核菌を含むアジュバントで免疫したマウスは、性別に関係なく、CFAで免疫したマウスよりも免疫後8〜9日目に発症が早く、急性期に重症度が高かった(図1B)。群間で体重に有意差はなかった(図1C)。EAEマウス由来の脾臓細胞の細胞蛍光分析および3H-チミジン取り込みによって評価されたTリンパ球の増殖活性が、以前に発表されたように実施された11。EAEマウスのすべての...

ここでは、加熱死菌菌アビウム亜種パラ結核を含む不完全フロイントアジュバントに懸濁した免疫原性エピトープミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質(MOG)35-55を使用して、C57BL/6マウスで実験的自己免疫性脳脊髄炎を積極的に誘導するための代替プロトコルを提示します。

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) induced by myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) requires immunization by a MOG peptide emulsified in ...

私たちは、相互作用性疾患を有する運動障害患者の治療を改善するために、専門家によって開発された新しい技術を用いて、いくつかの神経疾患の病因を研究しました。私たちの研究の一部は、病原体の役割と、遺伝的要因と環境要因の複雑な相互作用を特徴とする多発性硬化症やNMOSDなどの新しい炎症性疾患の病因に焦点を当てています。さまざまな病原体がこれらの疾患に関連していますが、それらの役割は不明です。我々は、マイコバクテリウム鳥類細胞種のパラ結核の抗原成分が、多発性硬化症患者において強い体液性および細胞性応答を誘発できることを発見しました。さらに、EAEモデルにおいて、マイコバクテリアが腸管免疫脳軸に作用することで、内訳自己遺伝子電位を提供することを実証しました。我々は、抗酸菌パラ結核が活性型EAEの誘導における強力なアジュバント候補として同定され、不活化結核菌よりも重篤な疾患をもたらした。この違いは、マイコバクテリウム・パラ結核が糖ペプチド脂質の代わりに細胞壁表面にリポペンタペプチド抗原を産生するためである可能性があります。今後は、末梢神経系と中枢神経系の免疫応答のクロストークを解明し、感染を介した神経炎症のメカニズムを理解することを目標としています。このために、我々は神経炎症のユニークな遺伝学モデルを開発していました。

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Research

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免疫学と感染症

DAラットの慢性再発性実験的自己免疫性脳脊髄炎：このビデオでは、多発性硬化症の動物モデルの誘導と臨床スコアを示しています。全体ラット脊髄と完全フロイントアジュバントを含むエマルジョンをラットを免疫することにより誘導される疾患は、、人間の病気に似た臨床症状を示しています。...

誘導および慢性-再発実験的自己免疫性脳脊髄炎の臨床スコアリング

このビデオは、マウスモデルで実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)を誘発するための抗原アジュバントエマルジョンを生成する効率的な均質化技術を示しています。このエマルジョンは、水相に自己抗原であるミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質(MOG)を含み、不活化病原菌を含む連続的な油相に囲まれています。エマルジョンは、抗原の持続的な放出を確保し、免疫応答を持続させます。...

自己免疫性脳脊髄炎を誘発するための抗原アジュバントエマルジョンの調製

このビデオは、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質と不活性化結核菌の組み合わせを注入することにより、マウスモデルで実験的な自己免疫性脳脊髄炎を誘発する方法を示しています。このモデルにより、研究者は疾患のメカニズムを研究し、治療的介入をテストすることができます。...

マウスモデルにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎の誘導

このビデオは、ミエリン由来のペプチドにアジュバントを注入して自己反応性T細胞を活性化し、脳に移動することにより、実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)を誘発する方法を示しています。百日咳毒素は、血液脳関門の透過性を高めるために投与され、これらのT細胞や他の免疫細胞が脳に入ることを可能にします。これらの免疫細胞は脱髄を引き起こし、神経伝達の障害とEAEの発症につながります。...

マウスモデルにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎の生成

このビデオでは、実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)を使用して多発性硬化症のマウスモデルを確立しています。マウスにニューロンペプチドとアジュバントを含むエマルジョンを注入すると、自己反応性T細胞を活性化する免疫応答が引き起こされます。これに続いて、百日咳毒素(PTX)を注射して血液脳関門の透過性を高め、自己反応性T細胞が脳に浸潤できるようにします。この浸潤は、最終的にミエリン損傷をもたらすシグナル伝達カスケードを開始し、多発性硬化症の脱髄状態を模倣しています。...

実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）は、多発性硬化症の確立された動物モデルである。 C57BL / 6マウスは、中枢神経系における自己反応性免疫細胞によって引き起こさ昇順弛緩性麻痺をもたらす、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（MOG）ペプチド35-55（MOG 35-55）で免疫する。疾患の誘導およびモニタリングのためのプロトコルを説明する。...

ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（MOG<sub&gt; 35〜55</sub&gt;）C57BL / 6マウスにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）誘発

この原稿は、実験的な自己免疫性脳脊髄炎(EAE)モデルの誘導と採点の方法、およびさまざまな疾患段階におけるフローサイトメトリーと定量的PCRをそれぞれ使用して、リンパ節、脾臓、血液、脊髄の免疫細胞分布とmRNAサイトカインレベルの評価を説明しています。...

マウスおよび種々の組織における免疫細胞の疾患に依存する分布の評価における実験的自己免疫性脳脊髄炎の誘導

私たちは、マウスのミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質を含む融合タンパク質を大量に生成し精製するための基本的な実験装置のみを使用した簡単なプロトコルを記述します。このタンパク質は、T細胞とB細胞の両方によって引き起こされる実験的自己免疫性脳脊髄炎を誘発するために使用できます。...

実験的自己免疫性脳脊髄炎研究のためのシンプルで効率的な生産とマウスミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質の精製

本プロトコルは、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質を使用し、臨床スコアリングシステムを使用して疾患プロセスをモニタリングするマウスモデルにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎の誘発を記載しています。実験的自己免疫性脳脊髄炎関連症状は、マウス大腿骨マイクロコンピューター断層撮影分析とオープンフィールドテストを使用して分析され、疾患プロセスを包括的に評価します。...

実験的自己免疫性脳脊髄炎の誘導と多様な評価指標

多発性硬化症の動物モデルである実験的自己免疫性脳脊髄炎を誘発するために、マウスを自己抗原および完全なフロイントアジュバントを含む油中水型エマルジョンで免疫する。これらのエマルジョンの調製にはいくつかのプロトコルがありますが、ここでは、エマルジョン調製のための迅速で単純で標準化された均質化プロトコルを示します。...

実験的自己免疫性脳脊髄炎を誘発するための抗原/アジュバントエマルジョンを調製するための迅速、簡便、標準化されたホモジナイズ法

実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)は、多発性硬化症(MS)の動物モデルであり、ヒトの疾患と強力な体液性自己免疫応答を共有しています。ここでは、EAE免疫マウスの血清中の自己抗体を定量するためのシンプルで柔軟なELISAプロトコルを報告します。...

実験的自己免疫性脳脊髄炎に対するマウスにおける自己反応性抗体の定量化

学ぶ実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）誘導法。C57BL/6マウスを用い、抗酸菌パラ結核をアジュバントとして自己抗原の免疫原性を増強する手法を解説。神経疾患の病態理解と治療戦略開発に貢献します。

実験的自己免疫性脳脊髄炎における自己抗原の免疫原性増強における抗酸菌パラ結核のアジュバント活性

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実験的自己免疫性脳脊髄炎における自己抗原の免疫原性増強における 抗酸菌パラ結核の アジュバント活性

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