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リ モシラクトバチルス・ロイテリ におけるエレクトロポレーションと形質転換確認の方法 DSM20016
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JoVE Journal Bioengineering
Methods for Electroporation and Transformation Confirmation in Limosilactobacillus reuteri DSM20016

リ モシラクトバチルス・ロイテリ におけるエレクトロポレーションと形質転換確認の方法 DSM20016

Full Text
4,935 Views
11:04 min
June 23, 2023

DOI: 10.3791/65463-v

Alexander Duggan1, David McMillen1

1University of Toronto Mississauga

AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

ここでは、 Limosilactobacillus reuteri DSM20016を使用するためのプロトコル、増殖、プラスミド形質転換、コロニーPCR、蛍光レポータータンパク質測定、および限定的なプラスミドミニプレップ、および一般的な問題とトラブルシューティングについて詳しく説明します。これらのプロトコルにより、DSM20016中のレポータータンパク質の測定、またはレポーターが関与しない場合はコロニーPCR による 確認が可能になります。

L.Reuteri、特にこの株DSM20016は、堅牢で自然なヒト腸の共生であり、胃腸管全体での治療的送達と疾患の検出に大きな期待を寄せています。この作業は、DSM20016をこの種のアプリケーションの合成生物学シャーシとして位置付けるのに役立ちます。乳酸桿菌には特定のモデル生物はありません。

好ましい種は存在しますが、それらは通常、特定の研究目的に偏って選択されます。細菌ファミリー内の変異は断片化されたプロトコルにつながり、一部は出版物をさかのぼって変更を繰り返しています。初心者にとって、何が有用で何が役に立たないかを正確にフィルタリングすることは非常に困難です。

DSM20016の変容のための1つの論文は存在しますが、それは現代的ではありません。他のラクトバチラレスファミリーメンバーのための最新のプロトコルは存在しますが、それらはDSM20016されていません。ここでは、DSM20016エレクトロポレーションのための使いやすく、一元化された、最新のプロトコルの完全なセットを提供するよう努めています。

このプロトコルセットは、以前のDSM20016探査プロトコルよりも大幅に近代化され、いくつかのぶら下がっているスレッドを解明し、以前はあまり明確ではなかった部分を強調します。プロトコルセットも完全であり、特にDSM20016については、他の非DSM20016プロトコルが完全に互換性がない株です。私たちの主な目標の1つは、微生物を安価なセンサーおよびデリバリーシステムとして使用することです。

私たちは腸疾患の専門家と協力して、DSM20016を使用して胃腸管の状態を感知し、必要に応じて治療法を提供しています。

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