Name: ナイーブおよびエフェクターCD8 T細胞のミトコンドリア機能の測定 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: 学ぶミトコンドリア機能測定法。Mito Stress Testを用いてナイーブおよびエフェクターCD8 T細胞のバイオエネルギクスをリアルタイムで解析し、リゾホスファチジン酸が代謝柔軟性に与える影響を評価する。

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<table><tbody><tr><td>アンチマイシン A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8674</td><td></td></tr><tr><td>抗CD28</td><td>Biolegend</td><td>102116</td><td></td></tr><tr><td>抗CD3/CD28 Dynabeads</td><td>サーモフィッシャー</td><td>11456D</td><td></td></tr><tr><td>ビオチン化抗CD3</td><td>バイオレジェンド</td><td>317320</td><td></td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>108321-42-2</td><td></td></tr><tr><td>CD8a+ T細胞単離キット</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-104-075</td><td></td></tr><tr><td>セルストレーナー (100 & マイクロ;m)</td><td>CELL TREAT</td><td>229485</td><td></td></tr><tr><td>エチレンジアミン四酢酸</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E8008</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>26873-85-8</td><td>密度勾配培地&nbsp;</td></tr><tr><td>FCCP((4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)カルボノヒドラゾノイルジシアン化物)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2920</td><td></td></tr><tr><td>グルコース</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-6152</td><td></td></tr><tr><td>グルタミン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>LSカラム</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>ポジティブセレクションカラム</td></tr><tr><td>磁気細胞分離カラム</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-301</td><td></td></tr><tr><td>マイクロプレート</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr><tr><td>オリゴマイシン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>75351</td><td></td></tr><tr><td>ピルビン酸</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>113-24-6</td><td></td></tr><tr><td>レコビナント IL-2</td><td>PeproTech</td><td>200-02</td><td></td></tr><tr><td>ロテノン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8875</td><td></td></tr><tr><td>タツノオトシゴ メディア</td><td>Agilent</td><td>103576-100</td><td></td></tr><tr><td>センサーカートリッジ</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr><tr><td>ストレプトアビジン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9275</td><td></td></tr><tr><td>滅菌済み 6 ウェルプレート</td><td>CELL TREAT</td><td>230601</td><td></td></tr><tr><td>滅菌済み 24 ウェルプレート</td><td>CELL TREAT</td><td>229524</td><td></td></tr><tr><td>XF Calibrant</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr></tbody></table>

ナイーブおよびエフェクターcd8 t細胞のミトコンドリア機能の測定

Measuring Mitochondrial Function of Na&#239;ve and Effector CD8 T Cells

解糖系および酸化的代謝能力は、特定の時点における電子伝達系の成分を標的とすることにより能力を評価するミトコンドリア機能アッセイを使用して測定できます(図2A)。センサーカートリッジポートにさまざまな注入スキームをロードして、従来のアッセイを変更し、急性TCR刺激を評価できます(図2B、C)。結果を解釈する前に、さまざまな細胞タイプの細胞数と薬物濃度を最適化する必要があります。ここで、このレポートでは、ナイーブ細胞とエフェクター細胞の両方の容量を測定するために最適化された電子伝達鎖の阻害剤を使用して、CD8 T細胞(図3A、B)に最適化された条件について説明します。重要なことに、このアッセイは、抗原特異的刺激または抗CD3/CD28刺激から生成されたエフェクターCD8 T細胞に対するTCR刺激を研究する...

ナイーブおよびエフェクターCD8 T細胞のミトコンドリア機能の測定

Understanding how immunometabolism impacts the function, differentiation, and fate of lymphocytes has garnered significant interest and attention. ...

measuring-mitochondrial-function-of-nave-and-effector-cd8-t-cells

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

細胞媒介のlymphocytotoxicity（CML）アッセイは、in...

傷害性Tリンパ球によって媒介ベータ細胞死を評価するための方法

このビデオは、細胞外フラックスアッセイを使用して、脳血管内皮(CVE)細胞のミトコンドリア機能の評価を示しています。CVE細胞は、細胞外フラックス細胞培養プレートに播種されます。細胞外フラックスセンサーは、バイオアナライザーにロードしてキャリブレーションする前に水和されます。次に、セルを含むプレートを解析のためにロードします。...

脳血管内皮細胞におけるミトコンドリア機能の評価

このプロトコルは、高感度の細胞ベースの細胞毒性アッセイについて説明しています。このアッセイは、エフェクターCD8+ T細胞の数が増加している場合の生標的CD4+ T細胞の頻度の減少を列挙することにより、抗原特異的CD8+...

細胞毒性活性を測定するための細胞ベースのフローサイトメトリーアッセイ

ここで説明するフローサイトメトリーによりげっ歯類組織分析から単離されたミトコンドリアの免疫標識によってミトコンドリア外膜タンパク質を検出および定量するための方法である。この方法は、ミトコンドリア亜​​集団の機能的側面を評価するために拡張することができる。...

単離されたミトコンドリアのフローサイトメトリーによる外膜タンパク質の免疫検出

この記事は、ミトコンドリアや細胞内のリソソームを定量化する強力な方法を示しています。リソソームやミトコンドリア固有染料表面マーカー蛍光に活用された抗体との組み合わせにより、初代培養細胞を用いた組織サンプルから収穫のような混合細胞集団におけるこれらのオルガネラの定量化フローサイトメトリー マルチ...

ミトコンドリア、リソソーム T 細胞のマルチカラー フロー フローサイトメトリーを用いた定量化

ここでは、モデル腫瘍抗原に対する細胞傷害性 T リンパ球 (CTL) 応答における immunodominance...

腫瘍特異的 CD8+ T 細胞応答における Immunodominance を研究するためのインビボ細胞毒性アッセイ

ここでは、生体内培養造血幹細胞およびT細胞におけるミトコンドリア質量および膜電位を測定する信頼性の高い方法について説明する。...

造血幹細胞とT細胞におけるミトコンドリア質量と膜電位の測定

代謝適応は、分化、持続性、および細胞毒性を決定するため、T細胞にとって基本的である。ここでは、サイトカイン分化型ヒト初代T細胞の エクスビボ でミトコンドリア呼吸をモニタリングするための最適化されたプロトコールが提示される。...

サイトカイン分化型ヒト初代T細胞におけるミトコンドリア呼吸のリアルタイムモニタリング

mtDNAの合成と分布を検出および定量するためのマルチウェルプレートフォーマットおよび自動免疫蛍光イメージングを使用して、細胞内のミトコンドリアDNA(mtDNA)代謝のダイナミクスを研究する手順について説明します。これはさらに、mtDNA代謝に対するさまざまな阻害剤、細胞ストレス、および遺伝子サイレンシングの影響を調べるために使用できます。...

ミトコンドリアDNA合成と分布のハイスループット画像ベースの定量

この手法では、蛍光ベースのライブイメージングを使用して、HeLa細胞内のミトコンドリア膜電位とスーパーオキシドレベルを視覚化し、定量的に測定するための効果的なワークフローについて説明します。...

HeLa細胞におけるライブイメージングを用いたミトコンドリア膜電位およびスーパーオキシドレベルの蛍光ベースの定量

免疫細胞の生理学的に関連する基質濃度の下でミトコンドリアの生体エネルギーを研究する方法は限られています。私たちは、高分解能蛍光肺活量測定法を使用して、ヒトT細胞、単球、および末梢単核細胞のエネルギー需要に対するミトコンドリア膜電位の応答の変化を評価する詳細なプロトコルを提供します。...

ヒト免疫細胞におけるミトコンドリア膜電位の動的変化を評価するための高分解能蛍光スパイロメトリー

学ぶミトコンドリア機能測定法。Mito Stress Testを用いてナイーブおよびエフェクターCD8 T細胞のバイオエネルギクスをリアルタイムで解析し、リゾホスファチジン酸が代謝柔軟性に与える影響を評価する。

ナイーブおよびエフェクターCD8 T細胞のミトコンドリア機能の測定

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