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電気刺激フラットマウント網膜におけるカルシウムイメージング
電気刺激フラットマウント網膜におけるカルシウムイメージング
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JoVE Journal Neuroscience
Calcium Imaging In Electrically Stimulated Flat-Mounted Retinas

電気刺激フラットマウント網膜におけるカルシウムイメージング

Full Text
2,591 Views
07:25 min
August 18, 2023

DOI: 10.3791/65705-v

Marina Cunquero1, Maria Marsal1, Gustavo Castro-Olvera1, Steven T. Walston2, F. Taygun Duvan2, José Gabriel Macias-Montero3, Carles Puigdengoles3, Mokhtar Chmeissani3, Jose A. Garrido2,4, Pablo Loza-Alvarez1

1Institut de Ciències Fotòniques (ICFO),The Barcelona Institute of Science and Technology, 2Catalan Institute of Nanoscience and Nanotechnology (ICN2), CSIC and BIST,Campus UAB, 3Institut de Física d'Altes Energies (IFAE),The Barcelona Institute of Science and Technology, Campus UAB, 4Institució Catalana de Recerca i Estudis Avançats (ICREA)

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study explores a detailed protocol for examining calcium activity in retinal ganglion cells subject to electrical stimulation, essential for advancing retinal prostheses. The researchers utilize calcium imaging as a method to investigate neural activity, offering insights into selective excitation of retinal neurons.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Retinal physiology
  • Calcium imaging

Background

  • Retinal prostheses can generate visual perceptions.
  • Ex vivo methods are needed to test these devices effectively.
  • Calcium imaging provides cellular resolution for studying neural activity.
  • The protocol addresses gaps in comprehensive testing methodologies.

Purpose of Study

  • Provide researchers with a robust methodology for neural retinal stimulation experiments.
  • Enable testing of new retinal prosthesis devices prior to implantation.
  • Enhance understanding of cellular responses within the retinal ganglion cell layer.

Methods Used

  • Use of ex vivo retinal preparations from anesthetized rats to assess calcium dynamics.
  • Calcium indicators are injected into the vitreous 2-3 weeks prior to imaging.
  • Protocols involve precise surgical techniques for retinal extraction and mounting.
  • Fluorescence microscopy is employed to visualize neural activity during electrical stimulation.

Main Results

  • Calcium imaging allows discrimination between active and inactive cells during stimulation.
  • Revealed relationships between current levels and cell distances from stimulating electrodes.
  • Detailed methodology supports improved assessment of retinal cell responses.

Conclusions

  • The study establishes a framework for investigating retinal neuron responses to electrical stimulation.
  • Insights gained may improve future retinal prosthesis design and function.
  • This protocol enhances the understanding of neuronal mechanisms relevant to visual prosthetics.

Frequently Asked Questions

What are the advantages of using calcium imaging in this study?
Calcium imaging allows for cellular resolution and enables the targeting of specific cell types within the retina, providing detailed insights into neuronal activity.
How is the retinal model prepared for experimentation?
The retina is prepared by injecting viral particles into the vitreous 2-3 weeks before imaging, followed by careful extraction and mounting on a microelectrode array.
What types of data are obtained from this methodology?
The protocol enables the measurement of calcium dynamics in retinal neurons, allowing the analysis of excitability and responses to electrical stimulation.
How can this method be applied in future research?
This methodology can be adapted for testing various retinal stimulators and improving understanding of retinal neuron interactions and activations.
What considerations should be made when interpreting the results?
It is crucial to account for the distance of cells from the stimulating electrodes, as this affects the current required to evoke a response.

人工網膜には、視覚を発生させる能力があります。新しいプロテーゼの開発を進めるためには、移植前にデバイスを試験する ex vivo 法が必要です。本稿では、電気刺激を受けたときの網膜神経節細胞層のカルシウム活性を研究するための包括的なプロトコルを提供します。

ex vivo法を使用して網膜埋め込み型デバイスをテストする試みがありましたが、サンプルの保持からデータ分析までの徹底的で詳細なプロトコルが不足していました。この研究により、私たちはこのギャップを埋め、さまざまなバックグラウンドを持つ研究者に、自信を持って神経網膜刺激実験に着手するために必要なツールを提供することを目指しています。カルシウムイメージングは、神経活動を研究するための一般的な技術であり、非光学的方法に比べていくつかの利点があります。

細胞の分解能を提供し、特定の細胞タイプを標的にすることができます。電気刺激時に活性細胞と不活性細胞を区別できるため、新しいMEAの試験に特に役立ちます。私たちは、カルシウムイメージングを使用して網膜ニューロンの応答を研究するための堅牢な方法論を導入しています。

このアプローチは、細胞の選択的興奮に関する洞察を提供し、より良い刺激プロトコルの開発、インプラント性能の向上、および最先端の進歩における重要なステップを提供する可能性があります。私たちの研究室は、高度な顕微鏡技術の開発に重点を置いています。現在、カルシウム動態を3次元で記録し、組織全体の負の相互作用をより深く理解する研究を行っています。

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カルシウムイメージング 電気刺激 フラットマウント網膜 網膜ジストロフィー 失明 人工網膜 視細胞障害 視力修復 埋め込み型デバイス 電極 Ex vivo法 機能検証 生体内実験 カルシウム活性 網膜神経節細胞層(GCL) 遺伝子コードカルシウム指示薬 蛍光シグナル 倒立蛍光顕微鏡 電気刺激 微量カルシウム分析

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