Analysis of Protein Complex Formation at Micromolar Concentrations by Coupling Microfluidics with Mass Photometry

Myndert Claasen; Zornitsa Kofinova; Matteo Contino; Weston B. Struwe

doi:10.3791/65772

マイクロ流体と質量測光の結合によるマイクロモル濃度でのタンパク質複合体形成の解析

JoVE Journal
Biochemistry

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JoVE Journal Biochemistry

Analysis of Protein Complex Formation at Micromolar Concentrations by Coupling Microfluidics with Mass Photometry

マイクロ流体と質量測光の結合によるマイクロモル濃度でのタンパク質複合体形成の解析

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January 26, 2024

DOI: 10.3791/65772-v

Myndert Claasen¹, Zornitsa Kofinova¹, Matteo Contino², Weston B. Struwe^3,4

¹Refeyn Ltd., ²Adaptix Ltd., ³Physical and Theoretical Chemistry Laboratory, Department of Chemistry,University of Oxford, ⁴The Kavli Institute for Nanoscience Discovery,University of Oxford

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

このプロトコルは、質量測光と新しいマイクロ流体システムを組み合わせて、低親和性のタンパク質間相互作用を調査します。このアプローチは、溶液中の高濃度の錯体を急速に希釈することに基づいており、低親和性測定を可能にし、質量測光の適用範囲を広げます。

このプロトコルは、低親和性タンパク質複合体を分析するためのまったく新しい方法を示しています。これにより、研究者は、以前は一般的に非常に困難または不可能であった、弱いまたは一過性の場合でも、特定のタンパク質相互作用を検出して特性評価することができます。タンパク質相互作用は細胞機能にとって非常に重要ですが、その検出と測定は困難な場合があります。

質量測光は、タンパク質複合体の形成を定量化するための優れたツールですが、希薄なサンプルには制限があります。私たちは、MassFluidixでこの問題を解決しています。私たちが取り組んでいる研究のギャップは、科学者が溶液中のタンパク質間の低親和性相互作用を確実に特徴付ける方法です。

私たちのアプローチの利点は、標識や固定化を必要とせずに、溶液中の弱いタンパク質相互作用を探すことができることです。そのため、研究者は、関心のあるタンパク質と、それらが見ているシステムを破壊していることを心配することなく、それらがどのように相互作用するかを観察できます。