プロテオミクスおよびリン酸化プロテオミクス解析のための生体液からの細胞外小胞の化学的親和性に基づく単離(英語)
October 27th, 2023
本プロトコルは、機能化された磁気ビーズを利用して尿中細胞外小胞を効率的に隔離するための詳細な説明を提供します。さらに、ウェスタンブロッティング、プロテオミクス、リン酸化プロテオミクスなどのその後の分析も網羅しています。
私たちは、細胞外小胞を用いたバイオマーカーの探索に取り組んでいます。重要なステップの 1 つは、それらを効率的かつ選択的に分離することです。EVtrapは、磁気ビーズベースの分離に基づいており、ハイスループットで使いやすく、特に臨床用途に容易であることから、当社に大いに役立ちます。
私たちは、乳がん、腎臓がん、パーキンソン病などのさまざまな疾患のタンパク質とリン酸化タンパク質バイオマーカーの発見にこのプロトコルを使用しています。このバイオマーカーは、生体液に由来します。EVはリキッドバイオプシーに使用できる可能性があり、臨床診断と治療をさらに改善することができます。
現在、細胞外小胞の単離に最も一般的に使用されているアプローチは、超遠心分離と沈殿ですが、これらの方法は汚染物質の共分離に限定されており、効率も低いです。したがって、当社のEVtrap法は、EVを分離するためのより効果的な方法を提供し、より再現性と感度の高い方法を可能にし、下流の分析にも役立ちます。現在取り組んでいるのは2つのことです。
まず、EVの分離と下流分析、特にマスバックアップベースの分析のための方法とプロトコルの開発を続けています。2つ目は、EVtrapの利点から、臨床分野でのさまざまな用途を模索していることです。
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概要
このプロトコルは、機能化された磁性ビーズを使用して尿中の細胞外小胞（EV）を効率的に分離する方法を概説しています。また、バイオマーカーの発見に不可欠なウェスタンブロット、プロテオミクス、リン酸化プロテオミクスなどの後続の分析についても詳述しています。
主要な研究要素
科学分野
- 神経科学
- バイオマーカー発見
- 細胞外小胞
背景
- 細胞外小胞は液体バイオプシーに重要です。
- さまざまな疾患への洞察を提供できます。
- 効率的な分離は臨床応用にとって重要です。
- 生体液からのタンパク質やリン酸化タンパク質は潜在的なバイオマーカーです。
研究目的
- バイオマーカーの発見を加速する。
- EVを効率的かつ選択的に分離する。
- 臨床診断と治療を改善する。
使用された方法
- 磁性ビーズを用いた尿中細胞外小胞の分離。
- タンパク質分析のためのウェスタンブロット。
- バイオマーカー同定のためのプロテオミクスとリン酸化プロテオミクス。
- 臨床応用のための高スループット法。
主な結果
- 生体液からのEVの成功的な分離。
- 疾患に関連するタンパク質とリン酸化タンパク質の同定。
- 液体バイオプシー応用への潜在性の実証。
- がんおよびパーキンソン病のバイオマーカーの発見を促進。
結論
- このプロトコルはEV分離の効率を向上させます。
- 臨床的に関連するバイオマーカーの発見をサポートします。
- 診断および治療戦略の改善の可能性があります。
よくある質問
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:47
Extracellular Vesicle (EV) Isolation from Human Urine Samples Using the EVtrap Approach
3:39
Preparation of Dried Extracellular Vesicle (EV) Sample for Proteomics and Phosphoproteomics Analysis
6:31
Proteome/Phosphoproteome Analysis of the Extracellular Vesicle (EV) Samples Using LC‐MS/MS
