Name: H型高血圧ラットにおけるHuotan Jiedu Tongluo煎じ薬の降圧効果と機序 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-17T13:20:00.000+00:00
Duration: 5 min 57 s
Description: 学ぶH型高血圧ラットにおけるHuotan Jiedu Tongluo煎じ薬の降圧効果と機序。ERストレス誘導アポトーシス抑制による作用機序を解明し、伝統的中医学の新たな治療戦略を提示する。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

この研究は、吉林省国家自然科学基金会(no.YDZJ202301ZYTS189)。

H型高血圧ラットにおけるHuotan Jiedu Tongluoの降圧効果

<ol><li>Noone, C., Dwyer, C. P., Murphy, J., Newell, J., Molloy, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+effectiveness+of+physical+activity+interventions+and+antihypertensive+pharmacological+interventions+in+reducing+blood+pressure+in+people+with+hypertension%3A+Protocol+for+a+systematic+review+and+network+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Syst+Rev%22%5BJournal%5D)">Comparative effectiveness of physical activity interventions and antihypertensive pharmacological interventions in reducing blood pressure in people with hypertension: Protocol for a systematic review and network meta-analysis.</a> Syst Rev. 7 (1), 128(2018).</li>
<li>Huang, K., Zhang, Z., Huang, S., Jia, Y., Zhang, M., Yun, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+association+between+retinal+vessel+abnormalities+and+h-type+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurol%22%5BJournal%5D)">The association between retinal vessel abnormalities and h-type hypertension.</a> BMC Neurol. 21 (1), 6(2021).</li>
<li>Tan, Y., Nie, F., Wu, G., Guo, F., Wang, Y., Wang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+h-type+hypertension+on+intraplaque+neovascularization+assessed+by+contrast-enhanced+ultrasound%5BTitle%5D)+AND+%22J+Atheroscler+Thromb%22%5BJournal%5D)">Impact of h-type hypertension on intraplaque neovascularization assessed by contrast-enhanced ultrasound.</a> J Atheroscler Thromb. 29 (4), 492-501 (2022).</li>
<li>Towfighi, A., Markovic, D., Ovbiagele, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pronounced+association+of+elevated+serum+homocysteine+with+stroke+in+subgroups+of+individuals%3A+A+nationwide+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">Pronounced association of elevated serum homocysteine with stroke in subgroups of individuals: A nationwide study.</a> J Neurol Sci. 298 (1-2), 153-157 (2010).</li>
<li>Zhong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+homocysteine+and+blood+pressure+related+to+poor+outcome+of+acute+ischemia+stroke+in+Chinese+population%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">High homocysteine and blood pressure related to poor outcome of acute ischemia stroke in Chinese population.</a> Plos One. 9 (9), e107498(2014).</li>
<li>Hao, P., Jiang, F., Cheng, J., Ma, L., Zhang, Y., Zhao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traditional+Chinese+medicine+for+cardiovascular+disease%3A+Evidence+and+potential+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Traditional Chinese medicine for cardiovascular disease: Evidence and potential mechanisms.</a> J Am Coll Cardiol. 69 (24), 2952-2966 (2017).</li>
<li>Tian, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Huotan+Jiedu+Tongluo+decoction+inhibits+balloon-injury-induced+carotid+artery+intimal+hyperplasia+in+the+rat+through+the+perk-eif2%CE%B1-atf4+pathway+and+autophagy+mediation%5BTitle%5D)+AND+%22Evid+Based+Complement+Alternat+Med%22%5BJournal%5D)">Huotan Jiedu Tongluo decoction inhibits balloon-injury-induced carotid artery intimal hyperplasia in the rat through the perk-eif2α-atf4 pathway and autophagy mediation.</a> Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 5536237(2021).</li>
<li>Simko, F., Pechanova, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+roles+of+melatonin+and+chronotherapy+among+the+new+trends+in+hypertension+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pineal+Res%22%5BJournal%5D)">Potential roles of melatonin and chronotherapy among the new trends in hypertension treatment.</a> J Pineal Res. 47 (2), 127-133 (2009).</li>
<li>Li, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((H-type+hypertension+is+a+risk+factor+for+cerebral+small-vessel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">H-type hypertension is a risk factor for cerebral small-vessel disease.</a> BioMed Res Int. 2020, 6498903(2020).</li>
<li>Rodrigo, R., Passalacqua, W., Araya, J., Orellana, M., Rivera, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homocysteine+and+essential+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Homocysteine and essential hypertension.</a> J Clin Pharmacol. 43 (12), 1299-1306 (2003).</li>
<li>Lehmann, M., Gottfries, C. G., Regland, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+cognitive+impairment+in+the+elderly%3A+Homocysteine+is+an+early+marker%5BTitle%5D)+AND+%22Dement+Geriatr+Cogn%22%5BJournal%5D)">Identification of cognitive impairment in the elderly: Homocysteine is an early marker.</a> Dement Geriatr Cogn. 10 (1), 12-20 (1999).</li>
<li>dos Santos, E. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+that+folic+acid+deficiency+is+a+major+determinant+of+hyperhomocysteinemia+in+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Metab+Brain+Dis%22%5BJournal%5D)">Evidence that folic acid deficiency is a major determinant of hyperhomocysteinemia in Parkinson's disease.</a> Metab Brain Dis. 24 (2), 257-269 (2009).</li>
<li>Zhao, W., Gao, F., Lv, L., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interaction+of+hypertension+and+homocysteine+increases+the+risk+of+mortality+among+middle-aged+and+older+population+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hypertens%22%5BJournal%5D)">The interaction of hypertension and homocysteine increases the risk of mortality among middle-aged and older population in the United States.</a> J Hypertens. 40 (2), 254-263 (2022).</li>
<li>Woo, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperhomocyst%28e%29inemia+is+a+risk+factor+for+arterial+endothelial+dysfunction+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Hyperhomocyst(e)inemia is a risk factor for arterial endothelial dysfunction in humans.</a> Circulation. 96 (8), 2542-2544 (1997).</li>
<li>Lu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+intervention+of+enalapril+maleate+and+folic+acid+tablet+on+the+expressions+of+the+grp78+and+chop+and+vascular+remodeling+in+the+vascular+smooth+muscle+cells+of+h-hypertensive+rats+with+homocysteine%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Rev+Med+Pharmaco%22%5BJournal%5D)">The intervention of enalapril maleate and folic acid tablet on the expressions of the grp78 and chop and vascular remodeling in the vascular smooth muscle cells of h-hypertensive rats with homocysteine.</a> Eur Rev Med Pharmaco. 22 (7), 2160-2168 (2018).</li>
<li>López-García, P., Moreira, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+forces+for+the+origin+of+the+eukaryotic+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22BioEssays%22%5BJournal%5D)">Selective forces for the origin of the eukaryotic nucleus.</a> BioEssays. 28 (5), 525-533 (2006).</li>
<li>Minamino, T., Komuro, I., Kitakaze, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoplasmic+reticulum+stress+as+a+therapeutic+target+in+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Endoplasmic reticulum stress as a therapeutic target in cardiovascular disease.</a> Circ Res. 107 (9), 1071-1082 (2010).</li>
<li>Chen, X., Cubillos-Ruiz, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoplasmic+reticulum+stress+signals+in+the+tumour+and+its+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Endoplasmic reticulum stress signals in the tumour and its microenvironment.</a> Nat Rev Cancer. 21 (2), 71-88 (2021).</li>
<li>Ji, C., Kaplowitz, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperhomocysteinemia%2C+endoplasmic+reticulum+stress%2C+and+alcoholic+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroentero%22%5BJournal%5D)">Hyperhomocysteinemia, endoplasmic reticulum stress, and alcoholic liver injury.</a> World J Gastroentero. 10 (12), 1699-1708 (2004).</li>
<li>Zhang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homocysteine+induces+programmed+cell+death+in+human+vascular+endothelial+cells+through+activation+of+the+unfolded+protein+response%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Homocysteine induces programmed cell death in human vascular endothelial cells through activation of the unfolded protein response.</a> J Biol Chem. 276 (38), 35867-35874 (2001).</li>
<li>Cunard, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoplasmic+reticulum+stress%2C+a+driver+or+an+innocent+bystander+in+endothelial+dysfunction+associated+with+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Cur+Hypertens+Rep%22%5BJournal%5D)">Endoplasmic reticulum stress, a driver or an innocent bystander in endothelial dysfunction associated with hypertension.</a> Cur Hypertens Rep. 19 (8), 64(2017).</li>
<li>Casas, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GRP78+at+the+centre+of+the+stage+in+cancer+and+neuroprotection%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">GRP78 at the centre of the stage in cancer and neuroprotection.</a> Front Neurosci. 11, 177(2017).</li>
<li>Urano, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coupling+of+stress+in+the+ER+to+activation+of+JNK+protein+kinases+by+transmembrane+protein+kinase+ire1%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Coupling of stress in the ER to activation of JNK protein kinases by transmembrane protein kinase ire1.</a> Science. 287 (5453), 664-666 (2000).</li>
<li>Borghi, A., Verstrepen, L., Beyaert, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRAF2+multitasking+in+tnf+receptor-induced+signaling+to+nf-%CE%BAb%2C+map+kinases+and+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">TRAF2 multitasking in tnf receptor-induced signaling to nf-κb, map kinases and cell death.</a> Biochem Pharmacol. 116, 1-10 (2016).</li>
<li>Wen, X. -R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Butylphthalide+suppresses+neuronal+cells+apoptosis+and+inhibits+JNK-caspase3+signaling+pathway+after+brain+ischemia+%2Freperfusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Butylphthalide suppresses neuronal cells apoptosis and inhibits JNK-caspase3 signaling pathway after brain ischemia /reperfusion in rats.</a> Cell Mol Neurobiol. 36 (7), 1087-1095 (2016).</li>
<li>Jin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serine-threonine+protein+kinase+activation+may+be+an+effective+target+for+reducing+neuronal+apoptosis+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regen+Res%22%5BJournal%5D)">Serine-threonine protein kinase activation may be an effective target for reducing neuronal apoptosis after spinal cord injury.</a> Neural Regen Res. 10 (11), 1830-1835 (2015).</li>
<li>Xu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+and+propofol+combination+therapy+inhibits+endoplasmic+reticulum+stress+and+remarkably+attenuates+cerebral+ischemia-reperfusion+injury+and+ogd+injury+in+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Estrogen and propofol combination therapy inhibits endoplasmic reticulum stress and remarkably attenuates cerebral ischemia-reperfusion injury and ogd injury in hippocampus.</a> Biomed Pharmacother. 108, 1596-1606 (2018).</li>
</ol>

当社は、この調査が、潜在的な利益相反と解釈される可能性のある商業的または金銭的関係がない状態で実施されたことを宣言します。

高血圧は、成人人口の3分の1が罹患し、脳卒中、冠状動脈性心臓病、心不全、腎不全などのリスクを高める最も一般的な心血管疾患の1つです8。H型高血圧症は、原発性高血圧症とホモシステイン濃度の上昇が同時に起こることを指す特殊なタイプの高血圧症であり、長年にわたって広く注目を集めてきました9。近年、経口EMと降圧薬の併用により、血圧のコントロールや血中Hcy値の低下など、効果の向上が見られていますが、頭痛、めまい、疲労、咳、低血圧など、禁忌や副作用、薬剤耐性など、まだまだ多くの欠点があります。伝統的な漢方薬は、個別化されたアプローチを通じてH型高血圧症を治療し、根本的な原因に対処し、副作用の少ない補完的な効果を提供することで、症状の効果的な長期管理を可能にします。本研究では、伝統的な漢方薬の処方HTJDTLDが、メチオニン誘発性H型高血圧症に対して明らかに降圧効果を有することを見出しました。さらに重要なことに、HTJDTLDは、Hcyの上昇に関連する高血圧に対する最初の承認された治療法であるEMの降圧効果を大幅に高めました。しかし、EMの投与により、副作用が生じることがあります。 
メチオニンの代謝中に形成される含硫アミノ酸であるHcyのレベルは、高血圧10、アルツハイマー病、認知症11、パーキンソン病12などの心血管疾患および神経変性疾患で上昇します。以前の研究では、高血圧とホモシステインとの相互作用が中高年の死亡リスクに影響を与えることも示されました13。Woo et al.14 は、Hcy レベルの上昇が内皮機能障害を引き起こし、エラスチン繊維の破壊とコラーゲン産生の増加の結果である動脈硬化に関連していることを報告しました。本研究では、メチオニン投与群で血漿中のHcy濃度が有意に上昇し、これも血圧の上昇と有意な動脈病理学的変化と組み合わされることを発見しました。しかし、HTJDTLD治療は血圧を大幅に下げ、動脈の病理学的損傷を軽減し、Hcyレベルを低下させました。EMは、エナラプリルと葉酸の両方を含む新しい化合物製剤で、Hcy15の上昇に伴う高血圧の治療薬として初めて承認されました。HTJDTLDは、Hcyレベルの低下と病理学的変化の緩和によって示されるように、降圧効果を強化したことは注目に値します。
小胞体(ER)は、分泌タンパク質および膜貫通タンパク質の合成、フォールディング、および修飾のための中枢オルガネラである16。正常な小胞体機能の摂動は小胞体ストレスにつながる可能性があり、これは多くの疾患、そして最近では高血圧に関連しています17,18。さらに、以前の報告では、Hcyがジスルフィド結合形成を妨害し、内皮生存率と血管弛緩を低下させることにより小胞体ストレスを活性化できることが示されています19。Hcy誘発性小胞体ストレスも内皮性アポトーシスを引き起こす可能性があります20,21。しかし、HTJDTLDが小胞体ストレスを調節することにより降圧効果を発揮するかどうかは研究されていません。そこで、小胞体ストレス誘発性アポトーシス経路を介したHTJDTLDの降圧効果を調査しました。GPR78は、Bipとも呼ばれ、主要な付き添いであり、ERストレス22の後に活性化されます。腫瘍壊死因子受容体関連因子2(TRAF2)も、小胞体ストレス23などの内因性シグナルに対する細胞応答と関連していることが証明されている。TRAF2はシグナル伝達カスケードを開始し、細胞および状況依存的にc-Jun N末端キナーゼ(JNK)の活性化をもたらす24。アポトーシスの重要な執行者であるカスパーゼ-3は、アポトーシスプロセスにおいて極めて重要な役割を果たし、さまざまな種類の哺乳動物細胞25の種々の経路を通じて活性化することができる。アポトーシスの重要な執行者であるカスパーゼ-3は、アポトーシスプロセスにおいて極めて重要な役割を果たし、さまざまな哺乳類細胞タイプにわたるさまざまな経路を通じて活性化することができる26。カスパーゼ-3は、小胞体ストレスを介したアポトーシスに関与し、異なるアポトーシスカスケードの最終的な共通メンバーとして働く27。本研究では、GPR78、TRAF2、JNK、カスパーゼ3の遺伝子発現とタンパク質発現をqRT-PCRとウェスタンブロッティングにより検出しました。その結果、メチオニン処理により、GPR78、TRAF2、JNK、およびカスパーゼ3の遺伝子およびタンパク質の発現が有意に増加し、HTJDTLDがこれらの遺伝子およびタンパク質の発現を有意に阻害することが示されました。ただし、これら 2 つの方法のみを使用することにはまだいくつかの制限があります。ERS関連シグナル経路の阻害剤を使用し、フローサイトメトリーによって細胞アポトーシスを検出することにより、HTJDTLDの作用機序を評価することが理想的かもしれません。今後も実験プロトコルの改良を進めていきます。
その結果、HTJDTLDはメチオニン誘発性H型高血圧症のラットにおいて降圧効果を有することが示された。その根底にあるメカニズムには、小胞体ストレスの活性化によるアポトーシスの阻害が含まれる可能性があります。HTJDTLDは、メチオニン誘発性高血圧症のラットにおける降圧効果と潜在的なメカニズムを考えると、高血圧の治療における将来の治療応用に大きな期待が寄せられています。

高血圧は、心臓発作、脳卒中、腎不全の主要な危険因子であり、世界中で10億人が罹患する公衆衛生上の大きな課題となっています1。チオール基含有アミノ酸であるホモシステイン(Hcy)は、メチオニン代謝の重要な代謝中間体です。血漿Hcyレベルが上昇した高血圧は、H型高血圧症と定義され、脳卒中などの心脳血管疾患の発生と再発の重大な危険因子となる可能性があります2,3。最近の研究では、H型高血圧症の併存が心血管疾患や脳血管疾患の副作用を悪化させる可能性があることが報告されています4。特に、中国のH型高血圧症の患者の75%が原発性高血圧症であり、これは生活の質に深刻な影響を及ぼしています5。現在、H型高血圧症の治療には主に西洋医学が含まれています。ただし、特定の副作用やコンプライアンスの低下を引き起こす可能性があり、H型高血圧の包括的な管理のニーズを満たすことができなくなりました。
中国伝統医学(TCM)は、中国で2,000年以上の歴史を持つユニークなリソースです。西洋医学における高血圧コントロールのアンメットニーズにより、臨床医は H型高血圧症の予防と治療におけるTCMの潜在的な役割を検討し始めています6。Huotan Jiedu Tongluo Decoction (HTJDTLD) は、Yue Deng 教授が広範な臨床専門知識から考案した伝統的な漢方薬の処方です7.HTJDTLDは、20年以上にわたる臨床応用を通じて、心血管疾患や脳血管疾患の治療において顕著な有効性を示してきました1。しかし、HTJDTLDがH型高血圧症に治療効果があるかどうかは報告されていません。そこで、H型高血圧ラットにおけるHTJDTLDの降圧効果と特異的なメカニズムを探り、H型高血圧の治療薬候補を特定することを目指しました。

<table><tbody><tr><td>1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR</td><td>Yeasen,China</td><td>11149ES</td><td>cDNA合成キット&nbsp;</td></tr><tr><td>中国</td><td></td><td>bs-0061R</td><td></td></tr><tr><td>抗カスパーゼ-3抗体</td><td>Bioss, 中国</td><td>bs-0081R</td><td></td></tr><tr><td>抗GPR78抗体</td><td>アブカム 米国</td><td>ab108513</td><td></td></tr><tr><td>抗JNK抗体</td><td>アブカム 米国</td><td>ab76572</td><td></td></tr><tr><td>抗p-JNK抗体</td><td>バイオス, 中国</td><td>bsm-52462R</td><td></td></tr><tr><td>抗ウサギIgG抗体</td><td>Bioss, China</td><td>bs-0295G-HRP</td><td></td></tr><tr><td>Anti-TRAF2 antibody</td><td>Bioss, China</td><td>bs-22372R</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad CFX96 Touch system&nbsp;</td><td>バイオ・ラッド</td><td>CFX96</td><td>リアルタイム PCR 解析システム&nbsp;</td></tr><tr><td>ECLウェスタンブロット基質</td><td>メルク、マサチューセッツ州、米国</td><td>WBULP-10ML</td><td></td></tr><tr><td>エナラプリルマレイン酸葉酸錠</td><td>揚子江製薬会社、中国</td><td>20040991</td><td></td></tr><tr><td>FastStart SYBRグリーンマスター</td><td>シグマ</td><td>FSSGMMRO</td><td></td></tr><tr><td>Fructus Trichosanthis</td><td>長春伝統中国医学大学の最初の提携病院、</td><td>カタログ番号なし</td><td></td></tr><tr><td>Hirudo</td><td>中国長春伝統医学大学初の付属病院、カタログ</td><td>番号</td><td></td>なし</tr><tr><td>インテリジェント非侵襲的血圧計&nbsp;</td><td>北京Softronバイオテクノロジー会社</td><td>BP-2010A</td><td></td></tr><tr><td>Lonicerae Japonicae Flos</td><td>長春伝統中国医学大学の最初の提携病院、中国</td><td>カタログ番号</td><td></td>なし</tr> メ<tr><td>チオニン</td><td>シグマ、米国</td><td>M9500</td><td></td></tr><tr><td>Radix Angelicae Sinensis</td><td>中国長春伝統中国医学大学の最初の提携病院</td><td>カタログ番号なし</td><td></td></tr><tr><td>Radix et Rhizoma Glycyrrhizae</td><td>中国長春中医薬大学初の付属病院</td><td>カタログ番号</td><td></td>なし</tr><tr><td>Radix et Rhizoma Nardostachyos</td><td>中国長春伝統医学大学初の付属病院</td><td>カタログ番号</td><td></td>なし</tr><tr><td>Radix et Rhizoma Rhodiolae Crenulatae</td><td>中国、長春中国伝統医学大学の最初の提携病院</td><td>カタログ番号</td><td></td>なし</tr><tr><td>Radix et Rhizoma Salviae Miltiorrhizae</td><td>中国、長春伝統中国医学大学の最初の提携病院、</td><td>カタログ番号</td><td></td>なし</tr><tr><td>Radix Scrophulariae</td><td>中国、長春伝統中国医学大学の最初の提携病院</td> カタログ<td>番号なし</td><td></td></tr><tr><td>ラットHcy ELISAキット</td><td>上海Meimian工業会社、中国</td><td>MM-0293R2</td><td></td></tr><tr><td>RIPAバッファー</td><td>上海Beyotimeバイオテクノロジー会社</td><td>P0013B</td><td></td></tr></tbody></table>

h型高血圧ラットにおけるhuotan jiedu tongluo煎じ薬の降圧効果と機序

The Antihypertensive Effects and Mechanisms of Huotan Jiedu Tongluo Decoction in Rats with H-Type Hypertension

血漿ホモシステイン(Hcy)レベルの上昇を特徴とする高血圧の特定の形態であるH型高血圧症は、世界中で主要な公衆衛生上の課題となっています。この研究では、血管狭窄の治療に一般的に使用される非常に効果的な伝統的な漢方薬処方であるHuotan Jiedu Tongluo煎じ薬(HTJDTLD)の降圧効果と根本的なメカニズムを調査しました。ラットのH型高血圧症の誘発にはメチオニンを用い、HTJDTLDを胃内に投与した。次に、ラットの尾側動脈の収縮期血圧と拡張期血圧を非侵襲的ラット尾側マノメトリーによって測定しました。大動脈の組織学的評価は、ヘマトキシリン-エオシン(HE)染色によって行われました。酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)を使用してHcyレベルを測定し、定量的逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応(qRT-PCR)およびウェスタンブロッティングを使用して、グルコース調節タンパク質78(GRP78)、腫瘍壊死因子(TNF)受容体関連因子2(TRAF2)、c-Jun N末端キナーゼ(JNK)、およびカスパーゼ-3のmRNAおよびタンパク質レベルを決定しました。その結果、HTJDTLDはメチオニン治療後に血圧を有意に低下させ、病理組織学的病変を緩和し、Hcyレベルを低下させることが示されました。さらに、HTJDTLDは、主に小胞体(ER)ストレス誘発性アポトーシス経路に関与するGRP78、JNK、TRAF2、およびカスパーゼ3の遺伝子およびタンパク質の発現を有意に阻害しました。全体として、結果は、HTJDTLDがH型高血圧のラットに効果的な降圧効果を示し、ERストレス誘発性アポトーシス経路活性化の阻害に関連する降圧メカニズムを明らかにしました。

表4および表5に示すように、収縮期血圧(SBP)および拡張期血圧(DBP)は、1週間から4週間まで、MET群の方がCON群よりも有意に高かった。HTJDTLD処理後、ラットのSBPおよびDBPはMET群のSBPおよびDBPよりも有意に低かった。特に、HTJDTLDとEMの併用は、HTJDTLD治療単独よりも強い降圧効果を示しました。
HE染色とMassonのトリクローム染色によれば、大動脈血管壁の子宮内膜は不完全で滑らかではなく、培地は著しく肥厚していた。平滑筋細胞の増殖と肥大がみられ、配置層数が増加し、MET群ではCON群に比べて線維が乱れていた。しかし、血管内膜はより完全かつスムーズに回復し、培地の肥厚は大幅に減少し、MET+HTJDTLD+EM、MET+EM、およびMET+HTJDTLDグループの内膜損傷は大幅に緩和されました(図1 および 図2)。さらに、メチオニン基のHcy濃度は対照群の2倍でした。しかし、MET + HTJDTLD + EM、MET + EM、および MET + HTJDTLD グループの Hcy 濃度は、MET グループの Hcy 濃度よりも有意に低かった。特に、MET+HTJDTLD+EMグループで最も有意な減少が見られ、これはMETグループよりも約1倍低かった(図3)。mRNAおよびタンパク質の発現結果は、GPR78、TRAF2、JNK、p-JNK、およびcaspase-3の発現がメチオニン処理後に明らかにアップレギュレーションされたことを示しました。しかし、HTJDTLD、EM、および HTJDTLD と EM の組み合わせは、GPR78、TRAF2、JNK、およびカスパーゼ-3 のアップレギュレーションを有意に阻害しました。特に、HTJDTLDとEMの併用アプリケーションが最も大きな効果を発揮しました(図4 および 図5)。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65932/65932fig01.jpg"> 図1:HE染色。 (A)CON群、(B)MET群、(C)MET+HTJDTLD+EM群、(D)MET+EM群、(E)MET+HTJDTLD群からの胸部大動脈組織の組織学的変化。核は青色に染色されますが、細胞質と細胞外マトリックスはピンク色の染色の程度が異なります(100倍)。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65932/65932fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65932/65932fig02.jpg"> 図2:マッソン染色((A)CON基、(B)MET基、(C)MET+HTJDTLD+EM基、(D)MET+EM基、(E)MET+HTJDTLD基。各群の大動脈血管のマッソン染色を行い、HTJDTLDが沈着および線維化に及ぼす影響を評価しました(100x)。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65932/65932fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65932/65932fig03v2.jpg"> 図3:Hcyのレベル。 各群の血清Hcy濃度はELISAによって検出されました。SD±平均値(n = 6、SDはCON:236.5 nmol/L、MET:185 nmol/L、MET + HTJDTLD + EM:126.8 nmol/L、MET + EM:124 nmol/L、MET + HTJDTLD:325 nmol/L)として示しました。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65932/65932fig03large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65932/65932fig04.jpg"> 図4:GRP78、TRAF2、JNK、カスパーゼ-3のmRNA発現。 MET、MET+EM+HTJDTLD、MET+EMによる治療後、QRT-PCRによりERS関連遺伝子の発現を検出しました。データは平均SD±(n = 6、SDは次のように示されました:GRP78 [CON:0.12、MET:0.13、MET + HTJDTLD + EM:0.11、MET + EM:0.17、MET + HTJDTLD:0.12];TRAF2 [CON: 0.09, MET: 0.09, MET + HTJDTLD + EM: 0.07, MET + EM: 0.11, MET + HTJDTLD: 0.13];JNK [CON: 0.99, MET: 0.01, MET + HTJDTLD + EM: 0.03, MET + EM: 0.06, MET + HTJDTLD: 0.07; caspase-8 [CON: 0.06, MET: 0.10, MET + HTJDTLD + EM: 0.01, MET + EM: 0.13, MET + HTJDTLD: 0.03). * は CON グループと比較した有意差、# は MET グループと比較した有意差、Δ は MET + HTJDTLD グループと比較した有意差、 ∇は、MET+EMグループと比較して有意な差を表しています。p &lt; 0.01 です。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65932/65932fig04large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65932/65932fig05.jpg"> 図5:GRP78、TRAF2、JNK、p-JNK、Caspase-3のタンパク質発現 (A)タンパク質サンプルは、GRP78、TRAF2、JNK、p-JNK、およびCaspase-3抗体を用いたウェスタンブロッティングにより分析しました。GAPDHをコントロールとして用いた。(B)GRP78、RAF2、JNK、p-JNK、およびCaspase-3タンパク質の定量は、デンシトメトリーによって決定され、GAPDHに正規化されています。データは平均±SD(n = 6)として示されました。*は、CONグループと比較して有意差を表し、p&lt;0.01です。#はMETグループと比較した有意差、ΔはMET+HTJDTLDグループと比較した有意差、∇はMET+EMグループと比較した有意差を表します。p &lt; 0.01 です。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65932/65932fig05large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>逆転写反応</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>コンポーネント</td>
			<td>内容量(mL)</td>
		</tr><tr><td>トータルRNA</td>
			<td>2</td>
		</tr><tr><td>gDNAダイジェスター Mix</td>
			<td>3</td>
		</tr><tr><td>スーパーミックスプラス</td>
			<td>5</td>
		</tr><tr><td>RNaseフリーウォーター</td>
			<td>10</td>
		</tr><tr><td colspan="2">反応プログラムは以下の通りであった:25°C、5分;55°C、15分;85°C、5分</td>
		</tr><tr><td>RT-PCR検査</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>コンポーネント</td>
			<td>内容量(mL)</td>
		</tr><tr><td>テンプレート</td>
			<td>2</td>
		</tr><tr><td>フォワードプライマー(10μM)</td>
			<td>0.4</td>
		</tr><tr><td>リバースプライマー(10μM)</td>
			<td>0.4</td>
		</tr><tr><td>グリーンqPCRミックス</td>
			<td>10</td>
		</tr><tr><td>ヌクレアーゼフリー水</td>
			<td>7.2</td>
		</tr><tr><td colspan="2">反応プログラムは次の通りであった:予変性95°C、5分;変性 95 °C, 10 s;アニーリング/伸長 60 °C、45 秒、合計 40 サイクル。</td>
		</tr></tbody></table>表1:逆転写反応量。
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>プライマー名</td>
			<td>シーケンス (5' から 3')</td>
		</tr><tr><td>GPR78-Fの</td>
			<td>CGTCGTATGTGGCCTTCACT</td>
		</tr><tr><td>GPR78-R</td>
			<td>ATTCCAAGTGCGTCCGATGA</td>
		</tr><tr><td>TRAF2-F</td>
			<td>GAAGGGAGCATTCCTAGACC</td>
		</tr><tr><td>トラフ2-R</td>
			<td>GAAGGGAGCATTCCTAGACC</td>
		</tr><tr><td>JNK-F</td>
			<td>GTCAGAATCCGAACGAGA</td>
		</tr><tr><td>JNK-R</td>
			<td>GTCTACGCAGGCAATCG</td>
		</tr><tr><td>カスパーゼ-3-F</td>
			<td>GCGGTATTGAGACAGACAGTGGAAC</td>
		</tr><tr><td>カスパーゼ-3-R</td>
			<td>GCGGTAGAGTAAGCATACAGGAGTC</td>
		</tr></tbody></table>表2:プライマーのリスト。
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>10% 分離ゲル、5 mL システム:</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>コンポーネント</td>
			<td>内容量(mL)</td>
		</tr><tr><td>H2O</td>
			<td>1.9</td>
		</tr><tr><td>アクリルアミド30%</td>
			<td>1.7</td>
		</tr><tr><td>1.5 mol/L Tris-HCL (pH 8.8)</td>
			<td>1.3</td>
		</tr><tr><td>10%のSDS</td>
			<td>0.05</td>
		</tr><tr><td>10%過硫酸アンモニウム</td>
			<td>0.05</td>
		</tr><tr><td>テメド</td>
			<td>0.002</td>
		</tr><tr><td>5%濃縮ゲル、3 mLシステム:</td>
			<td></td>
		</tr><tr><td>コンポーネント</td>
			<td>内容量(mL)</td>
		</tr><tr><td>H2O</td>
			<td>2.1</td>
		</tr><tr><td>アクリルアミド30%</td>
			<td>0.5</td>
		</tr><tr><td>1.0 mol/L Tris-HCL (pH 6.8)</td>
			<td>0.38</td>
		</tr><tr><td>10%のSDS</td>
			<td>0.03</td>
		</tr><tr><td>10%過硫酸アンモニウム</td>
			<td>0.03</td>
		</tr><tr><td>テメド</td>
			<td>0.003</td>
		</tr></tbody></table>表3:分離ゲルと濃縮ゲルの組成。
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>群</td>
			<td>1週間</td>
			<td>2週間</td>
			<td>3週間</td>
			<td>4週間</td>
		</tr><tr><td>詐欺</td>
			<td>163.4 ± 6</td>
			<td>150.1 ± 7.0</td>
			<td>134.2 ± 9.9</td>
			<td>158.8 ± 10.2</td>
		</tr><tr><td>会った</td>
			<td>192.1 ± 9.5##</td>
			<td>166.7 ± 12.8#</td>
			<td>177.3 ± 19.7##</td>
			<td>187 ± 23.6##</td>
		</tr><tr><td>MET+HTJDTLD+EM</td>
			<td>165.4 ± 9.2##</td>
			<td>148.9±11.1*</td>
			<td>134.5 ± 12.3**</td>
			<td>159.2 ± 19.6**</td>
		</tr><tr><td>MET+EM(エマージング航空)</td>
			<td>173 ± 9.1##</td>
			<td>149.9±18.7*</td>
			<td>145±12.5**</td>
			<td>162.4 ± 19.1**</td>
		</tr><tr><td>MET+HTJDTLDの</td>
			<td>176.7 ± 8.4##</td>
			<td>154.9±22.8</td>
			<td>168.3 ± 10.2</td>
			<td>172.2 ± 17.4</td>
		</tr></tbody></table>表4:収縮期血圧の変化。 #p &lt; 0.05 および ##p &lt; 0.01 対対照群、*p &lt;0.05 および **p &lt; 0.01 対 MET 群。
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>群</td>
			<td>1週間</td>
			<td>2週間</td>
			<td>3週間</td>
			<td>4週間</td>
		</tr><tr><td>詐欺</td>
			<td>138.4 ± 13.8</td>
			<td>121.2 ± 12.5</td>
			<td>107±19.7</td>
			<td>131.1 ± 16.3</td>
		</tr><tr><td>会った</td>
			<td>147.9 ± 7.7#</td>
			<td>131±11.9</td>
			<td>143.7 ± 19.6##</td>
			<td>146 ± 21.4##</td>
		</tr><tr><td>MET+HTJDTLD+EM</td>
			<td>139.4 ± 10</td>
			<td>123.1 ± 18.5</td>
			<td>117.1 ± 9.6**</td>
			<td>129.2 ± 18.6**</td>
		</tr><tr><td>MET+EM(エマージング航空)</td>
			<td>140.9 ± 13.4</td>
			<td>119.6 ± 7.8</td>
			<td>123.6 ± 10.8**</td>
			<td>128±25.2**</td>
		</tr><tr><td>MET+HTJDTLDの</td>
			<td>140.4 ± 11.3</td>
			<td>129.5 ± 11.1</td>
			<td>138.3 ± 15.1</td>
			<td>132.8 ± 16</td>
		</tr></tbody></table>表5:拡張期血圧の変化。#p &lt; 0.05 と ##p &lt; 0.01 対対照群、**p &lt; 0.01 対 MET 群。

ここでは、H型高血圧を誘発し、胃内に投与されたHuotan Jiedu Tongluo煎じ薬(HTJDTLD)の降圧効果を評価するためのプロトコルを紹介します。H型高血圧のラットでは、HTJDTLDは効果的な降圧効果を示し、おそらく小胞体(ER)ストレス誘発性アポトーシス経路の活性化の阻害と関連していました。.

H型高血圧ラットにおけるHuotan Jiedu Tongluo煎じ薬の降圧効果と機序

H-type hypertension, which is a specific form of hypertension characterized by elevated plasma homocysteine (Hcy) levels, has become a major public health ...

H型高血圧症は、人間の公衆衛生上の重要な課題となっています。それは主に西洋医学の治療に依存しており、悲しい影響を与える可能性があります。私たちの研究は、H型高血圧のラットにおける伝統的な漢方薬処方であるHuotan Jiedu Tongluo煎じ薬の降圧効果とメカニズムを調査しています。私たちの研究は、Huotan Jiedu Tongluo煎じ薬がH型高血圧のラットに降圧効果があることを示しました。その根底にあるメカニズムには、小胞体ストレスの活性化によるアポトーシスの阻害が含まれる可能性があり、これにより患者に効果的な治療選択肢が提供されます。今後は、早期診断や予後のためのバイオマーカーの可能性を爆発させ、H型高血圧症の新規治療薬を開発していきます。

the-antihypertensive-effects-mechanisms-huotan-jiedu-tongluo

Research

JoVE Journal

Biochemistry

生物化学

ここでは、アンジオテンシンII注入によって誘発された高血圧マウスにおける腎交感神経除神経(RDN)のプロトコルを提示します。この手順は再現性があり、便利であり、高血圧および心肥大に対するRDNの調節メカニズムを研究することを可能にする。...

腎除神経の改善により、アンジオテンシンII注入による高血圧が軽減されました。

本プロトコールは、ラット冠状動脈の血管反応性を測定するためのワイヤー筋電計技術を記載する。...

標準化されたラット冠状動脈リング調製と血管直径に沿った動的張力変化のリアルタイム記録

ここでは、糖尿病性腎症の治療におけるJiawei Shengjiang...

糖尿病性腎症のラットモデルに対するJiawei Shengjiang Sanの拮抗効果:EGFR/MAPK3/1シグナル伝達経路との関連

本研究では、ネットワーク薬理学と遺伝子発現オムニバス(GEO)データセットの相乗的な統合により、外用薬投与のメカニズムを解明することを目指しました。この記事では、肛門湿疹の治療におけるShiDuGao(SDG)の実現可能性、標的、およびメカニズムを評価しました。...

肛門湿疹に対するShiDuGao治療の有効性と根底にある経路メカニズムのGEOデータセットとネットワーク薬理学に基づく

コンフォメーションの柔軟性は、タンパク質の機能に重要な役割を果たしています。本明細書において、我々は、規則及び不規則タンパク質に機能を駆動急速な構造変化をプロービングするための水素 - 重水素交換に結合された時間分解エレクトロスプレーイオン化質量分析法の使用を記載しています。...

時間分解エレクトロスプレーイオン化水素 - 重水素交換質量分析タンパク質の構造とダイナミクスを学ぶために

ひと白血球抗原 (HLA) シーケンス臓器提供者と受信者のペア間の不一致は、臓器移植での拒絶反応の抗体の主要な原因です。レシピエントの抗ドナー HLA 同種抗体をプローブする個々 のドナーの HLA...

臓器移植における HLA 同種抗体の検出のためのペプチド配列をお好み

タンパク質の結晶化制御用プロトコルをご紹介します。プロセスは、いくつかの結晶化パラメーターの制御操作をできるように自動化されたデバイスを使用します。タンパク質の結晶化が行われてアウト監視および結晶化液滴の粒子径分布を調査しながら結晶化ソリューションの制御と自動添加による。...

タンパク質結晶の成長を使用して異なる寸法自動結晶化その場の動的光散乱と相まって

Biolayer 干渉計、等温滴定型熱量計、x...

糖タンパク質 x 線結晶構造解析および生物物理学的手法によって、免疫グロブリンフォールドのキャラクタリゼーション

ここで提供されるプロトコルは、異なる組織および脳の様々な領域から分離されたミトコンドリアを有する異なるペプチドおよびタンパク質のネイティブ形態、プレフィブリル、および成熟したアミロイド線維の相互作用を調るためのプロトコルである。...

アミロイドフィブリルスによる脳ミトコンドリアの相互作用と膜透過性

コレステロールを飽和させて哺乳動物の組織や細胞を豊かにするシクロデキストリンの適用と、ゼノプス卵母細胞を豊かにするコレステロールを豊富なリン脂質系分散液(リポソーム)の使用の2つの方法が提示される。これらの方法は、分子、細胞、および器官機能におけるコレステロール値の上昇の影響を決定するのに役立ちます。...

哺乳類組織の富化とコレステロールを伴うゼノプス卵母細胞

学ぶH型高血圧ラットにおけるHuotan Jiedu Tongluo煎じ薬の降圧効果と機序。ERストレス誘導アポトーシス抑制による作用機序を解明し、伝統的中医学の新たな治療戦略を提示する。

H型高血圧ラットにおけるHuotan Jiedu Tongluo煎じ薬の降圧効果と機序

さらに動画を探す