2023年10月6日
私たちは、ビブラトームとアガロース包埋肺組織を利用して肺切片を生成し、肺構造の高解像度画像を取得する組織処理技術を開発しました。免疫蛍光染色法を用いて、特定の肺構造マーカーを用いて空間的なタンパク質発現を観察しました。
このプロトコルは、ブタなどの肺移植および再生の大型動物モデルで特に有用であり、時間の経過とともに小さな断片をサンプリングできます。この手法は、これらのモデルで作用する空間生物学をよりよく理解するのに役立ちます。この技術は、抗原賦活化を必要とせずに免疫蛍光イメージングに適した最小限の処理で肺切片を生成し、これまでに試験されたすべての抗体で有効です。
この手順は、わずかに厚い切片、たとえば約1ミリメートルを切断するために適応することができ、その後、ライトシート蛍光顕微鏡で使用して、より3次元のボリュームで空間的なタンパク質発現を研究することができます。私たちの研究では、肺移植の拒絶反応に影響を与える要因を調査し、ブタモデルを使用して拒絶反応を減らす治療法を開発しています。この手法は、術後の移植結果に影響を与える空間的なタンパク質の変化を理解するのに役立ちます。
現在、この手法を使用して、ブタ肺移植モデルにおける空間的タンパク質発現のランドスケープを調査しています。実験的治療のメカニズムの理解を深める一助となれば幸いです。ここで成功するための鍵は、ビブラトームの照準にあり、ブレードの振幅が大きく、力の速度が低いことは、セクショニングがうまくいかない場合に確認すべき重要なことです。
本研究では、ビブラトームとアガロース包埋肺組織を用いて高解像度の肺切片を作製する、新しい組織処理技術を提示します。この手法により、免疫蛍光染色を用いて肺構造におけるタンパク質発現の空間的分布を観察することが可能になります。
アガロースに包埋した肺組織をオートビブラトームで自動切片化することにより、種を問わず、再現性が高く最小限の処理で済む肺スライスを作製し、マルチプレックス蛍光イメージングに利用することが可能になります。このワークフローは、肺本来の組織構造と抗原性を維持するという課題を解決し、トランスレーショナルな肺研究に不可欠な高コンテンツ空間的タンパク質解析をサポートします。本アプローチは、前臨床肺モデルにおける予測信頼性を高め、損傷、再生、および移植結果に関するメカニズム研究に寄与します。
本手法は、初期の発見から前臨床検証までを統合したものであり、肺損傷、再生、および移植研究におけるワークフローを支援します。