Name: 食事誘発性肥満糖尿病マウスにおける十二指腸-空腸バイパス手術 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-18T12:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 50 s
Description: 学ぶ 十二指腸-空腸バイパス手術のマウスモデル構築法。食事誘発性肥満糖尿病マウスを用いて、グルコース代謝改善とインスリン抵抗性低減の効果を評価する技術を習得できます。

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以下に説明するすべてのプロトコル手順は、承認番号2020112501の下で、南部戦域司令部総合病院の動物管理および使用委員会のガイドラインに従っています。
1. 術前準備全般
注:30匹の6週齢の雄C57BL/6マウスを購入しました。マウスは、12時間の明暗サイクルの下で特定の病原体を含まない(SPF)実験室に収容されました。温度、22±2°C;湿度、55-65%。マウスには水への自由なアクセスが与えられ、肥満を誘発するために6週間にわたって60%kcalの脂肪食が与えられました。40 mg / kgストレプトゾトシンの腹腔内注射を5日間投与して、糖尿病を誘発しました17。30匹のマウスのうち、22匹のマウスがランダムな血糖値&gt;300 mg / dLのスクリーニングを受け、DJB(n = 15)グループと偽手術(n = 7)グループにランダムに割り当てられました。8匹のマウスは、血糖値が標準以下であるため、実験から除外されました。
<ol><li>手術の8時間前にマウスを絶食します。手術の2時間前に水を抜いてください。</li>
	<li>1%ペントバルビタールナトリウム溶液(6 mL / kg)とブプレノルフィン(1 mg / kg)を腹腔内投与します。.鉗子でマウスのつま先や尾に触れ、マウスが明らかなけいれんや震えを示さないようにします。適切な麻酔下では、マウスは酸素補給なしで自由に呼吸することができます。</li>
	<li>マウスを滅菌ボード上の仰臥位に置き、実体顕微鏡下に置きます。目に目の軟膏を塗ります。電気毛布を使用して、手順全体を通してマウスを暖かく保ちます。手術用ガウン、滅菌手袋、オートクレーブ滅菌器具などの滅菌手順を使用してください。</li>
	<li>偽対照マウスでは、幽門の 1 cm 下にある十二指腸と Treitz の 5 cm 下の空腸にそれぞれ 2 つの切開を行い、切開部を縫合します。</li>
</ol>2. 十二指腸空腸バイパス術:外科的処置
<ol><li>剣状突起から腹部に脱毛ペーストを塗布して、この領域から毛を取り除きます。クリームを拭き取り、肌がきれいであることを確認します。ヨウ素とアルコール溶液を交互にこすり洗いして、その領域を3回こすります。</li>
	<li>マウスを滅菌ドレープで覆い、操作領域を露出させたままにし、剣状突起から腹部まで2 cmの切開を行います。</li>
	<li>腹部リトラクターを使用して腹腔を露出させます。濡れた綿棒で腹部の脂肪を押しのけ、肝臓を頭側に移動して胃と腸を完全に露出させます。</li>
	<li>胃と幽門は肝臓の下にあり、トレイツの靭帯は遠位十二指腸にあります。Treitzの靭帯から5cm遠位の空腸を6-0シルク縫合糸で二重結紮します(図1A)。2つの結紮の中間点で空腸を切断し、空腸の切り株を10-0シルク縫合糸で縫合します(図1B)。 注:腸間膜血管をねじらないでください。</li>
	<li>近位空腸切開部を腸に沿って空腸まで5cm引っ張って、空腸-空腸吻合を作成します。2つの腸を水平に整列させ、次に10-0シルク縫合糸を使用して側方吻合を作成します(図1C)。 注:手術中は、水分の損失を減らすために、腸を生理食塩水で湿らせてください。これにより、腸が丸まってしまうのを防ぎ、縫合しやすくなります。</li>
	<li>腸の両端を固定し、切開部を同じ長さに切ります(図1D)。後腸壁の第2層を全層連続縫合糸で縫合します。 注:切開長さは約0.5〜0.6cm、針距離は~0.5mmです。</li>
	<li>腸の両端を固定し、腸の前壁を縫合します。前壁の第1層を単純な連続縫合糸で縫合し、第2層を水平内反縫合糸で縫合します(図1E-F)。 注:腹腔の感染を防ぐために、腸の内容物を綿棒で綿棒で拭きます。</li>
	<li>遠位空腸切開部を幽門の1cm下にある十二指腸に引っ張って、十二指腸-空腸吻合を作成します(図1G)。ステップ2.6-2.7と同じ方法で縫合します(図1H-K)。 注:吻合部の漏れを減らすために、吻合部の角にある縫合糸を確認してください。</li>
	<li>マイクロ鉗子で腸を結紮し、マイクロハサミで腸を切断します。十二指腸-空腸吻合の遠位端から2 mmの6-0シルク縫合糸で十二指腸を二重結紮します。マイクロハサミで中間点を切断し、10-0シルク縫合糸で切り株を縫合します(図1L)。 注:胃十二指腸血管は膵臓の頭部に対して垂直に分岐し、幽門に隣接しているため、横断面の血管を注意深く探索する必要があります。総胆管と十二指腸の合流点は、膵臓や総胆管を傷つけないように注意しながら位置していました。</li>
	<li>腹腔内を30°Cの生理食塩水ですすいでください。腸を腹腔に戻します。筋肉と皮膚を別々に6-0シルクで縫合します。その後、ヨードフォアで皮膚を消毒します。</li>
	<li>手術後、脱水症状を防ぐために、背中に30°Cの生理食塩水(30mL/kg)を皮下注射します。感染を防ぐために、ペニシリン(10 mg / kg)を筋肉内に注射します。.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66049/66049fig01.jpg"> 図1:十二指腸-空腸バイパス術 (A) トレイツの靭帯から5cm遠位の空腸の位置。(B)空腸を6-0シルクで二重結紮し、結紮糸の中央を切り取ります。(C)空腸-空腸吻合。(D)0.5〜0.6cmの切開を行い、後壁を縫合します。(E-F)完全な空腸-空腸吻合。(G)遠位空腸を幽門の1cm下の十二指腸に引っ張ります。(H)十二指腸-空腸吻合。(I)十二指腸-空腸吻合を0.5〜0.6cmの切開で切断し、後壁を単純な連続縫合で縫合します。(J-K)完全な十二指腸-空腸吻合。(L)遠位から十二指腸-空腸吻合まで2mmのところで、十二指腸を6-0シルクで二重結紮し、結紮糸の中央を切断します。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66049/66049fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
3. 術後ケア全般
<ol><li>手術後、低体温症を防ぐためにマウスを電気毛布の上に置きます。マウスが完全に目覚めるまで自由に這い回ってからケージに戻ります。</li>
	<li>術後の日には、食事と水を制限し、マウスの背中に2mLの生理食塩水を皮下注射します。術後最初の日に、10mLの10%ブドウ糖と機能性飲料(1:1の比率)を食事なしで与え、生理食塩水1mLを皮下に注射します。</li>
	<li>術後2日目と3日目に、マウスに20mLの10%グルコースと機能性飲料の混合物を与えてください。4日目以降、マウスに純水と高脂肪食を与えます。移行栄養は、術後の回復状態に応じて、溶液、半液体、または固形食品の順序で実行する必要があります。</li>
	<li>術後鎮痛:ブプレノルフィン(0.1 mg / kg)を1日目から3日目まで12時間ごとに注射し、その後5日目まで1日1回注射します。.</li>
	<li>手術後、マウスの摂食条件、活動、糞便、および創傷治癒を観察します。</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66049/66049fig02.jpg"> 図2:DJB手術の図(A)十二指腸-空腸吻合。(B)空腸-空腸吻合。(C)胆道膵臓の四肢。(D)消化器系の肢。(E)一般的な肢。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66049/66049fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66049/66049fig03.jpg"> 図3:DJB手術の解剖学。 (A)十二指腸-空腸吻合。(B)空腸-空腸吻合。(C)胆道膵臓の四肢。(D)消化器系の肢。(E)一般的な肢。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66049/66049fig03large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
4. 代謝パラメータの術後評価
<ol><li>体重測定<ol><li>測定の8時間前にマウスを絶食します。手術の前後の月曜日に、毎週8週間マウスの体重を量ります。</li>
	</ol></li>
	<li>食物摂取量測定<ol><li>各ケージに1匹のマウスを収容します。24時間の前後の各ケージ内の固形食品の量を測定します。2つの値の差は、毎日の食物摂取量を表します。</li>
	</ol></li>
	<li>ランダムな血糖値測定<ol><li>測定の毎週月曜日の午前8:00に、マウスの尾の先端から一滴の血液を採取し、それを血糖値計に挿入されたグルコースストリップに適用します。</li>
	</ol></li>
	<li>経口ブドウ糖負荷試験<ol><li>DJB手術の8週間後、経口ブドウ糖負荷試験の前にマウスを8時間絶食します。マウスの尾の先端から一滴の血液を採取し、それを血糖値計に挿入されたグルコースストリップの上に置きます。20%D-グルコース(2 g / kg)の経口投与を行います。.強制経口投与後0、15、30、60、90、120、150、180分後の血糖値を測定します。</li>
	</ol></li>
</ol>

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<li>Nasser, K. M., Wahba, H. A., Kamal, E., El-Makhzangy, A. M., Bahaa, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+model+for+training+and+improvement+of+the+surgical+skills+in+endolaryngeal+microsurgery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Voice%22%5BJournal%5D)">Animal model for training and improvement of the surgical skills in endolaryngeal microsurgery.</a> J Voice. 26 (3), 351-357 (2012).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>腹部レトラクタ</td><td>F.S.T</td><td>17000-03</td><td>Colibriリトラクタ-3cm、リトラクタ範囲1.5cm / 3cm長</td></tr><tr><td>1%ナトリウムペントバルビタール溶液</td><td>広州化学試薬工場</td><td>/</td><td>&nbsp;ペントバルビタールナトリウム粉末500mgを生理食塩水50mlに溶解して、1%ペントバルビタールナトリウム溶液を得ました。</td></tr><tr><td>注射用ベンジルペニシリンナトリウム</td><td>North China Pharmaceutical Company Ltd.</td><td>F2062121</td><td>ペニシリン</td></tr><tr><td>ブプレノルフィン</td><td>広州化学試薬工場</td><td>/</td><td>鎮痛剤</td></tr><tr><td>ブプレノルフィン</td><td>広州大塚製薬有限公司</td><td>/</td><td>鎮痛剤</td></tr>ク<tr><td>エン酸ナトリウム緩衝液</td><td>LEAGENE</td><td>R00522</td>緩<td>衝液</td></tr><tr><td>綿棒HaoZheng</td><td></td>医療<td>60220610</td><td>綿棒</td></tr><tr><td>脱毛ペースト</td><td>Veet</td><td>AAPR-S222</td><td>脱毛クリーム</td></tr><tr><td>耳札</td><td>ZEYA</td><td>SUS304</td><td>耳マーク</td></tr><tr><td>電気毛布</td><td>ZOSEN</td><td>ZS-CWDRT</td><td>ヒートパッド</td></tr><tr><td>電子スケール</td><td>ウェトラー・トレド</td><td>20060902-6</td><td>体重測定</td></tr><tr><td>経腸栄養粉末</td><td>アボット研究所</td><td>/</td><td>栄養粉末</td></tr><tr><td>目軟膏</td><td>広州大塚製薬株式会社</td><td>/</td><td>Protect the eyes</td></tr><tr><td>Glucometer</td><td>Roche</td><td>6993788001</td><td>Assess blood glucose</td></tr><tr><td>Graphpad Prism version 9.4.1</td><td>GraphPad Software</td><td>version 9.4.1</td><td>統計解析ソフト</td></tr><tr><td>高脂肪食(High Fat [60FDC] Purified げっ歯類ダイエット)</td><td>Dyets</td><td>112252</td><td>60kcal% High Fat Diet</td></tr><tr><td>Micro鉗子</td><td>Jinzhong Medical</td><td>18-1140</td><td>マイクロ鉗子</td></tr><tr><td>マイクロニードルホルダー</td><td>Jinzhong Medical</td><td>EMT-160-Z</td><td>ニードルホルダー</td></tr><tr><td>マイクロハサミ</td><td>Jinzhong Medical</td><td>YBC010</td><td>マイクロハサミ</td></tr><tr><td>顕微鏡カメラ</td><td>LAPSUN</td><td>E 2000</td><td>ビデオ</td></tr><tr><td>眼科用ハサミ</td><td>Jinzhong Medical</td><td>Y00030</td><td>手術用ハサミ</td></tr><tr><td>ペントバルビタール</td><td>広州化学試薬工場</td><td>/</td><td>麻薬</td></tr>塩化<tr><td>ナトリウム注射</td><td>広州大塚製薬有限公司</td><td>B21L0301</td><td>NaCl 0.9%</td></tr> <tr><td>実体顕微鏡</td><td>ZEISS</td><td>Stemi 305</td><td>双眼実体顕微鏡</td></tr><tr><td>ストレプトゾトシン</td><td>Σ</td><td>S110910-1G</td><td>STZ</td></tr><tr><td>縫合線</td><td>霊橋縫合</td><td>ZS-LQPMRZ5/0</td><td>Prolene 6/0,Prolene 10/0</td></tr><tr><td>組織鉗子</td><td>Jinzhong Medical</td><td>H1701</td><td>外科用鉗子</td></tr></tbody></table>

食事誘発性肥満糖尿病マウスにおける十二指腸-空腸バイパス手術

Duodenal-Jejunal Bypass Surgery in Diet-Induced Obese Diabetic Mice

一般的な条件 DJB手術の平均手術時間は84.5±2.6分でした。15匹のマウスがDJB手術を受け、9匹のマウスが生存しました。 表1に示すように、死亡の大部分は手術中またはその後の7日間に発生しました。術後死亡因は術後1日目の出血(n=2)、術後4日目の吻合部漏出(n=1)、術後7日目の吻合部閉塞(n=2)、術後3週間後の原因不明(n=1)であった。
この実験に先立つ8週間、手術を簡略化するための事前実験として、毎週10匹のマウスに対してDJB手術を行いました。 図4に示すように、実験前のマウスの週次生存率の傾向を求めました。生存率の漸進的な改善が観察され、DJB技術を習得するには集中的な外科トレーニングが必要であることを示しています。
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" ...

The prevalence of obesity and type 2 diabetes is a serious global health concern. Obesity is a major pathogenic factor in type 2 diabetes, cardiovascular ...

duodenal-jejunal-bypass-surgery-in-diet-induced-obese-diabetic-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

胃バイパスラットモデルを用いて多数の研究が最近ルー-en-Y法胃バイパス操作の基礎となる生理学的メカニズムを明らかにするために行われている。この記事では、この実験的なツールの利点と限界を理解することが私たちの公開胃バイパスラットモデルの技術的および実験の詳細を示し、議論することを目指しています。...

ラットにおけるルー-en-Y法胃バイパス手術

このビデオでは、肥満手術-Roux-en-Yの手順について説明しています。これは、腸の中央部である空腸を切開して、腸の手足を2つ作り出すものです。胆道肢は既存の腸ループに付着し、消化肢は胃に付着して胃バイパスを作成します。ここで作られた胃バイパスは、栄養素の摂取を減らし、効率的に体重を減らすのに役立ちます。...

Roux-en-Y胃バイパス術:マウスモデルにおける胃切除術のための肥満外科手術

肥満手術は、病的肥満にしばしば関連する致命的な代謝合併症(糖尿病、肥満、脂質異常症)を減らすための最も効率的な方法です。肥満手術のマウスモデルは、これらの手術が糖尿病、高血圧、脂質異常症に及ぼす有益な効果の背後にある分子メカニズムを解読するためのユニークな資産です。...

スリーブ胃切除およびマウスにおける変更されたルーワイ胃バイパスのテクニック

このプロトコルは、マウス島の単離および脱細胞化された骨格上への播種を実証する。足場支持膵島を、ストレプトゾトシン（STZ）誘発糖尿病マウスの精巣上体脂肪パッドに移植した。島は移植部位で生存し、高血糖状態を逆転させた。...

糖尿病マウスの精巣上体脂肪細胞における膵島支持骨格移植

次に、マウスの垂直方向のスリーブ胃切除のパフォーマンスについて説明します。これは胃の約 70%...

垂直方向のスリーブ胃切除術のマウスモデル

このプロトコルは、ラットに 1 吻合胃バイパス (OAGB) の性能です。オペレーターは、手縫い吻合続いて長く、管状ホチキス止め胃ポーチを実行します。このモデルのオペレーターは胆道膵と人間; 一般的な肢の同じ比率を再現します。したがって、胆道膵肢は 35...

ラットにおける 1 吻合胃バイパス (OAGB)

糖尿病と肥満の有病率は、世界的に継続的に増加しています。糖尿病、肥満、およびそれに関連する死亡率と共罹患率の間のメカニズムをさらに調査する必要があります。ここでは、肥満手術の単純な前臨床モデルとして、動物におけるスリーブ胃摘出(SG)のプロトコルを提示する。...

外科用クリップを用いたマウスにおけるスリーブ胃切れ術

ルーアンY胃バイパス(RYGB)は、肥満および糖尿病を治療するために行われる。しかしRYGBの有効性の根底にあるメカニズムは十分に理解されておらず、動物モデルにおける高い死亡率を引き起こす技術的困難によって研究が制限されている。この記事では、成功率の高いラットで RYGB...

リニア・ステープラーを用いたラットにおけるルー・アン・Y胃バイパスのプロトコル

単一吻合十二指腸回腸バイパス(SADI-S)は、重要な代謝効果を伴う新しい肥満手術です。本稿では、マウスにおけるSADI-Sの信頼性と再現性のあるモデルを紹介します。...

マウスにおけるスリーブ状胃切除モデルを用いた単一吻合十二指腸回腸バイパス術

[を使用した非肥満糖尿病マウスにおける胃排出能の評価<sup&gt; 13</sup&gt; C] - オクタン酸呼気テスト

学ぶ 十二指腸-空腸バイパス手術のマウスモデル構築法。食事誘発性肥満糖尿病マウスを用いて、グルコース代謝改善とインスリン抵抗性低減の効果を評価する技術を習得できます。

食事誘発性肥満糖尿病マウスにおける十二指腸-空腸バイパス手術

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