Name: 野外および実験室条件下での人獣共通線虫の診断のための簡便便浮遊法 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-12-15T14:30:00.000+00:00
Duration: 3 min 46 s
Description: 学ぶ 犬の糞便からToxocara canisとAncylostoma spp.を検出する簡便な浮遊法。野外や実験室で線虫感染診断を迅速に行い、地域別駆虫戦略の策定に貢献する手法です。

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著者らは、メキシコ国立自治大学のDirección General de Asuntos del Personal AcadémicoがPAPIIT IN218720助成金を通じて財源を提供してくれたこと、および要求された延長を許可してくれたクラウディア・メンドーサ博士に感謝しています。この作品は、2019年に亡くなった私の素敵なニコールに捧げられています。あなたはいつも私の心の中で生き続けます。

犬の使用と世話は、メキシコ国立自治大学によって承認されました。
1.糞便サンプルの収集
注:獣医師または動物の所有者の助けを借りて犬を扱ってください。
<ol><li>野良犬(図1A)や神経質な動物の場合は、排便直後または10分以内に地面からサンプルを採取してください。</li>
	<li>手術用手袋または薄肉のポリエチレンバッグに水またはワセリンを注油します。直腸から糞便サンプルを採取するには、手術用手袋または薄肉のポリエチレンバッグを着用してください。</li>
	<li>各犬から少なくとも2gの糞便を採取します(図1B)。</li>
	<li>日付、場所(Googleマップを使用した全地球測位システム[GPS]座標)、各動物の識別番号の割り当て、犬のおおよその年齢、犬の性別、犬種、屋内または屋外(野良犬)として個々の糞便サンプルを特定します。</li>
	<li>糞便サンプルの入った袋をしっかりと結び目で閉じます。採取後4〜8時間以内に糞便サンプルが分析されない場合は、バッグを冷蔵(4〜4°C)してください。</li>
</ol>2. フィールド診断のための飽和塩溶液の調製
注意: 天びん、測定材料、ストーブ、またはお湯を沸かすためのガスへのアクセスが不足または制限されている場合は、水、食卓塩、プラスチック製の12オンス(355 mL)カップ、および1Lのソーダプラスチック空ボトルを使用して、飽和生理食塩水を簡単に調製できます。
<ol><li>空の1Lソーダボトルを完全に洗います。ボトルに1Lの水を入れます。</li>
	<li>12オンスのプラスチックカップに一般的な食卓塩を入れます。</li>
	<li>塩をソーダボトルに移します。</li>
	<li>ソーダボトルをスクリューキャップでしっかりと閉じます。塩が溶けなくなるまで溶液を激しく振る。 注意: 塩が完全に溶けるまでソーダボトル内の溶液を振ると、最大90分かかる場合があります。</li>
</ol>3.検査診断のための飽和塩溶液の調製
<ol><li>一般的な食卓塩420gの重さを量ります。</li>
	<li>420gの塩を1Lの水に溶かします。</li>
	<li>塩が溶けなくなるまで溶液を沸騰させます。</li>
	<li>溶液をろ過して、未溶解の塩を廃棄します。</li>
	<li>重流体比重計または濃度計を使用して溶液の濃度を確認します。 注:理想的な濃度は、より良い結果を得るために SpG が 1.20 です(図 2A)。卵の浮遊能力は溶液との相互作用の影響を受け、同じ比重の溶液中で卵が浮遊する能力に変化をもたらします。したがって、最適な卵の回収を達成するためには、浮遊選鉱溶液中の比重の上限を考慮し、標的とする寄生虫要素の比重を上回っていることを確認することが不可欠である6。</li>
</ol>4.浮遊選鉱法
注:糞便サンプルが乾燥しすぎたり硬すぎたりする場合は、乳鉢で浸軟してください。
<ol><li>スプーンを使用して、約3gの糞便を1つのプラスチックカップ(高さ~8.5cm、直径~5.5cm)に入れます。</li>
	<li>ペーストが得られるまで1mLの飽和塩溶液を加えます。</li>
	<li>1分間攪拌し、100mLの飽和塩溶液を加えます。</li>
	<li>この懸濁液をプラスチックストレーナーを通して2つ目のプラスチックカップに通し、粗い粒子を避けます(図2B)。</li>
	<li>サスペンションを15〜20分間放置します。</li>
	<li>接種ループを炎の中に1秒間置き、卵、嚢胞、またはオーシストがないことを確認します(図2C)。</li>
	<li>接種ループが冷えるまで5秒間待ちます(図2D)。</li>
	<li>接種ループで懸濁液の表面から3滴を取ります。3つの滴をそれぞれ1枚のスライドガラスに別々に置きます(図2E-G) メモ:液滴が互いに接触していないことを確認します(図2H)。</li>
	<li>10倍の対物レンズで顕微鏡で観察します(図2I)。倍率を40倍にする場合はカバーガラスを配置します。</li>
	<li>液滴に陽性の結果が観察された場合は、実験室のログブックに十字(+)を割り当てて、糞便懸濁液表面のランダムな部位に特許期間中の寄生虫の存在を記録します。</li>
</ol>5.浮遊選鉱法の解釈
注:陰性の結果は決定的ではありません。
<ol><li>3日間連続して採取したサンプルで3つのテストを行い、テストの感度を上げます。 注:肯定的な結果は、特許期間中に寄生虫が存在することを示しています。</li>
</ol>

糞便浮遊技術による人獣共通回虫の認識

<ol><li>Duncan, K. T., Koons, N. R., Litherland, M. A., Little, S. E., Nagamori, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+intestinal+parasites+in+fecal+samples+and+estimation+of+parasite+contamination+from+dog+parks+in+central+Oklahoma%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Parasitology+Regional+Studies+and+Reports%22%5BJournal%5D)">Prevalence of intestinal parasites in fecal samples and estimation of parasite contamination from dog parks in central Oklahoma.</a> Veterinary Parasitology Regional Studies and Reports. 19, 100362(2020).</li>
<li>Kisiel, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Owned+dog+ecology+and+demography+in+Villa+de+Tezontepec%2C+Hidalgo%2C+Mexico%5BTitle%5D)+AND+%22Preventive+Veterinary+Medicine%22%5BJournal%5D)">Owned dog ecology and demography in Villa de Tezontepec, Hidalgo, Mexico.</a> Preventive Veterinary Medicine. 135, 37-46 (2016).</li>
<li>Lyons, M. A., Malhotra, R., Thompson, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+the+free-roaming+dog+population+and+gastrointestinal+parasite+diversity+in+Tul%C3%BAm%2C+M%C3%A9xico%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Investigating the free-roaming dog population and gastrointestinal parasite diversity in Tulúm, México.</a> PLoS One. 17 (10), e0276880(2022).</li>
<li>Dantas-Torres, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TROCCAP+recommendations+for+the+diagnosis%2C+prevention+and+treatment+of+parasitic+infections+in+dogs+and+cats+in+the+tropics%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Parasitology%22%5BJournal%5D)">TROCCAP recommendations for the diagnosis, prevention and treatment of parasitic infections in dogs and cats in the tropics.</a> Veterinary Parasitology. 283, (2020).</li>
<li>Cantó, G. J., García, M. P., García, A., Guerrero, M. J., Mosqueda, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prevalence+and+abundance+of+helminth+parasites+in+stray+dogs+from+the+city+of+Quer%C3%A9taro+in+central+Mexico%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Of+Helminthology%22%5BJournal%5D)">The prevalence and abundance of helminth parasites in stray dogs from the city of Querétaro in central Mexico.</a> Journal Of Helminthology. 85 (3), 263-269 (2011).</li>
<li>Torres-Chablé, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+gastrointestinal+parasites+in+domestic+dogs+in+Tabasco%2C+Southeastern+Mexico%5BTitle%5D)+AND+%22Revista+Brasileira+de+Parasitologia+Veterin%C3%A1ria%22%5BJournal%5D)">Prevalence of gastrointestinal parasites in domestic dogs in Tabasco, Southeastern Mexico.</a> Revista Brasileira de Parasitologia Veterinária. 24 (4), 432-437 (2015).</li>
<li>Cortez-Aguirre, G. R., Jiménez-Coello, M., Gutiérrez-Blanco, E., Ortega-Pacheco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stray+dog+population+in+a+city+of+Southern+Mexico+and+its+impact+on+the+contamination+of+public+areas%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Medicine+International%22%5BJournal%5D)">Stray dog population in a city of Southern Mexico and its impact on the contamination of public areas.</a> Veterinary Medicine International. 2018, 1-6 (2018).</li>
<li>Rodríguez-Vivas, R. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+epidemiological+study+of+intestinal+parasites+of+dogs+from+Yucat%C3%A1n%2C+Mexico%2C+and+their+risk+to+public+health%5BTitle%5D)+AND+%22Vector+Borne+Zoonotic+Diseases%22%5BJournal%5D)">An epidemiological study of intestinal parasites of dogs from Yucatán, Mexico, and their risk to public health.</a> Vector Borne Zoonotic Diseases. 11 (8), 1141-1144 (2011).</li>
<li>Maggi, R. G., Krämer, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+the+occurrence+of+companion+vector-borne+diseases+in+pet+animals+in+Latin+America%5BTitle%5D)+AND+%22Parasites+%26+Vectors%22%5BJournal%5D)">A review on the occurrence of companion vector-borne diseases in pet animals in Latin America.</a> Parasites & Vectors. 12 (1), 145(2019).</li>
<li>Cruz-Vazquez, C., Castro, G., Parada, F., Ramos, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+occurrence+of+Ctenocephalides+felis+and+Ctenocephalides+canis+%28siphonaptera%3APulicidae%29+infesting+dogs+and+cats+in+an+urban+area+in+Cuernavaca%2C+Mexico%5BTitle%5D)+AND+%22Entomological+Society+of+America%22%5BJournal%5D)">Seasonal occurrence of Ctenocephalides felis and Ctenocephalides canis (siphonaptera:Pulicidae) infesting dogs and cats in an urban area in Cuernavaca, Mexico.</a> Entomological Society of America. 38 (1), 111-113 (2001).</li>
<li>Bolio-Gonzalez, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+the+Dirofilaria+immitis+infection+in+dogs+from+M%C3%A9rida%2C+Yucat%C3%A1n%2C+Mexico%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Parasitology%22%5BJournal%5D)">Prevalence of the Dirofilaria immitis infection in dogs from Mérida, Yucatán, Mexico.</a> Veterinary Parasitology. 148 (2), 166-169 (2007).</li>
<li>Pastor-Santiago, J. A., Flisser, A., Chávez-López, S., Guzmán-Bracho, C., Olivo-Díaz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((American+visceral+leishmaniasis+in+Chiapas%2C+Mexico%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Tropical+Medicine+and+Hygiene%22%5BJournal%5D)">American visceral leishmaniasis in Chiapas, Mexico.</a> The American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 86 (1), 108-114 (2012).</li>
<li>Trasviña-Muñoz, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+intestinal+parasites+in+stray+dogs+from+a+farming+and+cattle+region+of+Northwestern+Wexico%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">Detection of intestinal parasites in stray dogs from a farming and cattle region of Northwestern Wexico.</a> Pathogens. 9 (7), (2020).</li>
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<li>Cringoli, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ancylostoma+caninum%3A+Calibration+and+comparison+of+diagnostic+accuracy+of+flotation+in+tube%2C+McMaster+and+FLOTAC+in+faecal+samples+of+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Parasitology%22%5BJournal%5D)">Ancylostoma caninum: Calibration and comparison of diagnostic accuracy of flotation in tube, McMaster and FLOTAC in faecal samples of dogs.</a> Experimental Parasitology. 128 (1), 32-37 (2011).</li>
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<li>Dryden, M. W., Payne, P. A., Ridley, R., Smith, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+common+fecal+flotation+techniques+for+the+recovery+of+parasite+eggs+and+oocysts%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Comparison of common fecal flotation techniques for the recovery of parasite eggs and oocysts.</a> Veterinary Therapeutics. 6 (1), 15-28 (2005).</li>
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<li>Katagiri, S., Oliveira-Sequeira, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+three+concentration+methods+for+the+recovery+of+canine+intestinal+parasites+from+stool+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Parasitology%22%5BJournal%5D)">Comparison of three concentration methods for the recovery of canine intestinal parasites from stool samples.</a> Experimental Parasitology. 126 (2), 214-216 (2010).</li>
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</ol>

著者には開示すべき利益相反はありません。

T. canisやAncylostoma spp.などの線虫は、犬の小腸に生息し、ヒトに感染する可能性があります。T. canisによって引き起こされる臨床徴候は、若い犬では深刻であり、発育不良、呼吸器系の問題、または消化管病変として現れます28。成犬の場合、感染は通常軽度である傾向があります。診断は、糞便サンプル中の特徴的な卵の特定に依存しています。この状態は、犬に駆虫治療を処方する頻繁な原因です29。トキソカラの疫学を理解するためには、寄生虫が母犬から子犬に、出生前の胎盤と、哺乳直後のガラクトゲン感染症の両方を介して、母犬から子犬に感染する可能性があることを認識することが不可欠です。人間は、汚染された土壌や感染した犬の毛皮など、さまざまな手段で感染卵を摂取すると、T.canisに感染する可能性があります。この場合、人間は寄生虫の宿主として機能し、寄生生殖はありませんが、卵から放出された幼虫は、特に子供の場合、害を及ぼす可能性があります<sup cla...

胃腸寄生虫は、犬に影響を与える最も一般的な健康問題の1つです1。推定によると、世界には~7億匹の飼い犬がおり、約1億7,500万匹が放し飼いに分類されます2。60種以上の寄生虫が犬と人間の間で共有されており、犬がこれらの寄生虫を持つ人間の感染源である可能性があることを示唆しています3。Toxocara canisとAncylostoma caninumは、犬に感染し、偶発的に人間の宿主に感染する2つの寄生種です。現在、これらの蠕虫がメキシコで生き残り、繁殖できる場所についていくつかの研究があります。犬のトキソカラの有病率は、米国、メキシコ、中央アメリカ、カリブ海諸国で0%から87%以上までさまざまです4。Toxocara canisとAncylostoma spp.、およびイヌの他の寄生種は、メキシコで以前に報告されています5,6,7,8,9,10,11,12,13(表1)。
<table border="1" fo:font-size="8px" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>寄生種</td>
			<td>地域</td>
			<td>有病率(%)</td>
			<td>参考</td>
		</tr><tr><td rowspan="4">Ancylostomaのcaninum</td>
			<td>ケレタロ</td>
			<td>42.90</td>
			<td>5</td>
		</tr><tr><td>タバスコ</td>
			<td>15.90</td>
			<td>6</td>
		</tr><tr><td>カンペチェ州</td>
			<td>35.7 – 42.9</td>
			<td>7</td>
		</tr><tr><td>ユカタン州</td>
			<td>73.8</td>
			<td>8</td>
		</tr><tr><td rowspan="2">バベシア</td>
			<td>モレロス州</td>
			<td>13.60</td>
			<td rowspan="2">9</td>
		</tr><tr><td>ベラクルス州</td>
			<td>10.00</td>
		</tr><tr><td>コクシジウムオーシスト</td>
			<td>ユカタン州</td>
			<td>2.30</td>
			<td>8</td>
		</tr><tr><td>クテノセファリド</td>
			<td>モレロス州</td>
			<td>30.3</td>
			<td>10</td>
		</tr><tr><td>ジピリジウム・カニナム</td>
			<td>ユカタン州</td>
			<td>2.30</td>
			<td>8</td>
		</tr><tr><td>ディロフィラリア</td>
			<td>ユカタン州</td>
			<td>7.0 – 8.3</td>
			<td>11</td>
		</tr><tr><td rowspan="2">ジアルジア</td>
			<td>タバスコ</td>
			<td>3.00</td>
			<td>6</td>
		</tr><tr><td>ユカタン州</td>
			<td>18.8</td>
			<td>8</td>
		</tr><tr><td>リーシュマニア</td>
			<td>チアパス 州</td>
			<td>19.00</td>
			<td>12</td>
		</tr><tr><td>サナダムシ</td>
			<td>バハカリフォルニア</td>
			<td>6.79</td>
			<td>13</td>
		</tr><tr><td rowspan="2">トキソカラ・イヌ</td>
			<td>ケレタロ</td>
			<td>22.10</td>
			<td>5</td>
		</tr><tr><td>ユカタン州</td>
			<td>6.20</td>
			<td>8</td>
		</tr><tr><td>トリチュリス・バルピス</td>
			<td>ユカタン州</td>
			<td>25.40</td>
			<td>8</td>
		</tr><tr><td rowspan="6">トリパノソーマ</td>
			<td>ハリスコ州</td>
			<td>8.10</td>
			<td rowspan="6">9</td>
		</tr><tr><td>カンペチェ州</td>
			<td>7.60</td>
		</tr><tr><td>チアパス 州</td>
			<td>4.5 – 42.8</td>
		</tr><tr><td>キンタナ・ロー州</td>
			<td>20.1 – 21.3</td>
		</tr><tr><td>トルカ</td>
			<td>17.50</td>
		</tr><tr><td>ユカタン州</td>
			<td>9.8 – 34</td>
		</tr></tbody></table>表1:2001年から2020年までのメキシコにおける犬の寄生虫の地域的有病率(%)。 2001年から2020年にかけて実施された以前の調査の結果により、メキシコのいくつかの都市部と農村部におけるイヌ寄生虫の分布を特定することができました。これらの研究は、さまざまな生態系におけるイヌ寄生虫の存続を助長する疫学的要素の深い理解を提供し、一部の寄生虫種の人獣共通感染の影響の包括的な評価に貢献します。
卵、嚢胞、オーシスト、幼虫などの腸内寄生虫のライフサイクル段階は、糞便サンプルで見つけることができます。したがって、糞便物質の検査は、動物の寄生虫に関する貴重な情報を提供します。ヒトの糞便中のAncylostomidae卵を検出する方法の必要性から、1878年に単純な糞便塗抹標本が使用され、胃腸寄生虫を検出するために長年使用されていましたが、あまり感度が低いと考えられていました。したがって、より優れた共顕微鏡法を開発する必要性が生じた14。糞便サンプル中の寄生虫の卵を回収して数えるための浮遊選鉱技術が最初に報告されてから100年以上が経過しました15。それ以来、浮遊選鉱技術のいくつかの方法と変種は、宿主内のいくつかの寄生虫を検出するための標準と見なされてきました。
例えば、レーンは1924年に、遠心分離とそれに続く沈殿物を1g(レーン)または10g(ストールの修正)でSpG1.2の飽和塩化ナトリウム溶液に浮遊させる直接遠心浮遊選鉱法を含む方法を説明しました。その後、浮遊選鉱技術は、異なるSpG14の溶液を使用して変更されました。1939年、ゴードンとウィットロックは、寄生虫の卵を視覚化する際のデトリタスからの干渉によるストールの手法の欠点を報告し、マクマスター16として知られる定量的方法を開発しました。1979年、O'GradyとSlocombeは、溶液の比重、タイミング、およびストレーナーのメッシュサイズが、浮遊選鉱技術を使用した卵検出の精度に影響を与えることを実証しました17。過去数十年の間に、浮選技術にいくつかの変更が加えられたため、浮選方法の標準化が急務となっています。現在、人獣共通感染症の寄生虫の予防の文脈での犬の蠕虫感染の検出は、人獣共通線虫の感染段階による環境汚染を制限するために適切な駆虫治療を適用するために必要です18。
定性的な方法の中で、糞便浮遊選鉱法は、多くの機器を必要とせず、単純で安価で再現性があるため、広く使用され、受け入れられています。しかし、感染の強度が低いと感度が低下するという大きな欠点があります19。卵、オーシスト、嚢胞、または線虫幼虫などのより多くの寄生要素の存在を明らかにする能力は、通常、溶液20の密度によって決定される。
これまでの報告では、イヌ線虫の卵を検出するための共寄生学的手法が比較されています。運動性原虫の検出に関しては、直接糞便塗抹標本が使用されます。一方、沈降法は、吸虫などの寄生虫の重い卵を診断するのに有用です21。最も広く使用されているフィールドベースの診断検査の1つは、糞便塗抹標本法です。しかし、この技術の感度が低いのは、寄生虫の卵の検出を妨げる破片が含まれているという事実に起因している可能性があります。ふるい分けステップと適切なSpGを提供する溶液を組み込むことにより、浮遊選鉱法は、回虫や鉤虫の卵をより明確で雑然とした観察を提供します。これは、顕微鏡スクリーニングのためのより正確で効率的なプロセス22をもたらす。同様に、寄生虫の卵やオーシストを回収するために、単純な浮遊選鉱と直接遠心浮選技術が非常に一般的に利用されています14。古典的な浮選法は、McMaster法15などの計数室の使用に応じて、定性的または定量的と見なすことができます。それにもかかわらず、浮遊選鉱法は感度が低く、特許期間中の寄生虫の検出に焦点を当てているため、否定的な結果は決定的であると見なされるべきではありません。ただし、精度は、糞便サンプルの保存手順や浮遊選鉱溶液のSpGに依存するだけでなく、ユーザーの糞便検査を実施する際の技術的習熟度と経験にも依存します。
その結果、糞便中の犬の寄生虫を検出するための他の方法が検討されています。犬の腸管蠕虫感染症の診断に最も広く使用されているアプローチの1つは、チューブ内の浮遊選鉱プロトコルやマクマスター法と比較した場合、犬の A.caninum の診断に正確で信頼性の高い結果をもたらす多価で高感度かつ正確な方法であるFLOTAC法であると一般的に認識されています19。23。沈降法は、吸虫卵、胚化線虫卵、およびほとんどのサナダムシの卵を回収するのに有用であり、これらの構造は浮遊しないため、浮遊選鉱溶液の表面では回収できません24。浮遊選鉱/沈殿技術よりも優れていることが証明されている方法の1つは、糞便中の条虫卵の検出を可能にし、時間がかからず、糞便破片から アノプロケファラ の卵を分離し、結晶化を減少させるため、修正二重遠心浮遊法です25。さらに、この技術は、回虫卵を高感度で検出するために成功裏に使用されています26。しかし、これらの前述の技術やOvassayなどの遠心分離法の中には、この研究で提案する浮選プロトコルとは対照的に、ホルマリンなどの試薬、市販のキット、実験室条件下でのサンプル処理、および硫酸亜鉛27などの試薬の使用が必要であり、これらは高価で環境毒性を回避するために特別な廃棄手順を必要とします。
最近では、高SpGの溶液を添加することにより浮選法の感度を高める技術の使用が好まれています。しかし、これらの溶液の欠点は、最終準備における破片の増加であり、したがって、寄生虫の卵の不正確な検出であることを考慮する必要があります。さらに、材料、試薬、コスト、環境影響問題、および遠心分離法の使用の難しさは、浮遊選鉱技術14の選択に影響を与え、これは、本研究で提示するプロトコルとは対照的に、フィールド条件において困難であり得る。食卓塩による浮選溶液の調製は、圃場条件下では砂糖がスズメバチやミツバチなどの昆虫を引き付け、調製物が粘着性になるため、砂糖の利用よりも有利です。さらに、べたつきを避けるために糖溶液に添加されるフェノールやZnSO4などの溶液は、環境保護ガイドラインに従って適切に廃棄するのが複雑であり、現場で廃棄することはできません。食卓塩溶液とは異なります。
この原稿の目的は、野外および実験室条件下での単純な浮遊選鉱技術の適応を使用して、糞便サンプル中の T.canis および Ancylostoma 属の卵を検出する手順を示すことです。本書に記載されているプロトコルに従い、バックアップバッテリーを備えた顕微鏡を使用すると、実験装置やインフラストラクチャが利用できない場合に、農村部および郊外地域でのこれらの犬の人獣共通寄生虫の診断が可能です。この研究で説明した単純な浮遊選鉱法は、迅速な結果を得ることができ、ルーチンスクリーニングのための非侵襲的で費用対効果の高い技術です。

<table><tbody><tr><td>3 x 1.2 V AA充電式電池</td><td>エナジャイザー</td><td></td><td>小売店で販売</td></tr><tr><td>ブンゼンバーナー</td><td>Viresa</td><td>FER-M224</td><td></td></tr><tr><td>使い捨て 12 オンス ガラスカップ</td><td>Uline Mexico</td><td>S-22275</td><td>小売店で販売</td></tr><tr><td>ガラススライド</td><td>Velab、メキシコ</td><td>VEP-P20</td><td></td></tr><tr><td>接種ループ</td><td>VelaQuin、メキシコ</td><td>CRM-5010PH&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>光学顕微鏡</td><td>ベラクイン、メキシコ</td><td>VE-B2</td><td></td></tr><tr><td>ライター</td><td>Bic</td><td>J25</td><td>小売店で販売</td></tr><tr><td>プラスチックカップ 1 個 (12 オンス)</td><td>Amazon</td><td>ASIN B08C2CRHSH</td><td>キッチンなら何でも プラスチック製の再利用可能なカップ</td></tr><tr><td>プラスチックカップ&nbsp;(サイコロまたは尿サンプルカップのサイズ)直径5.5cm、高さ8.5cm、2カップ</td><td>Amazon</td><td>Layhit-Containers-ZYHD192919</td><td>任意のキッチンにすることができます プラスチック製の再利用可能なカップ</td></tr><tr><td>プラスチックストレーナー 10 cm</td><td>Ecko</td><td>ASIN B00TUAAVWI</td><td>任意のキッチンプラスチックストレーナー</td></tr><tr><td>ソーダボトル</td><td>コカコーラ</td><td>1リットル</td><td>小売店で販売されている</td></tr><tr><td>スプーン</td><td>Amazon Basics</td><td>ASIN B00TUAAVWI</td><td>どれでも可能キッチンスプーン</td></tr><tr><td>食卓塩</td><td>La Fina</td><td></td><td>小売店で販売</td></tr></tbody></table>

野外および実験室条件下での人獣共通線虫の診断のための簡便便浮遊法

A Simple Fecal Flotation Method for Diagnosing Zoonotic Nematodes Under Field and Laboratory Conditions

Toxocara canisやAncylostoma caninumなどの人獣共通感染症の可能性のある犬の寄生虫を野外条件下で診断することは、メキシコの農村部や郊外では検査室へのアクセスが限られているため、通常困難です。本研究は、2017年から2021年にかけてメキシコのイヌから採取した糞便サンプルから、野外条件下でT. canisとAncylostoma spp.を検出することを目的としたものです。サンプルサイズを計算した結果、全国で534匹の犬が登録されました。
サンプルは、排便後に直腸または地面から直接採取されました。サンプルは、4°Cで個別に密封されたビニール袋に入れて保存しました。 塩化ナトリウムの飽和溶液(比重[SpG]1.20)を野外および実験室条件下で調製した。採取から3日以内に、2〜4gの糞便を、各糞便サンプルを生理食塩水に懸濁させることによる浮遊法を用いて寄生虫について検査した。糞便を浮遊選鉱溶液と混合し、金属製のスプーンを用いて粉砕した。
均一な粘稠度が得られたら、糞便サンプルをふるいを使用して新しいプラスチックカップに注ぎ、10〜15分間放置しました。混合物の上部から3滴を、滅菌した接種ループを用いて回収した。スライドを顕微鏡に置き、訓練を受けた寄生虫学者によって寄生虫を同定しました。1,055匹の犬の糞便サンプルを顕微鏡でスクリーニングしました。 Ancylostoma spp.の陽性サンプル数は833(78.95%頻度)、 T. canisの陽性サンプル数は222(21.04%)でした。これらの知見は、メキシコの都市部と農村部に生息するイヌの人獣共通感染症蠕虫を、実験室および野外条件下で共寄生虫鏡技術を用いて同定することの重要性を示している。

この研究では、 T. canis と Ancylostoma spp. の同定のための収集と共寄生虫鏡検査手順について説明します。犬の蠕虫の卵を検出するための単純な糞便浮遊法を採用した理論的根拠は、この技術がソリューション、機器、および材料が安価であるため、費用対効果が高いことです。そのため、短時間で複数のサンプルを処理できるため、サンプル処理能力が高いのが特徴です。さらに、単純な糞便浮遊選鉱法は実行が容易で、比較的敏感です。
サンプルサイズと動物の選択は、主に動物の飼い主の意欲と近づく野良犬の安全性によって決定される利便性によって行われました。本研究では、2017年から4年間、メキシコのイヌCanis lupus familiarisにおけるAncylostoma spp.およびT. canisの発生と頻度を評価するために浮遊選鉱法を使用しました。1,638匹の犬から糞便サンプルを採取し、顕微鏡でスクリーニングしました。合計1,235匹の犬がT.canisとAncy...

この研究では、2017年から2021年にかけてメキシコの犬から採取された糞便サンプルから検出された Toxocara canis と Ancylostoma 属菌を野外条件下で同定するための浮遊選鉱法の使用について説明します。

Diagnosis of canine parasites with zoonotic potential such as Toxocara canis and Ancylostoma caninum under field conditions is usually difficult due to ...

現在、犬の人獣共通寄生虫の全国的なジオロケーション研究が実施されており、これらの病気のさらなる制御と予防戦略が立てられています。メキシコには多種多様な生態系が存在することが、犬の寄生虫感染の頻度に影響を与えています。そのため、各寄生虫の疫学に応じた地域固有の駆虫ガイドラインを提案できるように、フィールドワークを行い、これらの寄生虫を特定する必要があります。単純な浮遊選鉱法は、クリプトスポリジウム卵母細胞、ジアルジア嚢胞、または毛虫症を検出するのに十分な感度ではありません。これらの寄生虫の共寄生虫鏡下検出を改善するための濃縮手順を提案します。この技術は、検査室のインフラや機器が利用できない場所での犬の蠕虫感染症の診断を迅速化し、促進することができます。所見と駆虫の推奨事項は、各顕微鏡検査の直後に処方することができます。このプロトコルは、犬のトキソカラ・イヌ・アンシロストーマ感染の頻度を推定するために、野外または実験室の条件下で定期的な糞便検査を実施するのに役立ちます。

a-simple-fecal-flotation-method-for-diagnosing-zoonotic-nematodes

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

実験用ラットとマウスにおけるエクト - とEndoparasitesの診断

土壌送信蠕虫（STHs）による慢性感染症が発育し、成長期の子供に無駄に吸収不良を引き起こします。それゆえ、これらの感染症はまた、子どもたちの体力を減らすことが妥当である。ここでは、STHsと子供の体力を評価するため、20メートルシャトルランテストの診断のための二つの技術を可視化する。...

土壌伝播蠕虫の感染状況及び学齢児童の体力を決定

間の共生を研究するために、...

蛍光顕微鏡を用いて線虫の中の細菌の可視化

このビデオは、ゼブラフィッシュの幼生の真菌感染を定量化する方法を示しています。真菌胞子は幼虫の後脳心室にマイクロインジェクションされ、幼虫は感染の発生を可能にするためにインキュベートされます。感染した幼虫は一定の間隔で収穫され、コロニー形成単位を列挙することで感染の進行が評価されます。...

ゼブラフィッシュ幼生の真菌感染を定量化する技術

野生動物は、一般的にさまざまな蠕虫に寄生されます。蠕虫には、主に "回虫" (線虫)、"トゲトゲミズ" (Acanthocephalans)、"吸虫" (吸虫)、"条虫" (条虫) の 4 種類があります。ここでは、脊椎動物から蠕虫を採取する方法と、蠕虫の保存方法と分類学的識別方法について説明します。...

野生生物からの蠕虫の収集と同定

このプロトコルの目的は、高スループット方法でゼブラフィッシュ稚魚の腸を介して蛍光に分類された食物の通過時間を測定することです。...

ゼブラフィッシュ稚魚を用いた消化管通過時間の高スループット測定

このプロトコルは、現場の天然基質から生きた線虫を効率的に抽出する方法を概説する。...

ベアマン・ファネルによる野生の線虫の迅速な分離

このプロトコルは、自己発症 性Caenorhabditis...

自己 カエノールハブディティス 線虫の生態学的調査を行うための高度にスケーラブルなアプローチ

細胞外細菌やオルセーウイルスや微胞子虫(真菌)などの細胞内病原体を含む腸内微生物は、野生の カエノラブディティス 線虫と関連していることがよくあります。この記事では、 C.エレガンス...

RNA蛍光 in situ ハイブリダイゼーション(FISH)による カエノラブディティスエレガンス 腸における微生物のコロニー形成と感染を可視化

寄生虫感染症は、特に発展途上国や地域で公衆衛生上の大きな課題となっています。この研究では、自動糞便分析装置を比較して、その診断効果を従来の直接湿式塗抹顕微鏡法と比較します。...

便サンプル中の寄生虫感染を検出するための自動糞便分析装置と直接湿式塗抹顕微鏡の比較分析

この研究では、ラジカルベースの方法と in vitro 卵孵化アッセイ (EHA) を使用して Tithonia diversifolia...

in vitroアッセイを用いた消化管線虫卵に対するTithonia diversifolia抽出物の抗酸化および駆虫特性の評価

学ぶ 犬の糞便からToxocara canisとAncylostoma spp.を検出する簡便な浮遊法。野外や実験室で線虫感染診断を迅速に行い、地域別駆虫戦略の策定に貢献する手法です。

野外および実験室条件下での人獣共通線虫の診断のための簡便便浮遊法

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