Name: 骨肉腫モデルマウスにおける漢方薬の煎じ薬の強制経口投与戦略 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-07T13:20:00.000+00:00
Duration: 3 min 11 s
Description: 学ぶ漢方薬の煎じ薬調製とマウスへの経口投与法。骨肉腫モデルにおける動物保護と治療効果評価の標準化プロトコルを確立し、再現性のある研究データを提供します。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

現在の研究は、(1)国家自然科学基金(81973877および82174408)、(2)中国国家重点研究開発プログラム(2020YFE0201600)、(3)上海最優先研究センター建設プロジェクト(2022ZZ01009)、(4)上海共同イノベーションセンター病院中医薬準備の産業変革、および(5)上海中医薬大学の予算内の研究プロジェクト(2021LK047)からの助成金によってサポートされています。

このプロトコルはサンプルとしてYiqi Jieduの煎じ薬の使用によって骨肉腫モデルマウスの詳しい強制経口の技術を記述する。この実験では、生後4週間の雄の胸腺マウス(BALB/cヌード)を使用し、上海中医薬大学実験動物センターのSPFグレードの飼育室で飼育しました。すべての動物実験は、上海中医薬大学動物管理委員会によって承認され、実験動物倫理綱領(動物倫理承認番号:PZSHUTCM2304060007)に準拠し、実験動物に関する国際的な要件に厳密に従って実施されました。
1. 素材
<ol><li>漢方薬(高麗人参42g、 Hedyotis diffusa 52.5g、有刺鉄線スカルキャップハーブ31.5g)、1mLシリンジ、12G/55mm肘強制経口注射針を入手します(図1)。</li>
</ol>2.投与量の決定
<ol><li>標準体重60kgの成人の1日投与量は、高麗人参12g、 Hedyotis diffusa 15g、とげのある頭蓋骨ハーブ9gで、合計36gの煎じ薬、つまり0.6gの煎じ薬/ kg体重です。体表面積11によると、標準体重60kgの成体と標準体重25gのマウスの等価用量12倍、低用量6倍、高用量24倍、および我々の予備データを参照して、本研究のマウスにYiqi Jiedu煎じ薬の20倍の用量比を使用し、 したがって、マウスの投与量は12gの煎じ薬/kg体重であった。</li>
	<li>次の式を使用して、各マウスの投与量を計算します。 マウスの投与量(スタンド体重)=成人の投与量(スタンド体重)×20(指定等価線量比)。 各マウスの1日の投与量は、200 μLで0.3 g [(12 gの煎じ薬/ 1000 g体重)x 25 g体重]で、最終濃度は1.5 g / mLです。.</li>
	<li>Yiqi Jiedu 煎じ薬群のマウス (n=7) の煎じ薬の総量を 28 日間強制経口投与して 58.8 g と計算します。これを 39.2 mL に濃縮し、最終濃度 1.5 g/mL にします。</li>
	<li>煎じ薬および強制経口投与段階での薬物損失の可能性を考慮し、計算の便宜上、合計126 g(高麗人参42 g、 Hedyotis diffusa 52.5 g、とげのある頭蓋骨ハーブ31.5 g)の煎じ薬を準備し、84 mLの最終容量に濃縮します。</li>
</ol>3. 細胞源と培養
<ol><li>ATCC細胞バンクからヒト由来の143B骨肉腫細胞を購入します。</li>
	<li>10 cmの細胞培養皿に、10% FBS、100 U/mLペニシリン、および100 μg/mLのストレプトマイシンを含む10 mLのMEM培地に1 x 106 143B細胞を播種します。</li>
	<li>143B細胞を5%CO2 インキュベーターで37°Cで細胞が80%〜90%コンフルエントになるまで培養します。</li>
</ol>4. モデリング手法
<ol><li>80%コンフルエント培養した143B細胞を回収し、6 mLの10%血清含有MEM培地に再懸濁し、基底膜マトリックスゲルと体積比1:1で混合して、最終濃度が1 x 107 細胞/mLの細胞懸濁液を作製します。</li>
	<li>10μLの細胞懸濁液を各胸腺マウスの左脛骨に注入して、以前の出版物12に記載されているように、in situ異種移植骨肉腫マウスモデルを確立します。手順の概要は次のとおりです。<ol><li>細胞をPBSで2回洗浄します。1.5 mLの0.25%トリプシンで細胞を3分間トリプシン処理します。6 mL の 10% 血清含有 MEM 培地を添加します。細胞を15 mLの遠心チューブに集めます。</li>
		<li>20 μL の細胞懸濁液を細胞計数プレートのチャンバーに吸引し、自動セルカウンターを使用して細胞濃度を計算します。細胞を室温で800 x g で5分間遠心分離します。</li>
		<li>上清をピペットで廃棄し、細胞ペレットを8.5 mg/mLの基底膜マトリックスに再懸濁し、氷上に置いてください。</li>
		<li>マウスを2%イソフルランと98%の酸素(酸素流量、2 L / min)に曝露して麻酔をかけます。麻酔中の乾燥を防ぐために、少量の獣医用軟膏を目に塗ります。</li>
		<li>換気の良い場所で手順全体を実行してください。骨肉腫細胞注射の前に、足をそっと触れて、各マウスが深い麻酔下にあることを確認してください。マウスにまだ Twitch や Jerk などの応答がある場合。マウスにけいれんやジャークなどの反応が残っている場合は、これらの反応が消えるまで、より長い時間待ちます。</li>
		<li>マウスを仰臥位に置きます。親指と人差し指でマウスの足首を持ち、ベタジンと70%エタノール綿棒を交互に3回交互に投与して脛骨の注射部位を消毒します。</li>
		<li>針を1mLのシリンジに取り付け、針先を脛骨の軸に平行な注射部位に向けます。針を経皮的に挿入して、脛骨プラットフォームを貫通して脛骨の遠位端に向かって穴を開けます。</li>
		<li>以前に氷上に置いた骨肉腫細胞懸濁液をマイクロボリュームシリンジにロードし、脛骨内の1 mLシリンジを骨肉腫細胞ロードマイクロボリュームシリンジと交換します。.約 10 μL (1 x 107 cells/mL) の骨肉腫細胞懸濁液を各胸腺マウスの脛骨にゆっくりと注入します。</li>
		<li>微量シリンジを注射部位から取り外し、綿棒で注射部位を約30秒間押します。マウスを清潔なケージに戻し、10分間回復を観察します。</li>
	</ol></li>
</ol>5.強制経口投与のための漢方薬煎じ薬処方の調製(図2)
<ol><li>ステップ2に従って投与量を計算します。</li>
	<li>高価なハーブの高麗人参を除くすべての煎じ薬草を、薬の表面より3 cm高いレベルの飲料水に30分間浸し、次に以下に説明するように煎じ薬を2回実行します。</li>
	<li>強い火で沸騰するまで加熱し、次に穏やかな火で15〜25分間加熱することにより、最初の煎じ薬を実行します。軽度の火とは、通常80°Cから100°Cの範囲の温度の低電力熱を指し、強火は通常200°Cから300°Cの範囲の高出力熱を指します。</li>
	<li>煎じ薬液を1つの容器に注ぎます。</li>
	<li>薬草を飲料水で加熱し、薬の表面を沈めるのに十分な量で強い火で沸騰させ、穏やかな火で15〜25分間加熱することにより、2回目の煎じ薬を実行します。</li>
	<li>手順5.4と同じ容器に煎じ薬液を注ぎます。</li>
	<li>高麗人参42gを別々に浸して煎じ、薬の表面より3cm高い飲料水で、高価です。</li>
	<li>浸した高麗人参を強い火で60分間加熱して、最初の煎じ薬を実行します。 手順5.4と同じ容器に煎じ薬液を注ぎます。</li>
	<li>中火で40分間加熱することにより、薬の表面を水没させるのに十分な量の飲料水で高麗人参の2回目の煎じ薬を実行します。手順5.4と同じ容器に煎じ薬液を注ぎます。 注意: 煎じ薬に使用される容器は、医薬品との化学反応の可能性を避けるために、キャセロール(臨床診療で最も一般的に使用される)、セラミック、ガラス、ステンレス鋼など、化学的に安定している必要があります。.異なるステップから得られたすべての煎じ薬液は、同じ容器に入れなければなりません。</li>
	<li>計量カップの口に輪ゴムで固定された3層のガーゼを使用して、煎じ薬液を混合してろ過します。</li>
	<li>ろ過した煎じ薬を鍋の強い火で沸騰させ、次に穏やかな火に変え、目標濃度(最終濃度1.5 g / mLの最終濃度で最終容量84 mL)に達するまで弱火を保ちます。</li>
	<li>1週間の胃内投与に必要な用量に従って、濃縮煎じ薬のアリコート21mLを調製し、アリコートを-20°Cの冷蔵庫に保管します。</li>
</ol>6. 強制経口避妊装置を用いたマウスへの強制経口投与
<ol><li>マウスケージの表面またはその他の粗い表面にマウスを置きます。</li>
	<li>右手の親指と人差し指でマウスの尻尾をつかみます。次に、左手の親指、人差し指、中指でマウスの首をつかみます。</li>
	<li>左手の残りの2本の指でマウスの尻尾を持ち、マウスの頭、首、体を一直線にします。 注意: つかむプロセス全体を通して、マウスをリラックスさせてください。マウスが動きにくい場合は、マウスがリラックスするまで把持プロセスを実行する必要があります。</li>
	<li>強制経口避妊薬を右手に持ち、体重20gのマウスに200μLの煎じ薬を装填します(100μLの煎じ薬調製剤/マウスの体重10g)。</li>
	<li>強制経口注射針を口の角から挿入し、舌をマウスの上顎に押し付けます。</li>
	<li>マウスの体を同じ方向に保ち、強制経口注射針が約10mm外側に残るまで、食道に沿って胃に向かってゆっくりと押します。 注:強制経口注射針が食道に入ると空洞感があります。マウスに挿入された強制経口注射針の長さは、胸骨の上部まで測定する必要があります。.強制経口注射針の全長は60mm(図3)であるため、煎じ薬をマウスの胃に注入する前に、約50mmの強制経口注射針をマウスの体内に挿入する必要があります。</li>
	<li>煎じ薬の処方をマウスの胃に注射します。抵抗にぶつかったり、口角から液体が出たりすると、強制経口注射針の位置がずれるため、避けなければなりません。さらに、煎じ薬式が厚い場合は、注入速度を遅くする必要があります。</li>
	<li>マウスを放し、10分間観察します。強制経口投与は、呼吸異常が認められず、マウスをケージに戻せば成功です(図4)。</li>
</ol>7.治療方針
<ol><li>Yiqi Jiedu 煎じ薬の治療効果を調べるには、対照群と Yiqi Jiedu 煎じ薬群を設定します。対照群のマウスには、生理食塩水を1日1回28日間投与する。Yiqi Jiedu煎じ薬群のマウスには、Yiqi Jiedu煎じ薬を1日1回28日間投与します。</li>
</ol>8.副作用
<ol><li>ケージに戻された後のマウスの状態を注意深く観察し、体重減少や餌が胃に入らないことによる精神状態の低下などを観察します。</li>
	<li>マウスは、食物による気管閉塞により呼吸困難や息切れを経験し、気管をきれいにしようとして咳をします。強制経口投与中にこれらの症状のいずれかが観察された場合は、直ちに強制経口投与を中止し、マウスを安楽死させてください。</li>
</ol>

骨肉腫マウスにおけるハーブ煎じ薬製剤と強制経口投与の標準化

<ol><li>Gao, S. Discussion on advantages and improvement of traditional Chinese medicine decoction. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGao%2C+S+%22Chinese+Community+Physicians+%28Comprehensive+Edition%29%22">Chinese Community Physicians (Comprehensive Edition)</a>. (21), 12(2005).</li>
<li>Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopoeia of the People's Republic of China. , (2015).</li>
<li>An, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interpretation+on+specification+of+traditional+Chinese+medicine+decoction%5BTitle%5D)+AND+%22Herald+Med%22%5BJournal%5D)">Interpretation on specification of traditional Chinese medicine decoction.</a> Herald Med. 42 (11), 1648-1652 (2023).</li>
<li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+strategies+in+standard+decoction+of+medicinal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22China+J+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">Research strategies in standard decoction of medicinal slices.</a> China J Chinese Materia Medica. 41 (8), 1367-1375 (2016).</li>
<li>Luo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+soaking+traditional+Chinese+medicine+before+decoction+on+active+components%5BTitle%5D)+AND+%22Shanghai+Yiyao%22%5BJournal%5D)">Effect of soaking traditional Chinese medicine before decoction on active components.</a> Shanghai Yiyao. 40 (9), 63-64 (2019).</li>
<li>Liu, F., Chen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+standardization+of+decocting+methods+of+modern+decoction%5BTitle%5D)+AND+%22Global+Trad+Chinese+Med%22%5BJournal%5D)">On the standardization of decocting methods of modern decoction.</a> Global Trad Chinese Med. 7 (5), 377-378 (2014).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+decocting+times+and+instrument+on+the+quality+of+decoction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Trad+Chinese+Med%22%5BJournal%5D)">Influence of decocting times and instrument on the quality of decoction.</a> J Trad Chinese Med. 50 (6), 550-552 (2009).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herbal+decoctosome+is+a+novel+form+of+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+China.+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Herbal decoctosome is a novel form of medicine.</a> Sci China. Life Sci. 62 (3), 333-348 (2019).</li>
<li>Lan, Y., Hu, Y., Huang, W., Tang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reflections+on+PK+-+PD+model+based+on+animal+experiments+for+study+of+Chinese+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Lishizen+Med+Materia+Medica+Res%22%5BJournal%5D)">Reflections on PK - PD model based on animal experiments for study of Chinese medicine.</a> Lishizen Med Materia Medica Res. 34 (2), 395-397 (2023).</li>
<li>Li, Y., Bai, M., Song, Y., Guo, H., Miao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+and+reflection+on+standard+decoction+of+Chinese+materia+medica%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Trad+Herbal+Drugs%22%5BJournal%5D)">Research and reflection on standard decoction of Chinese materia medica.</a> Chinese Trad Herbal Drugs. 49 (17), 3977-3980 (2018).</li>
<li>Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration, Center for Drug Evaluation and Research (CDER). Estimating the maximum safe starting dose in initial clinical trials for therapeutics in adult healthy volunteers. , https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/estimating-maximum-safe-starting-dose-initial-clinical-trials-therapeutics-adult-healthy-volunteers (2005).</li>
<li>Chang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratibial+osteosarcoma+cell+injection+to+generate+orthotopic+osteosarcoma+and+lung+metastasis+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Intratibial osteosarcoma cell injection to generate orthotopic osteosarcoma and lung metastasis mouse models.</a> J Vis Exp. (176), 63072(2021).</li>
<li>He, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+animal+science%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Laboratory animal science.</a> , (2006).</li>
<li>Patten, A. R., Fontaine, C. J., Christie, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+the+different+animal+models+of+fetal+alcohol+spectrum+disorders+and+their+use+in+studying+complex+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Fronti+Pedia%22%5BJournal%5D)">A comparison of the different animal models of fetal alcohol spectrum disorders and their use in studying complex behaviors.</a> Fronti Pedia. 2, 93(2014).</li>
<li>Jones, C. P., Boyd, K. L., Wallace, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+mice+undergoing+serial+oral+gavage+while+awake+or+anesthetized%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Animal+Sci%22%5BJournal%5D)">Evaluation of mice undergoing serial oral gavage while awake or anesthetized.</a> J Am Assoc Lab Animal Sci. 55 (6), 805-810 (2016).</li>
<li>Recena Aydos, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonalcoholic+fatty+liver+disease+induced+by+high-fat+diet+in+C57bl%2F6+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Nonalcoholic fatty liver disease induced by high-fat diet in C57bl/6 models.</a> Nutrients. 11 (12), 3067(2019).</li>
</ol>

著者らは、開示するものは何もないと宣言しています。

伝統的な漢方薬で処方されたハーブの臨床効果は、投与量と剤形に大きく関連しています。したがって、標準化された煎じ薬戦略および熟練した投与プロセスの確立は、臨床診療において、ならびに実験結果の信頼性を向上させるためにも必要である。
この研究では、まず、伝統的な漢方薬の臨床診療で使用される漢方薬の標準化された煎じ薬の詳細な戦略を提供し、科学的に煎じ薬を煎じるための人々の指導を容易にし、煎じ薬の品質と漢方薬の臨床効果を実質的に改善します。したがって、標準化が達成されれば、臨床診療における漢方薬の有効性の正確性と一貫性が向上します。
強制経口投与法は、前臨床試験における経口摂取法として広く適用されており、マウス、ラット、ウサギなどのさまざまな実験動物に適用でき、投与の容易さ、正確な投与量管理、薬物投与の臨床経路を模倣する能力などのいくつかの利点があります13。しかし、麻酔なしで誤った姿勢で固定すると、動物は苦戦し、研究者の健康を脅かし、実験の信頼性を低下させる可能性があります。したがって、標準化された強制経口法の確立は、これらの可能性を減らし、煎じ薬が誤って食道に入ったり、食道の損傷を引き起こしたりして、動物の死や実験の失敗を引き起こすことを避けるために重要です。
ここでは、骨肉腫モデルマウスに煎じ薬を送達するために強制経口投与ルートを選択しましたが、これは投与量を正確に測定し、実験全体を通して一貫した薬物送達を保証することができたからです。煎じ薬の処方を調製するために、まず、体重60kgの成人に使用した量の20倍の比率に基づいて、マウス用の煎じ薬の量を計算しました。浸し、沸騰するまで加熱して2回煎じます。濾過濃縮し、煎じ薬を-20°Cでアリコートで保存した。 強制経口投与を行うには、濃縮煎じ薬製剤200μLを強制経口装置にロードし、強制経口注射針を口に挿入し、強制経口注射針を胃に向かって静かに押し込み、煎じ薬をマウスの胃に注入します。私たちの発見の1つは、強制経口投与によるYiqi Jiedu煎じ薬の煎じ薬処方を受けたグループで観察された腫瘍増殖の有意な阻害です。対照群と比較して、Yiqi Jiedu煎じ薬群では腫瘍体積の明らかな減少が観察されました。これらの結果は、強制経口投与法が煎じ薬製剤の有効成分を標的部位に効果的に送達し、強力な抗腫瘍効果をもたらすことを示しています。さらに、実験期間中、マウスの全身状態と体重をモニタリングすることにより、強制経口投与法の安全性プロファイルを評価しました。Yiqi Jiedu煎じ薬強制経口投与群と対照群の間で体重変化や毒性の兆候に有意差は見られず、煎じ薬の強制経口投与は忍容性が高く、明らかな有害作用を引き起こさないことが示された。
強制経口投与法は、煎じ薬の処方を実験動物に送達するのに有効であることが証明されましたが、この投与方法に関連する潜在的な副作用と特定の制限を認識することが重要です。食物による気管閉塞を避けるために、強制経口投与中および経口後の呼吸困難、息切れ、咳などのマウスの状態を注意深く観察してください。それらのいずれかが現れたら、すぐに強制経口を止め、水平の硬いデスクトップで胸骨圧迫を行います。さらに、深刻な状態には、すぐに獣医師の助けが必要です。さらに、次の制限に細心の注意を払う必要があります。第一に、強制経口摂取は動物にストレスを誘発し、全体的な生理機能や治療への反応に影響を与える可能性があります。しかし、強制経口投与中は小さな餌針を使用し、マウスを優しく扱うことで、ストレスを最小限に抑えるための対策を講じました。さらに、強制経口投与は、動物への危害の可能性を回避するために標準化された技術が使用されることを保証するために、特別な訓練を受け、資格のある人によってのみ行うことができます14。第二に、煎じ薬フォーミュラの有効成分が抗腫瘍効果を発揮する正確なメカニズムは不明のままです。強制経口投与戦略は、ハーブ化合物の薬物動態と薬力学を変化させ、バイオアベイラビリティと治療効果に影響を与える可能性があります。.今後の研究では、強制経口投与による煎じ薬の抗腫瘍効果の根底にある正確なメカニズムの解明に焦点を当てるべきである。さらに、長期強制経口投与中にイソフルラン麻酔を適用すると、煎じ薬の不完全な摂取と未熟な強制経口技術による動物の死亡が減少することが研究で報告されています15。一方、煎じ薬に食用油を加えると、強制経口に関連する動物のストレスが軽減されます16。
結論として、漢方薬の標準化された煎じ薬プロセスとマウスの熟練した強制経口投与戦略を提供しました。これらの取り組みにより、実験マウスの食道損傷や死亡の可能性を回避するだけでなく、各実験動物が同量の漢方薬を投与できるようにすることで、実験結果の正確性と一貫性、および治療効果が向上します。私たちの研究は、骨肉腫マウスモデルにおける伝統的な漢方薬の煎じ薬処方の投与に対する強制経口戦略の有効性と安全性を示しています。これらの結果は、骨肉腫の治療におけるこの送達法の可能性を浮き彫りにし、伝統的な漢方薬投与の強制経口投与戦略を最適化するためのさらなる研究の基礎を築くものである。さらに、今後の研究では、煎じ薬製剤の有効成分の正確な作用メカニズムを調査し、他の治療法との潜在的な相乗効果を調査して、骨肉腫患者の治療結果を向上させる必要があります。したがって、これらの知見は、この投与方法の潜在的な利点と限界に光を当て、骨肉腫治療におけるその応用に関する貴重な洞察を提供します。

煎じ薬は、伝統的な漢方薬と液体の薬の最も一般的に使用される剤形です1,2。伝統的な漢方薬の煎じ薬は、ハーブを水に浸した後、水で煎じ、濾過してかすを捨てることによって処理されます。
煎じ薬の処方は、特に伝統的な中国医学における証拠に基づく治療の特徴に沿って、臨床的必要性に基づいて個別化できるため、経口投与によるこの剤形は、何千年もの間臨床診療に適用され、具体的でかけがえのない利点があります3,4.煎じ薬の品質は、臨床効果に直接関係しています。したがって、煎じ薬処方は、有効成分が最大限に抽出され、保護されるように、標準化された煎じ薬法の原則に基づいて調製する必要があります3。一方、煎じ薬対応薬は、臨床診療で使用される生の漢方薬の主な形態です。処方された煎じ薬の品質基準と製造方法は、中国薬局方2の規定に準拠している必要があります。さらに、処方された煎じ薬は、冷たい飲料水に少なくとも30分間浸してから、加熱して特別な医薬品ポットで煎じる必要があります5。研究によると、ほとんどの有効成分は2回煎じることによって抽出でき、医療機関における伝統的な漢方薬の煎じ薬室の管理に関する実践規範も、煎じ薬を2回行うように規定しています4,6,7。硬い食感のものや強壮剤などの特別な漢方薬が処方されている場合は、煎じ薬時間を延長することをお勧めします。処方された煎じ薬が浸されている容器から始めて、煎じ薬製剤と直接接触する煎じ薬器具および貯蔵容器は、化学的に安定しており、キャセロール、セラミック、ガラス、ステンレス鋼などの蓋が付いている必要があります。ただし、アルミニウムや通常のプラスチック製品は使用しないでくださいが、鉄やその他の腐食性器具は、治療効果を低下させ、有害な影響を引き起こす可能性のある化学反応を避けるために禁止する必要があります4,6,7。
臨床実験の実施には限界があるため、マウスなどのヒトの病気を媒介する小動物は、伝統的な漢方薬の煎じ薬を含むさまざまな介入の治療効果と包括的なメカニズムを調査するために医学研究でよく使用されます8,9;ただし、人間とは異なり、煎じ薬の処方は毎日調製し、混合し、臨床診療で1日2回新たに投与する必要があります。動物は自発的に薬を必要な用量で時間通りに服用することができず、現在、漢方薬に関連する動物実験のほとんどは、煎じ薬の強制経口投与です。in vivo動物実験に使用される煎じ薬式は、事前に調製し、分注し、-20°Cで保存し、使用直前に解凍する必要があります3,4,10。さらに、標準以下の動物の固定化と強制経口注射針の操作は、不必要な怪我や否定的な感情のリスクを高めます。したがって、経口薬物送達の重要な方法として、食道損傷や薬物のこぼれの可能性を回避し、各モデル動物に同量の処方された漢方薬を投与して正確な実験結果を得るために、熟練した強制経口投与技術が特に重要です。ここでは、漢方薬の煎じ薬の強制経口投与プロトコルを提供します。

<table><tbody><tr><td>143B細胞株</td><td>ATCC</td><td>CRL-8303</td><td>骨肉腫細胞株</td></tr><tr><td>麻酔器</td><td>深センRWDライフテクノロジー株式会社</td><td>R500IP</td><td>麻酔マウスの機器</td></tr><tr><td>自動セルカウンター</td><td>上海シモ生物技術株式会社</td><td>IC1000</td><td>カウント細胞</td></tr><tr><td>BALB/c 無霊性マウス</td><td>上海SLAC実験動物株式会社</td><td>男性</td><td>の動物の</td></tr><tr><td>とげのある頭蓋骨のハーブ</td><td>上海Yanghetang伝統的な漢方薬タブレット株式会社</td><td>20230606</td><td>煎じ薬用医薬品&nbsp;</td></tr><tr><td>基底膜マトリックス</td><td>Shanghai Uning BioscienceTechnology Co., Ltd</td><td>356234, BD, Matrigel</td><td>re-suspende cells</td></tr><tr><td>Centrifuge tube (15 mL)</td><td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td><td>430790, Corning</td><td>Centrifuge the cells</td></tr><tr><td>Elbow vevage needle (12-gauge/ 55 mm)</td><td>RWD Life Science Co., Ltd.</td><td>C21014-12</td><td>胃灌流装置</td></tr><tr><td>ガーゼ</td><td>ハイシハイヌオグループ株式会社</td>のコンポーネント<td>LC45</td><td>煎じ薬フィルター</td></tr><tr><td>高麗人参</td><td>上海Wanshicheng Pharmaceutical Co.、Ltd.</td><td>20220704-2</td><td>煎じ薬用医薬品&nbsp;</td></tr><tr><td>Hedyotis diffusa</td><td>Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. (上海陽河堂伝統漢方薬タブレット株式会社)</td><td>2023071107</td><td>煎じ薬用医薬品&nbsp;</td></tr><tr><td>イソフルラン</td><td>深センRWDライフテクノロジー株式会社</td><td>VETEASY</td><td>麻酔マウス</td></tr><tr><td>マイクロボリュームシリンジ</td><td>上海高鳩産業貿易株式会社</td><td>0-50 &L</td><td>脛骨に精密な細胞</td></tr>を<tr><td>注入する リン酸緩衝生理食塩水</td><td>Beyotime Biotechnology</td><td>ST447</td><td>洗浄 ヒト骨肉腫細胞</td></tr><tr><td>輪ゴム</td><td>Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd.</td><td>XPJ</td><td>計量カップ固定ガーゼ</td></tr><tr><td>シリンジ (1mL)</td><td>Shanghai Mishawa Medical Industry Co., Ltd.</td><td>胃</td><td>灌流装置</td></tr><tr><td>トリプシン(0.25%)のSBM0040</td>成分上海<td>YueNian Biotechnology Co.、Ltd</td><td>25200056、細胞のGibco</td><td>トリプシン治療</td></tr></tbody></table>

骨肉腫モデルマウスにおける漢方薬の煎じ薬の強制経口投与戦略

Gavage Strategy for Decoction Formula of Traditional Chinese Medicine in Osteosarcoma Model Mice

煎じ薬は、伝統的な漢方薬で最も一般的に使用されている剤形であり、経口投与によって何千年もの間臨床診療に適用されており、患者の特定の症候群に基づいて迅速な効果、吸収の容易さ、および個別化された治療を特徴としています。煎じ薬の品質は、伝統的な漢方薬の臨床効果に直接関係しています。したがって、主観的要因によって引き起こされる煎じ薬の品質の違いを避けるために、煎じ薬処方の標準化プロセスが重要です。一方、臨床実験の実施には限界があるため、マウスなどのヒトの病気を媒介とする小動物は、漢方薬の煎じ薬を含むさまざまな介入の治療効果と包括的なメカニズムを調査するために医学研究によく使用されます。したがって、経口投与法として重要な経口投与法として、食道の損傷や薬剤のこぼれを防ぐために熟練した強制経口投与技術が特に重要であり、これにより、各モデル動物に均等な量の薬が投与され、正確な実験結果が得られます。さらに、煎じ薬調製剤の標準化された方法と熟練した強制経口投与戦略は、動物福祉を保護し、使用される動物の数を最小限に抑えるために必要です。ここでは、骨肉腫マウスモデルにおけるYiqi Jiedu煎じ薬を用いた煎じ薬処方と強制経口投与技術の詳細な標準化プロセスを報告しました。有効性は腫瘍体積によって評価された。従ってこのプロトコルは動物保護を最大にし、研究データの信頼性を改善し、生体 内の従来の漢方薬のための煎じ薬の方式の治療効果そして分子メカニズムを将来調査するための有効な作戦を提供する。

in vivoでの骨肉腫の増殖に対するYiqi Jiedu煎じ薬の阻害効果は、143B骨肉腫細胞を胸腺マウスの脛骨に注入することによって調製された脛骨内異種移植骨肉腫マウスモデルで決定されました。Yiqi Jiedu煎じ薬は、Yiqi Jiedu煎じ薬群のマウスに、143B注射の2日目から28日間強制経口投与した。生理食塩水を対照群のマウスに投与した。すべてのマウスを28日後に安楽死させた。結果は、Yiqi Jiedu煎じ薬群の腫瘍体積が対照群と比較して有意に減少していることを示しました(図5)。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66177/66177fig01.jpg"> 図1:煎じ薬の消耗品。 煎じ薬は、(A)高麗人参、(B)Hedyotis diffusa、(C)とげのある頭蓋骨のハーブ、(D)目盛り付き計量カップ、(E)輪ゴム、(F)ガーゼ、(G)計量カップの口に3層のガーゼを輪ゴムで固定します。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66177/66177fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66177/66177fig02.jpg"> 図2:漢方薬の煎じ薬調製。 (A)高麗人参以外の煎じ薬を30分間浸す。 (B)高麗人参を別々に30分間浸す。 (C)高麗人参を別々に煎じる。(D)漢方薬の濾過煎じ薬。(E)漢方薬の濃縮煎じ薬の保管。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66177/66177fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66177/66177fig03.jpg"> 図3:強制経口投与の消耗品 通常の1mLシリンジにオリジナル針(左パネル)、オリジナル針1mLシリンジを12/55mmエルボ胃灌流針に交換して強制経口避妊薬をセット(右パネル)。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66177/66177fig03large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66177/66177fig04.jpg"> 図4:マウスへの強制経口投与の手順。 (A)ケージ表面のマウス。(B)マウスの尻尾を片手で掴んでいる。(C-D)マウスを片手で固定。(E)マウスの口から針を刺す。(F)強制経口投与の終了。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66177/66177fig04large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66177/66177fig05.jpg"> 図5:骨肉腫マウスモデルにおける煎じ薬の阻害効果。 (A)対照群とYiqi Jiedu煎じ薬介入群から採取された骨肉腫サンプル。エラーバーは標準偏差(n = 7)を表します(B)対照群(Ctrl)群とYiqi Jiedu煎じ薬介入群の間の腫瘍体積 の不対t 検定。Yiqi Jiedu 煎じ薬を 28 日間介入すると、腫瘍の体積が有意に抑制されます (p&lt;0.05)。エラーバーは標準偏差(n = 7)を表します。(C)実験期間中のYiqi Jiedu強制経口投与群および対照群のマウスの体重。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66177/66177fig05large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。</a>

プロトコルは例として骨肉腫のマウス モデルのYiqi Jieduの煎じ薬の煎じ薬の煎じ薬の方式および強制経口の技術の詳しい標準化プロセスを提供する。動物保護について説明し、研究データの信頼性を向上させ、in vivoでの煎じ薬処方の治療効果と分子メカニズムを調査するための効果的な戦略を提供します。

Decoction formula is the most commonly used dosage form in traditional Chinese medicine and applied in clinical practice for thousands of years by ...

この研究は、段階的な運用下での予防措置の準備についての詳細で標準化されたプロトコルを提供し、必要としている人々に参考資料を提供しています。私たちの研究は、正確な結果を得るために、各動物が均等に投与されることを保証します。私たちの研究は、動物保護を最大化し、約の研究結果の信頼性を向上させることを目的としています 煎じ薬製剤。

gavage-strategy-for-decoction-formula-traditional-chinese-medicine

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

この記事の目的は、肺転移アッセイ (プーマ) のプロトコルの詳細な説明を提供するためにです。このモデルは、広視野蛍光または共焦点レーザー走査型顕微鏡を使用して肺の転移性骨肉腫 (OS)...

肺転移アッセイを用いた骨肉腫の肺転移を植民地化の勉強に実用的な考慮事項

癌由来細胞の小胞 (Ev) の直噴は骨髄腫瘍進行をサポートのリプログラミングにつながるただし、セルは、この効果を仲介する明確ではありません。ここで、我々 転移の MSCs の EV 教育に重要な役割を明らかに EV を介する腫瘍間葉系幹細胞 (MSC) 相互作用は生体内で、調査するステップバイ ステップ...

腫瘍と間葉系幹細胞の間細胞小胞を介した通信を定義する骨肉腫のマウスの前臨床モデル

ここでは、プロトコルを提案誘導多能性幹細胞 (Ips) の世代の李 Fraumeni シンドローム (LFS) 患者派生繊維芽細胞、間葉系幹細胞 (MSCs) 経由で Ips の分化から骨芽細胞、およびモデリングの体内にLFS...

李 Fraumeni 症候群患者由来の誘導多能性幹細胞を用いた骨肉腫をモデリング

骨肉腫 (OS) の骨細胞外マトリックス (BEM) モデルは、よく確立され、表示をここでです。原発腫瘍の成長の in vitro真似をして OS の組織学的および cytogenic...

骨肉腫に対する三次元骨細胞外マトリックス モデル

ここでは、転移生物学の前臨床調査や新規治療薬の開発に使用できる自発的な肺転移を伴う骨肉腫の切断手順に続く同種の同一性の好交性移植法について説明する。...

転移率を制御する切断を用いた同種異形性骨肉腫スプレイグ・ドーリーラットモデル

本プロトコールは、同所性骨肉腫および肺転移病変を有するマウスモデルを生成するための脛骨内骨肉腫細胞注射を記載する。...

同所性骨肉腫および肺転移マウスモデルを生成するための脛骨内骨肉腫細胞注射

このプロトコルはヘマトキシリンEosin (HE)の汚損およびマイクロコンピュータ断層撮影(マイクロCT)の技術の結合によって骨粗しょう症のマウス...

骨粗鬆症マウスモデルにおける海綿骨マイクロアーキテクチャ評価

このプロトコルはデキストランの硫酸塩ナトリウムと結合されるアゾメタンによって引き起こされる潰瘍性coloproctitis準のcolorectal癌のマウス...

マウスにおける大腸肛門炎モデルの設定と漢方薬の治療効果評価

本プロトコールは、ヒト骨肉腫組織を用いて患者由来異種移植片(PDX)マウスモデルを確立する方法を記載している。...

ヒト骨肉腫組織を用いた患者由来異種移植マウスモデルの樹立

閉経後の骨粗鬆症は、世界的な公衆衛生問題となっています。この研究の目的は、この状態に対する伝統的な漢方薬 Xiaoyao...

マウスの閉経後骨粗鬆症の治療におけるXiaoyao錠剤の抗炎症効果に関する研究

学ぶ漢方薬の煎じ薬調製とマウスへの経口投与法。骨肉腫モデルにおける動物保護と治療効果評価の標準化プロトコルを確立し、再現性のある研究データを提供します。

骨肉腫モデルマウスにおける漢方薬の煎じ薬の強制経口投与戦略

さらに動画を探す