Name: 子宮内膜腫に関連する不妊症を研究するための実験的モデルマウスの確立 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-05T13:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: 学ぶ子宮内膜腫関連不妊症の病態生理メカニズムをC57BL/6Jマウスを用いた新規モデルで解明する方法。このモデルは生殖医学の知見向上と治療法開発に貢献します。

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<meta charset="utf8"></head><body>新規子宮内膜腫模擬マウスモデルの開発

<table><tbody><tr><td>1 ccシリンジ、25 G針付き</td><td>BDバイオサイエンス</td><td>301320</td><td></td></tr><tr><td>10 mm 組織培養皿</td><td>隼</td><td>353001</td><td></td></tr><tr><td>10%緩衝ホルマリン</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>SF100-4</td><td></td></tr><tr><td>10x リン酸緩衝生理食塩水 (PBS) バッファー</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>AM9625</td><td></td></tr><tr><td>30G針</td><td>BDバイオサイエンス</td><td>305107</td><td></td></tr><tr><td>5-0黒編みシルク非吸収性縫合糸</td><td>株式会社エティコン</td><td>W500H</td><td></td></tr><tr><td>70%エタノール</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>粘着顕微鏡スライド</td><td>マリエンフェルト</td><td>810401</td><td></td></tr><tr><td>ブプレノルフィン注射&nbsp;</td><td>医療獣医インターナショナル</td><td>RXBUPRENOR5</td><td></td></tr><tr><td>両頭綿棒</td><td>三洋電機株式会社</td><td>ハビー-340</td><td></td></tr><tr><td>細い鉗子</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>ケタミン</td><td>アルファサンインターナショナルb.v</td><td>2203095-08</td><td></td></tr><tr><td>マイクロチューブ</td><td>コーニング&nbsp;</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr><tr><td>ニードルホルダー</td><td>株式会社エクセルタ</td><td>2827-NH-35-SE-ND</td><td></td></tr><tr><td>眼科用軟膏</td><td>主な医薬品</td><td>10033691</td><td></td></tr><tr><td>過ヨウ素酸シッフ(PAS)染色キット&nbsp;</td><td>アブカム</td><td>AB150680</td><td></td></tr><tr><td>パウダーフリー滅菌手袋</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>19020558</td><td></td></tr><tr><td>カセットの処理/埋め込み</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>15-197-700A</td><td></td></tr><tr><td>サイズ3メス</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>22-079-657</td><td></td></tr><tr><td>小さな鋸歯状の半湾曲鉗子</td><td>ロボズ外科用器具株式会社</td><td>RS-5135</td><td></td></tr><tr><td>小型手術用ハサミ</td><td>ロボズ外科用器具株式会社</td><td>RS-5850</td><td></td></tr><tr><td>標準光学顕微鏡</td><td></td><td></td><td>膣細胞診塗抹標本および組織学的分析の評価に。</td></tr><tr><td>スチールメスの刃 #10</td><td>B.ブラウン</td><td>BB510</td><td></td></tr><tr><td>滅菌ガーゼ</td><td>メディコム</td><td>HMWS077</td><td></td></tr><tr><td>滅菌パイレックスガラスペトリ皿</td><td>コーニング</td><td>70160-101</td><td></td></tr><tr><td>温度調節式電気パッド&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>VICRYL RAPIDE(ポリグラクチン910)吸収性縫合糸</td><td>株式会社エティコン</td><td>W9918</td><td></td></tr><tr><td>キシラジン&nbsp;</td><td>アルファサンインターナショナルb.v</td><td>2110333-10</td><td></td></tr></tbody></table>

子宮内膜腫に関連する不妊症を研究するための実験的モデルマウスの確立

Establishment of an Experimental Mouse Model of Endometrioma to Study its Related Infertility

OMAの設立成功 移植プロトコルに供された12匹のマウスのうち、10匹は肉眼的な解剖学的および組織学的レベルの両方で特徴的なOMA病変を示し、成功率は83%でした。肉眼的検査では、卵巣に付着した液体で満たされた病変が明らかになり、臨床OMAの症状を彷彿とさせます(図2)。 図3に示すように、病理組織学的精査により、異所性子宮内膜組織の移植が成功したことが確認されました。さらに、子宮内膜症病変の浸潤は、インプラントの横の卵胞の大規模な閉鎖を引き起こし、卵巣環境への干渉を示しています。
モデルの特異性 モデルの有効性にとって重要だったのは、卵巣子宮内膜症に対する特異性でした。徹底的な検査の結果、他の骨盤内臓器や腹部臓器には無関係な子宮内膜症インプラントは確認されず、このモデルの精度と、子宮内膜腫とそれに関連する不妊症を調査するための堅牢なツールとしての可能性が強調されました。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66240/66240fig01.jpg"> 
図 1: 子宮内膜腫モデルの生成。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66240/66240fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66240/66240fig02.jpg"> 
図2:子宮内膜腫の肉眼的解剖学。 偽対照群と比較して、移植後4週間の卵巣形態と関連して異所性子宮内膜嚢胞性増殖が認められた。青い破線の輪郭:子宮内膜症病変。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66240/66240fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66240/66240fig03.jpg"> 
図3:マウスモデルからの子宮内膜病変の組織学的染色切片。 偽対照群と比較して、組織学のOMAグループでは、移植後4週間で卵巣と関連して異所性子宮内膜嚢胞性成長が見られました。黒い矢印は閉鎖性卵胞を示します。スケールバー= 0.5 mm。略語:OMA =子宮内膜腫。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66240/66240fig03large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>

Endometrioma (OMA), a subtype of endometriosis characterized by the formation of endometriotic cysts in the ovaries, affects 17-44% of individuals ...

私たちの研究範囲は、子宮内膜腫関連不妊症の根底にあるメカニズムを理解することに焦点を当てています。私たちは、子宮内膜腫をシミュレートするマウスモデルを開発し、生殖能力への影響を調査することで、知識のギャップに対処することを目指しています。子宮内膜症研究の分野では、最近の発展には、子宮内膜症の根底にある分子メカニズムの理解の進歩、診断と治療のための新しいマーカーの同定、子宮内膜腫などの特定のサブタイプを研究するための革新的なモデルの開発が含まれます。これらの開発は、子宮内膜症の知識と潜在的な治療戦略の向上に貢献します。子宮内膜腫研究における現在の実験上の課題には、信頼できる動物モデルの欠如、病因と生殖能力への影響に関する理解の限界、再発研究と診断検査の必要性が含まれます。子宮内膜腫マウスモデルと調査結果の組み込みは、これらの課題に対処し、この分野を前進させます。私たちのプロトコルは、他の技術と比較して明確な利点を提供します。特に子宮内膜腫の模倣に焦点を当てていますが、この方法では他のサブタイプは確立されていません。高い成功率で遺伝子組み換えが可能になり、人間と同様の生殖特性を再現できるため、子宮内膜腫関連の不妊症を研究するための貴重なツールとなります。私たちの発見は、子宮内膜症研究の新時代への道を切り開きました。私たちのモデルは、長年のギャップを埋めることで、革新的な洞察を約束し、子宮内膜腫の理解、治療、そして潜在的に予防に革命をもたらします。再発研究と診断研究の結果を統合することで、私たちの研究は子宮内膜症の研究と患者ケアのより広範な文脈を強化します。[ナレーター]雄のフェロモンを含む寝具を集めた後、雌のマウスケージに48時間導入します。10ミリリットルのPBSをペトリ皿に注ぎ、綿棒の一端を浸して液体を吸収します。ケージからマウスを1匹そっと取り出し、蓋の上に置きます。湿らせた綿棒を膣内にそっと挿入し、綿棒を動物の体の長軸に対して45度ゆっくりと回転させます。膣の発光壁から細胞を集めた後、綿棒を慎重に引き抜きます。綿棒の先端を、事前に標識された清潔なスライドガラス上でそっと転がして、収集した細胞を転写します。発情期を示す角化上皮細胞の存在について、顕微鏡下でスライドを調べます。まず、ドナーが安楽死させた発情期の雌マウスの腹部を70%エタノールで消毒します。滅菌手術用ハサミを使用して、腹膜の正中線に沿って1センチメートルの切開を行い、筋肉層を露出させます。次に、別のハサミを使用して筋肉層を切り、骨盤腔を露出させます。鉗子の先端を閉じ、鈍い中央部分を使用して腸をそっと持ち上げます。子宮を見つけた後、子宮角全体を滅菌解剖し、両方の子宮角を確実に除去します。切除した組織をPBSを含むペトリ皿に入れ、余分な脂肪組織を取り除きます。滅菌メスを使用して、組織を1ミリメートルの立方体に細かく解剖します。組織を湿らせるために定期的にPBSを追加します。麻酔をかけたレシピエントマウスを無菌手術ボード上に仰臥位に置きます。後ろ足を優しく操作して手術部位を特定し、皮膚の下に骨が隆起しているのを感じます。手術部位を70%エタノール綿棒で消毒し、次にベタジンで消毒します。選択した部位で、3〜5ミリメートルの正確な横切開を行います。利き手ではない鉗子で卵巣を安定させ、わずかな分離を観察しながら卵巣滑液包に100マイクロリットルのPBSを注入します。滑液包に小さなスリットを作り、マイクロ鉗子を使用して、1ミリメートルの立方体の子宮組織片を移植します。手術後は、筋肉層を吸収性縫合糸で縫合し、皮膚を非吸収性縫合糸で縫合します。4週間後、移植したレシピエントマウスをハウジングケージから取り出します。安楽死させたレシピエントマウスに正中線切開を行い、臓器検査のために腹腔を露出させます。腹腔に無関係な子宮内膜症病変がないか徹底的に検査します。次に、目に見える病変のある卵巣を抽出して写真を撮ります。病変のある卵巣を10%中性緩衝ホルマリンで固定します。組織切片を切片化してスライドに取り付けた後、スライドキシレン溶液を配置してパラフィンを除去します。スライドを一連の減少するエタノール濃度に配置することにより、組織切片を再水和します。組織切片を室温で5〜10分間1%過ヨウ素酸で処理します。次に、スライドを蒸留水で完全にすすぎ、残留過ヨウ素酸を除去します。次に、組織切片をシフト溶液で15分間染色します。スライドを熱い水道水ですすぎ、余分な汚れを取り除き、次に蒸留水ですすぎます。組織切片をメイヤーのヘマトキシリンで2〜3分間対比染色します。ブルーイング試薬を30秒間塗布する前に、スライドを流水道水ですすいでください。スライドを蒸留水ですすぎた後、エタノール濃度を上げて切片を脱水します。セクションをキシレンに浸して透明にします。セクションに封入剤を塗布し、気泡を避けてカバースリップをそっと置きます。乾燥後、光学顕微鏡でスライドを調べて、卵巣の子宮内膜症を確認する子宮内膜腺、間質、および出血性嚢胞の存在を確認します。偽対照群と比較して、子宮内膜群では移植後 4 週間で異所性子宮内膜嚢胞性成長が卵巣形態に関連して見られました。さらなる組織病理学的精査により、子宮内膜群における異所性子宮内膜組織の着床に成功したことが確認されました。

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Research

JoVE Journal

Medicine

医学

腸間膜動脈カスケードに子宮組織の自動移植によるマウスおよびラットにおける子宮内膜症の外科的誘導の説明。...

子宮組織の自動移植による外科的に誘発される子宮内膜症のマウスモデル

ここでは、マウスに移植した蛍光に分類されたひと子宮内膜片のライブ...

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微妙な子宮内膜症の術中検出：腹膜整合性の喪失に伴う骨盤痛の検出および治療のための新たなパラダイム

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初代ヒト骨髄およびその悪性腫瘍を研究する三次元組織培養モデル

私たちは、ヒト乳癌におけるホルモン作用を研究するための新規のex vivoモデルを開発した。これは、組織構造、細胞間相互作用、およびパラクリンシグナル伝達を維持する外科乳房組織標本から単離された組織の微細構造に基づいている。...

アン<em&gt;エクスビボ</emヒト乳癌でホルモンの作用を研究するために&gt;モデル

学ぶ子宮内膜腫関連不妊症の病態生理メカニズムをC57BL/6Jマウスを用いた新規モデルで解明する方法。このモデルは生殖医学の知見向上と治療法開発に貢献します。

子宮内膜腫に関連する不妊症を研究するための実験的モデルマウスの確立

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