Name: マウス鎖骨上褐色脂肪組織の解剖、組織学的処理、遺伝子発現解析 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-29T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: 学ぼう マウス鎖骨上褐色脂肪組織の精密解剖法と組織学的処理、遺伝子発現解析の手法。顕微鏡下での摘出とホモジナイズ処理により、代謝研究における褐色脂肪の生理機能解明に貢献するデータ収集が可能となる。

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この研究は、NIHのNIDDKの賞番号R01DK116899、USDA/ARSの賞番号3092-51000-064-000D、およびベイラー医科大学心臓血管研究所のパイロット賞によってサポートされています。フローチャートは BioRender を使用して作成されました。

マウスにおけるscBATの形態学的および分子的特性評価

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</ol>

著者には開示すべき利益相反はありません。

このプロトコルでは、H&Eおよび遺伝子発現解析のためのscBATの解剖および処理手順を詳細に示します。scBATは頸部の中間層にあり、太い静脈に沿っているため、このデポの分離には正確な技術が必要です。具体的には、デポをはっきりと見るために、首を開いた後にマウスを解剖顕微鏡の下に置くことをお勧めします。一対の極細点鉗子を使用して、唾液腺と周囲の静脈からscBATを剥がし、静脈に穴を開けないように注意する必要があります。出血が多すぎると、scBATの位置を特定するのが難しくなります。H&E染色用のscBATを処理するために、プロトコルのセクションに示されているように、4% PFA、脱水剤アルコール、および有機溶媒であるトルエンの使用を含むように、公開されているプロトコル19 の使用を若干修正して適合させました。手順全体が完了するまでに~6日かかり、H&E染色されたスライドは染色完了の翌日に画像化できます。
RNAを出発物質とするRT-qPCRは、脂肪組織生物学の分野で遺伝子発現解析に最も頻繁に使用される方法です。scBATはiBATに比べて比較的小さなBATデポであるため、遺伝子発現に十分なRNAを得ることは困難です。RNAの収量を増やすには、プロトコールの項で概説されているように、凍結した状態で乳棒と乳鉢を使用して組織を粉末化することから始めて、逐次ライセート調製ステップを適用することをお勧めします。このライセート調製法を用いて、1匹の成体マウスからscBATの遺伝子発現解析用RNAサンプルを高収量かつ高品質に得ることに成功しました。このライセート調製法は、タンパク質溶解バッファーを使用してウェスタンブロッティング用のscBATから高品質のタンパク質ライセートを得るためにも適用できます。
マウスiBATを用いて、熱発生と代謝におけるBATの機能に関する実質的な知識を得ることができました。scBATを含む、これまで認識されていなかったマウスとヒトのBATデポが最近いくつか同定されたことで、マウスと成体におけるBATの生理学的寄与を完全に理解するには、さらなる研究が必要であることが明らかになりました。特に、これらの新たに発見されたBATデポの起源、機能、および熱発生および局所的または全身代謝への関与を明らかにする研究が必要です。

米国および世界中で肥満の有病率が増加していることから、肥満の病因を理解し、潜在的な治療法を特定することに大きな関心が寄せられています1,2。脂肪組織は代謝に重要な役割を果たしており、脂肪組織の調節不全は肥満の発症につながる可能性があります。一般的に、脂肪組織には白色脂肪組織と褐色脂肪組織の2種類があります。白色脂肪組織(WAT)は化学エネルギーを蓄え、内分泌因子を分泌することができますが、褐色脂肪組織(BAT)は化学エネルギーを使用して熱を発生させ、寒さの中で体温を維持することができます3,4。このユニークな能力により、BATの活性化はエネルギー消費を増加させ、インスリン感受性を改善することもできます5。
BATは、タンパク質1(UCP1)6の脱共役によって媒介される非震え熱発生を介してその機能を発揮します。マウスやヒトを含む哺乳類は、さまざまな量のBATを保有しています。BATの古典的な見解は、これらの脂肪組織は成人のヒトよりもマウスや乳児に豊富に存在するというものです。肩甲骨の間の背側上部に位置するiBATは、マウスで最も研究されているBATデポです。放射性同位元素イメージングと生検検査を適用することにより、最近の研究では、成人のヒトでいくつかのBATデポが特定されました。それらのいくつかは、頸部深部と鎖骨上領域に見られるデポを含め、マウスや他のモデル動物ではこれまで同定されていなかった7,8,9,10,11。これらのBATデポの中で、scBATは成人の人間に最も頻繁に見られるデポです。ヒトで新たに発見されたこれらのBAT貯蔵所の起源と分子的寄与をよりよく理解するためには、これらの貯蔵庫の機能的役割を追跡し、テストするための遺伝的および分子的操作を可能にするマウスの同等の貯蔵所を特定することが不可欠である。したがって、私たちらは、scBAT12,13、胸部血管周囲BAT14,15、腎周囲BAT16、および大動脈周囲BAT17など、マウスのさまざまな解剖学的位置で、これまで知られていなかったいくつかのBATデポを特定しました。マウスscBATは、解剖学的にはヒトscBATに似ており、形態学的には古典的iBATに似ており、高レベルのUCP112を発現している。
容易に解剖できるマウスiBATとは異なり、scBATはマウス頸部の中間層、唾液腺の下、外頸静脈に沿って位置しています。組織学的および分子学的分析のためのこのデポの分離は困難な場合があります。ここでは、出生後および成体マウスからscBATを解剖し、このデポを組織学および遺伝子発現解析のために処理する手順を詳細に説明します。

<table><tbody><tr><td>95% 脱水アルコール (Flex 95)</td><td>Epredia</td><td>8201</td><td></td></tr><tr><td>100% 脱水アルコール (Flex 100)</td><td>Epredia</td><td>8101</td><td></td></tr><tr><td>96 ウェル PCR プレート</td><td>Bio-Rad</td><td>MLL9601</td><td></td></tr><tr><td>Aurum Binding Mini Column</td><td>Bio-Rad</td><td>7326826</td><td></td></tr><tr><td>Aurum High Stringency Wash</td><td>Bio-Rad</td><td>7326803</td><td></td></tr><tr><td>Aurum Low Stringency Wash</td><td>バイオ・ラッド</td><td>7326804</td><td></td></tr><tr><td>ベースモールド (埋め込み用)</td><td>Tissue-Tek</td><td>4122</td><td></td></tr><tr><td>BD PrecisionGlide Needle 21g x 1 1/2"</td><td>Becton Dickinson</td><td>305167</td><td></td></tr><tr><td>C1000 Touch Thermal Cycler</td><td>Bio-Rad</td><td>1840148</td><td></td></tr><tr><td>Capless Microcentrifuge Tubes 2 mL</td><td>Fisherbrand</td><td>02-681-453</td><td></td></tr><tr><td>遠心分離機&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td>5430R</td><td></td></tr><tr><td>CFX Opus 96 リアルタイムPCR装置</td><td>Bio-Rad</td><td>12011319</td><td></td></tr><tr><td>Chloroform</td><td>Thermo Scientific Chemicals</td><td>383760010</td><td></td></tr><tr><td>Cytoseal 60 低粘度封入剤</td><td>Epredia</td><td>83104</td><td></td></tr><tr><td>DEPC処理水</td><td>Ambion</td><td>AM 9906</td><td></td></tr><tr><td>解剖顕微鏡</td><td>Nikon</td><td></td><td></td>SMZ1500</tr><tr><td>DNase 希釈液</td><td>バイオ・ラッド</td><td>7326805</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>バイオ・ラッド</td><td>7326828</td><td></td></tr><tr><td>dNTPs</td><td>Invitrogen</td><td>18427013</td><td></td></tr><tr><td>溶出液</td><td>バイオ・ラッド</td><td>7326801</td><td></td></tr><tr><td>EM 400 包埋培地パラフィン</td><td>ライカバイオシステム</td>ズ <td>3801320</td><td></td></tr><tr><td>エオシン Y (0.5% w/v)</td><td>RICCA</td><td>2858-16</td><td></td></tr><tr><td>フォーミュラR 浸透培地パラフィン</td><td>ライカバイオシステムズ</td><td>3801470</td><td></td></tr><tr><td>Genemark Nutator Gyromixer 349</td><td>Bio Express</td><td>S-3200-2</td><td></td></tr><tr><td>Gill #3 Hematoxylin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>GHS332-1L</td><td></td></tr><tr><td>HCl (for HCL-Ethanol)</td><td>Fisher Chemical</td><td>A142212</td><td></td></tr><tr><td>IP VI Embedding Cassettes</td><td>Leica Biosystems</td><td>39LC-550-5-L</td><td></td></tr><tr><td>Koptec's Pure Ethanol - 200 Proof (70% Ethanol用)</td><td>Decon Labs</td><td>V1001</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2 (25 mM)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R0971</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuge Tubes 1.7 mL</td><td>Avantor</td><td>87003-294</td><td></td></tr><tr><td>Microseal 'B' Seals (adhseive seals)</td><td>Bio-Rad</td><td>MSB1001</td><td></td></tr><tr><td>ミクロトーム</td><td>ライカバイオシステムズ</td><td>RM2245</td><td></td></tr><tr><td>分子生物学グレード 水</td><td>コーニング</td><td>46-000-CM</td><td></td></tr><tr><td>モルタル クアーズ テック</td><td>トーマス サイエンティフィック</td><td>60310</td><td></td></tr><tr><td>NaCl (0.85% 生理食塩水用)</td><td>フィッシャー バイオ試薬</td><td>BP358-212</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop 分光光度計</td><td>NanoDrop Technologies</td><td>ND-1000 UV/Vis</td><td></td></tr><tr><td>オリゴ dT</td><td>Invitrogen</td><td>18418020</td><td></td></tr><tr><td>パラフィン セクション 浮選槽</td><td>Boekel Scientific</td><td>14792V</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド (PFA)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148-500G</td><td></td></tr><tr><td>PCR チューブ ストリップ</td><td>Avantor</td><td>76318-802</td><td></td></tr><tr><td>クアーズ テック</td><td>トーマス サイエンティフィック</td><td>60311</td><td></td></tr><tr><td>乳棒 ペレット モーター</td><td>キンブル</td><td>749540-0000</td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水(PBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Precision Model 19真空オーブン&nbsp;</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>CAT#51221162</td><td></td></tr><tr><td>プライマー:36B4&nbsp;(フォワード) 10 &mu;M 5' TGA AGT GCT CGA CAT CAC AGA GCA 3'</td><td></td><td></td><td>陳研究室 オリゴデータベース</td></tr><tr><td>プライマー:36B4(リバース)10 &mu;M 5' GCT TGT ACC CAT TGA TGA TGG AGT GT 3'</td><td></td><td></td><td>陳研究室 オリゴデータベース</td></tr><tr><td>Primer: Fabp4 (forward) 10 &mu;M 5フィートACA CCG AGA TTT CCT TCA AAC TG 3'</td><td></td><td></td><td>陳研究室 オリゴデータベース</td></tr><tr><td>プライマー: Fabp4 (リバース) 10 &mu;M 5フィートCCA TCT AGG GTT ATG ATG CTC TTC A 3'</td><td></td><td></td><td>陳研究室 オリゴデータベース</td></tr><tr><td>プライマー: Glut 4 (フォワードプライマー) 10 &mu;M 5フィートCTG、ATT、CTG、CTG、CCC、TTC、TGT、CCT、3フィート</td><td></td><td></td><td>陳研究室 オリゴデータベース</td></tr><tr><td>入門:Glut 4(逆)10 &mu;M 5フィートGAC ATT GGA CGC TCT CTC TCC AAC TT 3'</td><td></td><td></td><td>Chen lab Oligo database</td></tr><tr><td>Primer: PPARg (フォワード) 10 &mu;M 5フィートAGG GCG ATC TTG ACA GGA AAG ACA 3'</td><td></td><td></td><td>Chen lab オリゴデータベース</td></tr><tr><td>入門: PPARg (リザーブ) 10 &mu;M 5フィートAAA TTC GGA TGG CCA CCT CTT TGC 3'</td><td></td><td></td><td>Chen lab オリゴデータベース</td></tr><tr><td>入門: Ppargc1a (逆) 10 &mu;M 5' ATG TTG CGA CTG CGG TTG TGT ATG 3'</td><td></td><td></td><td>陳研究室 オリゴデータベース</td></tr><tr><td>入門: Ppargc1a(フォワード) 10 &mu;M 5' ACG TCC CTG CTC AGA GCT TCT CA 3'</td><td></td><td></td><td>陳研究室 オリゴデータベース</td></tr><tr><td>入門: Ucp1 (フォワード) 10 &mu;M 5フィートAGC CAC CAC AGA AAG CTT GTC AAC 3'</td><td></td><td></td><td>陳研究室 オリゴデータベース</td></tr><tr><td>入門: Ucp1 (リバース) 10 &mu;M 5フィートアカ GCT TGG TAC GCT TGG GTA CTG 3'</td><td></td><td></td><td>Chen lab Oligo database</td></tr><tr><td>RNA isolation solution (PureZol)</td><td>Bio-Rad</td><td>7326880</td><td></td></tr><tr><td>RNase Away (表面除染剤)</td><td>Thermo Scientific</td><td>1437535</td><td></td></tr><tr><td>RNase H</td><td>NEB</td><td>M0297S</td><td></td></tr><tr><td>Rnase inhibitor (RNase Out)</td><td>Invitrogen</td><td>10777019</td><td></td></tr><tr><td>Scintillation Vial(ガラス)</td><td>電子顕微鏡Sciences</td><td>72632</td><td></td></tr><tr><td>スライド乾燥ベンチ&nbsp;</td><td>電熱(コールパーマー)</td><td>MH6616</td><td></td></tr><tr><td>ステンレス染色ラック</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>70312-54</td><td></td></tr><tr><td>実体顕微鏡(埋め込み用)</td><td>オリンパス</td><td>SZ51</td><td></td></tr><tr><td>スジカルハサミ</td><td>マッケソン</td><td>43-1-104</td><td></td></tr><tr><td>超微細点ストレート解剖鉗子</td><td>アバンター</td><td>82027-402</td><td></td></tr><tr><td>スーパーフロストプラス顕微鏡スライド</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>Superscript III Reverse Transcriptase (5x First-Strand Buffer and 0.1M DTTを含む)&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>18080044</td><td></td></tr><tr><td>SUR-VET シリンジ、針付き 25 G x 5/8", 1 mL</td><td>Terumo</td><td>100281</td><td></td></tr><tr><td>SYBR Green (qPCR 酵素マスター混合物)</td><td>Applied Biosystems</td><td>A25778</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek Manual Slide Staining Set (jars)</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>SKU: 62540-01</td><td></td></tr><tr><td>Toluene</td><td>Fisher Chemical</td><td>T324-1</td><td></td></tr><tr><td>移送用ピペット</td><td>Avantor</td><td>414004-005</td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Fisher Chemical</td><td>X3P-1GAL</td><td></td></tr></tbody></table>

マウス鎖骨上褐色脂肪組織の解剖、組織学的処理、遺伝子発現解析

Dissection, Histological Processing, and Gene Expression Analysis of Murine Supraclavicular Brown Adipose Tissue

褐色脂肪組織(BAT)を介した熱産生は、代謝の制御に重要な役割を果たしており、その形態と機能は、マウスやヒトの環境刺激によって大きく影響を受けます。現在、マウスの背側上部の2つの肩甲骨の間に位置するマウス肩甲間BAT(iBAT)は、研究室がBAT機能を研究するために使用する主要なBATデポです。最近、これまで知られていなかったいくつかのBATデポがマウスで同定され、その中にはヒト鎖骨上褐色脂肪組織に類似したものも含まれていました。iBATとは異なり、マウス鎖骨上褐色脂肪組織(scBAT)は頸部の中間層に位置するため、簡単にアクセスすることはできません。
新たに同定されたマウスscBATの研究を容易にするために、出生後および成体マウスから無傷のscBATを解剖する手順を詳述したプロトコルを本明細書に提示する。scBATは他の脂肪デポに比べてサイズが小さいため、手順はscBATの処理に特化して変更され、最適化されています。これらの変更の中には、組織採取中に解剖顕微鏡を使用して、凍結scBATサンプルの精度と均質化を高め、その後のqPCR分析の効率を高めることが含まれます。これらの最適化により、マウスにおけるscBATの同定、形態学的外観、および分子特性を決定することができます。

背中の2つの肩甲骨の間の皮下層に位置するiBATとは異なり、scBATは頸部の中間層に位置し、骨格筋の層と唾液腺の層の間に深く伸び、外頸静脈に沿って成長します(図1A)。scBATの解剖は、iBATほど簡単ではありません。ここでは、出生後および成体マウスから無傷のscBATを解剖するための重要なステップを含む詳細な手順を提供します(図1B、C)。提供されたプロトコルを使用して頸部を開いた後、scBATの薄層を解剖顕微鏡で識別し、接続された唾液腺と一対の鉗子で外頸静脈から剥離することができます(図1D、E)。デポの形態を評価するために、新たに単離されたscBATを、以前に発表されたH&amp;E染色手順19 (図2A)と組み合わせた提供された処理手順を使用して処理しました。 図2Bに示すように、scBATはBATデポに典型的な組織構造を持ち、健康な出生後および成体マウスにおいて多くの小さな多房脂肪細胞で構成されています。scBATの遺伝子発現レベルを評価するために、所定の手順を用いて単離されたscBATデポからRNAを抽出しました(図3A)。次に、目的の遺伝子の発現レベルを標準的なRT-qPCR法で評価できます(図3A)。 図3Bに示すように、BAT発生のマスターレギュレーターである Ppargを含むscBAT機能の媒介に関与する遺伝子の発現レベルの違い。 Fabp4 と Glut4、2つの栄養素輸送体。また、熱発生に関与する2つの遺伝子である Ucp1 と Ppargc1aは容易に決定できます。比較のために、単離されたiBATからRNAを抽出し、上記の遺伝子の発現も提供された手順を使用して評価しました(図3A)。これらの遺伝子の発現レベルは、これら2つのデポ間で比較的類似しています。(図3B)。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66475/66475fig1.jpg"> 図1:scBATの解剖学的位置と解剖プロセス。 (A)首の中間層におけるscBATの位置。(B)皮膚を切除する前後の首の表層。スケールバー = 250 μm。黄色の点線は、U字型に切開した後に露出する領域の輪郭を描いています。(C)解剖中の視覚的明瞭さを高めるために解剖顕微鏡の下に置かれたマウスの死骸の画像。(D、E)scBATを3週間齢と3ヶ月齢のマウスから除去する前後の頸部中間層の代表的な画像。スケールバー = 250 μm。黄色の点線は、露出した二国間scBATデポの輪郭を描いています。n = 2 です。略語:scBAT =鎖骨上褐色脂肪組織;sfi = 表層;SG = 唾液腺;tr =気管;JV = 外頸静脈;SM = 骨格筋。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66475/66475fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66475/66475fig2.jpg"> 図2:H&amp;E染色のためのscBATの処理。 (A)H&amp;E染色のためのscBAT処理の主なステップを示すフローチャート。組織を解剖した後、順次固定、脱水、包埋、切片化、染色を行います。(B)生後3週間および3ヶ月齢のマウスのH&amp;E染色scBATの代表的な画像。n = 3 各発達段階;スケールバー = 250 μm (低倍率画像用)。スケールバー = 50 μm (高倍率画像の場合)。略語:scBAT =鎖骨上褐色脂肪組織;PFA =パラホルムアルデヒド;H&amp;E = ヘマトキシリンとエオシン。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66475/66475fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66475/66475fig3.jpg"> 図3:遺伝子発現解析のためのscBATからのRNAの調製。 (A)scBAT遺伝子発現のRNA単離およびRT-qPCR解析の段階を示すフローチャート。サイズが小さく、テクスチャーが柔らかいため、scBATデポを急速凍結し、液体窒素で粉砕することは、RNA単離を成功させるために不可欠です。 (B)生後3ヶ月の雄マウスから単離したscBATおよびiBATにおける 、Pparg、 Fabp4、 Glut4、 Ucp1、 およびPpargc1aを含むマーカー遺伝子の相対発現、n = 5。データは平均±SEMとして提示されています。 36B4 は、ノーマライゼーションのためのハウスキーピング遺伝子として使用されました。略語:scBAT =鎖骨上褐色脂肪組織;RT-qPCR = 逆転写定量PCR;LN2 = 液体窒素。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66475/66475fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。</a>

ここでは、マウスの鎖骨上褐色脂肪組織の組織学的および遺伝子発現解析を解剖および実行するための実用的な手順を提供します。

Brown adipose tissue (BAT)-mediated thermogenesis plays an important role in the regulation of metabolism, and its morphology and function can be greatly ...

dissection-histological-processing-gene-expression-analysis-murine

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

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マウスの子犬からの白と茶色の脂肪デポコレクション:マウスの子犬から白い脂肪組織と茶色の脂肪組織を収穫するための外科的処置

原因肥満や他の併存疾患の間で抜本的なと負の接続に、ロールの脂肪の研究は、病気で再生し、全体的な健康が保証されています。私たちは、 その場で、そしてインビトロ方法で使用して脂肪の研究を可能に脂肪デポの単離および切除するためのプロトコルを提示する。...

マウス脂肪デポのローカライズ、識別、および切除

連続凍結切片を、単一のマウス骨格筋からの隣接領域を用いた遺伝子発現の測定のための組織学的応用およびRNAの濃縮を可能にするために収集されます。直接アプリケーション間で比較され、プールされた凍結切片と測定30mgの - 高品質のRNAが20から得られます。...

遺伝子発現と組織学的分析のためにシングルマウス骨格筋の連続領域の凍結切片化

ここの褐色脂肪組織 (BAT) マウスから分離した高スループット DNA シーケンス (チップ seq) 続いて効率的なクロマチン免疫沈降 (チップ)...

マウスの褐色脂肪組織のクロマチン免疫沈降

脂肪細胞は離散的な拠点に存在し、独自のマイクロ環境の中で多様な役割を果たしています。脂肪細胞の性格と機能の地域的な違いが明らかになるにつれて、デポの標準化された識別と隔離は、フィールドの進歩のために重要です。本明細書では、様々なマウス脂肪デポの切除に関する詳細なプロトコルを提示する。...

多様なマウス脂肪デポの同定と解剖

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神経紋の分離、培養、脂肪形成誘導、周食脂肪組織由来の脂肪由来幹細胞

この報告書は、新生児マウスからの原発性褐色および白色の前突細胞の同時分離のためのプロトコルを記述する。単離された細胞は培養中に増殖させ、完全に成熟した白および褐色のアディポサイトに分化するように誘導することができる。この方法は、培養中の一次脂肪細胞の遺伝的、分子的、機能的特徴付けが可能となる。...

新生児マウスからの白色および褐色の前読細胞の分離と分化

この研究では、遺伝子およびタンパク質発現解析のためにマウス褐色脂肪細胞を単離する新しい方法について説明します。...

遺伝子およびタンパク質発現解析のためのマウス肩甲間褐色脂肪組織からの褐色脂肪細胞の単離(英語)

マイクロPET/MRイメージングベースのアプローチを用いたマウスにおける熱発生性脂肪デポーの機能イメージングおよび定量。...

[18F]FDGマイクロPET/MRイメージングを用いたマウスの褐色およびベージュ色の脂肪組織の可視化と定量化

新生仔マウスの肩甲間褐色脂肪組織の間質血管分画から前駆脂肪細胞を単離し、脂肪滴を蓄積する細胞に分化し、分子マーカーを発現し、成熟した褐色脂肪細胞のミトコンドリア形態を示します。これらの細胞は、免疫蛍光法および透過型電子顕微鏡法によってさらに分析されます。...

新生仔マウスの肩甲間脂肪組織の間質血管画分からの褐色脂肪細胞の分化とイメージング

このプロトコルは、マウス脂肪組織から間質血管画分(SVF)を半自動分離して、脂肪前駆細胞を取得し、 in...

組織解離剤を用いたマウス白色脂肪組織からの間質血管画分の半自動単離(英語)

学ぼう マウス鎖骨上褐色脂肪組織の精密解剖法と組織学的処理、遺伝子発現解析の手法。顕微鏡下での摘出とホモジナイズ処理により、代謝研究における褐色脂肪の生理機能解明に貢献するデータ収集が可能となる。

マウス鎖骨上褐色脂肪組織の解剖、組織学的処理、遺伝子発現解析

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