2024年3月8日
このプロトコルは、個々のヒト末梢血単核細胞のサイトカイン分泌動態を定量的に測定するための高度なマイクロ流体プラットフォームを説明しています。このプラットフォームは、例としてリポ多糖で刺激された個々の細胞ごとに最大3つのサイトカイン(IL-6、TNFα、およびIL-1β)を並行して測定します。
このプロジェクトでは、単一細胞の分解能で細胞機能を直接、定量的、かつ詳細に分析することを可能にする新しい分析戦略の開発と適用に焦点を当てています。そのため、純粋な1つのデータポイント測定を超えて、宿主や組織内の複雑な応答から生じるこの多機能性をよりよく理解し、活用することを目指しています。これらの機能を包括的に理解することは複雑で困難であり、学際的なアプローチが必要です。
したがって、この文脈における課題の1つは、サンプル、調製物、組織によって大きく異なる可能性のある分泌タンパク質の量とダイナミクスを捕捉するために、アッセイ開発のダイナミックレンジが適切であることを確認することです。免疫応答の調節が乱れると、さまざまな障害が引き起こされ、軽度の発熱から生命を脅かす可能性のある合併症につながる可能性があります。従来のエンドポイント測定を超えて、免疫細胞の調節不全と活性化を単一細胞レベルで動的に直接測定し、さらなる洞察を得ることを提案しました。
そのため、サイトカインは通常、上清中の濃度または活性化細胞の濃度として特定の時点で検出されます。個々の細胞の分泌を直接定量化するためのバルク測定は、エンドポイント測定として、同時分泌と二次分泌を区別しない細胞の不均一性をマスクします。応答の動的側面を見落とす 細胞の完全機能とは、免疫細胞が複数のサイトカインを同時に分泌する能力を指します。
これにより、例えば、脅威に対する反応を微調整したり、このポリ機能を動的に測定したりすることができ、時間の経過とともに免疫反応のさまざまなニュアンスについて十分な洞察を得ることができます。
本研究では、単一細胞レベルでのサイトカイン分泌ダイナミクスを定量的に測定するために設計された高度なマイクロ流体プラットフォームを提示します。このプラットフォームにより、リポポリサッカライドで刺激した個々のヒト末梢血単核球から、3種類のサイトカイン(IL-6、TNFα、およびIL-1β)を同時に測定することが可能です。
単一細胞レベルの解像度でサイトカインの同時および連続的な分泌を解明することは、創薬における免疫応答特性評価の重要な欠落を埋めることになります。このマイクロ流体ドロップレットプラットフォームは、多機能免疫細胞の定量的な時間分解分析を可能にし、ターゲットバリデーションとメカニズムのリスク低減における予測信頼性を高めます。そのモジュール性とマルチプレックス能により、免疫学に特化した研究開発パイプラインにおいて再利用可能な資産として位置付けられます。
このマイクロ流体プラットフォームは、初期の探索から前臨床研究までを統合し、仮説駆動型の免疫ターゲットバリデーションからトランスレーショナルなバイオマーカーの同定までを橋渡しします。