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熱ショックタンパク質70のシャペロン機能を研究するための大腸菌ベースの相補アッセイ
熱ショックタンパク質70のシャペロン機能を研究するための大腸菌ベースの相補アッセイ
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JoVE Journal Biochemistry
Escherichia coli -Based Complementation Assay to Study the Chaperone Function of Heat Shock Protein 70

熱ショックタンパク質70のシャペロン機能を研究するための大腸菌ベースの相補アッセイ

Full Text
1,890 Views
07:14 min
March 8, 2024

DOI: 10.3791/66515-v

Hloniphani Rachel Ncube1, Unarine Dali1, Tendamudzimu Harmfree Dongola1, Addmore Shonhai1

1Department of Biochemistry & Microbiology,University of Venda

AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

このプロトコルは熱衝撃蛋白質70 (Hsp70)のシャペロンの活動を示す。 大腸菌dnaK756 細胞は、天然の機能障害Hsp70を保有し、熱ストレスの影響を受けやすいため、アッセイのモデルとなります。機能的なHsp70の異種導入は、細胞の成長欠乏を救います。

私は、マラリアや結核などのヒト感染症を引き起こす抗原に将来の静電気防御を付与する熱ショックタンパク質の役割を研究しています。私の研究は基本的に、ヒトに感染する病原体の熱ショックタンパク質機構の構造と機能的特徴に焦点を当てています。熱中症蛋白質は一般的に高度な概念を持っていますが、ある程度の機能的特殊化を示します。

さらに、それらは薬剤耐性に関与しています。そのため、さまざまな疾患モデルにおいて薬剤耐性を逆転させるために、それらを標的とする取り組みが進行中です。それらには、生化学的、生物物理学的、バイオインフォマティクス、および細胞生物学的技術が含まれます。

言い換えれば、これらのタンパク質の役割を研究するために、さまざまな分野の技術が使用されています。私たちの場合、マラリア原虫のタンパク質の研究はマラリアの主な原因であり、それらは生産が困難であり、これはこれらのタンパク質を研究する能力を制限します。例えば、タンパク質を結晶化して画像化するのに十分なレベルを生成することは困難です。

我々は、マラリア原虫におけるこれらのタンパク質の機能的ネットワークのいくつかを確立しました。また、マラリアや結核の原因となる病原体において、これらのタンパク質を標的とする化合物を研究するためのアッセイも確立しました。現在のプロトコルは、モデルとして等しいを使用して、HSP 70のシャペロンタンパク質フォールディングの役割と細胞保護機能を調査するために使用されます。このプロトコルは、タンパク質70を標的とする低分子阻害剤のスクリーニングにも採用できます。

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