Name: 同種移植拒絶反応研究のための肝瘻造設術を用いたヘテロトピア補助全肝ラット移植モデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-08T14:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 25 s
Description: 学ぶラットのヘテロトピア補助全肝移植モデルによる肝同種移植拒絶反応のメカニズム。外科的困難性と動物ストレスを軽減し、移植免疫学研究の実用的ツールとして活用可能です。

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<meta charset="utf8"></head><body>ラットにおける肝移植と同種移植片の開存性の分析

<ol><li>Lee, S., Edgington, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+liver+transplantation+utilizing+inbred+rat+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Heterotopic liver transplantation utilizing inbred rat strains.</a> Am J Pathol. 52 (3), 649-669 (1968).</li>
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<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+liver+transplantation+with+flow-regulated+portal+vein+arterialization+offers+a+successful+therapeutic+option+in+acute+hepatic+failure--investigations+in+heterotopic+auxiliary+rat+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl+Int%22%5BJournal%5D)">Auxiliary liver transplantation with flow-regulated portal vein arterialization offers a successful therapeutic option in acute hepatic failure--investigations in heterotopic auxiliary rat liver transplantation.</a> Transpl Int. 19 (7), 581-588 (2006).</li>
<li>Qiao, J., Han, C., Zhang, J., Wang, Z., Meng, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+of+auxiliary+partial+heterotopic+liver+transplantation+with+liver+dual+artery+supply%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Ther+Med%22%5BJournal%5D)">A new model of auxiliary partial heterotopic liver transplantation with liver dual artery supply.</a> Exp Ther Med. 9 (2), 367-371 (2015).</li>
<li>Li, J., Ren, J., Zhang, J., Meng, X. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+kidney-sparing+portal+vein+arterialization+model+of+heterotopic+auxiliary+liver+transplantation+increases+liver+IL-6%2C+TNF-%CE%B1%2C+and+HGF+levels+and+enhances+liver+regeneration%3A+an+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Surg%22%5BJournal%5D)">Modified kidney-sparing portal vein arterialization model of heterotopic auxiliary liver transplantation increases liver IL-6, TNF-α, and HGF levels and enhances liver regeneration: an animal model.</a> BMC Surg. 2, 281-292 (2022).</li>
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<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+partial+liver+grafting+in+rats%3A+effect+of+host+hepatectomy+on+graft+regeneration%2C+and+review+of+literature+on+surgical+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Auxiliary partial liver grafting in rats: effect of host hepatectomy on graft regeneration, and review of literature on surgical technique.</a> Microsurgery. 22 (8), 371-377 (2002).</li>
<li>Schleimer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+auxiliary+rat+liver+transplantation+with+flow-regulated+portal+vein+arterialization+in+acute+hepatic+failure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Heterotopic auxiliary rat liver transplantation with flow-regulated portal vein arterialization in acute hepatic failure.</a> J Vis Exp. (91), e51115(2014).</li>
<li>Prescott, M. J., Lidster, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+quality+of+science+through+better+animal+welfare%3A+the+NC3Rs+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Improving quality of science through better animal welfare: the NC3Rs strategy.</a> Lab Animal. 46 (4), 152-156 (2017).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Banff+schema+for+grading+liver+allograft+rejection%3A+an+international+consensus+document%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Banff schema for grading liver allograft rejection: an international consensus document.</a> Hepatology. 25 (3), 658-663 (1997).</li>
<li>Kwong, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OPTN%2FSRTR+2020+Annual+Data+Report%3A+Liver%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">OPTN/SRTR 2020 Annual Data Report: Liver.</a> Am J Transplant. 22, Suppl 2 204-309 (2022).</li>
<li>Nacif, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Late+acute+rejection+in+liver+transplant%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Arq+Bras+Cir+Dig%22%5BJournal%5D)">Late acute rejection in liver transplant: a systematic review.</a> Arq Bras Cir Dig. 28 (3), 212-215 (2015).</li>
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<li>Ceresa, C. D. L., Nasralla, D., Coussios, C. C., Friend, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+case+for+normothermic+machine+perfusion+in+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transpl%22%5BJournal%5D)">The case for normothermic machine perfusion in liver transplantation.</a> Liver Transpl. 24 (2), 269-275 (2018).</li>
<li>Nasralla, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+randomized+trial+of+normothermic+preservation+in+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A randomized trial of normothermic preservation in liver transplantation.</a> Nature. 557 (7703), 50-56 (2018).</li>
<li>Markmann, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+portable+normothermic+blood-based+machine+perfusion+on+outcomes+of+liver+transplant%3A+The+OCS+liver+PROTECT+randomized+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Surg%22%5BJournal%5D)">Impact of portable normothermic blood-based machine perfusion on outcomes of liver transplant: The OCS liver PROTECT randomized clinical trial.</a> JAMA Surg. 157 (3), 189-198 (2022).</li>
<li>Goldaracena, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-inflammatory+signaling+during+ex+vivo+liver+perfusion+improves+the+preservation+of+pig+liver+grafts+before+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transpl%22%5BJournal%5D)">Anti-inflammatory signaling during ex vivo liver perfusion improves the preservation of pig liver grafts before transplantation.</a> Liver Transpl. 22 (11), 1573-1583 (2016).</li>
<li>Carlson, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-10+and+transforming+growth+factor-beta+cytokines+decrease+immune+activation+during+normothermic+ex+vivo+machine+perfusion+of+the+rat+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transpl%22%5BJournal%5D)">Interleukin-10 and transforming growth factor-beta cytokines decrease immune activation during normothermic ex vivo machine perfusion of the rat liver.</a> Liver Transpl. 27 (11), 1577-1591 (2021).</li>
<li>Ig-Izevbekhai, K., Goldberg, D. S., Karp, S. J., Foley, D. P., Abt, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosuppression+in+donation+after+circulatory+death+liver+transplantation%3A+Can+induction+modify+graft+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transpl%22%5BJournal%5D)">Immunosuppression in donation after circulatory death liver transplantation: Can induction modify graft survival.</a> Liver Transpl. 26 (9), 1154-1166 (2020).</li>
<li>Kageyama, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemia-reperfusion+Injury+in+allogeneic+liver+transplantation%3A+A+role+of+CD4+T+cells+in+early+allograft+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Ischemia-reperfusion Injury in allogeneic liver transplantation: A role of CD4 T cells in early allograft injury.</a> Transplantation. 105 (9), 1989-1997 (2021).</li>
<li>Oldani, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+short-term+machine+perfusion+on+the+risk+of+cancer+recurrence+after+rat+liver+transplantation+with+donors+after+circulatory+death%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The impact of short-term machine perfusion on the risk of cancer recurrence after rat liver transplantation with donors after circulatory death.</a> PLoS One. 14 (11), e0224890(2019).</li>
<li>Schlegel, A., Graf, R., Clavien, P. A., Dutkowski, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothermic+oxygenated+perfusion+%28HOPE%29+protects+from+biliary+injury+in+a+rodent+model+of+DCD+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Hypothermic oxygenated perfusion (HOPE) protects from biliary injury in a rodent model of DCD liver transplantation.</a> J Hepatol. 59 (5), 984-991 (2013).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>3-0 シルク縫合糸</td><td>エチコン</td><td>C013D</td><td></td></tr><tr><td>5-0 シルクネクタイ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>18020-50</td><td></td></tr><tr><td>6-0 シルクネクタイ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>18020-60</td><td></td></tr><tr><td>7-0 シルクネクタイ</td><td>テレフレックス</td><td>103秒</td><td></td></tr><tr><td>9-0 ポリアミド縫合糸</td><td>AROSurgical</td><td>T05A09N10-13</td><td>黒い</td></tr><tr><td>双極性焼灼</td><td>コッドマン&コッドマンシャートルフ株式会社</td><td>P.H.234</td><td></td></tr><tr><td>ブプレノルフィンHCL</td><td>ホスピラ</td><td>409201232</td><td></td></tr><tr><td>鉗子、アドソンブラウン</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11627-12</td><td>12.5センチ</td></tr><tr><td>鉗子、角度付きデュモン&nbsp;</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11253-25</td><td>医療用 #5/45 11 cm</td></tr><tr><td>鉗子、縫合糸結束&nbsp;</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>18025-10</td><td>10センチ</td></tr><tr><td>ヘパリンナトリウム注射、USB</td><td>フレゼニウス・カビ</td><td>504015</td><td>10 mLあたり10,000 USP単位</td></tr><tr><td>ハイドロディセクションカニューレ</td><td>アンブラーサージカル</td><td>1021円</td><td>27グラム</td></tr><tr><td>イソフルラン</td><td>Dechra 獣医製品</td><td>17033-091-25</td><td></td></tr><tr><td>I.V.カテーテル</td><td>ケンドール</td><td>2619パー</td><td>26 G x 3/4インチ</td></tr><tr><td>磁気リトラクションシステム</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>18200-50</td><td></td></tr><tr><td>マイクロクランプ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>18055-05</td><td>6ミリメートル</td></tr><tr><td>マイクロクランプ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>18055-06</td><td>4ミリメートル</td></tr><tr><td>マイクロクランプアプリケーター</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>18057-14</td><td>14センチ</td></tr><tr><td>マイクロニードルホルダー</td><td>S&(ス&)T</td><td>C-14</td><td>14センチ</td></tr><tr><td>顕微鏡</td><td>ツァイス</td><td>ユニバーサルS3</td><td>デュアルヘッド</td></tr><tr><td>眼科用軟膏</td><td>プルーベ</td><td>14590500</td><td></td></tr><tr><td>ポリイミジチューブ</td><td>コール・パーマー</td><td>95820-04</td><td>外径 0.0215 インチ、内径 0.0195 インチ、壁 0.0010 インチ</td></tr><tr><td>塩田</td><td>バクスター</td><td>281324</td><td>0.9%塩化ナトリウム</td></tr><tr><td>外科用スプリングハサミ</td><td>S&(ス&)T</td><td>SDC-15</td><td>ブラント 14 cm</td></tr><tr><td>外科用スプリングハサミ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>15021-15</td><td>ヴァンナス 14 cm</td></tr></tbody></table>

同種移植拒絶反応研究のための肝瘻造設術を用いたヘテロトピア補助全肝ラット移植モデル

Heterotopic Auxiliary Whole Liver Rat Transplant Model Utilizing a Hepaticoureterostomy for Allograft Rejection Studies

現在、29組のラットを使用してHALT-PVAプロトコルを確立し、17組の同系移植、および12組の同種移植を行っています。同系移植された肝臓は、指定された8日または30日間の実験エンドポイントまで70%の成功率で生存し、同種移植された肝臓は、指定された3日または8日間のエンドポイントまで50%の成功率で生存しました。失敗には、外科的合併症により死亡したラットや、レシピエントが生き残った場合でも失敗した補助肝臓が含まれます。
手術の平均時間は130分で、冷冷虚血時間は約35分、温冷虚血時間は約25分未満でした。術中の合併症がなかった場合、レシピエントは10〜20分以内に目を覚まし、活動的になり、1時間以内および24時間以内に飲酒と歩行を開始し、通常の健康なラットのように行動しました。
同系肝移植片は、移植後30日で優れた色と胆管の開存性を示しました(図3)、一方、ヘマトキシリンとエオシン(H&amp;E)の組織型は、8日と30日の時点で有意な実質変化がなく、正常な肝細胞構造を示しました(図4A、B)。わずか3日後、同種移植の組織型は著しい門脈炎症を示し(図4C)、8日間の同種移植片は広範なリンパ球浸潤を伴う急性細胞拒絶反応を示しました(図4D)。
代表的な同種および同系のLTx検体を、委員会認定の肝病理学者によって評価し、拒絶反応をBanff Schema拒絶活性指数(RAI)12を用いて採点した。病理学的評価では、8日間および30日間の同系移植の両方で、バンフRAIが0で拒絶反応は存在しないと判断されましたが、8日間の同種移植片はバンフRAIスコア9で厳しく拒絶されました(表1)。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66516/66516fig01.jpg"> 
図1:ラットのHALT-PVA手順の概略図。 PVはステントを使用して左腎動脈で動脈化され、IHVCは左腎静脈に端から端まで吻合され、ステントを使用して胆管が尿管に接着されます。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66516/66516fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66516/66516fig02.jpg"> 
図2: 外科的処置 (A)PVの水解剖。PVを周囲の結合組織から27Gのハイドロ解剖針で解離します。(B)動脈ステントの挿入。動脈ステントは、腎動脈分岐部のフォークに切られた小さな漏斗状の開口部に挿入されます。(C)腎静脈を広げる。吻合のためのドナーIHVCのより大きな幅に一致させるために、2つのステー縫合糸が所定の位置に配置された後、レシピエントの腎静脈の顔に小さな魚の口の切り込みが行われます。 (D)吻合直後の灌流肝移植。腎動脈とPV接続を腎静脈とIHVCの下に配置することは、移植片の血栓症を予防するために重要です。(E)ラットHALT-PVAの その場。 補助肝臓は、腸に戻る前に腹部の左壁に対して配置されます。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66516/66516fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66516/66516fig03.jpg"> 
図3:移植後30日間の同系HALT-PVA (A)30日後、補助肝臓は天然肝臓と同様の色と質感を持つが、(B)胆管とPVステントは特許を保持し、制限を受けていない。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66516/66516fig03large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66516/66516fig04.jpg"> 
図4:補助肝移植片の組織学。 正常な肝細胞構造を示す移植後 8 日間および (B) 移植後 8 日間および (B) 30 日間の同系移植片と、門脈の炎症とリンパ球浸潤を示す (C) 3 日間および (D) 8 日間の同種移植片の H&amp;E 染色。スケールバー:50μmこの <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66516/66516fig04large.jpg" target="_blank">図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>同種異系Txの</td>
			<td>門脈の炎症</td>
			<td>胆管損傷</td>
			<td>静脈内膜炎</td>
			<td>バンフRAI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3日間(LT-34)</td>
			<td>2</td>
			<td>2</td>
			<td>3</td>
			<td>7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3日間(LT-38)</td>
			<td>1</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8日間(LT-20)</td>
			<td>3</td>
			<td>3</td>
			<td>3</td>
			<td>9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8日間(LT-40)</td>
			<td>3</td>
			<td>3</td>
			<td>3</td>
			<td>9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syngeneic Txの</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8日間(LT-13)</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8日間(LT-19)</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30日間(LT-28)</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30日間(LT-32)</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
表 1: バンフ スキーマ。 同種および同系ラットLTxの拒絶活性指数(RAI)。

Small animal transplant models are indispensable for organ tolerance studies investigating feasible therapeutic interventions in preclinical studies. Rat ...

私たちの研究の主な範囲は、肝移植後の免疫寛容の背後にあるメカニズムの調査です。次に、肝拒絶反応を減らし、肝移植レシピエントの生存率を改善する方法を調査します。この異所性移植手順で最も困難なステップは、下肝大静脈と腎静脈のエンドツーエンドの吻合です。したがって、あらゆる方法で 3 ミリメートルの静脈のエンドツーエンド吻合を快適に実行できる人は誰でも、この手順を実行するために必要なすべての技術的スキルを持っています。同所性ラット肝移植モデルは技術的に困難な手術であり、無肝および下半身の虚血時間が長いため複雑になり、レシピエント動物の回復が困難になります。ここで紹介する異所性肝移植モデルは、これらの合併症を排除します。また、高度な顕微手術のスキルは必要ありません。無肝または下半身の虚血時間がない場合のレシピエントの迅速な回復は、同所性ラット肝移植に対する異所性の有意な利点です。また、同所性肝移植後の拒絶反応の研究は、実験的エンドポイントとして罹患率または死亡に依存することがよくありますが、この異所性モデルには当てはまりません。常温 ex vivo 肝灌流は、臨床移植前に肝臓を保存するためのエキサイティングな新しい戦略です。しかし、常温灌流後の移植用の肝臓を準備するという高い技術的要求により、小動物モデルが不足しています。したがって、私たちの目標は、異所性肝移植モデルを使用して、常温灌流後の肝臓を信頼性と再現性のある方法で移植に成功させることです。[ナレーター]腹部を剃り消毒した後、麻酔したドナーラットを加熱した手術パッドの上に仰臥位に置きます。縦方向に切開したら、湿らせた綿棒を使用して肝臓を慎重に引っ込め、熱状靭帯、三角形靭帯、肝胃靭帯、および肝十二指腸靭帯を解剖します。バイポーラ鉗子で傍食道血管を焼灼し、左外側葉と前尾状葉の間でさらに分割します。角度の付いた鉗子または針ホルダーを使用して、横隔膜の下の肝上大静脈の後ろを解剖します。次に、肝上大静脈の下に5-0の絹縫合糸を通し、後で使用するために二重結び目をゆるく結びます。肝下大静脈を後腹膜組織から右腎静脈まで分離します。次に、肝下大静脈にできるだけ近い6-0シルク縫合糸で右副腎静脈を結紮します。27ゲージのハイドロダイセクションニードルを使用して、門脈を周囲の結合組織から解離します。門脈を幽門静脈と脾静脈から分離し、7-0シルク縫合糸で結紮して分割します。総肝動脈を分離した後、6-0シルク縫合糸で結紮し、門脈の下を通過する場所の近くで動脈を分割します。胃十二指腸動脈の分岐部で5-0シルク縫合糸で胆管を結紮し、胆管周囲の脂肪組織を確実に保存します。バネハサミを使用して、結紮部の近位の胆管壁に小さな切開を行います。ポリアミドチューブステントを胆管内腔に挿入し、6-0シルク縫合糸で固定し、縫合糸の一端を後で使用するために長く残します。5-0 結紮と 6-0 結紮の間を切断して、胆管を分割します。肝下大静脈と門脈の上面を外科用染めペンで印を付け、吻合中の血管の位置合わせを補助します。次に、肝臓のできるだけ遠位の微小血管クランプで門脈を固定します。26ゲージの針が付いた20ミリリットルの注射器をクランプの近位の門脈に挿入し、10〜15ミリリットルの氷冷ヘパリン化生理食塩水で肝臓を灌流し、同時にスプリングハサミを使用して肝下大静脈を右腎静脈にできるだけ近づけて分割します。肝臓を切除するには、マイクロクランプの近位にある門脈を解剖します。次に、肝上大静脈の周囲に以前に配置された5-0縫合糸を締め、横隔膜を解剖して胸腔内大静脈を横断します。肝臓の後ろにある残りの靭帯の解剖を続け、以前に結紮された副腎静脈を分割します。切除した肝臓を氷の上の冷たい生理食塩水に入れます。腹部を剃り消毒した後、麻酔をかけたレシピエントラットを加熱した手術パッドの上に仰臥位に置きます。縦切開の際、湿らせた綿棒で腸を腹部の右側に引っ込め、湿らせたガーゼで覆います。さらに湿らせたガーゼを塗って胃、脾臓、肝臓を覆い、左の腎臓血管と腎臓血管を露出させます。27ゲージのハイドロダイセクション針と鈍い先端鉗子を使用して、左腎静脈を腎動脈から分離し、両方の血管から脂肪と結合組織を慎重に除去します。バイポーラ鉗子を使用して、すべての微小側枝を焼灼し、大動脈または大静脈と腎臓の間の腎静脈と動脈を分離します。性腺静脈と副腎静脈を分離した後、6-0シルクを使用して、腎静脈の近位に一時的に結紮します。下極で尿管を動員し、6-0シルク縫合糸で結紮しました。最初に腎動脈をクランプし、次に腎静脈をクランプし、微小血管クランプで大動脈と大静脈をできるだけ近づけます。血管の分岐点を過ぎたところをスプリングハサミを使用して腎動脈を横断し、大静脈と腎臓の約中間で腎静脈を分割します。周囲の結合組織から左腎臓を動員し、それを除去します。腎動脈と腎静脈の断端をヘパリン化生理食塩水で洗い流し、残りの血液をすべて除去します。バネハサミを使用して、腎動脈分岐部のフォークに小さな切り込みを入れ、漏斗状の開口部を作成します。次に、26ゲージのカテーテルから切り取った8ミリメートルのステントを挿入し、縫合糸の一端を長く残して6-0シルク縫合糸で固定します。ドナーの肝臓を導入し、門脈、肝下大静脈、および胆管がレシピエントの左腎静脈と動脈に面するように配置します。9-0ナイロン縫合糸を使用して、肝下大静脈腎静脈接続の反対側に2本のステー縫合糸を取り付けました。次に、バネハサミを使用して、幅がドナーの肝下門脈と一致するまで、腎静脈の表面に小さな魚の口の切開を行います。9-0 シルク縫合糸を使用して、肝肝下門脈を腎静脈の端から端まで吻合し、血管の前壁と後壁の両方に 9 本または 10 本の縫合糸を縫合します。腎動脈の配置が肝下門脈の下にあることを確認します。次に、腎動脈にあらかじめ留置したステントを肝門脈に挿入し、6-0シルク縫合糸で固定し、縫合糸の一端を長くして動脈の反対側の糸に取り付けます。両端を一緒に引き、それぞれがステントから滑り落ちないようにします。順番に、腎静脈からマイクロクランプを取り外し、次に腎動脈から取り外します。肝臓の再灌流中は、ガーゼと綿棒を使用して、漏れのない吻合が達成されるまで吻合領域の周囲に軽い圧力を加えます。副腎静脈と性腺静脈に以前に配置された一時的な結紮を取り除きます。周囲の結合組織から左尿管の端から約10ミリメートル下に慎重に動員し、かなりの量の脂肪組織を付着させたままにします。スプリングハサミで、以前に配置された6-0結紮の近位にある尿管の壁に小さな切開を行います。胆管に事前に取り付けられたポリアミドステントを尿管壁の小さな切開部に挿入します。ステントを 6-0 シルク縫合糸で固定し、ステントの胆管側の長い糸で一端を結び、両端をしっかりと引き寄せます。腸を元の位置に戻し、2〜3ミリリットルの生理食塩水で洗浄します。最後に、腹部を層状に閉じます。手術後2日目から、同種移植レシピエントにヘパリンを毎日皮下注射します。移植後 30 日で、同系肝移植片は最適な色と胆管の開存性を示しました。ヘマトキシリンとエオシンの組織学は、8日間隔と30日間隔の両方で有意な実質変化のない正常な肝細胞構造を示しました。逆に、同種移植では、移植後 3 日という早い時期に重大な門脈炎症が示され、8 日目に広範なリンパ球浸潤を特徴とする急性細胞拒絶反応が示されました。

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JoVE Journal

Medicine

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ラット型異形肝移植モデルにおける動脈リコネクション後の合併症の減少

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腎同種移植片拒絶反応のためのラット同所性腎移植モデル

学ぶラットのヘテロトピア補助全肝移植モデルによる肝同種移植拒絶反応のメカニズム。外科的困難性と動物ストレスを軽減し、移植免疫学研究の実用的ツールとして活用可能です。

同種移植拒絶反応研究のための肝瘻造設術を用いたヘテロトピア補助全肝ラット移植モデル

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