Name: 移植されたマウス肺の生体内2光子顕微鏡検査 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 16 s
Description: 学ぶ マウス肺移植後の2光子顕微鏡による生体内イメージング法。虚血再灌流損傷における免疫メカニズムと単球による好中球浸潤の動態をリアルタイムで可視化し、移植免疫学の理解を深めます。

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<meta charset="utf8"></head><body>マウス肺移植における細胞動態のリアルタイムモニタリング

<table><tbody><tr><td>0.75% ポビドンヨード</td><td>アプリケア</td><td>NDC 52380-0126-2</td><td>消毒剤用</td></tr><tr><td>1インチ 20G IV カテーテル</td><td>テルモ</td><td>SROX2025CA</td><td>気管内チューブ (ETT)</td></tr> <tr><td>用 1インチ シルクテープ</td><td>デュラポア</td><td>3M ID 7100057168</td><td>マウスを所定の位置に固定するには</td></tr><tr><td>20x 水浸長対物レンズ</td><td>オリンパス</td><td>N20X-PFH</td><td></td></tr><tr><td>3M ベトボンド接着剤</td><td>Medi-Vet.com</td><td>10872</td><td>カバーガラスを肺に接着するには</td></tr><tr><td>655 nm 非標的量子ドット</td><td>サーモフィッシャー</td><td>Q21021MP</td><td>血管の標識用</td></tr><tr><td>70% エタノール</td><td>シグマ アルドリッチ</td><td>EX0281</td><td>消毒剤用</td></tr><tr><td>アージェント 高温 ファインチップ 焼灼 ペン</td><td>マッケッソン</td><td>231</td><td></td></tr><tr><td>ブラック O リング (2 cm)</td><td>金物店</td><td>N/A</td><td>カスタムメイドのイメージング用チャンバー</td></tr><tr><td>ボルト (2)</td><td>金物店</td><td>N/A</td><td>特注のイメージングチャンバー用</td></tr><tr><td>真鍮のつまみナット (2)</td><td>金物店</td><td>N/A</td><td>特注のイメージングチャンバー用</td></tr><tr><td>ブプレノルフィン 1.3 mg/mL</td><td>フィデリス アニマルヘルス</td><td>NDC 86084-100-30</td><td>疼痛管理用</td></tr><tr><td>カメレオンチタンサファイアフェムト秒パルスレーザー</td><td>コヒーレント</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>カバーガラス (24 mm x 50 mm)</td><td>Thomas Scientific</td><td>1202F63</td><td>カスタムメイドイメージングチャンバー用</td></tr><tr><td>湾曲蚊クランプ (1)</td><td>Fine Science Tools</td><td>13009-12</td><td></td></tr><tr><td>デュアルチャンネルヒーターコントローラー</td><td>Warner Instruments</td><td>TC-344B</td><td></td></tr><tr><td>ファインハサミ (1)</td><td>Fine Science Tools</td><td>15040-11</td><td></td></tr><tr><td>固定ステージ直立顕微鏡</td><td>Olympus</td><td>BX51WI</td><td></td></tr><tr><td>ガーゼ(1cm×3cmにカット)</td><td>マッケソン</td><td>476709</td><td>左肺の下に配置</td></tr><tr><td>高真空グリース</td><td>ダウ・コーニング</td><td>N/A</td><td>カバーガラスをトッププレートに接着するには</td></tr><tr><td>イソフルラン 1%</td><td>シグマ アルドリッチ</td><td>26675-46-7</td><td>麻酔用</td></tr><tr><td>ケタミン塩酸塩 100mg/mL</td><td>ヴェドコ</td><td>NDC 50989-996-06</td><td>麻酔用</td></tr><tr><td>金属板(3cm×7cm)</td><td>金物店</td><td>N/A</td><td>特注のイメージングチャンバー用</td></tr><tr><td>先のとがった綿の先端のアプリケーター</td><td>ソロン</td><td>56225</td><td>肺を操作し、鈍い解剖を行うには</td></tr><tr><td>パワープロウルトラクリッパー</td><td>オスター</td><td>078400-020-001</td><td></td></tr><tr><td>Puralube 獣医眼軟膏</td><td>Medi-Vet.com</td><td>11897</td><td>眼の乾燥を防ぐために</td></tr><tr><td>小動物用人工呼吸器</td><td>ハーバード装置</td><td>55-0000</td><td></td></tr><tr><td>ストレート鉗子 (1)</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>91113-10</td><td></td></tr><tr><td>3チャンネルシャッタードライバー</td><td>Uniblitz</td><td>VMM-D3</td><td>レゾナントスキャナー</td></tr><tr><td>x.y.z 光学ステッピングモーター</td><td>Prior Scientific</td><td>OptiScan II</td><td></td></tr><tr><td>キシラジン 20 mg/mL</td><td>Akorn</td><td>NDC 59399-110-20</td><td>疼痛管理用</td></tr></tbody></table>

移植されたマウス肺の生体内2光子顕微鏡検査

Intravital Two-Photon Microscopy of the Transplanted Mouse Lung

4°Cで1時間の低温虚血保存後、B6マウスからB6マウスに左肺を同所的に移植しました。LysM-GFPマウス4を、次いで上記のように生体内二光子イメージングを行った。移植後の2つの時点でイメージングを行いました-2時間(図3A)と24時間(図3B)です。血管は、イメージングの直前に注入されたqドットによって赤で標識されます。さらに、24時間4でqドットを占有した単球を視覚化できます。緑色で標識されたレシピエント由来の好中球は、移植後24時間後の対応するビデオで肺移植片に浸潤しているのを見ることができます(補足ビデオ1)。肺胞は、コラーゲンからのSHGによる暗いクレーターとして視覚化できます( 図3の白い矢印)。移植後24時間では、移植後2時間と比較して、肺に好中球が多く存在することが観察されます(図3)。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66566/66566fig01.jpg"> 図1:2光子イメージングのためのマウスの準備(A)左開胸術で皮膚が再び開いた。(B)左胸部を切除した皮膚と軟部組織。(C,D)分割する前にリブを10秒間クランプします。(E) 左の 3本目から 5番目の肋骨を切除して、頭蓋尾側 ~0.8 cm x 前後 1.0 cm の窓を作成します。(F)左肺を左胸から持ち上げ、ガーゼのストリップに置きます。(G)イメージングウィンドウを備えたイメージングチャンバーが左肺を覆っています。(H)顕微鏡ステージ上に配置されたイメージングチャンバー。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/66566fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66566/66566fig02.jpg"> 図2:イメージングチャンバーのセットアップ (A)顕微鏡ステージ上に配置されたイメージングチャンバー。(B)左肺の上にトッププレートを固定するためのバネ仕掛けのボルト機構の拡大図。(C)Oリングとカバーガラスを適用した天板の表裏。白い線は、カバーガラスをトッププレートに接着するために真空グリースを塗布する領域を表しています。灰色の円は、カバーガラスに塗布する接着剤のリングを表しています。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/66566fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66566/66566fig03.jpg"> 図3:B6からB6へのマウス左肺移植の2光子生体内イメージング。1時間の低温虚血保存を施したLysM-GFPマウス。 イメージングは、移植後(A)2時間後および(B)24時間後に行われます。赤は q ドットを表します。緑はB6の好中球。LysM-GFPレシピエント。ブルーはコラーゲンが豊富な肺胞からのSHGを表しています。白い矢印は肺胞の空域を示しています。スケールバーは20μmを表しています。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/66566fig03large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
補足図1:追加の加熱を提供するために2つの抵抗器が取り付けられたトッププレート。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/Supplemental%20Figure%201.zip" target="_blank">このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。</a>
補足ビデオ1:B6からB6への移植マウス左肺の2光子タイムラプスイメージング。移植後24時間で1時間の低温虚血保存を行ったLysM-GFPマウス。 赤は q ドットを表します。緑はLysM-GFPレシピエントの好中球。青は、コラーゲンが豊富な肺胞からの第2高調波発生を表しています。スケールバーは20μmを表しています。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66566/Supplemental%20Video%201.zip" target="_blank">このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。</a>

Complications after lung transplantation are largely related to the host immune system responding to the graft. Such immune responses are regulated by ...

intravital-two-photon-microscopy-of-the-transplanted-mouse-lung

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

我々は、胸腺の生体内イメージング買収のための新たな研究ツールとプロトコルを開発しました。我々の技術は、T細胞の開発が発生した胸腺内で"ニッチ"の同定に役立つはずです。...

2光子顕微鏡を用いてマウスの胸腺の生体内イメージング

このプロトコルは、真空安定化イメージングウィンドウを使用して、無傷の肺の長期高解像度シングルセルイメージングをリアルタイムで行うための多光子顕微鏡の使用を説明しています。...

真空安定化撮像窓と肺における長期高分解能生体顕微鏡

このプロトコルは細胞特異的蛍光マーカーを発現するトランスジェニック マウスの生体イメージングを説明します。生体イメージングは、プロセスの顕微可視化が可能な埋込型の windows...

腫瘍関連血管系を使用しての生体顕微鏡が背高度な蛍光トランスジェニック マウスの皮下脂肪のウィンドウの部屋

本研究ではマウスの気管粘膜のインフルエンザ ウイルスに感染後 2...

イメージング 2 光子生体顕微鏡を用いたインフルエンザ ウイルス感染症の中に気管粘膜の細胞相互作用

ここで導入されたプロトコルでは、体内の炎症性条件の下で主要な人間のリンパ球のホーミング肺活量の評価をことができます。アレルギー性炎症のマウス...

In Vivo 光シート顕微鏡観察に基づくアレルギー性炎症の実験的肺ホーミング ヒトリンパ球のイメージング高度な

in vivoイメージングは、健康と疾患における生物学の研究のための強力なツールです。このプロトコルは、標準的な2光子顕微鏡によるマウス網膜の経瞳孔イメージングについて説明しています。また、網膜の複数の細胞コホートを蛍光標識するためのさまざまなin...

経瞳孔二光子マウス網膜のin vivoイメージング

ここでは、肺の高解像度の生体内イメージングを可能にするマウス胸郭用の永久に留置された光学窓の外科的移植のためのプロトコルを提示する。ウィンドウの永続性は、肺の動的細胞プロセス、特に播種された腫瘍細胞の転移進行など、ゆっくりと進化している細胞プロセスの研究に適しています。...

肺への癌転移を調査するための永久的な窓

我々は、マウス脳におけるルシフェラーゼ緑色蛍光タンパク質(GFP)を発現する二重レポーターベクターで形質導入されたヒト神経前駆細胞の実質内移植について説明する。移植後、ルシフェラーゼシグナルは、蛍光顕微鏡を用いて脳切片で同定された in vivo 生物発光およびGFP発現移植細胞を用いて繰り返し測定される。...

マウス脳におけるヒト神経前駆細胞の脳内移植と 生体 内生物発光追跡

この原稿は、同所注射された乳房腫瘍からの自然肺転移の確立および縦断的成長モニタリングの方法論を説明しており、転移カスケードのすべての段階での介入に適しています。...

インビボ 同所注射された乳房腫瘍細胞の自然肺転移を測定するためのイメージング

細胞療法は、前駆細胞を使用して損傷した組織を修復し、肺機能を改善することにより、肺線維症に対する有望な介入を提供します。イメージングは細胞統合の追跡において極めて重要な役割を果たすため、ここでは、マウスモデルにおける肺線維症の細胞療法の磁性粒子イメージングガイド下 in vivo...

磁性粒子イメージングを用いた肺線維症のための移植された遠位肺上皮前駆細胞の画像誘導 In vivo 追跡

ここでは、減衰BSL-2承認の 結核菌...

初期血管内感染中のマウス肺における減弱型自生 性結核菌 のインバイタルイメージング

学ぶ マウス肺移植後の2光子顕微鏡による生体内イメージング法。虚血再灌流損傷における免疫メカニズムと単球による好中球浸潤の動態をリアルタイムで可視化し、移植免疫学の理解を深めます。

移植されたマウス肺の生体内2光子顕微鏡検査

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