Name: デキストラン硫酸ナトリウムを用いた直腸結腸切除術および回腸嚢肛門吻合後の嚢炎のラットモデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-05-31T13:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 5 s
Description: 学ぼう、IPAA手術とDSS処理を用いてラット嚢炎モデルを確立する方法。微小外科技術による直腸結腸切除と回腸嚢肛門吻合の詳細な手順を解説し、疾患の病態と治療研究の基盤を提供します。

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<meta charset="utf8"></head><body>潰瘍性大腸炎の病因と治療を研究するための嚢炎の実験的ラットモデル

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</ol>

<table><tbody><tr><td>無水エタノール</td><td>天津Fengchuan化学試薬技術有限公司</td><td></td>中国<td>ヘマトキシン-エオシン染色</td></tr><tr><td>デキストラン硫酸ナトリウム&nbsp;</td><td>&nbsp;イェーセン&nbsp;</td><td>60316ES76</td> 袋の<td>炎症を誘発するために使用される</td></tr><tr><td>ホルムアルデヒド溶液</td><td>天津 Zhiyuan 試薬会社</td><td>中国</td><td>ヘマトキシン-エオシン染色</td></tr><tr><td>ガーゼ</td><td>江西省中安医療機器会社</td><td>中国</td><td>動物顕微鏡手術に使用</td></tr><tr><td>ヘマトキシリン</td><td>北京中山金橋会社</td><td>中国</td><td>ヘマトキシン-エオシン染色</td></tr><tr><td>インターフェロン &ガンマ;&nbsp;検出試薬キット</td><td>Cloud-clone</td><td>SEA049Ra</td><td>炎症性因子の検出</td></tr><tr><td>インターロイキン-10検出キット</td><td>Cloud-clone</td><td>SEA056Ra</td><td>炎症性因子の検出</td></tr><tr><td>インターロイキン-17検出キット</td><td>Cloud-clone</td><td>SEA063Ra</td><td>炎症性因子の検出</td></tr><tr><td>インターロイキン-6検出キット</td><td>Cloud-clone</td><td>SEA079Ra</td><td>炎症性因子の検出</td></tr><tr><td>Iodophor</td><td>Tangpai Medical Equipment Co., Ltd</td><td>中国</td><td>動物顕微鏡手術に使用</td></tr><tr><td>顕微鏡操作器具</td><td>Aesculap</td><td>ドイツ</td><td>動物顕微鏡手術に使用</td></tr><tr><td>Occludin</td><td>abcam</td><td>ab216327</td><td>免疫組織化学検査</td></tr><tr><td>ミシン針</td><td>揚州富田医療機器有限公司</td><td>中国</td><td>動物顕微鏡手術に使用</td></tr><tr><td>腫瘍壊死因子&α;検出試薬キット</td><td>Cloud-clone</td><td>SEA133Ra</td><td>炎症性因子の検出</td></tr><tr><td>2人用双眼手術顕微鏡</td><td>OPTON</td><td>ドイツ</td><td>動物顕微鏡に使用</td></tr><tr><td>キシレン</td><td>天津 Yingda 希少で貴重な試薬工場</td><td>中国</td><td>ヘマトキシン-エオシン 染色</td></tr></tbody></table>

デキストラン硫酸ナトリウムを用いた直腸結腸切除術および回腸嚢肛門吻合後の嚢炎のラットモデル

A Rat Model of Pouchitis Following Proctocolectomy and Ileal Pouch-Anal Anastomosis Using Dextran Sulfate Sodium

作出後の回腸袋モデルラットの全身状態評価 オペレーターがIPAAの外科的学習曲線を通過した後、ラットは手術によく耐え、手術時間は192.94分±27.15分で、術後合併症の発生が少なくなりました。ラットは術後早期に食事摂取量の減少を経験しましたが、術後10日から14日で術前の食欲は回復しました。術後早期の活動はわずかに減少し、目や鼻からの明らかな分泌物はありませんでした。手術前後の体重減少は1.59g±21.17gでした。術後初期体重は減少傾向を示し、最大で 69.58 g ± 33.19 g 減少しました。手術後8.25±2.53から安定した成長が始まり、手術後31日目には 手術翌日の体重の9.35%±4.7%を超えた。ラットは手術後24時間以内に排便することができ、便は緩んでいましたが、血便はありませんでした。軟便の形成は、手術後9日目から 12日目に 起こりました。
回腸パウチの代償的増加 手術後35日目に 麻酔下でラットの腹腔が開かれ、回腸嚢と骨盤腔との間に重度の癒着が明らかになりました。パウチと周辺組織との接着を慎重に分離した後、回腸パウチの代償的拡大、腸壁の肥厚、遠位小腸の軽度の拡張が観察されました(図1)。回腸袋の長さは手術時は2.89cm±0.28cmであったが、術後35日目には 3.86cm±0.87cm)となり、 P =0.000の有意な統計学的差を示した。回腸嚢の粘膜面積(cm2)も、外科的測定と比較して有意に増加しました(6.46 ± 0.85 対 17.02 ± 4.61、 P = 0.000)。IPAA群と回腸嚢炎群との間に有意差は認められなかった(P &gt; 0.05)。
回腸嚢炎のラットの全身状態評価と糞便スコア 手術後31日目 に、回腸嚢炎グループにDSSが投与されました。投与開始当初、IPAA群と回腸嚢炎群の体重は同等(352.00g±30.03g対352.00g±25.92g、 P =1)で、概ね良好な状態であった。しかし、回腸嚢炎群では食物や水分の摂取量が減少し、精神的疲労、毛髪の抜け落ち、目や鼻の分泌物、運動性の低下が生じ、IPAA群では大きな変化は認められませんでした。術後35日目 には、回腸嚢炎群の体重はIPAA群よりも有意に低かった(322.83g±29.24g 対364.83g±30.13g、 P =0.028)(図2)。
回腸嚢炎群は、DSS投与後1日目に著しい下痢を呈し、DSS投与後2日目には粘液、膿、血便が出た(図3)。術後35日目の 便スコアは、IPAA群と回腸嚢炎群の便スコア11 でした(4.33 ± 0.82 vs 2.17 ± 0.75、 P = 0.001)。IPAA群のラットは清潔で汚染のない肛門を持っていましたが、回腸嚢炎のラットは肛門の腫れが粘液、膿、血便の付着を伴っていました。
回腸パウチの病理組織学的変化
回腸袋標本の巨視的観察 IPAA群では、回腸嚢の腸壁が肥厚し、びらん、潰瘍、出血点は認められませんでした。回腸嚢炎群では、収納袋腸間膜の血管が厚くなり、回腸嚢の粘膜が広範囲または局所的に炎症を起こし、目に見えるびらん、潰瘍、出血点が認められ、その一部は顕著な遠位小腸拡張を伴います(図4)。
回腸嚢組織の顕微鏡観察 IPAA群のラットでは、嚢組織の一部腸絨毛の先端が鈍くなり、少量の好中球浸潤を伴い、時折、粘膜表面に少量の滲出が観察されました。
対照的に、回腸嚢炎群のラットの回腸嚢組織における腸絨毛の配置は極めて乱れていた。一部の腸絨毛が欠落しており、筋肉層を関与させることなく、広範な侵食と複数の斑点性潰瘍が見られました。これには、多数の好中球とリンパ球の浸潤、過剰な滲出、および目に見える陰窩の炎症が伴いました。回腸嚢炎群の回腸嚢組織の病理学的スコアは、IPAA群の病理学的スコアよりも有意に高く、有意な統計的差が観察されました(8.50 ± 1.76 対1.33 ± 0.52、 P = 0.000)(図5)。
腸管バリア機能タンパク質オクルージンの発現量 オクルジンは、腸管バリアの重要な機能タンパク質であり、ラットのIPAA群と回腸嚢炎群の両方で回腸嚢組織の細胞膜に発現している11。しかし、回腸嚢炎群のオクルージンタンパク質の発現レベルは、IPAA群よりも有意に低かった(0.25 ± 0.03 対 0.15 ± 0.02、 P = 0.000)(図6)。
回腸パウチにおける炎症性因子の検出 回腸嚢炎群のラットの回腸嚢組織におけるIL-6、IL-17、TNF-α、およびINF-γの発現レベルは、IPAA群の発現レベルよりも有意に高かった(ELISA試験16で決定)。逆に、IL-10は逆の結果を示し、統計的な差が観察されました(P = 0.000)(表1)。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig01.jpg"> 図1:回腸パウチの状態。 矢印は、(A)の手術時の回腸袋と(B)手術後35日目( 検体採取時)の回腸袋の代償性肥大を示しています。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig02.jpg"> 図2:IPAA手術後のラットの体重変化の傾向。 エラーバーは、各グループの標準偏差n = 6に関連しています。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig03.jpg"> 図3:ラットの糞 の写真 (A)IPAAグループ。(B)回腸嚢炎グループ。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig03large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig04.jpg"> 図4:回腸袋標本の巨視観察 (A)IPAAグループ。(B)回腸嚢炎グループ。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig04large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig05.jpg"> 図5:ラット回腸嚢組織の病理学的変化 (A)IPAA群。(B)回腸嚢炎グループ。スケールバー:60μmこの<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig05large.jpg" target="_blank">図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66623/66623fig06.jpg"> 図6:ラット回腸袋組織におけるオクルージンタンパク質発現の免疫組織化学的検出。(B)回腸嚢炎グループ。スケールバー:60μmこの<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66623/66623fig06large.jpg" target="_blank">図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>群</td>
			<td>n</td>
			<td>IL-6</td>
			<td>IL-10</td>
			<td>IL-17</td>
			<td>TNF-α</td>
			<td>INFのγ</td>
		</tr><tr><td>IPAAグループ</td>
			<td>6</td>
			<td>2.60 ± 0.36</td>
			<td>5.81 ± 0.66</td>
			<td>17.48±4.81</td>
			<td>86.94±24.06</td>
			<td>4.08±0.56</td>
		</tr><tr><td>嚢炎グループ</td>
			<td>6</td>
			<td>6.94 ± 1.18</td>
			<td>2.77 ± 0.60</td>
			<td>34.82±2.41</td>
			<td>213.00±26.11</td>
			<td>9.67±1.70</td>
		</tr><tr><td>P</td>
			<td>0</td>
			<td>0.000</td>
			<td>0.000</td>
			<td>0.000</td>
			<td>0.000</td>
			<td>0.000</td>
		</tr></tbody></table>表1:ラット回腸袋組織における炎症因子の発現レベル(pg / mL)。

Ulcerative colitis (UC) is a chronic immune-mediated disease that affects the entire colon and rectum with a relapsing and remitting course, causing ...

a-rat-model-pouchitis-following-proctocolectomy-ileal-pouch-anal

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