Name: 完全再灌流のためのLonga中大脳動脈閉塞法の最適化 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 18 s
Description: 学ぶ Longa法を用いたマウス中大脳動脈閉塞術の最適化手法。完全再灌流を確保するための外科的修正と、虚血性脳卒中研究における再現性の高い結果達成のポイントを解説します。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

すべての動物の取り扱いと手続きは、ザグレブ大学医学部の倫理ライセンス委員会とクロアチア共和国農業省の科学目的で使用される動物の保護のための倫理委員会によって承認されました。実験手順は、クロアチア動物保護法(NN 102/17、32/19)、動物保護法の改正(NN 37/13)、および科学的目的で使用される動物の保護に関するガイドライン(NN 55/13)に従って実施されました。これは、実験動物のケアと使用に関する欧州ガイド(指令2010/63/EU)に沿ったものです。
1.動物と手術部位の準備
<ol><li>動物をノックアウトボックスに入れ、酸素/窒素混合物(1:2の比率)に5%量のイソフルランを使用して麻酔を誘発します。</li>
	<li>動物の意識状態と呼吸周波数を目視で確認した後、実験室のはかりに持ってきて体重を量ります。</li>
	<li>下肢の指間皮膚をつまんで反射神経をチェックし、適切な麻酔の深さを確保します。</li>
	<li>動物を加熱された手術台に置き、鼻を麻酔マスクに入れます。手術台の初期温度を36°Cに設定し、動物の体温が37°Cに保たれるように調整します(後の手順で導入する直腸プローブを介して測定します)。その後のすべてのステップで、イソフルランの体積分率を調整して、動物の呼吸数を100呼吸/分に保ちます。. 注:動物と直接接触するすべての表面と材料は、手順の前に徹底的に消毒する必要があります。</li>
	<li>動物の目に目の軟膏を塗って、脱水症やイソフルランガスから動物を保護します。</li>
	<li>動物を仰向けにし、その下にサージカルテープで作られた小さな枕を置いて首を伸ばします。</li>
	<li>サージカルテープを使用して動物の手足を所定の位置に固定します。うっかり肩関節脱臼を起こさないように、前肢を伸ばしすぎないように注意してください。</li>
	<li>ワセスホワイトゼリーを使用して直腸プローブを潤滑し、直腸に挿入して連続体温測定を行います。サージカルテープを使用して、プローブをテールと一緒に所定の位置に固定します。</li>
	<li>術前に生理食塩水とブプレノルフィン(0.5 mg / kg)を腹腔内に注射して、動物を十分に水分補給し、処置中に鎮痛下に保ちます。.</li>
	<li>コードレスの動物用クリッパーを使用して、首の部分の動物の毛皮を剃ります。サージカルテープを使用して、すべての剃った毛皮を収集します。さらに、カミソリでその部分を剃り、毛皮が完全になくなるようにします。</li>
	<li>測定した動物の体重や年齢に基づいてMCAOフィラメントを選択します。容器から取り出し、見える場所にあるペトリ皿に入れます。フィラメントのシリコン部分に生理食塩水を一滴垂らして、フィラメントを清潔でほこりのない状態に保ちます。 注:フィラメントのシリコーンコーティングの厚さは、12〜16週齢のマウスの場合、メーカーの公式推奨に従って選択する必要があります。さらに、シリコーンコーティングの長さは、閉塞する灌漑領域のサイズに応じて、事前に慎重に計画する必要があります( ディスカッションを参照)。</li>
	<li>手術台の上に清潔な外科用ドレープを置きます。</li>
	<li>動物の剃った皮膚にベタジンを一滴垂らします。綿棒を使用して、消毒剤を内側から外側に円形に皮膚にこすりつけます。その後、エタノールを染み込ませた綿棒で同じことを行います。この手順を3回繰り返し、新しい滅菌綿棒を使用して繰り返します。</li>
	<li>局所創傷鎮痛のために、将来の切開部位の消毒された領域にリドカインジェルを軽くたたきます。.</li>
</ol>2. 虚血導入手術
<ol><li>消毒した皮膚をメスで切開します。外科的創傷の治癒を容易にするために、皮膚の切開ストロークの数を最小限に抑えてください。 注意: すべての機器は以前に滅菌されている必要があります。読者は、滅菌手袋または手術用手袋の使用に関する機関のガイドラインを参照する必要があります。</li>
	<li>タイプ7および5の鉗子を使用して、表在性筋膜を引き裂き、下にある組織から唾液腺を剥離します。 注意: 常に閉じた鉗子で前進し、組織を押しのけるために離れながら伸ばします。このようにして、解剖学的空間を最小限の組織外傷で横断することができます。</li>
	<li>ワイヤーリトラクターを初期位置に配置し、唾液腺が後続のステップを妨げないようにします。</li>
	<li>タイプ7鉗子を使用して首の深い筋膜を切除し、頸動脈領域から胸鎖乳突筋を取り外してリトラクターの位置を変更します。</li>
	<li>リトラクターを胸鎖乳突筋の下に到達するように再配置して、頸動脈領域へのアクセスを可能にします。</li>
	<li>舌骨筋を切除して、頸動脈領域への明確な視覚的で簡単なアプローチを可能にします。</li>
	<li>頸動脈とその枝を頸動脈静脈と迷走神経から解放し、これらは頸動脈筋膜に一緒に保持されています。 注:この筋膜は、迷走神経を傷つけたり、重大な出血を引き起こしたりしないように、慎重に取り外す必要があります。<ol><li>頸動脈トライアドの外側にある頸動脈筋膜をつまんで横方向にそっと引っ張ると、動脈、神経、静脈、および周囲のすべての血管枝が視覚的に識別されます。</li>
		<li>筋膜を横方向に引っ張りながら、タイプ5の鉗子を使用して、CCAを隣接する神経と静脈から分岐点とCCAを横切る上甲状腺静脈まで分離します。</li>
		<li>湾曲したタイプ7鉗子を使用して、CCAの下部を下にある組織と筋膜から完全に取り外し、将来のステップでクランプする準備ができていることを確認します。</li>
		<li>CCA分岐点の上の領域を頭蓋状に進行し、2つの鉗子を使用して頸動脈筋膜を引き裂きます。</li>
		<li>同様に、頸動脈筋膜の緩い端を内側と横方向に引っ張って、ECAと内頸動脈(ICA)をそれぞれ筋膜と周辺組織から正確に分離します。</li>
		<li>湾曲したタイプ7鉗子を使用して、ECAとICAを基礎となる組織から解放します。</li>
	</ol></li>
	<li>CCAを2つのそれぞれの枝で慎重に準備した状態で、湾曲したタイプ7鉗子を使用してECAを持ち上げ、タイプN0自己閉鎖鉗子でクランプします。</li>
	<li>N0型自動閉鎖鉗子を手術台に慎重に下げます。 注意: clを再配置するためにampECAのポイントでは、グリップを少し離してECA分岐ポイントを尾側に押す必要がある場合があります。この時点で、ECAクランプと分岐点の間に1mmを超えるECAが残っていることを確認することが重要です。</li>
	<li>ECAをクランプしてタイプN0ピンセットでしっかりと保持した状態で、ECAの後ろに2本の編組絹糸を導入します。 注:頭蓋糸は結紮の結び目になり、クランプ部位から頭蓋状に配置する必要があります。</li>
	<li>頭蓋糸は永久的なものであるため、完全に縛り、余分な糸をハサミで切り取ります。</li>
	<li>尾側の糸を緩い固定結び目に結びます。 注意: ECA分岐点の近くに置き、MCAOフィラメントが通過するように緩めておく必要があります。</li>
	<li>血管マイクロクリップを使用して、CCAをクランプし、ICAを閉じて、動脈切開後の出血を防ぎます。 注:CCAは脈動するハイスループット動脈であり、そうしないと後のステップで大量の出血や動物の死につながる可能性があるため、CCAに適用されるマイクロクリップが十分に強力にグリップしていることを確認することが重要です。</li>
	<li>マイクロスプリングハサミを使用して、ECAクランプ部位の真下に小さな動脈切開を行います。 注:動脈切開術は、フィラメントのシリコン部分が入るのに十分な大きさである必要がありますが、N0型鉗子が保持する張力を損なわないように、ECA円周の半分を超えてはなりません。</li>
	<li>ECAの角度と一致する角度で、フィラメントをCCAの近位方向に開動脈切開部位に挿入し、ECAの分岐部位の緩い固定結び目を通過し、フィラメントでCCAの内腔に突き刺さります。</li>
	<li>フィラメントのシリコン部分の周りの固定結び目を締めます。 注:フィラメントは最後の操作の途中でECAから滑り落ちる傾向があり、その時点でフィラメントを元に戻すのは非常に難しいため、この時点では細心の注意が必要です。</li>
	<li>ICAマイクロクリップを慎重に開いて取り外します。</li>
	<li>フィラメントをECAに部分的に挿入して固定した状態で、完全な動脈切開を行い、MCAOフィラメントを内部に含めてECAの切り株を緩めます。この時点で、タイプN0自閉鉗子を放し、取り外します。</li>
	<li>タイプ5ピンセット1セットでECAの切り株をしっかりとつまんで少し上げます。部分的に挿入されたフィラメントを別の鉗子で保持しながら、ECA切り株を下げてそっと引っ張り、フィラメントの内側の端をICAに向けます。フィラメントのシリコン部分を挟まないでください。</li>
	<li>鉗子をフィラメントにつかんだ状態で、フィラメントをICAを通ってゆっくりと意志の輪に向かって進めます。 注:ICAの最初の分岐ポイントは、オペレーターが目的のMCA分岐ポイントを見逃すことができる唯一の分岐ポイントでもあります。したがって、フィラメントをMCA分岐点に導くためには、わずかな横方向の前進角度が必要です。横方向の進行角度がわずかに小さいと、フィラメントは翼状口蓋動脈(PPA)から離れて湾曲し、前進端がウィリスの円に入る可能性が高くなります(図1)。</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66720/66720fig01.jpg"> 図1:翼状口蓋動脈の分岐点を過ぎた中大脳動脈閉塞フィラメントの進行の図。 適切なフィラメントの前進(左側)は、MCAOフィラメントがICAの側壁に逆らい、PPA分岐点から離れるように方向を変えることによって達成されます。そうしないと(右側)、フィラメントがPPAに入り込み、脳卒中を引き起こさなくなる可能性があります。後者の場合、フィラメントは必要なところまで進むことができず、外科医はICA分岐点でフィラメントの端が見えるまでフィラメントを引き抜き、フィラメントを再び前進させ始める必要があります。緑色の動脈は後部連通動脈(PcomA)を表し、マウスではほとんどが非特許です。BioRender.com で作成。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66720/66720fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<ol start="21"><li>MCAOフィラメントをウィリスの円をゆっくりと進め、抵抗が急激に増加するのを感じます。 注意: この時点で、フィラメントの残りの長さを観察することが重要です。フィラメントは、成体マウスのICA分岐点から少なくとも7mm離れて楽に進む必要があります。</li>
	<li>虚血中にフィラメントがずれないように、固定結び目を締めます。</li>
	<li>CCAクリップを取り外し、時間を書き留めます。 注:これは虚血の発症の始まりを示しています。</li>
	<li>MCAOフィラメントの緩い端を頸動脈三角形と同側の胸鎖乳突筋の間の溝に詰めて、手術創からはみ出さないようにします。</li>
	<li>ワイヤーリトラクターを取り外し、手術創の端を互いに近づけます。組織が解剖学的位置に戻るまで、手術部位を数秒間落ち着かせます。</li>
	<li>テープ創傷閉鎖を使用して外科的創傷を閉じ、虚血期間後の創傷の迅速な再開を促進します。 注:研究者が虚血期間中に動物を目覚めさせたい場合は、創傷の時期尚早な再開を防ぐために創傷を縫合することをお勧めします。</li>
</ol>3. 虚血期
<ol><li>MRIまたはその他の定量的灌流測定方法を使用して、手術の成功を検証します。 注: MRI スキャンを行う場合、灌流強調イメージング (PWI) は広い MCA 領域で重大な虚血を示す必要があり、拡散強調イメージング (DWI) は、細胞浮腫による見かけの拡散係数 (ADC) の低下した部位を概説する必要があります。</li>
	<li>虚血期間が終了するまで、動物を清潔なケージに入れます。</li>
</ol>4.フィラメント抜去手術
<ol><li>割り当てられた虚血時間が終了する約5分前に、動物を位置決めし、再び手術台に固定します。</li>
	<li>テープ創傷のクロージャーを取り外し、ワイヤーリトラクターで外科的創傷を再度開きます。</li>
	<li>MCAOフィラメントの緩い端を周囲の組織と固定結び目の端から解放します。</li>
	<li>タイプN0鉗子では、ECA切り株の端をつまんで腹側に引っ張り、張力をかけます。最初の外科的処置と同様に、つまむ鉗子を慎重に下げます。 注意: オペレーターは、結び目をほどくことができなくなるため、固定結び目をつまむことを避ける必要があります。</li>
	<li>CCAを再度クランプしますamp微小血管クリップで。</li>
	<li>タイプ5鉗子を使用して、固定結び目を緩め、フィラメントの引き抜きを可能にします。 注:結び目を緩め始める最良の方法は、結び目が個々のパーツに分離するまでつまみ続けてから、糸の端を結び目に向かって押すことです。</li>
	<li>シリコン部分がECAの切り株から突き出始めるまで、MCAOフィラメントをゆっくりと引き抜きます。固定結び目を少し締めて、フィラメントを完全に引き抜く準備をします。</li>
	<li>フィラメントのシリコン端に近づいたら、固定結び目を締めて、MCAOフィラメントを押し出し、ECA切り株を1回で閉じるようにします。フィラメントが滑り落ちたら、結び目を完全に締めます。</li>
	<li>つまむ鉗子をCCAクリップと一緒に開いて取り外します。 注:これは虚血期間の終了と再灌流プロセスの開始を示します。</li>
	<li>ワイヤーリトラクターを取り外し、手術創の端を再び一緒にします。</li>
	<li>外科的創傷を末梢から縫合し、下にある組織が見えないように創傷を完全に閉じます。 注:必要な縫合糸の数は、外科的創傷のサイズによって異なります。</li>
	<li>消毒用アルコールワイプを使用して手術部位を洗浄し、消毒します。</li>
</ol>5. 術後ケア
<ol><li>動物を清潔なケージに入れ、麻酔から自然に目覚めさせます。</li>
	<li>ペレット状の食品をケージの底に置いて、手が届きやすくします。飲料水を使用して食品ペレットを柔らかくします。小さなシャーレに飲料水を入れ、ケージの床にも持って行きます。</li>
	<li>次の48時間で、腹腔内に24時間ごとに0.25 mLの生理食塩水にブプレノルフィン(0.5 mg / kg)を注射します。.</li>
</ol>

<ol><li>Feigin, V. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((regional%2C+and+national+burden+of+stroke+and+its+risk+factors%2C+1990-2019%3A+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2019%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet.+Neurology%22%5BJournal%5D)">regional, and national burden of stroke and its risk factors, 1990-2019: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2019.</a> The Lancet. Neurology. 20 (10), 1-26 (2021).</li>
<li>Bai, J., Lyden, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revisiting+cerebral+postischemic+reperfusion+injury%3A+New+insights+in+understanding+reperfusion+failure%2C+hemorrhage%2C+and+edema%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Stroke%22%5BJournal%5D)">Revisiting cerebral postischemic reperfusion injury: New insights in understanding reperfusion failure, hemorrhage, and edema.</a> Int J Stroke. 10 (2), 143-152 (2015).</li>
<li>Sommer, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemic+stroke%3A+experimental+models+and+reality%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Ischemic stroke: experimental models and reality.</a> Acta Neuropathol. 133 (2), 245-261 (2017).</li>
<li>Hill, J. W., Nemoto, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+middle+cerebral+artery+occlusion+with+complete+reperfusion+in+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22MethodsX%22%5BJournal%5D)">Transient middle cerebral artery occlusion with complete reperfusion in spontaneously hypertensive rats.</a> MethodsX. 1, 283-291 (2014).</li>
<li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema%5BTitle%5D)+AND+%22Nosotchu%22%5BJournal%5D)">Experimental studies of ischemic brain edema.</a> Nosotchu. 8 (1), 1-8 (1986).</li>
<li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li>
<li>Justić, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redefining+the+Koizumi+model+of+mouse+cerebral+ischemia%3A+A+comparative+longitudinal+study+of+cerebral+and+retinal+ischemia+in+the+Koizumi+and+Longa+middle+cerebral+artery+occlusion+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+and+Metab%22%5BJournal%5D)">Redefining the Koizumi model of mouse cerebral ischemia: A comparative longitudinal study of cerebral and retinal ischemia in the Koizumi and Longa middle cerebral artery occlusion models.</a> J Cereb Blood Flow and Metab. 42 (11), 2080-2094 (2022).</li>
<li>El Amki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothalamic%2C+thalamic+and+hippocampal+lesions+in+the+mouse+MCAO+model%3A+Potential+involvement+of+deep+cerebral+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22J+of+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Hypothalamic, thalamic and hippocampal lesions in the mouse MCAO model: Potential involvement of deep cerebral arteries.</a> J of Neurosci Methods. 254, 80-85 (2015).</li>
<li>Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+Stroke+in+Mice+-+Middle+Cerebral+Artery+Occlusion+with+the+Filament+Model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model.</a> J Vis Exp. (47), e2423(2011).</li>
<li>Trotman-Lucas, M., Kelly, M. E., Janus, J., Gibson, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Middle+cerebral+artery+occlusion+allowing+reperfusion+via+common+carotid+artery+repair+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Middle cerebral artery occlusion allowing reperfusion via common carotid artery repair in mice.</a> J Vis Exp. (143), e58191(2019).</li>
<li>Morris, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+study+of+variables+influencing+ischemic+injury+in+the+longa+and+koizumi+methods+of+intraluminal+filament+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A comparative study of variables influencing ischemic injury in the longa and koizumi methods of intraluminal filament middle cerebral artery occlusion in mice.</a> PLoS One. 11 (2), e0148503(2016).</li>
<li>Shimamura, N., Matchett, G., Tsubokawa, T., Ohkuma, H., Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+silicon-coated+nylon+suture+to+plain+nylon+suture+in+the+rat+middle+cerebral+artery+occlusion+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison of silicon-coated nylon suture to plain nylon suture in the rat middle cerebral artery occlusion model.</a> J Neurosci Methods. 156 (1-2), 161-165 (2006).</li>
<li>Guan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+suture+properties+on+stability+of+middle+cerebral+artery+occlusion+evaluated+by+synchrotron+radiation+angiography%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Effect of suture properties on stability of middle cerebral artery occlusion evaluated by synchrotron radiation angiography.</a> Stroke. 43 (3), 888-891 (2012).</li>
<li>Yuan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+suture+middle+cerebral+artery+occlusion+model+in+C57BL%2F6+mice+circumvents+posterior+communicating+artery+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Optimizing suture middle cerebral artery occlusion model in C57BL/6 mice circumvents posterior communicating artery dysplasia.</a> J Neurotrauma. 29 (7), 1499-1505 (2012).</li>
<li>Kitagawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+ischemia+after+bilateral+carotid+artery+occlusion+and+intraluminal+suture+occlusion+in+mice%3A+Evaluation+of+the+patency+of+the+posterior+communicating+artery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+and+Metab%22%5BJournal%5D)">Cerebral ischemia after bilateral carotid artery occlusion and intraluminal suture occlusion in mice: Evaluation of the patency of the posterior communicating artery.</a> J Cereb Blood Flow and Metab. 18 (5), 570-579 (1998).</li>
<li>McColl, B. W., Carswell, H. V., McCulloch, J., Horsburgh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extension+of+cerebral+hypoperfusion+and+ischaemic+pathology+beyond+MCA+territory+after+intraluminal+filament+occlusion+in+C57Bl%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Extension of cerebral hypoperfusion and ischaemic pathology beyond MCA territory after intraluminal filament occlusion in C57Bl/6J mice.</a> Brain Res. 997 (1), 15-23 (2004).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinctions+between+the+Koizumi+and+Zea+Longa+methods+for+middle+cerebral+artery+occlusion+%28MCAO%29+model%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis+of+rodent+data%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Distinctions between the Koizumi and Zea Longa methods for middle cerebral artery occlusion (MCAO) model: a systematic review and meta-analysis of rodent data.</a> Sci Rep. 13 (1), 10247(2023).</li>
<li>Trueman, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+re-examination+of+the+intraluminal+filament+mcao+model%3A+impact+of+external+carotid+artery+transection%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">A critical re-examination of the intraluminal filament mcao model: impact of external carotid artery transection.</a> Transl Stroke Res. 2 (4), 651-661 (2011).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>ベタジン皮膚液 10g/100ml</td><td>アルカロイド スコピエ</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>編組絹縫合糸</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>18020-60</td><td></td></tr><tr><td>ダフィロン縫合糸 5/0 DS16 B</td><td>. ブラウン</td><td>C0936154</td><td></td></tr><tr><td>ドロカイン 20 mg/g ゲル</td><td>ヤドラン・ガレンスキー Laboratorij</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>デュモン #5 鉗子</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11251-20</td><td>2個</td></tr><tr><td>デュモン#7鉗子</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11271-30</td><td></td></tr>デュ<tr><td>モンN0自己閉鎖鉗子</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11480-11</td><td></td></tr>デュ<tr><td>ラポアサージカルテープ1,25cm×9,1m</td><td>3M</td><td>7100057169</td><td></td></tr><tr><td>デュラポアサージカルテープ2,5cm×9,1m</td><td>3M</td><td>7100057168</td><td></td></tr><tr><td>外部サーモスタット</td><td>Petnap</td><td>1012536</td><td></td></tr><tr><td>ホールジーニードルホルダー</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>12500-12</td><td></td></tr>ホット<tr><td>ビーズ滅菌器</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>18000-50</td><td></td></tr><tr><td>アイリスはさみ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>14060-10</td><td></td></tr>イ<tr><td>ソフルランUSP</td><td>ピラマルクリティカルケア</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>レーザードップラーモニター</td><td>ムーア</td><td>MOORVMS-LDF2</td><td></td></tr><tr><td>メタルペットヒートパッド</td><td>ペットナップ</td><td></td><td></td>1012525</tr><tr><td>Micro Vannasスプリングハサミ</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-00</td><td></td></tr><tr><td>Mini-colibri retractor</td><td>Fine Science Tools</td><td>17000-01</td><td></td></tr><tr><td>Recugel eye ointment</td><td>Bausch&ロム</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>S&T B-1 ベッセルマイクロクランプ&nbsp;</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>00396-01</td><td>2個</td></tr><tr><td>入り S&鉗子を適用するTマイクロクランプ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>00071-14</td><td></td></tr><tr><td>シュワルツマイクロserrefines</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>18052-01</td><td></td></tr><tr><td>ステミDV4スポットステレオ顕微鏡</td><td>ツァイス</td><td>000000-1018-453</td><td></td></tr><tr><td>ステリストリップ強化接着スキンクロージャー 3 mm x 75 mm</td><td>3M</td><td>7100236545</td><td></td></tr><tr><td>ストレート組織鉗子</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11023-10</td><td></td></tr><tr><td>SZX スタンドアーム</td><td>オリンパス</td><td>SZ2-STS</td><td></td></tr><tr><td>Tec III 300 シリーズ校正済み気化器</td><td>Vaporizer Sales and Service inc.</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>ユニバーサルスタンド タイプ2</td><td>オリンパス</td><td>SZ2-STU2</td><td></td></tr><tr><td>VetFlo 6チャンネル麻酔スタンド</td><td>ケントサイエンティフィック</td><td>VetFlo-1225</td><td>O2/N2混合用に改造</td></tr></tbody></table>

完全再灌流のためのlonga中大脳動脈閉塞法の最適化

Optimization of the Longa Middle Cerebral Artery Occlusion Method for Complete Reperfusion

術中または術後のMRIスキャン、特に灌流強調イメージング(PWI)および/または拡散強調イメージング(DWI)スキャン(図2)は、成功した手順の決定的な証拠を提供できます。術中 PWI は、同側 MCA 領域に重大な虚血を示し、フィラメントの配置が完全な閉塞をもたらしたことが確認されています。成功した手順の術後PWIは、病変の中心に過剰灌流を示し、MCA領域の境界にある程度の再灌流を示します。術中 DWI 病変は、術中 PWI で観察された虚血領域に対応します。術後DWI病変は、虚血性病変のコアに向かって収縮を示し、病変の見かけの拡散係数が大幅に減少し、術中のDWI病変および周囲の再灌流脳組織よりも暗くなります。標準的なT2解剖学的スキャンは、術中および術後の両方で、フィラメント誘発性出血が発生しない限り、通常、特筆すべきものは何も示されません
(図3)。このような場合、PWIおよびDWIスキャンは、虚血が不完全またはまったくないことを明らかにします。
再灌流プロセスは次の48時間以内に続き、手術後2日目に行われたMRIスキャンで行われたことが確認されます(図2、2日目のCBF)。PWIスキャンでは、病変部位に完全な再灌流が示され、病変コアにわずかな過灌流が見られます。DWIスキャンでは、脳浮腫の形成により見かけの拡散係数が低下した複数の領域が示されています。T2解剖学的スキャンは、海馬などの非MCA領域の関与なしに、MCA領域を包む浮腫の高信号領域を示しています。
目覚めると、動物は急性脳卒中の明確な徴候を示します。一般的な行動症状には、病変の側面の筋肉緊張の増加が含まれ、動物は胴体をその方向に曲げます。同側方向に旋回および回転することも、急性脳卒中の明確な兆候です。歩行性運動失調症は、しばしば虚血性病変の体積における海馬の関与を示唆しています。ただし、この症状は、イソフルラン麻酔の副作用により、超急性期の特異性を欠く可能性があります。その後の数日間で、動物は前肢の屈曲を同側に発症し、ウィスカー反射の欠如を伴ってその姿勢状態を悪化させるはずです。死亡率は、脳浮腫のため、処置後約3日でピークに達します。慢性期は、脳浮腫が解消し始めた後に始まります。この間、動物は尿貯留を呈することがあります。このため、膀胱の硬さや尿道出口のしっかりとしたキャップを動物に検査することが重要です。ほとんどの場合、この問題は、排尿を促進するために膀胱を優しくマッサージすることで解決できます。体重回復の兆候は通常、脳卒中発症後最初の7日以内に現れます。
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66720/66720fig02.jpg"> 図2:MRIスキャンで完全な再灌流が確認されたMCAOの成功例。 CBF、ADC、およびT2wは、それぞれ脳血流マップ、見かけ拡散係数マップ、およびT2強調解剖学的スキャンの略です。IntraOP、postop、および D02 は、虚血発症後、再灌流開始後、および MCAO 後 2 日目の 3 つの異なるイメージング時点を示します。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66720/66720fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66720/66720fig03.jpg"> 図3:MCAO手順中のフィラメント誘発性出血の代表的なMRIスキャン。 CBF、ADC、T2wは、それぞれ脳血流マップ、見かけ拡散係数マップ、T2強調解剖学的スキャンの略です。IntraOP、postOP、および D02 は、虚血発症後、再灌流開始後、MCAO の 2 日目の 3 つの異なるイメージング時点を示します。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66720/66720fig03large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66720/66720fig04.jpg"> 図4:中大脳動脈枝での適切なフィラメントの配置の図。 ほとんどの場合、フィラメントのシリコン部分(白色)は、MCA分岐点よりも約2mm先の前大脳動脈(ACA)の近位部分に留まります。通常、マウスではACAの脳領域は影響を受けず、ACAは反対側の領域と結合して単一の奇形ACAになります。影響を受けた動脈は灰色で示されています。左側では、CCAは虚血期間中に特許が残されているため、フィラメントのシリコン部分で閉塞しているMCAまでのすべてのICA枝に血液が供給されます。右側では、フィラメントは同じ位置にありますが、虚血期間中はCCAライゲーションが維持されます。ほとんどの場合、PcomA(緑色)は特許を取得していないため、CCAライゲーションが維持されると、ストロークはMCA、AchA、VTA、HTA、およびPCAを介して同側半球の大部分を非選択的に包み込みます。そのような場合、PPAのブロックにより、眼の急性梗塞(白血球および異種性)の徴候も観察されます。BioRender.com で作成。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66720/66720fig04large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>

完全再灌流のためのLonga中大脳動脈閉塞法の最適化

The middle cerebral artery occlusion model serves as the primary animal model for studying ischemic stroke. Despite being used in research for over three ...

optimization-longa-middle-cerebral-artery-occlusion-method-for

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

腔内中大脳動脈閉塞（MCAO）モデルは、実験的虚血性脳卒中のモデルの中で最も頻繁に使用されるモデルです。ここでは、レーザードップラーフローメトリー、およびその代表的な結果のガイドで詳細にモデル全体のデモンストレーションを行います。...

マウスにおけるレーザードップラー流量計の指針と虚血性脳卒中に対する腔内中大脳動脈閉塞（MCAO）モデル

証拠が蓄積され、その虚血プレコンディショニング（PC） - 脳の非損傷虚課題は - その後の損傷虚血への過渡保護を与える。我々はC57BL6 /...

局所脳虚血への早期虚血耐性を誘導するために適切な前処理刺激として二国間の総頚動脈閉塞

私たちは、齧歯類の主要脳血管の閉塞のための永久的な再現性の高い方法を記述します。この技術は、非常に少ない周損傷、最小限の血液損失、長期生存率が高いと、ヒト臨床人口に見合った一貫性梗塞体積を達成することができる。...

永久的な脳血管閉塞<em&gt;経由</em&gt;ダブルリガチャーと離断

このプロトコルは、マウスにおける一過性中大脳動脈閉塞後の梗塞容積と血液脳関門の破壊を減少させる反復的な低酸素プレコンディショニング、または全身性低酸素症への短時間の曝露について説明しています。また、脳卒中後の梗塞容積と血液脳関門の破壊の二重定量化についても詳しく説明し、神経血管保護の有効性を評価します。...

マウスにおける反復低酸素プレコンディショニングと過渡中大脳動脈閉塞後に神経血管保護の定量

脳卒中の病態生理学を理解するためには、信頼性のあるモデルを使用することが重要です。この論文は、マウスにおいて最も頻繁に使用される脳卒中モデルのいずれかを説明する、中大脳動脈閉塞（MCAO）モデルと呼ばれる再潅流と（また腔内フィラメントまたは縫合モデルと呼ばれます）。...

マウスの中大脳動脈閉塞再灌流誘発性の脳卒中のための外科的アプローチ

私たちは、シリコーンコーティング縫合糸を使用して、中大脳動脈の閉塞によって誘発される脳卒中のマウスモデルを記述します。このプロトコルは、永久的な閉塞または一時的な虚血を誘発し、続いて再灌流を誘発するために適用することができます。...

梗塞エリアの中央動脈閉塞技術と可視化を使用したマウスにおける虚血性脳卒中および虚血 - 再灌流の誘導

新生児脳卒中は、早期の脳損傷の重要な原因であり、研究を可能にするためには、一貫した焦点損傷パターンと高い再現性を持つトランスレーショナルモデルが必要です。この研究では、完全正期相当のげっ歯類に非出血性の片側性限局性虚血再灌流障害を作成するための詳細な外科的手順について説明します。...

P10ラットにおける新生児脳卒中の一過性中大脳動脈閉塞モデル

腔内フィラメント中大脳動脈閉塞症は、齧歯動物で実験的ストロークの生体内で最も頻繁に使用されるモデルです。一般的な頚動脈修復が可能にする手術方法は、総頸動脈の再灌流と中大脳動脈領域に完全再灌流が可能ここでは、実行されます。...

マウスにおける一般的な頸動脈の修理で再灌流を許可する中大脳動脈閉塞

脳虚血再灌流のマウス モデルを確立して、脳卒中の病態を調査します。我々 は遠位右中大脳動脈と右総頚動脈を結紮し、10 または 40...

2 血管閉塞マウス脳虚血・再灌流モデル

このプロトコルは中間の大脳の動脈のintraluminal閉塞によってマウスの一時的な焦点の大脳の虚血のモデルを記述する。さらに、磁気共鳴画像法と行動テストを使用した結果評価の例が示されています。...

脳卒中の一過性中大脳動脈閉塞モデル

このプロトコルは、総頸動脈を介した中大脳動脈閉塞再灌流の準備プロセスを説明しています。...

中大脳動脈閉塞再灌流のための修正モデル調製

学ぶ Longa法を用いたマウス中大脳動脈閉塞術の最適化手法。完全再灌流を確保するための外科的修正と、虚血性脳卒中研究における再現性の高い結果達成のポイントを解説します。

完全再灌流のためのLonga中大脳動脈閉塞法の最適化

さらに動画を探す