2024年9月27日
このプロトコルは、針の面取りのプロセス中に加圧された空気を針に送達するための空気圧システムの組み立てを説明しています。このプロトコルでは、シャープなマイクロインジェクション針を作成するための面取りプロセスと、針の相対的な開口部のサイズを測定する方法についてさらに説明しています。
昆虫形質転換施設は、遺伝子組み換え昆虫の作製を支援する大学サービス施設です。彼らの研究は、蚊の嗅覚に関する研究を行う神経科学から、マラリアに対するワクチンを作る公衆衛生研究、そしてハエの新規タンパク質の発現まで多岐にわたります。従来、針は引っ張って何かにブラシをかけ、その針を開くことで開かされてきましたが、マイクロインジェクションに最適な針と使用できない針が生成される可能性があります。
したがって、この方法により、毎回鋭い針を得る簡潔な方法で針を開くことができます。このプロトコルは、針の開口部サイズに関するフィードバックを提供します。その針が開いたら、針の先端に供給される圧力を下げることができ、気泡が流れなくなる圧力が高いほど、その針の開口部のサイズは小さくなります。
本プロトコルでは、マイクロインジェクション用の鋭利なツールを作成するための針のベベリング工程において、加圧空気を供給するために使用される空気圧システムの組み立てについて詳述します。この手法により、針の開口サイズを精密に制御することが可能となり、マイクロインジェクションへの適用における一貫した品質を確保できます。
昆虫モデルシステムにおいて、ゲノム編集試薬を確実に導入するためには、鋭利なマイクロインジェクション針を安定して作製することが不可欠です。一定の空気圧フィードバックを用いたウェットベベリングプロトコルにより、再現性のある針口径を実現でき、これが実験の生存率やその後の遺伝子改変ワークフローに直接的に影響します。この技術は、昆虫モデルを用いたバイオファーマのR&Dにおける、堅牢な初期探索およびスクリーニングパイプラインを支えるものです。
このウェットベベリング法は、初期探索とアッセイ開発のインターフェースを統合し、昆虫モデルにおけるゲノム編集および機能研究のための標準化されたマイクロインジェクションツールを提供します。