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DOI: 10.3791/66797-v
Julieta S. Del Valle1,2, Azra Husetic*1, Dina Diek*1, Laurens F. Rutgers*1, Joyce D. Asseler3,4,5, Jeroen Metzemaekers6, Norah M. van Mello3,4,5, Susana M. Chuva de Sousa Lopes1,2,7
1Department of Anatomy and Embryology,Leiden University Medical Center, 2The Novo Nordisk Foundation Center for Stem Cell Medicine (reNEW),Leiden University Medical Center, 3Department of Obstetrics and Gynaecology,Amsterdam University Medical Center, 4Centre of Expertise on Gender Dysphoria,Amsterdam UMC, 5Amsterdam Reproduction and Development Research Institute, 6Department of Gynaecology,Leiden University Medical Center, 7Ghent-Fertility and Stem Cell Team (G-FAST), Department of Reproductive Medicine,Ghent University Hospital
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This protocol outlines the establishment of three-dimensional (3D) tissue organoids from primary human ovarian surface epithelium (hOSE) cells. It details the isolation, expansion, cryopreservation, and organoid derivation processes, along with immunofluorescence and quantitative analysis.
このプロトコルは、初代ヒト卵巣表面上皮(hOSE)細胞からの三次元(3D)組織オルガノイドの確立を説明しています。このプロトコールには、新たに採取した卵巣からのhOSEの単離、hOSEの細胞増殖、凍結保存融解手順、およびオルガノイドの誘導が含まれます。免疫蛍光、定量分析、スクリーニングプラットフォームとしての有用性の紹介が含まれています。
私たちの研究は、ヒトの卵巣機能を理解することに焦点を当てています。女性のリプロダクティブヘルスには依然として知識のギャップが存在し、不妊治療のための新技術の必要性が高まっているため、新しい臨床プロトコルの開発を促進するために、卵胞形成や組織再生などの卵巣プロセスを研究することを目指しています。近年、3D組織培養プロトコルの大きな進歩を目の当たりにしています。
これらの開発により、例えば、卵胞のような構造である人工卵巣の形成が可能になり、全部位のフルイメージの成熟をサポートすることができるようになった。さらに、臓器や組織の小型化であるオルガノイドや腫瘍化が、卵巣の生物学や疾患のさらなる研究への道を切り開いていることも明らかになっています。生殖年齢のドナーから得られる卵巣サンプルへのアクセスは、依然として大きな課題です。
その上、この材料を使用した場合の結果は、ドナーの年齢、代謝状態、内分泌機能の違いなどの要因によるものと思われる、高いドナー間生存率を示しています。全体として、この不均一性により、結果の再現やプロトコールの臨床への翻訳が困難になります。卵巣は体内で最もダイナミックで変化する器官の1つとして際立っていますが、その再生メカニズムはまだ非常によく理解されていません。
そして実際には、これまでに得られた知識のほとんどは、まだ動物モデルから来ています。OSCオルガノイドプロトコルにより、卵巣組織の再生と創傷治癒におけるヒトOSC層の役割を研究するためのプラットフォームを提供します。他のプロトコルと比較して、当社のプロトコルは非病理学的サンプルの使用に基づいて設計されています。
これにより、ヒトの卵巣機能に関する基本的な機構的問題に対する答えを見つけようとしている発達研究への応用が可能になります。
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