Name: 高吸水性ポリマー系独立栄養系におけるアーバスキュラー菌根培養物の接種と観察 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-14T14:35:00.000+00:00
Duration: 6 min 43 s
Description: 学ぶアーバスキュラー菌根菌の接種と観察法。高吸水性ポリマー系独立栄養系を用いて、Plantago lanceolataの根に菌根菌を接種し、リアルタイムでモニタリングします。従来法の限界を克服し、菌根菌と植物の相互作用を効率的に研究できます。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

ご提案いただいた2名の匿名のレビュアーに感謝いたします。この研究の資金は、プロジェクトJ-002295(AAFCの生物学的コレクションの管理と強化)の下で、カナダ農業・農業食品省(AAFC)によって提供されました。

1. 2コンパートメントシャーレの改造
注意: この手順に必要な材料は、 材料の表に記載されています。
<ol><li>ペトリ皿の蓋を変更します。<ol><li>回転工具と適切なカービングビットを使用して、蓋の上部に2つの穴(直径~7mm)を開け、側面に1cmの開口部を開けます。1つの穴は根(バーミキュライト)コンパートメントの灌漑に使用され、もう1つの穴は菌糸(SAP)コンパートメントの灌漑に使用されます。</li>
	</ol></li>
	<li>ペトリ皿の底を変更します。<ol><li>電動回転工具を使用して、植物の茎のためにペトリ皿の底の側面に切り込みを開けます。液体が排出されるのを防ぐために、ノッチが深すぎないことを確認してください。この切り込みは、蓋の1cmの開口部に合わせられます(ステップ1.1)。</li>
		<li>デュアルコンパートメントペトリ皿のプラスチックバリアをナイロンメッシュフィルターメンブレンに置き換えるには、電動回転ツールを使用して、ペトリ皿の底まで30mmの長方形のノッチをドリルで穴を開けます。</li>
		<li>高解像度の観察のために、ペトリ皿の底に直径~25mmの円形の穴を開けます。要件に応じて、SAP側に1つの穴(または複数の穴)を開けるか、各コンパートメントに1つの穴を開けます。穴が蓋の灌漑穴の真下に開けられていないことを確認してください。</li>
	</ol></li>
	<li>ナイロンメッシュフィルターメンブレンを取り付けます。<ol><li>金属製のガイドとペーパークリップを使用して、ナイロンメッシュフィルターメンブレンの一部を所定の位置に押し込み、プラスチックバリアにしっかりと押し付けます。メンブレンの上部をプラスチックバリアの上部に合わせます。メンブレンがガイドの下部から突き出ていることを確認してください。</li>
		<li>パイログラフィーキットを使用して、金属ガイドの端に沿って切断し、膜を溶かしてシャーレの底と2つのコンパートメントを分離するプラスチックバリアに密封します。</li>
		<li>金属製のガイドとペーパークリップを所定の位置に残したまま、ピンセットで余分なナイロンメッシュフィルターメンブレムを慎重に取り除きます。</li>
		<li>解剖顕微鏡で、ナイロンメッシュフィルターメンブレンがプラスチックに適切に密封されていることを確認して、根が菌糸(SAP)コンパートメントに浸透するのを防ぎます。</li>
	</ol></li>
	<li>カバースリップを取り付けます。 注意: カバーガラスはペトリ皿の下に置かれます。これにより、浸漬油を使用し、カバーガラスを洗浄することができます。<ol><li>シリコンシーラントを円形の穴の端(ペトリ皿の底の外側)に沿って置きます。</li>
		<li>カバースリップをペトリ皿の底の外側に置き、そっと押して完全に接着します。</li>
		<li>乾燥させ、かみそりの刃で余分なシーラントを取り除きます。</li>
	</ol></li>
	<li>点検して清掃します。<ol><li>エアブラストを使用して、ペトリ皿に付着した可能性のあるほこりやプラスチック片を取り除きます。</li>
		<li>解剖顕微鏡で検査し、欠陥を特定して修正します。 注意: ペトリ皿に指紋がつかないように手袋を着用してください</li>
	</ol></li>
</ol>2. 1Lの養液mMS-1の調製
<ol><li>ストック溶液を準備します。<ol><li>主要栄養素:以下を秤量し、1Lの蒸留水に溶解します。 7.31 g の MgSO4·7 H2O、0.80 g の KNO3、0.65 g の KCl、および 0.048 g の KH2PO4。</li>
		<li>重量 2.88 g の Ca(NO3)2·4H2Oを1Lの蒸留水に溶解します。</li>
		<li>0.80 gのNaFeEDTAを秤量し、0.5 Lの蒸留水に溶解します。</li>
		<li>0.375gのKIを秤量し、0.5Lの蒸留水に溶解します。</li>
		<li>微量栄養素<ol><li>3 gのMnCl2·蒸留水100mL中に4H2O。</li>
			<li>1.325 gのZnSO4·100mLの蒸留水に7H2O。</li>
			<li>0.75gのH3BO3 を100mlの蒸留水に溶解する。</li>
			<li>溶解したら、ステップ2.1.5.1-2.1.5.3で調製した溶液を混合します。</li>
			<li>重量 0.65 g の CuSO4·5H2Oを蒸留水50 mLに溶解する。</li>
			<li>0.12 gのNa2MoO4·100mLの蒸留水に2H2O。</li>
			<li>ステップ 2.1.5.5 の溶液 5 mL とステップ 2.1.5.6 の 1 mL をステップ 2.1.5.4 の溶液に加えます。</li>
			<li>ステップ2.1.5.7で得られた溶液の量を蒸留水で500mLに調整します。</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>mMS-1メディアを1L用意します。<ol><li>2 Lのガラス瓶に700 mLの蒸留水を加えます。</li>
		<li>磁気バーで絶えず攪拌しながら、100 mLの主要栄養素溶液(ステップ2.1.1)、100 mLの硝酸カルシウム溶液(ステップ2.1.2)、5 mLの第二鉄EDTA溶液(ステップ2.1.3)、1 mLのKI溶液(ステップ2.1.4)、および1 mLの微量栄養素溶液(ステップ2.1.5)を加えます。</li>
		<li>溶液の量を1000mLに調整します。 注:mMS-1はBécard and Fortin(1988)14から適応されています。SAP-ASは滅菌されていないため、121°Cで15分間の滅菌はオプションです。SAPには強力な緩衝効果があるため、pHは調整されておらず、Paré et al.(2022)12 では、SAPの条件が比較的中性(6.7〜7.4)であることが示されました。</li>
	</ol></li>
</ol>3. SAPの準備
注意: この手順に必要な材料は、 材料の表に記載されています。
<ol><li>SAPを水和する:5 gの乾燥SAPを500 mLのmMS-1栄養溶液と混合します(ステップ2.2)。</li>
	<li>室温(RT)で12時間(一晩)水和させます。</li>
	<li>水和したSAP穀物を排出して収集します。<ol><li>水和したSAPを使用して12ウェルプレート(セクション7)を充填する場合は、水和したSAPを排出せず、水和した穀物と残りのmMS-1栄養溶液を混合しないでください。 注:乾燥SAPの3つの粒度(小、中、大)が利用可能です。中粒度計(1〜2 mm)が最適です。大粒粒測定のSAPは水和すると飲み込みすぎてペトリ皿の蓋を閉じることができませんが、小さな粒粒測定のSAPはそれらの間にほとんどスペースを残さないため、粒子間の真菌構造の観察には制限があります。</li>
	</ol></li>
</ol>4.苗の準備
注意: この手順に必要な材料は、 材料の表に記載されています。
<ol><li>P. lanceolataの種子を、ペトリ皿のmMS-1栄養溶液で湿らせた吸い取り紙で発芽させます。</li>
	<li>RTで暗闇の中でインキュベートします。</li>
	<li>細根の長さが少なくとも2cmになるまで、必要に応じて水分を補給します。</li>
</ol>5. SAP-ASの組立・管理
注意: この手順に必要な材料は、 材料の表に記載されています。
<ol><li>SAP-AS の組立 (ステップ 1 + ステップ 2 + ステップ 3 + ステップ 4)<ol><li>苗の茎をペトリ皿の側面の切り欠きに置き、根を内側に、子葉/葉と茎を外側にします。</li>
		<li>根を約1.5〜2gのバーミキュライトで覆います。</li>
		<li>ルートコンパートメントを8mLのmMS-1栄養溶液で水和します。これは、ルートとバーミキュライトを安定させるのに役立ちます。</li>
		<li>ルートコンパートメントの側面にあるナイロンメッシュフィルターメンブレンに沿って5gの水和SAPを追加します。</li>
		<li>15 gの水和SAPを菌糸コンパートメントに加えます。ハイフコンパートメントは、ペトリ皿の底の側面にノッチがないコンパートメントです。</li>
		<li>蓋をしてペトリ皿を閉じる前に、ステムを傷つけないように、蓋の側面のノッチとペトリ皿の底が揃っていることを確認してください。</li>
		<li>若い茎をつぶさないように注意しながら、ベースと蓋を結合するパラフィンのストリップでシャーレを密封します。</li>
		<li>ペトリ皿の平均重量を量って記録し、SAP-ASをいつ再水和する必要があるかを判断します。</li>
		<li>スペースを最適化するためにペトリ皿を積み重ねます。ペトリ皿は、苗の側面に開口部がある不透明なカバーを使用して暗所に保管します。</li>
	</ol></li>
	<li>SAP-AS の管理。<ol><li>ペトリ皿をmMS-1栄養溶液のみで水和します。</li>
		<li>平均重量を参考にしてください。ペトリ皿が5〜6 g軽くなったら、mMS-1栄養溶液を追加して元の重量に戻します。バーミキュライトとSAPが水和されているが、浸水していないことを確認してください。根は酸素にアクセスできる必要があります。</li>
		<li>苗とその真菌のパートナーが成長するにつれて、それらをより頻繁に灌漑します。両方のコンパートメントに同時に水をやる必要はありません。灌漑要件は、苗の発育によって異なりますが、SAP-ASがインキュベートされる環境条件によっても異なります。</li>
		<li>植物に健康な葉が3枚以上ある場合は、古い葉を取り除くことにより、灌漑要件を減らします。枯れ葉を取り除きます。 注:mMS-1栄養溶液中にK+、Mg2+、Ca2+ などの陽イオンが存在すると、SAPネットワーク13 の拡張が時間とともに減少する傾向がある。</li>
	</ol></li>
</ol>6. SAP-ASの胞子1種への接種
注意: この手順に必要な材料は、 材料の表に記載されています。
<ol><li>単一の胞子で接種します。<ol><li>ガラスピペットを炎のキャンドルまたはブンゼンバーナーで加熱します。ガラスが溶けたら引っ張って、ガラス管が分離するまで伸ばします。</li>
		<li>実体顕微鏡で、ガラスピペットの先端を折って内径(通常は100〜300μm)を小さくします。これにより、個々の胞子の操作が大幅に容易になります。</li>
		<li>ペトリ皿を開き、胞子を配置する場所を特定し、ナイロンメッシュフィルターメンブレンに沿って5gの水和SAPの間のスペースを空けて、根の一部を露出させます。</li>
		<li>解剖顕微鏡の下で、押し出しピペットで胞子を拾います。胞子をピペッティングする前に、液体をピペットで動かしてください。胞子を採取した後は、液体をピペッティングしないでください。</li>
		<li>解剖顕微鏡の下で、胞子を根に注意深く沈着させます。胞子をピペッティングする前にピペッティングした液体は、胞子を排出するのに役立ちます。胞子が最適な場所に沈着しない場合は、鍼またはブラシの毛を使用して、胞子を根元に接触させます。必要に応じて、参照用に根に堆積した胞子の写真を撮り、マーカーを使用して接種部位を特定します。</li>
		<li>ルートフラグメント上のSAPを置き換えて、ルートと胞子に湿った微小環境を提供します。根のコンパートメントを灌漑する前に少なくとも24時間待ち、根から胞子を洗い流さないように注意してください。</li>
		<li>蓋をしてシャーレを閉じる前に、苗の茎を傷つけないように、蓋の側面のノッチとシャーレの底が揃っていることを確認してください。 注:SAP-ASは、根がナイロンメッシュフィルター膜に到達したとき、理想的には灌漑の数日後に接種する準備ができているため、遊離液はありません。</li>
	</ol></li>
</ol>7. SAPでの胞子発芽(オプション)
注意: この手順に必要な材料は、 材料の表に記載されています。
<ol><li>胞子の発芽。<ol><li>水和したSAPをブレンドして、滑らかな食感を得ます(手順3.3.1を参照)。気泡は通常、24時間以内に、またはブレンドされたSAPをオートクレーブ(オプション)することで消えます。</li>
		<li>針なしの20 mLシリンジを使用して、約2 g(2 mLに相当)のブレンドされたSAPを12ウェルプレートの各ウェルにピペットで移します。</li>
		<li>解剖顕微鏡で胞子を選択し、セクション6で説明されているように押し出しピペットを使用します。</li>
		<li>解剖顕微鏡の下で、各ウェルの中央に胞子を置きます。</li>
		<li>12ウェルプレートを暗闇の室温でインキュベートし、発芽を定期的にモニタリングします。</li>
		<li>解剖顕微鏡下で、菌糸が成長している胞子(少なくとも数ミリメートルの長さ)を選択します。</li>
		<li>1 mLのmMS-1栄養溶液をウェルに加え、培地がより滑らかになるまで数分待ちます。</li>
		<li>必要に応じて、鍼治療の針を使用して、胞子と菌糸を基質から穏やかに取り除きます。</li>
		<li>ピペットで胞子を集めるか、苗の根を培地の表面に持ってきて、胞子と菌糸を根に貼り付けます。次に、手順5.1.3で説明したように、苗をペトリ皿に入れます。 注:胞子の発芽と苗の成長を調整します。この方法は 、R. irregularis 胞子でのみテストされています。</li>
	</ol></li>
</ol>8. 共生発達のライブモニタリング
注意: この手順に必要な材料は、 材料の表に記載されています。
<ol><li>解剖顕微鏡、直立顕微鏡、または倒立顕微鏡で日常的に観察します。<ol><li>白色照明と暗視野を備えた解剖顕微鏡を使用して、各コンパートメントの上部を20倍〜40倍で観察します。</li>
		<li>倒立顕微鏡が利用できない場合は、ペトリ皿を逆さにして、解剖顕微鏡または直立顕微鏡で各コンパートメントの底を観察します。ペトリ皿をひっくり返す前に、SAP-ASを2日間乾燥させて、SAPがペトリ皿の底にわずかに付着するようにします。</li>
		<li>ペトリ皿の底部から40倍、カバーガラスから最大100倍(油浸)で詳細な観察を行います。</li>
	</ol></li>
	<li>胞子と菌糸ネットワークを観察します。 注:SAP粒子の内部で発生している真菌構造は染色される可能性があります。<ol><li>Vierheilig et al. (1998)15に従ってインクと酢の溶液を調製します。加熱しないでください。</li>
		<li>菌糸と胞子を含むSAP粒子を抽出し、RTのインクに入れます。インクはSAPグレインに浸透し、数分以内に菌糸と胞子を染色します。</li>
		<li>SAPグレインを取り出し、mMS-1養液または水道水に入れます。インクは12時間以内に穀物から出ますが、胞子と菌糸は汚れたままになります。</li>
		<li>2つの顕微鏡スライドの間にSAPグレインを押し込み、写真撮影や胞子のカウントのために平らにします。</li>
	</ol></li>
	<li>アーバスキュールを観察します。<ol><li>ルートコンパートメントからいくつかの根を抽出し、Vierheiligら(1998)15に従ってインクと酢のプロトコルを使用して染色します。根をKOH溶液に2〜3分以上浸さないように注意してください。そうしないと、根が壊れやすくなりすぎて次の手順を実行できず、分解して使用できなくなる破片になります。</li>
		<li>解剖顕微鏡下で、アーバスキュールを含む可能性のある長さ約5mmの根片を選択し、水滴のスライドに置きます。</li>
		<li>鍼または非常に細いピンセットを使用して、数細胞の厚さの層で根を引きちぎります。</li>
		<li>水を吸収し、顕微鏡でアーバスキュールのあるセグメントがまだ存在し、満足のいく品質であり、スライドに正しく配置されていることを確認します。この時点で、アーバスキュールはルートセル層内で簡単に見える必要があります。</li>
		<li>ルート層がスライドに付着するように、2〜3分間乾燥させます。ポリビニルアルコール-乳酸グリセロール(PVLG)バッファーを一滴加え、カバースリップを追加します。標準的な顕微鏡法で観察します。</li>
	</ol></li>
</ol>

SAP-ASを用いたアーバスキュラー菌根菌の培養による観察強化

<ol><li>Dotzler, N., Krings, M., Taylor, T. N., Agerer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germination+shields+in+Scutellospora+%28Glomeromycota%3A+Diversisporales%2C+Gigasporaceae%29+from+the+400+million-year-old+Rhynie+chert%5BTitle%5D)+AND+%22Mycol+Prog%22%5BJournal%5D)">Germination shields in Scutellospora (Glomeromycota: Diversisporales, Gigasporaceae) from the 400 million-year-old Rhynie chert.</a> Mycol Prog. 5 (3), 178-184 (2006).</li>
<li>Redecker, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomalean+fungi+from+the+ordovician%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Glomalean fungi from the ordovician.</a> Science. 289 (5486), 1920-1921 (2000).</li>
<li>Olsson, P. A., Jakobsen, I., Wallander, H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOlsson%2C+PA+%22Foraging+and+Resource+Allocation+Strategies+of+Mycorrhizal+Fungi+in+a+Patchy+Environment.+Mycorrhizal+Ecology.+Ecological+Studies%22">Foraging and Resource Allocation Strategies of Mycorrhizal Fungi in a Patchy Environment. Mycorrhizal Ecology. Ecological Studies</a>. , Springer. Berlin, Heidelberg. (2003).</li>
<li>Zheng, C., Chai, M., Jiang, S., Zhang, S., Christie, P., Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Foraging+capability+of+extraradical+mycelium+of+arbuscular+mycorrhizal+fungi+to+soil+phosphorus+patches+and+evidence+of+carry-over+effect+on+new+host+plant%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Soil%22%5BJournal%5D)">Foraging capability of extraradical mycelium of arbuscular mycorrhizal fungi to soil phosphorus patches and evidence of carry-over effect on new host plant.</a> Plant Soil. 387 (1-2), 201-217 (2015).</li>
<li>Singh, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+glomalin+in+mitigation+of+multiple+soil+degradation+problems%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Environ+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">The role of glomalin in mitigation of multiple soil degradation problems.</a> Crit Rev Environ Sci Technol. 52 (9), 1604-1638 (2022).</li>
<li>Wilson, G. W. T., Rice, C. W., Rillig, M. C., Springer, A., Hartnett, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soil+aggregation+and+carbon+sequestration+are+tightly+correlated+with+the+abundance+of+arbuscular+mycorrhizal+fungi%3A+results+from+long-term+field+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Ecol+Lett%22%5BJournal%5D)">Soil aggregation and carbon sequestration are tightly correlated with the abundance of arbuscular mycorrhizal fungi: results from long-term field experiments.</a> Ecol Lett. 12 (5), 452-461 (2009).</li>
<li>Gianinazzi, S., Gollotte, A., Binet, M. -N., van Tuinen, D., Redecker, D., Wipf, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agroecology%3A+the+key+role+of+arbuscular+mycorrhizas+in+ecosystem+services%5BTitle%5D)+AND+%22Mycorrhiza%22%5BJournal%5D)">Agroecology: the key role of arbuscular mycorrhizas in ecosystem services.</a> Mycorrhiza. 20 (8), 519-530 (2010).</li>
<li>Stürmer, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+history+of+the+taxonomy+and+systematics+of+arbuscular+mycorrhizal+fungi+belonging+to+the+phylum+Glomeromycota%5BTitle%5D)+AND+%22Mycorrhiza%22%5BJournal%5D)">A history of the taxonomy and systematics of arbuscular mycorrhizal fungi belonging to the phylum Glomeromycota.</a> Mycorrhiza. 22 (4), 247-258 (2012).</li>
<li>Gerdemann, J. W., Nicolson, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spores+of+mycorrhizal+Endogone+species+extracted+from+soil+by+wet+sieving+and+decanting%5BTitle%5D)+AND+%22Trans+Br+Mycol+Soc%22%5BJournal%5D)">Spores of mycorrhizal Endogone species extracted from soil by wet sieving and decanting.</a> Trans Br Mycol Soc. 46 (2), 235-244 (1963).</li>
<li>Walker, C., Vestberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+inexpensive+method+for+producing+and+maintaining+closed+pot+cultures+of+arbuscular+mycorrhizal+fungi%5BTitle%5D)+AND+%22Agr+Sci+Finland%22%5BJournal%5D)">A simple and inexpensive method for producing and maintaining closed pot cultures of arbuscular mycorrhizal fungi.</a> Agr Sci Finland. 3, 233-240 (1994).</li>
<li>Fortin, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arbuscular+mycorrhiza+on+root-organ+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Bot%22%5BJournal%5D)">Arbuscular mycorrhiza on root-organ cultures.</a> Can J Bot. 80 (1), 1-20 (2002).</li>
<li>Paré, L., Banchini, C., Hamel, C., Bernier, L., Stefani, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+low-cost+technique+to+initiate+single-spore+cultures+of+arbuscular+mycorrhizal+fungi+using+a+superabsorbent+polymer%5BTitle%5D)+AND+%22Symbiosis%22%5BJournal%5D)">A simple and low-cost technique to initiate single-spore cultures of arbuscular mycorrhizal fungi using a superabsorbent polymer.</a> Symbiosis. 88, 61-73 (2022).</li>
<li>Saha, A., Sekharan, S., Manna, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superabsorbent+hydrogel+%28SAH%29+as+a+soil+amendment+for+drought+management%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Soil+Tillage+Res%22%5BJournal%5D)">Superabsorbent hydrogel (SAH) as a soil amendment for drought management: A review.</a> Soil Tillage Res. 204, 104736(2020).</li>
<li>Bécard, G., Fortin, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+events+of+vesicular-arbuscular+mycorrhiza+formation+on+Ri+T-DNA+transformed+roots%5BTitle%5D)+AND+%22New+Phytol%22%5BJournal%5D)">Early events of vesicular-arbuscular mycorrhiza formation on Ri T-DNA transformed roots.</a> New Phytol. 108 (2), 211-218 (1988).</li>
<li>Vierheilig, H., Coughlan, A. P., Wyss, U., Piché, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ink+and+vinegar%2C+a+simple+staining+technique+for+arbuscular-mycorrhizal+fungi%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Ink and vinegar, a simple staining technique for arbuscular-mycorrhizal fungi.</a> Appl Environ Microbiol. 64 (12), 5004-5007 (1998).</li>
</ol>

著者は何も開示していません。

接種はプロトコルの最も重要なステップであり、押し出しガラスパスツールピペットは、AM菌の単一胞子を正確に操作しながらその完全性を維持するための優れたツールであることが証明されました。押し出しガラスパスツールピペットは、キャンドルやブンゼンバーナーの炎を使って簡単に成形でき、ピペットで移動する胞子のサイズに合わせて開口部を実体顕微鏡で調整できます。AM真菌胞子のサイズに合わせたツールで胞子を操作し(補足図1)、宿主植物の根が胞子が沈着するNitex膜に到達するのに十分な長さになったときにSAP-ASを接種することが重要です。
SAP-ASは、実験要件に簡単に適応できます。より大きなシャーレは、マルチコンパートメントを使用して、例えば、密接に関連した菌株間または異なる種類のAMF間の相互作用を監視したり、化学的(pH)または生物学的環境(線虫、細菌、真菌の導入)を変更したりするために使用できます。さまざまな菌栄養宿主植物を使用して、AM菌に光合成物を提供することもできます。栄養溶液mMS-1は、BécardとFortin(1988)15 によって記載された最小(M)培地レシピから、炭素源を制限するためのスクロース、ビタミン、およびバクト寒天を差し引いたものに由来しました。ただし、SAP-ASは、実験目的に応じて、さまざまな栄養溶液を補充できます。
SAP-ASでのAM菌の繁殖には、定期的な水やりが必要です。バーミキュライトとSAPの量が限られているため、特に標準的な2コンパートメントのペトリ皿(直径10cm)では、根とAM菌が湿度の変動にさらされます。拡張する能力、つまり SAP グレインの透明性は、時間の経過とともに低下します。実際、栄養溶液からの陽イオンの存在は、アクリレートネットワークの拡大を徐々に制限し、数か月後にSAPの交換が必要になります。さらに、ペトリ皿が光から適切に保護されていないか、水をやりすぎていると、緑藻やカビが時間の経過とともに成長する可能性があります。
現在までに、SAP-ASでは7種類のAM菌の培養に成功していますが、これはポットカルチャーで増殖できるAM菌種の数をはるかに下回っています。しかし、SAP-ASの生物的条件と非生物的条件はどちらもポットカルチャーの条件と非常によく似ており、他のAM真菌種がSAP-ASで繁殖できる可能性があります。SAP-ASでの胞子の直接接種は、根の滲出液および/または細菌の存在により、天然土壌の根圏の環境条件に近い環境条件を提供する可能性があります。これは、発芽胞子の接種よりも好ましいはずです。.さらに、AMF内で胞子の発芽を引き起こす条件はまだ十分に理解されていないため、mMS-1栄養溶液で水和したSAPは、他のAM真菌種の胞子の発芽に適応しない可能性があります。mMS-1栄養溶液で水和したSAPでの胞子発芽を試験し、 R. irregularis inoculumのみを使用して接種ステップで生存可能な胞子を特異的に選択しました。
AM共生の進展の接種とモニタリングは、SAP-ASで簡単に行うことができます。改良された2コンパートメントのペトリ皿は、異なるAM真菌種の培養を可能にします。Paré et al.12 は、6つの属と3つの科から7つの異なるAMF種を繁殖させました。2コンパートメントのペトリ皿の改造は、安価な工具で簡単に行うことができます。SAP-ASの調製・保守に必要な材料(バーミキュライト、SAP、パスツールピペットなど)や試薬(mMS-1)のコストや数量が限られているため、最小限のコストで大量のSAP-ASを管理することができます。また、SAP-ASを積み重ねることができるため、ポットカルチャーと比較してAM菌類培養物のフットプリントが大幅に削減されます。たとえば、50 個の SAP-AS (10 個入り 5 スタック) を 1 m の長さのシェルフに収めることができます (補足図 2)。これらの機能により、SAP-ASは、高校の実験コースや大学の学部レベルでAM共生を教えることに適したシンプルで安価な技術となっています。コロニーを形成したSAPの粒は、新しいSAP-ASまたはポットカルチャーの接種に使用できます。
ペトリ皿の底の後ろにカバースリップの存在は、超ラジカル真菌構造の高解像度の写真とビデオを可能にします。細胞質の流れは、自然条件に非常に近い生活条件下で簡単に研究できます。これは、菌糸体に関連するAM菌類の機能(栄養素、水輸送、土壌構造など)の研究や、菌糸の形態形成の研究にとって非常に重要です。
AMFは、植物の根と根圏内での生物学的サイクルを完了します。土壌微生物の研究は、土壌環境を観察することの固有の困難さのために複雑です。SAP-ASの主な目的は、AM菌の増殖のために根圏にできるだけ近い環境を再現し、AM菌の発達を詳細に観察する能力を維持することです。これは非滅菌状態を意味するため、腐生性微生物の増殖を避けるために、利用可能な炭素の量を制限する必要があります。根圏におけるAM菌の行動に関する知識はまだ非常に限られており、SAP-ASは、エクストララディカル環境で採餌する能力、胞子産生、および根の定着に関して、種間の詳細な比較を行う可能性を提供します。これは、バクテリア、線虫、原生生物、根真菌病原体などの他の土壌種との相互作用を追加することでさらに複雑になる可能性があり、SAP-ASのおかげで土壌微生物叢の相互作用に関する知識を向上させることができます。

アーバスキュラー菌根(AM)菌類(Glomeromycotina)は、気管植物による陸生土壌の植民地化に重要な役割を果たした可能性のある古代の植物の根共生生物(~500 Ma 1,2)です。AM菌類と気管植物との間のこの長い共進化は、アーバスキュラー菌根を王国間共生の傑作として位置付けています。AM菌糸は、菌根ネットワーク4を介して新しい宿主に栄養素が持ち越されるなど、宿主が土壌栄養素3を探す能力を大幅に向上させます。菌糸ネットワークは土壌構造を改善し、グロマリンの生産は土壌侵食を減らすことができます5。大気中の炭素の一部が菌類の根の共生生物に移動すると、土壌の炭素隔離が増加します6。全体として、AM菌類は非生物的ストレスと生物的ストレスの両方に対する植物の回復力を向上させるため、農業生態学でかなりの注目を集めています7。実際、AM菌類に優しい農業管理慣行は、作物生産のための化学物質投入物の使用を減らし、土壌有機炭素含有量を改善する可能性を秘めており、これは農家が持続可能な農業慣行への移行と気候変動との闘いに関する国内および国際的なコミットメントを遵守するために管理慣行に統合する必要がある重要な目標です。
しかし、AM菌類は土壌微視的な菌類であり、生物栄養や根圏の分布が偏っているため、その研究は困難です。土壌は、その不透明性、ニッチの巨大な多様性、およびあらゆる規模での多栄養相互作用のために、研究が最も難しいビオトープの1つです。したがって、AM菌の単離、増殖、および特性評価は困難です。20世紀 半ばまでは、胞子果皮を形成するAM菌種のみが特徴づけられていた8。しかし、AM真菌種の大部分は、直径が~20μmから~500μmの範囲の非胞子結実胞子を生成します。土壌湿式ふるい分け技術9 の記載は、これらのAM真菌種を記述する道を開き、それ以来、種の説明の割合が増加しています。それにもかかわらず、AM菌類はDikaryaと比較して小さな種のグループを表しています。
トラップ培養、すなわち、ターフェイスやバーミキュライトなどのオートクレーブ材料と宿主(ネギ、オオバコ)の滅菌種子で満たされたポットのAM真菌胞子を含む胞子または環境土壌サンプルの接種は、制御された条件下でAM菌を増殖させる10番目の方法です。ただし、接種の成功は、染色後に根の断片にアーバスキュールが存在するかどうかを調べるか、サブサンプルまたはポット全体を湿式ふるい分けして胞子を分離することによってのみ評価できます。通常、ポットカルチャーの分析前に少なくとも6〜12週間はシステムを乱さないことをお勧めします。この培養技術は、最も知られているAM真菌種の繁殖に適していますが、真菌共生生物の生観察は不可能であり、特に単一の胞子培養を試みる場合、接種の成功は不確実です。
それどころか、AM菌類の in vitro 増殖は、培地11の透明性のおかげで生きたまま監視することができるが、この培養技術では、無菌環境で機能するためには、形質転換された根の利用可能性と培地中の炭素の存在が必要である。胞子は滅菌する必要があり、従属栄養宿主との関連とともに、既知のAM真菌種のほとんどがこの技術を使用してうまく増殖しません。
したがって、現在の技術を使用したAM菌の増殖は、ほとんどの研究室で確立され、広く使用されていますが、AM菌の研究にはいくつかの制限があります。Paré et al. (2022)12 は、透明な高吸水性ポリマー (SAP) を植物全体と組み合わせて使用し、AM 菌を増殖させる in vivo 技術を開発しました。SAPベースの独立栄養システム(SAP-AS)として設計されたこの技術は、シンプルで安価で、ポットカルチャー(独立栄養宿主との関連、非滅菌条件)と in vitro カルチャー(透明培地、共生発達のライブモニタリング)の利点を兼ね備えています。ここでは、単一胞子接種による培養のセットアップ方法と、SAP-ASを使用してエクストララジカル菌糸体の高倍率観察を行う方法を説明するプロトコルを紹介します。具体的には、2コンパートメントのペトリ皿の改造方法、養液の調製方法、高吸水性樹脂(SAP)の調製方法、苗木の調製方法、SAP-ASの組み立て方法と単一胞子の接種方法、胞子の発芽前処理、共生の進行のライブモニタリングの方法などについて述べています。

<table><tbody><tr><td>100 x 15 mm スタッカブル バイプレート</td><td>Kord Valmark</td><td>1204U09</td><td>https://www.thomassci.com/Laboratory-Supplies/Petri-Dishes/_/100-x-15-mm-Stackable-Bi-Plate</td></tr><tr><td>12 ウェルプレート&nbsp;</td><td>Greiner Bio-one</td><td>665180</td><td>https://shop.gbo.com/en/row/products/bioscience/cell-culture-products/cellstar-cell-culture-multiwell-plates/665180.html</td></tr><tr><td>18 mm 丸型ガラス カバースリップ</td><td>フィッシャー サイエンティフィック</td><td>12-545-100</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-cover-glasses-circles-11/12545100#?keyword=12-545-100</td></tr><tr><td>20 mL シリンジ PP/PE 針なし</td><td>ミリポア シグマ</td><td>Z683620-100EA</td><td>https://www.sigmaaldrich.com/CA/en/product/aldrich/z683620?utm_source=google&utm_medium= cpc&utm_campaign=20674735406 &utm_content=157607444391&gc lid=Cj0KCQiA5rGuBhCnARIsAN11 vgQOT_WPRg9WFyBEyoO4b0x1 -F7Tks4houU7VTRS5EiYM9l0F-B oL7saAmFoEALw_wcB</td></tr><tr><td>鍼&nbsp;</td><td>リエール</td><td>A143-LP1-3075</td><td>https://www.lierre.ca/products/lierre-plus-acupuncture-needles-100pcs?gad _source=1&gclid=Cj0KCQiA5rGuBh CnARIsAN11vgTwupmw51UTdR k9cKr4ewi12W3dyVikenzH3sjdUB4 g41G-_KnvppoaAkbTEALw_wcB& utm_campaign=PMax-needles&utm_content=shopify_CA_ 5213169090694_35001500991622 &utm_medium=cpc&utm_source= google&variant=35001500991622</td></tr><tr><td>あぶらとり紙</td><td>FLINN&nbsp;</td><td>FB0678</td><td>https://www.flinnsci.ca/blotting-paper-12-x-19-pkg.-of-10/fb0678/</td></tr> <tr><td>商業用または科学用ブレンダーまたはキッチンハンドブレンダー</td>キッチン<td>エイド</td><td>KHBV53DG</td><td>https://www.kitchenaid.ca/en_ca/countertop-appliances/hand-blenders/hand-blender-products/p.variable-speed-corded-hand-blender.khbv53dg.html&nbsp;</td></tr><tr><td>ドレメル199カービングビットド</td><td>レメル</td><td>2615000199</td><td>https://www.dremel.com/ca/en/p/199-2615000199</td></tr><tr><td>ドライSAP中粒度測定1&ndash;2 mm</td><td>HORTA-SORB MD</td><td></td> 00810085242789 <td>https://www.horticulturalalliance.com/product/horta-sorb-md-granule/</td></tr> <tr><td>ナイフハンドルを解剖するためのフェザーステンレス鋼ブレード&nbsp;</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>08-916-5B</td><td>https://www.fishersci.ca/shop/products/graham-field-stainless-steel-blades-dissecting-knife-handles-8/089165b</td></tr><tr><td>ガラスパスツールピペット230ミリメートル</td><td>キンブル</td><td>RK-25554-14</td><td>https://www.coleparmer.ca/i/dwk-life-sciences-kimble-disposable-pasteur-pipettes-plugged-end-borosilicate-glass-230-mm-1000-cs/2555414</td></tr><tr><td>インク</td><td>シェー</td><td>ファー94321</td><td>https://www.amazon.com/Sheaffer-Skrip-Bottled-Black-94231/dp/B002IKKKUU</td></tr><tr><td>融解ガイド: 修正塗料スクレーパー、2-in</td><td>Mastercraft</td><td>#049-7335-8</td><td>https://www.canadiantire.ca/en/pdp/mastercraft-carbon-steel-flexible-spackling-putty-knife-wall-paint-scraper-2-in-0497335p.0497335.html?loc=plp</td></tr><tr><td>顕微鏡ガラススライド</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>12-552-5</td><td></td></tr><tr><td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-frosted-microscope-slides-4/125525 Nitex ナイロンメッシュフィルタースクリーン&nbsp;</td><td>ダイナミックアクアサプライ株式会社</td><td>NTX30-108</td><td>https://dynamicaquasupply.com/products/nitex-screen?_pos=1&_sid=ffc105328&_ss=r&amp; variant=6945749106731</td></tr><tr><td>ペーパークリップ</td><td>マカヌ</td><td>&lrm;クリップ-BK-41mm-24</td><td>https://www.amazon.ca/classeur-standard-grandes-trombones-excellentes</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Avantor/vwr</td><td>470201-930</td><td>https://www.avantorsciences.com/ca/en/product/8882964/parafilm</td></tr><tr><td>Plantago lanceolata seeds</td><td>ecoumene</td><td>NA</td><td></td></tr> <tr><td>https://www.ecoumene.com/produit/semences/herbacees/plantain-lanceole-bio/ ポリビニルアルコール-乳酸-グリセロール (PVLG).</td><td>NA</td><td>NA</td><td>https://invam.ku.edu/recipes</td></tr><tr><td>細先端のパイログラフィーキット</td><td>ウォールナット中空</td><td>483103</td><td>https://www.walnuthollow.com/collections/creative-wood-burning/products/walnut-hollow-creative-versa-tool</td></tr><tr><td>シリコンシーラント</td><td>Aqueon</td><td>100165003</td><td>https://www.aqueon.com/products/aquariums/silicone-sealant</td></tr><tr><td>Surgeonメスハンドル</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>22-079657</td><td>https://www.fishersci.ca/shop/products/surgical-design-scalpel-handles-blades/22079657#?keyword=scalpel</td></tr><tr><td>2 速回転工具キット</td><td>ドレメル</td><td>200-1/21</td><td>https://www.dremel.com/ca/en/p/200-1-21-f0130200ah</td></tr><tr><td>バーミキュライト</td><td>PRO-MIX</td><td>4981110</td><td>https://www.canadiantire.ca/fr/pdp/vermiculite-pro-mix-9-l-0597936p.0597936.html</td></tr><tr><td>X1000 丸型カバースリップ径 30 mm#1 (0.13&ndash;0.16 mm)</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック・サイエンティ</td>フィ<td>ック・インフィニティ12164692</td><td>https://www.fishersci.fi/shop/products/x1000-cover-slip-diam-30-mm-n-1-1/12164692</td></tr></tbody></table>

高吸水性ポリマー系独立栄養系におけるアーバスキュラー菌根培養物の接種と観察

Inoculating and Observing Arbuscular Mycorrhizal Cultures on Superabsorbent Polymer-Based Autotrophic Systems

アーバスキュラー菌根(AM)菌類は、植物の根との恒久的な関連と根圏での繁殖のために、操作や観察が困難です。通常、AM菌は、独立栄養宿主を用いたポット培養においてin vivo 条件下で培養するか、またはペトリ皿内のRi Transfer-DNA形質転換根(従属栄養宿主)を用いた in vitro 条件下で培養します。さらに、ポットカルチャーでのAM菌の培養は、不透明で非滅菌の環境で行われます。対照的に、 in vitro 培養では、無菌で透明な環境でAM菌を増殖させます。最近、高吸水性ポリマーベースの独立栄養システム(SAP-AS)が開発され、それぞれの制限(不透明度と従属栄養ホスト、無菌性)を回避しながら、両方の方法の利点を組み合わせることが示されています。ここでは、SAP-ASでのAM菌の簡単な調製、単一胞子接種、および観察のための詳細なプロトコルを紹介します。ペトリ皿を改造することで、現在の in vivo および in vitro 技術では困難または不可能であった高解像度の写真およびビデオ観察が生きた標本で可能になりました。

SAP-ASは、AM菌を培養し、イントララジカルおよびエクストララジカル真菌構造の発達を観察するためのシンプルで安価な技術です。ここでは、ユーザーが SAP-AS を設定するのに役立つ詳細なプロトコルを提供し、SAP-AS の元の説明と比較して 2 つの変更を導入しました。
まず、Nitexメンブレンに沿ったルートコンパートメントにSAPが存在すると、単一の胞子によるシステムの接種が容易になります(図1)。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66848/66484fig01.jpg"> 図1:SAP-ASの単一胞子接種 (A) Rhizophagus irregularis の単一胞子の接種 (B) Funneliformis mosseaeの単一胞子の接種。白い矢印は接種ポイントを示しています。スケールバー:500μmこの <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66848/66484fig01large.jpg" target="_blank">図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
胞子を沈着させることができるいくつかの根を持つ領域を特定するのは簡単です。胞子の正確な位置は、ペトリ皿の蓋の表面に印を付けて、根の発芽とコロニー形成について定期的にチェックできます。SAPの水和粒子の存在は、胞子の発芽を助長する湿った環境を提供します。Nitex膜の隣の根に接種することで、エクストララジカル菌糸体との共生が急速に進行し、菌糸コンパートメントにすばやくアクセスして栄養素を採取することができます(図2)。また、接種点に置いた単一の胞子が発芽するかどうかを観察する能力により、失敗した培養物を特定して除去し、それらを交換することもできます。
次に、ペトリ皿の底部にあるカバースリップにより、AMと真菌の共生(図2B、C)、特にラジカル菌糸体内の細胞質の流れ(図2D)の高解像度ライブイメージングが可能になります。
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66848/66484fig02.jpg"> 図2:SAP-AS接種 (A) SAP-ASにRhizophagus irregularis (DAOM 197198)の胞子を1つ接種した。宿主植物は オオバコランセオラータです。(B)実体顕微鏡下の菌糸コンパートメントのカバーガラスを通して観察された胞子のクラスター。スケールバー:500μm.(C)カバーガラスを通して観察した胞子クラスターの高解像度写真、10倍の倍率で光学顕微鏡で観察。スケールバー:100μm(D)100倍の倍率で光学顕微鏡の下でカバーガラスを通して観察された菌糸の高解像度写真。スケールバー:10μmこの <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66848/66484fig02large.jpg" target="_blank">図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
ユーザーは、mMS-1栄養溶液で水和したSAP上でAM真菌胞子の発芽を試みることで、SAP-ASが生存可能な胞子のみで接種されることを保証できます(図3)。しかし、これは R. irregularisの市販の胞子でのみ試験されており、mMS-1栄養溶液で水和したSAPでの胞子発芽の成功は、他のAM真菌種によって大きく異なる可能性があります。
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66848/66484fig03.jpg"> 図3:12ウェルプレートにおける R. irregularis 胞子の発芽。 スケールバー:500μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66848/66484fig03large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
最後に、SAP-ASはAMFを増殖させるための in vivoの非滅菌技術であるため、ペトリ皿をベンチで操作して開き、コロニー形成された根、遊離胞子、またはコロニー形成されたSAPの粒子をサンプリングできます(図4)。イントララジカルおよびエクストララジカル真菌構造は、鉢または根器官培養で増殖するAMFと同様の方法で染色できます(図4C)。
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66848/66484fig04.jpg"> 図4:SAP-ASから抽出されたエクストララジカルおよびイントララジカルAM真菌構造 (A) R. irregularis の遊離胞子がルートコンパートメントで観察されました。スケールバー:200μm.(B) R.irregularis の胞子はSAPで染色されています。スケールバー:500μm.(C)根内菌糸とアーバスキュールを示す染色された根の断片。スケールバー:50 μm、100 μmこの <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66848/66484fig04large.jpg" target="_blank">図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
補足図1:AM真菌胞子を操作するために利用可能なさまざまなツールの厚さの比較。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66848/Supplementary%20Figure%201.zip" target="_blank">このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。</a>
補足図2:スタックされたSAP-AS。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66848/Supplementary%20Figure%202.zip" target="_blank">このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。</a>

ここでは、高吸水性ポリマーベースの独立栄養系でアーバスキュラー菌根菌を接種および観察するためのシンプルで安価な技術について説明します。

Arbuscular mycorrhizal (AM) fungi are difficult to manipulate and observe due to their permanent association with plant roots and propagation in the ...

inoculating-observing-arbuscular-mycorrhizal-cultures-on

Research

JoVE Journal

Environment

環境

このビデオでは、好気性菌によるリグノセルロース植物組織の劣化を研究するために制御された環境のアプローチを示しています。栄養源と水分を制御する能力は、寒天ブロックの小宇宙の主な利点ですが、アプローチは、しばしば混合成功をもたらします。我々は、再現性、低ばらつきの結果を得るために重要な落とし穴に対処する。...

好気性菌による制御植物組織の分解のための寒天ブロックの小宇宙

出典: Nathoo、N.、 et al.植物/微生物の分子相互作用とシグナル伝達の同時かつ体系的な解析のための水耕共栽培システム J. Vis. 経験。 (2017)。このビデオは、無菌条件下での植物と細菌の相互作用を研究するための水耕栽培共栽培システムを示しています。植物の苗木は、...

植物宿主と相互作用する細菌の分子応答を研究するための共培養システム

バークホルデリアsartisoli RP037-MCHEと全細胞バイオレポーターアッセイは、水飽和モデル系内の空気で満たされた細孔を橋渡し菌糸体により能動輸送後の細菌による分解に利用可能な有機汚染物質（ すなわち、フルオレン）の画分を検出するために開発されました。...

水不飽和システムにおける有機汚染物質の輸送および生物学的利用能を評価するために、全細胞バイオレポーターアプローチ

記載された水耕共培養システムは、金属メッシュスクリーンを有する完全な植物を支持し、それらを細菌と共培養する。植物組織、細菌、および分泌された分子は、下流の分析のために別々に採取することができ、同時に植物宿主および相互作用する微生物または微生物の両方の分子応答を調べることができる。...

植物/微生物の分子相互作用およびシグナル伝達の同時および系統的分析のための水耕栽培共生システム

可能性のコミュニティ内でのほとんどの植物は、アーバスキュラー菌根菌 (AM)...

回転コアを使用して一般的な菌根菌ネットワークを介した植物相互作用の研究

ここでは、種の存在を定量化し、植物の根の初期植民地化時および異なる成長環境への移動後の細菌の空間分布を可視化するための水耕植物成長アッセイについて説明する。...

浮遊水耕システムにおけるアラビドプシス・タリアナ根の細菌の植民地化と維持のモニタリング

このプロトコルは、植物の根に土壌媒介微生物を接種するための戦略の詳細な要約を提示する。真菌 Verticillium longisporum および Verticillium...

植物の根に土壌媒介微生物を感染させる接種戦略

ここでのプロトコルでは、アーバスキュラー菌根のコロニー形成パターンの評価方法と、 Zea mays と Festuca...

フェストゥカルブラとゼアメイズの根におけるコロニー形成パターンと真菌戦略を探索するためのツールとしての菌根マップ

この記事では、イネのAM増強塩ストレス耐性を調査するために、アーバスキュラー菌根(AM)真菌接種物を生成するためのプロトコルについて説明します。...

アーバスキュラー菌根(AM)真菌接種物の作製と生理食塩水条件下でのイネとAM共生の表現型評価

師部ふるい要素に電気信号を取得し、測定するための電気浸透グラフ（EPG）の新しいアプリケーション

学ぶアーバスキュラー菌根菌の接種と観察法。高吸水性ポリマー系独立栄養系を用いて、Plantago lanceolataの根に菌根菌を接種し、リアルタイムでモニタリングします。従来法の限界を克服し、菌根菌と植物の相互作用を効率的に研究できます。

高吸水性ポリマー系独立栄養系におけるアーバスキュラー菌根培養物の接種と観察

さらに動画を探す