人間の手に対するCulex tarsalis蚊の調査および摂取行動の研究のためのAC-DC電気浸透学

私たちのグループは、多くの病原体がベクターの行動を操作して感染を促進するため、アルボウイルスやその他の要因が血液供給中に発生するプローブおよび摂取行動にどのように影響するかを研究するためにEPGを使用しています。基本的には、蚊に刺されたときに何が起こるのか、そしてその行動が病原体の伝染や病気の病理にどのように影響するのかを研究しています。歴史的に、EPGは主に植物を摂食する昆虫の研究に使用されていました。

近年の採血節足動物に対するAC-DC EPG手技の開発により、採血中に発生するプローブや摂取行動を侵襲的な手技を必要とせずにこれまでにない詳細に研究することができ、新たな管理戦略の開発が可能になる可能性がある。採血節足動物にEPGを使用する際の最大の課題は、波形を唾液分泌や病原体感染などの生物学的活動と相関させることです。波形の電気的起源と文献に基づく強力な仮説がありますが、それでも経験的な証拠が必要です。

まず、ガラス製の牧草地ピペットの先端を炎に通し、ピペットを少し回転させます。直径を検査し、プロセスを繰り返してピペットを希望のサイズにします。昆虫吸引器を作成するには、改造された牧草地ピペットの大きい方の端を蚊帳で覆い、接合部を電気テープで固定する実験室の吸引器に接続されたシリコンチューブに挿入します。

記録電極には、準備された昆虫の切り株と有線の蚊を保持するための新しいプラスチックラップでフォームブロックを包みます。銅線の上部1センチをかみそりの刃で、すべての面が光沢が出るまでこすります。次に、直径0.025ミリメートルの金線を4〜5センチの長さにカットします。

ワイヤーがへこまないようにテープでマスクされた自動閉鎖鉗子でワイヤーを保持し、銅線のきれいな先端に沿って昆虫の切り株の銅線に金線を3回優しく巻き付けます。解剖プローブを使用して銀の接着剤を塗布し、金線を所定の位置に保持します。緩い端がないことを確認したら、接着剤が乾くまで昆虫の切り株を泡の中に置きます。

次に、昆虫の切り株に取り付けられた金のワイヤーをそっと撫でて長く緩やかな弧を描くように形を整え、ワイヤーの長さを約2.5〜3センチメートルにトリミングします。解剖顕微鏡下で作業し、金線が解剖顕微鏡ステージに触れている間、利き手ではない手で真鍮の釘で昆虫の切株を保持し、利き手を使用して金線の先端を細い先の鉗子でつかみ、細い先の鉗子を使用して金線の先端を接着された領域の近くの昆虫の切株の銅線に交差させます。次に、金のワイヤーが細い先の鉗子の周りに小さな金のループを形成するまで、昆虫の切り株をそっと引っ張ります。

金線を放し、鉗子を慎重に取り外します。利き手ではない手で昆虫の切り株を持ちながら、細かい先の鉗子で金のループをつかみます。ループがワイヤーの首に対して90度の角度で曲がるまで、鉗子をスタブから軽く回転させながら、昆虫のスタブを引っ張ります。

昆虫の切り株をフォームブロックに戻す前に、金色のループが完全に閉じていることを確認してください。まず、昆虫吸引器と蚊の配線用の記録電極を準備します。麻酔をかけた蚊を仰向けにして、腹部を研究者に向けて麻酔パッドに置きます。

実験用テープを貼った後、テープに混ぜたばかりの銀のりを0.5センチメートル滴下します。次に、麻酔をかけた蚊の腹部を吸引器に吸引します。吸引は、腹部を所定の位置に固定し、吸引器を使用して銀の接着剤の上の解剖スコープの下に蚊を保持するのに十分な時間だけ使用します。

ミニューチンピンを銀のりに浸した後、蚊の前庭に薄い層を塗ります。記録電極の先端にある金のループを銀のりにすばやく浸します。蚊の前庭の銀の接着剤のスポットに置き、ループを前後に揺らして、ぴったりと座るようにします。

次に、フォームの昆虫の切り株を、ワイヤーでつながれた蚊が目覚めたときに快適に立つことができる角度で交換します。必要な数の蚊が配線されたら、フォームブロックを収納ボックスに入れて維持します。まず、エレクトロペネトグラフィーまたはEPG実験の日に記録電極を蚊に取り付けます。

ホストが所定の位置になったら、ヘッドを回します amplifier横に。有線の蚊を取り除いた後、昆虫の切り株の真ちゅうピンをヘッドのポートに挿入します amplifier。ハードウェア管理ソフトウェアを使用して録音を開始します。

ヘッドを配置します amplifier蚊が快適に立ってプローブできるように、手の上に。ヘッドのスイッチを入れます amp接地状態でオンにします。必要に応じてホストの手の位置を調整して、プローブの成功を支援します。

ハードウェア管理ソフトウェアを使用して、ホストの応答、蚊の行動、ゲインの変化、および記録中のその他の関連イベントに関するタイムスタンプ付きの観察を行います。ハードウェア管理ソフトウェアを使用して、画面上の信号の位置とソフトウェアゲインを調整し、両方の信号をはっきりと見えるようにします。ハードウェアゲインを調整するには、チャンネル1の範囲と乗算器スイッチを反転します。

その調整が十分でない場合は、チャネル1のゲインダイヤルを右または左に回してゲインをそれぞれ上げたり下げたりして、ピークアウトや不明瞭なピークを回避します。オフセットを調整するには、コントロールボックスのチャンネル1オフセットスイッチをネガに切り替えます。次に、コンピューター画面上でプリ信号とポスト信号のピークが同じ方向に発生するまで、チャネルを1オフセットダイヤル回します。

蚊がプローブの途中にある場合は、プローブが終了するのを待ちます。10分以内にプローブしない場合は、ヘッドアンプのスイッチを切ります。ホストに慎重に手を離してもらい、付属の昆虫の切り株で蚊を取り除きます。

最後に、収納ボックスの蚊を交換します。人間の手を食べるCulex tarsalis蚊のAC-DC EPG記録は、科、タイプ、およびサブタイプへの分類に適した解釈可能な波形を生成しました。