2024年7月19日
私たちは、磁気ビーズベースのT細胞濃縮およびペプチド:主要組織適合遺伝子複合体(MHC)四量体を通じて、マウス肺の希少抗原特異的T細胞集団を単離および同定するための詳細なプロトコールを提供します。
私たちの研究室では、耐性と免疫のさまざまな状況でのCD4 T細胞の発生を研究しています。私たちのプロジェクト全体では、抗原への曝露が、それ自体に対する耐性や病原体に対する免疫を高めることができる免疫記憶を確立するT細胞の表現型サブセットの発達をどのように促進するかに主に関心を持っています。最近では、肺組織に存在する制御性T細胞およびメモリーT細胞サブセットの開発に着目しています。
これらの組織常在T細胞は、組織損傷時の自己抗原に対する耐性の強化や、再感染時の病原体に対する炎症反応の促進に重要な役割を果たします。私たちの研究室は、抗原特異的T細胞の直接研究を専門としていますが、カスタムペプチドMHCテトラマー試薬です。これにより、TCRトランスジェニックモデルや実験アーティファクトを引き起こすことが知られている他の実験的操作を使用せずに、これらのT細胞を研究することができます。
抗原特異的T細胞は四量体で容易に同定できますが、これらのT細胞は、特にナイーブ状態や記憶状態にあるときに、非常に低い頻度で存在することがよくあります。また、これらのT細胞を、免疫応答後にしばしば存在する非リンパ組織から単離することも困難です。マウスの肺からT細胞を単離するための確立されたプロトコルがいくつかありますが、ここで紹介するプロトコルは、その後のテトラマー染色による低頻度抗原特異的T細胞の検出に最適化されています。
このプロトコルには、ライブラリリソースにより適切に対応するために、組織関連のための2つのオプションも含まれています。私たちのプロトコルは、研究者が肺組織の抗原特異的T細胞に四量体の使用を拡大するのに役立ちます。これにより、この分野で大きな関心が寄せられているトピックである組織常在型メモリーT細胞の発生と機能に関するより強力なin vivo研究が可能になるでしょう。
本研究では、マウス肺における希少な抗原特異的T細胞集団を単離および同定するための詳細なプロトコルを提示します。この手法では、磁気ビーズを用いたT細胞濃縮と、ペプチド:主要組織適合性複合体(MHC)テトラマーを用いて、このプロセスを効率化します。
非リンパ組織における希少な抗原特異的T細胞の直接的な同定は、免疫学主導の創薬およびトランスレーショナルリサーチにおける重大なボトルネックを解消します。磁気濃縮を伴うペプチド:MHCテトラマーの使用により、組織resident T細胞サブセットの高信頼な検出と特性評価が可能となり、初期の探索および前臨床段階における予測的な免疫プロファイリングとメカニズム的なリスク低減がサポートされます。この機能は、組織特異的な免疫応答を標的とする免疫調節療法のポートフォリオにおける意思決定を強化します。
本手法は、組織内における抗原特異的T細胞の高感度検出を可能にすることで、発見から前臨床に至るコンティニュアムへと統合され、メカニズム研究とトランスレーショナルな免疫プロファイリングの両方を支援します。