Cumulus-Oocyte Complexesの即時部分的除去:体外受精の迅速観察のための洗練されたアプローチ

私たちの研究は、卵丘卵子の即時部分的な除去が圧迫し、受精を促進するかどうかを評価することにより、体外受精の結果を改善することに焦点を当てています。観察効率は、受精レースと胚の品質に影響を与え、実験室の手順を最適化します。私たちは、より良い臨床結果を得るためにIVF技術を洗練することを目指しています。

卵丘の内側部分切除では、卵子が著しく圧迫され、体外受精の受精観察の効率が向上することを立証しました。これにより、受精イベントの評価のタイミングが改善され、胚の質と体外受精の結果が最適化される可能性があります。私たちのプロトコルは、ハンドインタイムを減らし、環境への曝露を最小限に抑え、胚の品質を向上させる可能性を秘めているため、体外受精の効率を向上させます。

従来の技術と比較して、合理化された効果的なアプローチを提供します。まず、卵子ピックアップ皿を摂氏37度のインキュベーターに一晩置きます。12ミリリットルの卵胞操作培地を14ミリリットルの丸底試験管に37°Cで一晩インキュベートします。

次に、卵子を回収する30分前に、チューブを予熱した試験管ラックに移します。次に、14ミリリットルの丸底試験管に9ミリリットルの卵胞操作培地を加え、摂氏37度で一晩インキュベートします。卵子回収の日に、培地4.5ミリリットルを、100%パラフィン油2ミリリットルで覆われたインキュベート済みの卵子ピックアップ皿に移します。

次に、卵子ピックアップ皿に4.5ミリリットルの受精培地を加え、摂氏37度で一晩インキュベートします。その後、100%パラフィンオイルで覆われた6cmの皿に1ミリリットルの施肥培地を追加します。ガラスパスツールピペットの先端を鈍くして丸めるには、アルコールランプで約5秒間燃焼させます。

パスツールピペットの先端に吸引ヘッドを取り付けて、傷がつかないように皿の底に触れるようにします。ピペットを過ぎて10センチの皿でグラスをすすぎ、卵胞操作用メディウムを使用します。簡単に言えば、17ゲージの針を使用して、経膣超音波ガイド下で卵子を回収します。

14ミリリットルの丸底試験管に集めた卵胞液を10センチメートルの皿に注ぎます。皿を恒温プラットフォームに置きます。OCCCを実体顕微鏡で観察し、卵子の存在を確認し、成熟度を評価します。

OCCCに卵子が存在するかどうかを確認し、卵子の成熟度を事前に評価します。丸い炎で磨かれたパスツールピペットを備えたシリコン吸引ピペットを事前に準備します。OCCCを吸引しながら、左薬指で培養皿を9〜10:00の位置で優しく持ち上げ、左に約15度傾けます。

11:00のディッシュの位置で吸引したOCCCを吐き出しながら、右横にゆるやかに細長く伸ばします。次に、拡大したOCCCの周りの顆粒膜細胞のサイズを観察します。次に、パスツールピペットを使用して、細長いOCCCの適切な位置ですばやく下向きにカットして、余分な顆粒化細胞を優しく除去します。

カットしたOCCCを、OCCCフラッシング液が入ったコレクションディッシュに移します。残りの卵胞液を滅菌サンプル容器に注ぎます。まず、採取した精液サンプルの精子濃度、運動性、形態を光学顕微鏡で評価します。

次に、精子ペレットを新しい遠心分離管に移し、受精培地で2回洗浄します。必要になるまで、6%二酸化炭素と摂氏37度でそれらをインキュベートします。余分な肉芽細胞を取り除いた後、OCCCを6〜8個、受精皿に1ミリリットルの受精培地を加えます。

受精皿での回収後約2〜3時間後に、モーダル精子を含むOCCCを単一の液滴で授精します。短期間の受精の場合は、OCCCを精子と4〜6時間共インキュベートします。インキュベーション後、卵子を囲む卵丘細胞を機械的に除去します。

卵子よりわずかに小さい内径のピペットを使用して卵子を吸引し、細胞が完全に除去されるようにします。受精を確認するには、2つの極体の存在を観察します。第二の極性体を示す卵母細胞は、受精していると考えられています。

定期的な受精の場合は、受精評価のために18〜20時間の共インキュベーション後にピペットを使用して卵丘細胞を取り出します。受精した卵子を、卵子回収後3〜5日間培養します。授精後20時間で受精を評価して、前核の数を決定します。

続いて、各接合子を培地液滴中で個別に培養し、受精後の胚を切断培地に移します。3日目の胚を胚盤細胞培地に移し、5日目に評価します。連続データを平均と標準偏差としてレポートし、順序データを比率として表します。

短期授精を受けた患者47人のうち、患者の年齢と回収された卵子の数に有意差は認められなかった。OCC群の部分的切除の平均処置時間は、切断率、最適胚率、および最適胚盤細胞率に有意差が認められなかったにもかかわらず、対照群と比較して有意に短かった。従来の体外受精を受けている患者では、患者の年齢と2つのグループ間で回収された卵子の数に類似性が認められました。

OCCC群の部分的な除去では、平均運転時間がわずかに短いことが認められましたが、統計的に有意な差は見られませんでした。前のグループと同様に、卵割率、最適胚率、および最適胚盤細胞率に有意な不一致は確認されませんでした。