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腸内スイスロールおよびパラフィン包埋組織の免疫蛍光染色に最適化されたプロトコール
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JoVE Journal Biology
Optimized Protocol for Intestinal Swiss Rolls and Immunofluorescent Staining of Paraffin Embedded Tissue

腸内スイスロールおよびパラフィン包埋組織の免疫蛍光染色に最適化されたプロトコール

Full Text
7,051 Views
08:25 min
July 19, 2024

DOI: 10.3791/66977-v

Sarah A. Dooley*1, Rachel Stubler*1, Rachel M. Edens1, Piper R. McKee1, Jordan N. Rucker1, Amy Engevik1

1Department of Regenerative Medicine and Cell Biology,Medical University of South Carolina

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This research investigates the gastrointestinal tract's functions and the impact of pathological conditions on intestinal epithelial cells. The study emphasizes the significance of tissue fixation and immunofluorescent staining for accurate results in cellular analysis.

Key Study Components

Research Area

  • Gastrointestinal physiology
  • Pathological responses in intestinal cells
  • Immunohistochemistry techniques

Background

  • The intestine plays a crucial role in digestion and nutrient absorption.
  • Different regions of the intestine have specialized functions and structures.
  • Proper tissue preservation and processing are essential for robust immunostaining.

Methods Used

  • Swiss roll technique for tissue fixation and processing
  • Mouse model
  • Immunofluorescent staining methods

Main Results

  • Detailed visualization of all regions of the mouse intestine is achievable in a single paraffin block.
  • The method facilitates consistent and reproducible results across diverse antibodies.
  • Improved understanding of intestinal cell type roles in homeostasis and inflammation.

Conclusions

  • The protocol provides an effective approach to study various questions in intestinal biology.
  • Enhances methodologies for future research in cellular response to environmental changes.

Frequently Asked Questions

What is the Swiss roll technique?
The Swiss roll technique is a method for tissue fixation and processing, enabling the preservation and orientation of various intestinal regions in a single block.
Why is antibody specificity important?
Antibody specificity is crucial for accurate labeling of distinct cellular structures during immunostaining, ensuring reliable detection of target proteins.
How does this protocol save resources?
Using the Swiss roll technique allows for the visualization of multiple intestinal regions within one paraffin block, reducing the need for additional embedding materials and reagents.
What types of conditions are studied with this method?
The method is applicable for investigating responses to infection, inflammation, obesity, and genetic mutations in intestinal cells.
Can this technique be used for other tissues?
While the protocol is designed for intestinal tissues, the principles may be adapted for use with other organ systems, subject to validation.
What are the key phases of the protocol?
Key phases include tissue removal, fixation, rolling, embedding, and immunostaining, providing a comprehensive approach to tissue processing.
How does tissue processing affect immunostaining?
Proper tissue processing and preservation are essential for high-quality immunofluorescent staining, directly influencing the clarity and reliability of results.

腸は消化と吸収に不可欠です。各領域(十二指腸、空腸、回腸、結腸)は、独自の細胞構造により、異なる機能を果たします。腸の生理学を研究するには、綿密な組織分析が必要です。このプロトコールでは、スイスロール法を用いた組織の固定と処理の概要を説明し、適切な組織の保存と配向を通じて正確な免疫染色を保証します。

私たちの研究は、消化管がどのように機能するか、そしてこれらの機能がさまざまな病理学的状態によってどのように影響を受けるかを理解することに焦点を当てています。私たちは、感染や炎症、肥満、遺伝子変異などのさまざまな状態に対するさまざまな腸上皮細胞の応答を学ぶことに興味を持っています。抗体特異性の重要性はますます明らかになっています。

しかし、組織固定、保存、標準化された染色方法の影響は、この分野では過小評価されています。一貫性のある堅牢な免疫蛍光染色は、データ収集の初期ステップで行われる組織の保存、処理、および配向の品質に大きく依存します。このプロトコルは、腸の細胞生物学および生理学に関するさまざまな問題を調査するためのシンプルで効果的な方法を提供します。

私たちの研究室では現在、これらのプロトコルを使用して、ホメオスタシスの維持と炎症の制限におけるさまざまな腸細胞タイプの役割についての理解を深めています。このプロトコルにより、マウス腸のすべての領域を1つのパラフィン包埋ブロックで詳細に可視化できます。これにより、パラフィン、パラフィン包埋サービス、切片化に必要な時間、試薬の費用を節約できます。

また、多様な抗体を用いて高い再現性を発揮します。

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