Name: 雌豚の開腹術による胚移植手術 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-18T13:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 41 s
Description: 学ぶ雌豚の開腹術による胚移植手術の詳細なプロトコル。遺伝子改変ブタの生産に不可欠なこの方法は、術前・術後の管理と安全な胚着床技術を含み、研究者に信頼性の高い手術ガイダンスを提供する。

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<meta charset="utf8"></head><body>クローンブタにおける卵管胚移植の最適化

<ol><li>Lunney, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Importance+of+the+pig+as+a+human+biomedical+model%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Importance of the pig as a human biomedical model.</a> Sci Transl Med. 13 (621), 5758(2021).</li>
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<li>Cadwallader, J. A., Alley, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malignant+hyperthermia+in+a+crossbred+landrace-large+white+pig%5BTitle%5D)+AND+%22N+Z+Vet+J%22%5BJournal%5D)">Malignant hyperthermia in a crossbred landrace-large white pig.</a> N Z Vet J. 23 (9), 207-211 (1975).</li>
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<li>Shi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+embryo+handling+and+transfer+method+on+pig+cloning+efficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Anim+Reprod+Sci%22%5BJournal%5D)">Influence of embryo handling and transfer method on pig cloning efficiency.</a> Anim Reprod Sci. 154, 121-127 (2015).</li>
<li>Castagna, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+cysts+and+their+consequences+on+the+reproductive+performance+of+swine+herds%5BTitle%5D)+AND+%22Anim+Reprod+Sci%22%5BJournal%5D)">Ovarian cysts and their consequences on the reproductive performance of swine herds.</a> Anim Reprod Sci. 81 (1-2), 115-123 (2004).</li>
<li>Knox, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+influencing+follicle+development+in+gilts+and+sows+and+management+strategies+used+to+regulate+growth+for+control+of+estrus+and+ovulation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Factors influencing follicle development in gilts and sows and management strategies used to regulate growth for control of estrus and ovulation.</a> J Anim Sci. 97 (4), 1433-1445 (2019).</li>
<li>Galvin, J. M., Killian, D. B., Stewart, A. N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+procedure+for+successful+nonsurgical+embryo+transfer+in+swine%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">A procedure for successful nonsurgical embryo transfer in swine.</a> Theriogenology. 41 (6), 1279-1289 (1994).</li>
<li>Lins, R. D. A. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+cyanoacrylate+in+the+coaptation+of+edges+of+surgical+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22An+Bras+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Use of cyanoacrylate in the coaptation of edges of surgical wounds.</a> An Bras Dermatol. 87 (6), 871-876 (2012).</li>
<li>Horvath-Pereira, B. deO., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Case+report%3A+An+innovative+non-invasive+technique+to+manage+shell+injuries+in+C.+carbonarius%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Vet+Sci%22%5BJournal%5D)">Case report: An innovative non-invasive technique to manage shell injuries in C. carbonarius.</a> Front Vet Sci. 9, 930419(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.25mL ストロー</td><td>ジェネリック</td><td>-</td><td>サージカル材料</td></tr><tr><td>1mLシリンジ</td><td>デスカーパック</td><td>341001</td><td>手術材料</td></tr><tr><td>10mLシリンジ</td><td>デスカーパック</td><td>324601</td><td>手術材料</td></tr><tr><td>20mLシリンジ</td><td>デスカーパック</td><td>324801</td><td>手術材料</td></tr><tr><td>3mLシリンジ</td><td>デスカーパック</td><td>324201</td><td>手術材料</td></tr><tr><td>5 mLシリンジ</td><td>Descarpack</td><td>324401</td><td>外科材料</td></tr><tr><td>60 mL シリンジ</td><td>Descarpack</td><td>323201</td><td>外科材料</td></tr><tr><td>9 mm 気管内チューブ</td><td>Rusch</td><td>112482-000090</td><td>外科材料</td></tr><tr><td>Allis 鉗子</td><td>ジェネリック</td><td>-</td><td>外科器具</td></tr><tr><td>Amox LA</td><td>JA Sa&uacute;de 動物</td><td>MAPA登録:8.781 / 2004</td><td>医薬品</td></tr><tr><td>バクハウス鉗子</td><td>ジェネリック</td><td></td><td>-手術器具</td></tr><tr><td>カテーテル 20G</td><td>Descarpack</td><td>362401</td><td>静脈内アクセス用カテーテル</td></tr><tr><td>Cetamin</td><td>Agener Uni&atilde;o</td><td>MAPA登録:SP-000292-5.000011&nbsp;</td><td>麻酔剤</td></tr><tr><td>導電性臨床ゲル</td><td>RMC</td><td>ANVISA登録:80122200013</td><td>手術材料</td></tr><tr><td>ジピロンD-500</td><td>ゾエティス</td><td>MAPA登録:SP0000728-46</td><td>医薬品</td></tr><tr><td>使い捨てメス n.22</td><td>ウィルテックス</td><td>ANVISA登録:10150470565</td><td>手術器具</td></tr><tr><td>使い捨て滅菌スポンジブラシ</td><td>リオキミカ</td><td>7.89778E+12</td><td>外科用無菌</td></tr><tr><td>Easy-Scan:Go</td><td>IMV</td><td>ESCG01</td><td>Ultrasound</td></tr><tr><td>Endozime AW Plus</td><td>Ruhof</td><td>34514</td><td>手術器具用洗剤</td></tr><tr><td>フェンタニル (Fentanest)</td><td>Crist&aacute;lia</td><td>ANVISA登録:1029800810159</td><td>麻酔薬</td></tr><tr><td>ゴセットリトラクター</td><td>ジェネリック</td><td>-</td><td>手術器具</td></tr><tr><td>ハルステッド-蚊止血鉗子</td><td>ジェネリック</td><td>-</td><td>手術器具</td></tr><tr><td>ヒーリング軟膏-ウンギントピアソン</td><td>ピアソンSA</td><td>MAPA登録:SP0000094-16</td><td>医薬品過</td></tr><tr><td>酸化水素溶液</td><td>リオキミカ</td><td>ANVISA登録:218690015</td><td>外科材料</td></tr><tr><td>イソフルオラン</td><td>Biochimico</td><td>ANVISA登録:100630222</td>麻酔<td>IV</td></tr><tr><td>点滴セット伸筋</td><td>ジェネリック</td><td>-</td><td>流体療法</td></tr><tr><td>IVマクロ点滴セット</td><td>Descarpack</td><td>410301</td><td>輸液療法</td></tr><tr><td>ラクトファー(セフチオファー)</td><td>オウロフィーノSA</td><td>MAPA登録:SP0000051-50</td><td>医薬品</td></tr><tr><td>Laringoscope</td><td>-</td><td>-</td><td>手術器具</td></tr><tr><td>Maxicam 2%</td><td>Ourofino SA</td><td>MAPA登録:SP0000051-69</td><td>医薬品</td></tr><tr><td>マイクロポア接着剤5 cm x 10 cm&nbsp;</td><td>ジェネリック</td><td>1530</td><td>手術材料</td></tr><tr><td>ミダゾラム</td><td>・ヒポレイバー</td><td>ANVISA登録 1134301430035</td>麻酔<td>薬</td></tr><tr><td>マルチウェイIV輸液セット</td><td>デスカーパック</td><td>413201</td><td>輸液療法</td></tr><tr><td>針 40 mm x 1.2 mm</td><td>デスカーパック</td><td>353601</td><td>医薬品や麻酔薬を塗布するための滅菌針。</td></tr><tr><td>針 40 mm x 1.6 mm</td><td>Wiltex</td><td>ANVISA登録: 10150470664</td><td>医薬品や麻酔薬を適用するための滅菌針。</td></tr><tr><td>ニードルホルダー</td><td>汎用</td><td>-</td><td>手術器具</td></tr><tr><td>ナイロン 2 縫合糸 trhead</td><td>シャロン メディカル</td><td>N502CTI40</td><td>手術材料</td></tr><tr><td>普通ペン</td><td>一般</td> <td>-</td> <td>メモを取るための普通ペン</td></tr> 生理<tr><td>液 0.9% 500 mL 袋</td><td>JP Farma</td><td>MS:1.0491.0070</td><td>輸液療法</td></tr><tr><td>ポリグリコール酸 2 縫合糸</td><td>アトラマット</td><td>G4099-75H</td><td>外科材料</td></tr><tr><td>塩化カリウム</td><td>Samtec</td><td>ANVISA登録:1559200010139</td><td>非経口薬</td></tr><tr><td>手続き用手袋</td><td>デスカーパック</td><td>122401</td><td>個人用保護具(PPE)</td></tr><tr><td>プロポフォール(プロビブ)</td><td>ユニ&アチルド;o Qu&iacute;マイカ</td><td>ANVISA登録:1049714490057</td><td></td></tr>麻酔<tr><td>リンガー乳酸溶液500mL袋</td>JP<td>ファルマ</td><td>MS:1.0491.0061</td><td>流体療法</td></tr><tr><td>リオヘックス0.5%クロレキシジンアルコール溶液</td><td>リオキミカ</td><td>218690356</td><td>外科無菌</td></tr><tr><td>リオヘックス2%クロレキシジン溶液と界面活性剤</td><td>リオキミカ</td><td>218690356</td><td>外科無菌</td></tr><tr><td>頭皮21G</td><td>Descarpack</td><td>421201</td><td>外科材料</td></tr><tr>靴は<td>、一般的な</td><td>個人用</td><td>保護具(PPE)</td><td>を覆います</td>滅菌</tr>は<tr><td>、クレマーANVISA</td><td>登録を圧縮します:10071150065</td><td>外科材料</td><td></td></tr><tr><td>滅菌ガーゼパッド</td><td>Procitex</td><td>ANVISA登録:80245210083</td><td>外科材料</td></tr><tr><td>滅菌外科用ドレープ140cm×90cm&nbsp;</td><td>ヴェンクリ</td><td>7010003</td><td>外科用材料</td></tr><tr><td>滅菌外科用ドレープ 150 cm x 190 cm&nbsp;</td><td>PolarFix</td><td>F00208</td><td>手術材料</td></tr><tr><td>滅菌手術用手袋</td><td>Mucambo</td><td>CA: 39.317</td><td>個人用保護具 (PPE)</td></tr><tr><td>聴診器</td><td>汎用</td><td></td><td>手術用器具</td></tr><tr><td>サージカルキャップ</td><td>Descarpack</td><td>93201</td><td>個人用保護具 (PPE)</td></tr><tr><td>手術用ガウン</td><td>Descarpack</td><td>231101</td><td>個人用保護具(PPE)</td></tr><tr><td>サージカルマスク</td><td>デスカーパック</td><td>110701</td><td>個人用保護具(PPE)</td></tr><tr><td>手術用ハサミ 鈍器-鈍器</td><td>ジェネリック</td><td>-</td><td>手術器具</td></tr><tr><td>シャープシャープ</td><td>ジェネリック-</td><td></td><td>手術器具</td></tr><tr><td>手術用ステープラー</td><td>Tradevet</td><td>-</td><td>外科材料</td></tr><tr><td>Tekbond 瞬間接着剤</td><td>Tek ボンド</td><td>78072720030</td><td>外科材料</td></tr><tr><td>温度計</td><td>ジェネリック</td><td>-</td><td>外科用機器</td></tr><tr><td>三方活栓</td><td>Solidor</td><td>374</td><td>外科材料</td></tr><tr><td>トラマドール ヒドロクロライド</td><td>Agener Uni&atilde;o</td><td>MAPA登録:SP-000292-5.000002</td><td></td></tr>麻酔<tr><td>透明フィルムドレッシング</td><td>SkinupperANVISA</td><td>登録:82307460014</td><td>外科材料</td></tr><tr><td>防水接着剤10 cm x 4.5 cm&nbsp;</td><td>ジェネリック</td><td>364828</td><td>外科用材料</td></tr></tbody></table>

雌豚の開腹術による胚移植手術

Embryo Transfer Surgery via Laparotomy in Gilts

この記事は、クローン胚を雌豚の卵管に移植するための開腹手術を実証することを目的としています。すべての動物は適切な麻酔面に留まり、麻酔回復中の術中の事故や合併症はありませんでした。雌豚は、手術終了後に立ち上がるのに平均して2〜3時間かかりました。
すべての外科的処置は、平均して44分続きました。9雌豚が手術を受け、雌豚1隻あたり平均185個のクローン胚が移植され、合計1,664個の胚が両側に移植されました(表1)。卵巣の局在化、それらの外部化、および胚を含むトムキャットカテーテルの卵管の口への導入は、手術の最も繊細な瞬間に対応していました。すべての雌豚の卵巣は手術中に検査され、すべてが最近排卵した出血性卵胞を示し、排卵発生直後に胚移植を行うことを目指した発情同期プロトコルで期待されたものと一致しました。すべての処置は術中の事故なしに行われました。
手術後に激しい痛みの徴候を示した動物はおらず、手術後の各雌豚について術後3日間にわたって行われた痛みのスケール(0から18の範囲)で平均痛みスコアは0.33、0.33、3.67、1.33、0.33、1.33、4.67、2.00、および0.33でした(表2)。手術後 12日目に 皮下液貯留 (漿液腫) を示したのは、手術された雌豚のうち 1 つだけで、手術創の近くに感染と炎症の兆候が見られました。超音波ガイドによる40 mm x 1.6 mmの針で体液を排出した後、炎症領域に冷湿布を毎日30分間7日間適用し、セフチオファー(3回の筋肉内注射、注射間隔72時間の間隔)および2%メロキシカム(0.4 mg / kg SID、筋肉内、3日間)を投与した後、創傷は瘻孔し、残りの粘液膿性の内容物を排出しました。 その結果、動物は完全に改善されます。他の手術された雌豚は、手術後6日目から 10日目にのみ 行われた創傷洗浄のために交換または取り外す必要なく、5日間外科用包帯と一緒に残りました。
雌豚2、8、および9では、子宮内腔に体液の蓄積と胚小胞形成は観察されませんでした(図1A)。したがって、これらの動物の妊娠診断は陰性と見なされました。他の雌豚は、子宮内液の蓄積と胚小胞の形成を示し、明確に定義された無響の丸みを帯びた構造として視覚化されました(図1B-D)。レシピエント雌ブタのうち2つにおいて、妊娠32日目の胚小胞内の初期発生期の胚構造に対する高エコー領域を特定することが可能でした(図1E、F)。
妊娠診断が陰性であったか、妊娠が進行しなかった後、雌豚を安楽死させ、生殖器系を分析しました。卵巣、卵管、および子宮角の領域での癒着は、雌豚1、2、3、および4で多かれ少なかれ観察され、卵巣嚢胞は雌豚8で観察されました(図2)。ギルト3の子宮からは、妊娠期間が約12〜20日と適合する4つの胚構造が取得され、ギルト7からは1つの構造が得られた(図3)。胚組織断片の分析では、胚死または流産を引き起こす可能性のあるパルボウイルス、 レプトスピラ 属、 エリシペロトリックス・ルシオパチー、およびブタ・サーコウイルス2型および3型(PCV2/PCV3)の検出は陰性でした。
<img alt="超音波シーケンス、腎臓構造分析、医療画像、診断手順、腎臓検査。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66984/66984fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> 図1:外科的処置の30日後における胚レシピエントの雌豚の子宮の超音波画像 (A)雌豚2の子宮は内部に液体が存在しず、妊娠診断が陰性であることを特徴づける。金箔1(B)、金箔3(C)、および金箔4(D)の妊娠子宮には、体液が入った胚小胞が含まれています(アスタリスク)。ギルト3(E)とギルト7(F)の妊娠子宮は、胚小胞の内部に高エコー構造(矢印)を示しており、妊娠32日で胎児が形成されたことを示しています。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66984/66984fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="解剖プロセス、解剖学的研究、ラベル付き標本セグメント、教育研究図。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66984/66984fig02.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> 図2:生殖器系の分析。 金箔1(A)、金箔2(B)、金箔3(C)、金箔4(D)、金箔5(E)、金箔6(F)、金箔7(G)、金箔8(H)、金箔9(I)の剖検後の子宮、卵巣、卵管の画像。矢印は子宮角、卵巣、卵管の癒着を強調し、矢印は卵巣嚢胞を強調しています。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66984/66984fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="解剖学的研究のためのシャーレ内の生体組織標本とサンプルを示す解剖画像。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66984/66984fig03.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> 図3:妊娠診断。 金箔3(A-D)および金箔7(E)から取り出された初期段階の胚は、超音波検査で陽性の妊娠診断と胚小胞内の高エコー構造を示します。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66984/66984fig03large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
表1:雌豚ごとに移植された胚の数と種類、診断された妊娠、および手術された雌豚の剖検後に得られた胚の数。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66984/66984_Table%201.xlsx" target="_blank">この表をダウンロードするには、ここをクリックしてください。</a>
表2:痛みの兆候の提示に関して、手術された各雌豚に割り当てられた値。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66984/66984_Table%202.xlsx" target="_blank">この表をダウンロードするには、ここをクリックしてください。</a>

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