2024年11月1日
この記事では、95%エタノールをマウスの子宮に1〜3分以内に注入することにより、死亡率が非常に低く、子宮内癒着が最小限に抑えられた、信頼性と再現性のある薄い子宮内膜を作製するための詳細なプロトコルについて説明します。
薄い子宮内膜は、不妊症の重大な原因として広く認識されています。薄い子宮内膜の病因に関する研究は動物モデルに依存しているため、適切なモデルの選択が重要になります。ここでは、マウスで信頼性と再現性のある薄い子宮内膜モデルを生成する詳細なプロトコルについて説明します。
マウスを解剖し、操作のためにマウスの子宮角を露出させる必要があるため、手術はトラウマ性です。不適切な操作は感染を引き起こしたり、マウスの死につながることさえあります。実際、実験運転の前には、慎重な訓練と経験が必要です。
私たちは、臨床例で観察されるさまざまな程度の薄い子宮内膜症状を再現するために、注入時間が1〜3分の子宮内膜モデルの開発に成功しました。これにより、研究の特定のニーズに応じて、さまざまなレベルの損傷を持つモデルを作成できます。私たちのプロトコルで使用されている方法は、低コスト、適合性、および実験期間という利点があります。
それは他の技術と比較して3つの初期で病理学的メカニズムと治療を研究します。まず、麻酔をかけたマウスを予熱した手術台の上に仰臥位に置き、医療用テープを使用してマウスの四肢を固定します。滅菌ハサミと鉗子を使用して、尿道口から約1センチメートルの位置にある腹部に1センチの切開を行い、腹腔まで伸びます。
滅菌鉗子で内臓をそっと脇に動かして、子宮を見つけます。右の子宮角を露出させ、子宮頸部近くの近位端と卵巣近くの遠位端に止血クランプを適用します。25ゲージの注射器を使用して、針を子宮角と平行に保持しながら、約50マイクロリットルの95%エタノールを子宮腔に注入します。
必要に応じて、シリンジを1〜5分間維持します。.次に、エタノールを子宮腔から引き出し、子宮腔を滅菌生理食塩水で5回洗い流して、残っているエタノールを取り除きます。次に、止血クランプを取り外し、子宮と内臓を元の位置に戻します。
5/0吸収性の外科用縫合糸を使用して、腹膜を縫合し、続いて表皮を縫合します。まず、安楽死させた薄い子宮内膜マウスモデルを解剖台に置き、手術用ハサミで縫合糸を切って子宮を露出させます。次に、外科用鉗子を使用して、子宮全体を慎重に抽出し、子宮を周囲の内臓から取り外します。
すぐに両方の子宮角を取り除き、各角を3〜4つの小さなセグメントに分割します。1.5ミリリットルの微量遠心チューブで採取した4%パラホルムアルデヒドの1ミリリットルに子宮組織を入れます。.ホルマリン固定サンプルを組織カセットに入れ、組織カセットを一連のエタノール濃度、続いてキシレンとパラフィンで移します。
55°Cに加熱した溶融パラフィンワックスをワックス型に充填します。加熱された鉗子を使用して、浸潤した組織セグメントを埋め込みカセットからワックス型にすばやく移します。組織セグメントが適切に配置されたら、包埋カセットの底を組織型の上に置きます。
次に、4°Cに設定した冷却プレートに型を直接置き、少なくとも20分間、パラフィンを固めます。次に、サンプルを型から取り出し、パラフィントリマーを使用して、その周りの余分なワックスを切り取ります。子宮内膜の厚さと子宮内膜腺の数は、対照群と比較して、1分、2分、および3分群で有意に減少しました。
4分群と5分群では重度の子宮癒着とほとんど見えない子宮腔が観察され、子宮内膜腺は発見されませんでした。子宮内膜線維症は、エタノール注入の持続時間とともに増加し、対照群と比較して1〜5分群での過剰な染色によって示されました。.
本研究では、信頼性と再現性の高い子宮内膜損傷マウスモデルを構築することにより、不妊症に関連する重要な課題である子宮内膜薄層化の問題に取り組んでいます。本プロトコルでは、マウスの子宮に95%エタノールを1〜3分間注入し、臨床例で観察されるさまざまな程度の子宮内膜薄層化症状を効果的に再現します。
薄い子宮内膜の再現性のあるマウスモデルを構築することは、子宮内膜病理の制御された調査を可能にすることで、不妊研究における重要な空白を埋めることになります。このモデルは、生殖健康における治療法発見のためのメカニズムのデリスキングおよびターゲットバリデーションを支援します。その信頼性と拡張性は、子宮内膜修復を標的とした候補介入策の前臨床評価のための基盤的なツールとして位置づけられます。
このマウスモデルは、生殖健康における探索から前臨床に至る連続的なプロセスに組み込まれており、早期の仮説検証、ターゲットのバリデーション、および前臨床候補物質の評価を可能にします。